霍乱弧菌检测优秀课件

二、标本的采集与送检
概述：
➢ 标本采集： ➢ ➢病例：粪便、肛拭子、呕吐物 未使用抗生素之前 ➢ “健康”人：粪便、肛拭子 ➢ 其他传播环节的标本：食物、水、环境类样品…… ➢ ➢监测：水样，水产品等 ➢ 标本运送： ➢ 一般要求在6小时内室温（20-25 ℃ ）条件下送达实验室检测， ➢ ➢ C-B运输培养基（pH8.4）; （或文腊二氏保存液） ➢ ➢ 碱性蛋白胨水（pH8.4-9.2） ： ➢ 培养基质量的保证：碱性胨水要澄清透明（表明未长细菌）、 8-10ml量要足。
3、生物标本
➢ 水生动物的采样通常选取活的或新鲜的水生动 物为采集对象，
➢ 有时也应考虑冰冻的水生动物，以无菌操作采 集合适的部位，如鳃部和/或肠内
➢ 容物等，置采样瓶（管）或食品采样袋密封， 在常温下送检。有条件的采样点可
➢ 将水生动物整体采回实验室再进行相关处置。 同时，要求以无菌棉签涂抹五只（条）以上的 某类水生动物体表、鳃及/或肛门，置碱性蛋 白胨水送检，每管碱性蛋白胨水作一份样品看 待。
三、霍乱弧菌的培养分离
➢ 增菌：碱性蛋白胨水（pH 8.6）作为增菌液； ➢ 分离：强选择性分离培养基（庆大霉素培
养基或TCBS 培养基或4号培养基）分离； 弱选择性培养基使用碱性琼脂或碱性胆盐 琼脂。
➢ 应注意不同厂商以及不同批号培养基的质 量，每批培养基在使用前必须进行质量检 测。
分离培养要点（两管三板法）：
O139群霍乱弧菌的生物学特征
▪ 生化特征与O1菌基本相同。 ▪ 含有与O1群霍乱弧菌相同毒力基因 ▪ 除O抗原不同外，其它性状均与EL-Tor生物型相似。 ▪ 毒力蛋白及其调控因子与El-Tor霍乱具有高度同源
的编码。 ▪ O139霍乱弧菌菌可以产生荚膜 ▪ 与O1群霍乱无交叉免疫力 ▪ 环境适应能力强 ▪ 耐药性强
彦岛型 （Hikojima）
A、B（少量C） A、B、C
非O1群霍乱弧菌（O139霍乱）
➢ O139群霍乱弧菌 ➢ 1992年，在印度印度马德拉斯、泰米尔纳
德发生的霍乱疫情，分离到的菌株不与O1 群霍乱血清凝集，但是引起O1群霍乱的典 型症状。引起WHO重视，定为O139群霍乱 弧菌，被认为下一次霍乱大流行主角。
2、水样标本
➢ 水体的采样一般要求用灭菌的500ml 水样瓶采集 相对静止的表层水 （水面30cm 以内）450ml， 加盖密封后快速送检。取水点的选择应结合流行 病学调查等资料确定，同时，采样时应选择在水 流平稳或静止处吸取。非疫情状态下的监测采样 时间一般在清晨时，此时水体未受人群活动等因 素影响。
➢第二管碱性蛋白胨水增菌１８小时后划线分离选择性平板（庆大／四号／Ｔ ＣＢＳ平板，第三板）。
可疑菌落的挑取
➢ 经典的鉴定步骤要求每个平板应挑取5个以上可疑菌落,转种于克氏双糖斜面 或者普通琼脂斜面待分纯培养后,再进行O1、O139群血清玻片凝集试验，鉴 于对霍乱疫情应急处理的考虑,现大多数监测实验室一般采用将血清玻片凝集 试验前置的做法,作为快速筛查的手段,直接对平板上生长的单个可疑菌落进行 玻片凝集试验,出现明显凝集时可做初步报告,对平板上出现可疑凝集的菌株必 须马上转种于克氏双糖斜面或者普通琼脂斜面,待纯培养物生长良好后再次进 行玻片凝集试验加以确证。
El Tor霍乱弧菌为主。
古典生物型与El-Tor生物型区别
特征
