甘蔗糖蜜酒精废液

甘蔗糖蜜酒精废液中总黄酮含量的测定

D eterm inati on of the to tal con ten t of flavono id s in w aste

liqu id of alcoho l p roducti on from sugarcane m o lasses

张　吉,周文红,刘慧霞

Z hang J i,Z hou W enhong and L iu H u ix ia

(广西大学轻工与食品工程学院,广西南宁市　530004)

(L igh t Indu stry and Food Engineering In stitu te,Guangx iU n iversity,N ann ing,530004)

摘　要:以芦丁为标准物质,用分光光度法测定了甘蔗糖蜜酒精废液中黄酮类化合物的含量。此法排除了废液中其他物质的干扰,重现性好,平均回收率达97123%,是一种较为快速的测定废液中总黄酮含量的新方法。为废液中黄酮类化合物的提取和开发利用提供了理论依据。

关键词:糖蜜酒精废液;黄酮类化合物;分光光度法

中图分类号:T S26212

Abstract:T he con ten t of flavono ids in w aste liqu id of alcoho l p roducti on from sugarcane m o lasses w as determ ined by sp ectrop ho tom etry u sing ru tin as standard sub stance.T h is is a new m ethod fo r relatively rap id determ inati on of the to tal con ten t of flavono ids in w aste liqu id since it can eli m inate the in terfere of o ther com pounds,it has h igh rep etiti on rate,and the average recovery w as97. 23%.It p rovides the theo retical basis fo r the ex tracti on and exp lo itati on of flavono ids in w aste liqu id.

Key words:W aste liqu id of alcoho l p roducti on from sugarcane m o lasses,F lavono ids,Sp ectrop ho tom e2 try

1　引言

甘蔗糖蜜酒精废液中的色素一般是大分子有机化合物,在溶液中呈现胶体状态。难以被微生物所降解,耐温、耐光照,放置时间延长其色值不减[1]。目前对甘蔗糖蜜酒精废液中色素的研究报导较少。这些色素主要来自糖蜜原料本身,其中最重要的色素是多酚类色素,其主要成份即是黄酮类化合物。黄酮类化合物是自然界存在的酚类化合物中最大的类别之一[2],有较强的抗氧化能力。由于其几乎存在于所有的绿色植物中,因此在涉及到植物提取的所有工作中都会遇到它们。甘蔗中含有大量黄酮类化合物,它们在澄清过程中有部分被除去,还有一部分仍留在糖汁中,并一直留存至最终产物废蜜和酒精废液中。如果能从废液中将黄酮类化合物提取出来,必定可获取良好的经济效益。据资料显示,对黄酮类化合物的化学分析测量研究,在水果,蔬菜的储藏和加工方面有广泛应用。但糖蜜酒精废液中黄酮类化合物的分析和分离方面的研究未见有报导,因此,探索研究用化学方法分析测定黄酮类化合物的含量,并试验研究将废液中的黄酮类提取出来,不仅有利于治理糖蜜酒精废液,还可以提高糖蜜酒精废液的资源利用附加值,具有重要的研究意义。本研究采用分光光度法,对几种典型的糖蜜酒精废液中的黄酮类物质进行化学分析方法的探索比较实验,旨在找到简便的方法测定废液中的黄酮类物质的含量,为进一步的分离回收色素有价资源提供参考依据。

2　实验过程[3,4]

211　实验原理

黄酮类化合物的母核由A、B两个芳香环组成,在母核某些位置上含有羟基时能与金属离子形成稳定络合物,在B环上任何有相邻的两个羟基存在时同样也能产生络合物。利用三价铝离子与黄酮发生反应,生成黄色络合物。该络合物在一定的吸收光波长下有一吸收峰值,不同浓度试样吸光度随浓度

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广西轻工业　(2005年第2期　总第87期)

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收稿日期:2005202228

的增加而增加,通过准确的测定数据,作出标准曲线的回归方程,找出其一般规律,再以同样的方法处理样液,测得吸光度后,代入回归方程便可计算出废液中的黄酮含量。通过加标实验可验证方法的可行性。

212　实验设备仪器及试剂配制

设备仪器:722型可见光光度计、电子天平;

药品:芦丁、无水乙醇、甲醇、硝酸铝;

芦丁标准溶液:将芦丁在100℃下,烘干1h,用电子天平准确称取10m g,用甲醇溶液定容至100m l,即011m g m l。

5%硝酸铝甲醇溶液(显色剂):用电子天平准确称取5g硝酸铝,用95g甲醇溶液将其溶解。

213　最大吸收光波长的确定

吸取芦丁标准溶液215m l,显色剂1m l,加入615m l甲醇,放置5m in,以甲醇及显色剂作空白,在400～500nm波长范围测定其吸光度,发现在434nm 处有最大吸收,因此选择434nm为测定波长。

214　标准曲线的绘制

吸取芦丁标准溶液0、015、110、115、210、215m l,分别加入10m l容量瓶中,加入显色剂1m l,用甲醇稀释到刻度,放置5m in,于434nm处测定吸光度,作得曲线如图1所示。其回归方程为:y= 316274x-010031

215　样品测定

21511　步骤

(1)取样液2m l,加无水乙醇定容至20m l,离心分离10m in。 (2)取离心液215m l,加入显色剂1m l,加甲醇溶液定容至10m l,以甲醇及显色剂作空白,于434nm 处测定吸光度为A。

(3)取离心液215m l,加甲醇溶液定容至10m l,以甲醇及显色剂溶液作空白,于434nm处测定吸光度为B。

21512　测定干扰的排除

(1)由于废液中含有大量蛋白质,加入乙醇溶液将其沉淀,可消除蛋白质对样液吸光度测定的影响。

(2)因为废液本身为棕红色,在434nm下也有一定的吸光度,故必须排除废液本身颜色的影响。通过设置空白样检测废液中黄酮类所产生的吸光度= A-B,代入回归方程便可计算出废液中的黄酮含量。测定结果如表 所示。

216　加标回收实验

为了检验本分析方法的准确性,进行了回收试验。在样液中加入一定量的芦丁标准溶液,再以同样的方法处理样液,然后测定其吸光度。比较测得的量与实际加入量,便可确定该实验方法的可行性

。

图1　标准曲线

表 不同废液试样中黄酮含量的测定结果

项目 试样样液量

(m l)

取离心液量

(m l)稀释倍数吸光度

废液中黄酮含量

(m g m l)

废液色素浓液 22154010470105524提取色素后清液 2215401035010420废液色素浓液 2215401105011192提取色素后清液 2215401043010508废液色素浓浆121540128501603691

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