羊红细胞溶血
古典生物型
-
El-Tor 生物型
D
鸡红细胞凝集
-
+
V-P试验
-
+
多粘菌素B敏感试验
+
-
IV组噬菌体裂解
+
-
V组噬菌体裂解
-
+
O1群霍乱弧菌的血清分型及抗原成份
型别
别名
O抗原成份
原型
稻叶型（Inaba）
A、C
异型 中间型
小川型（Ogawa）
注意！
➢ 因腹泻病因复杂，霍乱轻型病例的症状与体征 很不明显，不易与其他病因引起的腹泻相区别。 因此，霍乱流行季节，逢泻必采是必须遵守的 原则
➢ （2）送检 剧烈腹泻病人的水样便含有大量病菌，直
接分离培养不难检出阳性。条件允许的医院，通知实验室 人员直接水样便接种四号平板培养。缩短检测时间。
➢ 不能立即检查的，要接种于培养基内，尽快送往检验室。 送检标本可放入（PH8.6-9.0）碱性蛋白胨水（不是最佳 的，尤其6小时内还不能进行培养时，尽量采用 C-B运输 培养基。），也可放入文—腊二氏保存液或插入CaryBlair二氏半固体保存培养基中。
大便≈小便
病原学
形态：霍乱弧菌属于弧菌科弧菌属，革兰染 色阴性菌体短小，稍弯曲，两端钝圆，长 1.5～2.0µm,宽0.3～0.4µm 。 菌体尾端有单鞭毛，运动极为活泼，在暗视 野显微镜下呈流星样运动，培养温度以37℃ 为最适宜，在碱性（PH8.8～9.0）肉汤（或 蛋白胨）培养基上易于生长（耐碱怕酸）
霍乱弧菌涂片、染色
Hale Waihona Puke 革鞭兰毛
染
染
色
色
分群与分型
➢ 根据O抗原的特异性，可将霍乱弧菌分成200 个血清群。
➢ 根据是否与O1抗血清凝集分两大群， O1群霍乱弧菌：凡能与O1群抗血清发生凝集 非O1群霍乱弧菌：凡不被O1群抗血清凝集的。
O1群霍乱弧菌的生物型
1、古典生物型（前6次大流行） 2、E1 Tor 生物型（第7次 1961年来）。 两个生物型具有相同的血清型。我国流行以
霍乱弧菌检测优秀课件
学习要点：
➢ 霍乱弧菌概述与分类 ➢ 霍乱弧菌的标本采集 ➢ 霍乱弧菌的分离培养 ➢ 霍乱弧菌的鉴定
一、概述
➢ 霍乱弧菌（V.cholera）是人类霍乱的病原 体，霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传 染病之一。曾在世界上引起多次（7次）大 流行。
➢ 典型临床表现：剧烈的呕吐、腹泻（无痛 性） 、米泔水样便、脱水，死亡率甚高。 属于国际检疫的烈性传染病。
➢挑取粪便，直接接种于碱性蛋白胨水（第一管）中，同时划线分离选择性平 板（庆大／四号／ＴＣＢＳ平板，第一板）。
➢第一管碱性蛋白胨水在３７ ℃增菌６－８小时，沾取菌膜下表层液体，划线 分离选择性平板（庆大／四号／ＴＣＢＳ平板，第二板），同时吸取0.1～ 0.2 ml表层培养物，接种碱性蛋白胨水（第二管）。
不符合规定，立即通知相关实验室或CDC更换。 ➢ 便量合适：不要太少，不能太多（改变培养基的pH）。 ➢ 送检及时：6h内送检。
1、粪便标本
（1）采样 逢疑必采 应在发病早期，服用 抗菌药物之前完成，并尽快送到检验室。 粪便标本采集方法如下：用棉拭子采取自 然排出的新鲜大便，也可用直肠棉拭或采 便管由肛门插入直肠内3cm-5cm处采取， 水样便采取1ml-3ml，成型便采取指甲盖 大小的粪便量。 病人的呕吐物，沾染粪便 的衣服和用具，也可作为检材。