高效液相色谱技术在药用辅料检测中的应用新进展

高效液相色谱技术在药用辅料检测中的应用新进展

发表时间：2015-10-29T10:06:52.413Z 来源：《健康世界》2015年6期作者：梁佳易李翠娟罗杰

[导读] 石药集团欧意药业有限公司河北 050000 可以应用于不同种类的药用辅料分析，并且各具优势。结论：在药用辅料检测中，各种联用技术将是未来发展的方向。

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摘要：目的：高效液相色谱技术在药用辅料检测中的应用新进展。方法：通过近5年来的文献查阅，论述了高效液相色谱一紫外检测器法（HPLC-UV）、高效液相色谱一示差折光检测器法（HPLC-RID）、高效液相色谱一蒸发光散射检测器法（HPLC-ELSD）等不同方法在药用辅料检测方面的应用新进展。结果：通过高效液相色谱一紫外检测器法（HPLC-UV）、高效液相色谱一示差折光检测器法（HPLC-RID）、高效液相色谱一蒸发光散射检测器法（HPLC-ELSD）等不同方法在药用辅料检测方面的应用分析，得出HPLC与不同检测器联用，可以应用于不同种类的药用辅料分析，并且各具优势。结论：在药用辅料检测中，各种联用技术将是未来发展的方向。关键词：高效液相色谱技术；药用辅料检测；应用

一、一般资料与方法

1、一般资料

经过多年的发展和改进，液相色谱技术已经在诸多领域得到了广泛的应用和实践。近年来，有关药品的质量控制标准已得到了较大的完善，而有关药用辅料的质量控制标准还多数停留在相对落后的层次上。由于药用辅料质量的优劣直接关系到药物制剂在体内的安全性和有效性，所以药用辅料的质量控制标准的研究与提高迫在眉睫。目前，人们尤其关注药用辅料的安全性、质量控制标准的提高，而更严格科学的质量控制标准离不开先进的检测技术，特别是针对有关物质检查，有关物质含量微小，需选择一些灵敏度高、专属性强的检测方法，如应用HPLC/UV/DAD.HPLC/MS等现代分析技术对有关物质进行定性和定量分析[1]，而且，随着经济的发展和进步，对于药物的安全性也逐渐重视起来，我国药用辅料的检测控制标准正在走向不断完善的过程中，而且还将会得到更好、更广阔的发展。

2、方法

2.1 HPLC-UV法

紫外检测器（UVD）用于检测具有特定吸收波长，并在该波长下响应值（A）与浓度（C）成正比的物质。大部分药用辅料如醇类、酮类、酯类、酚类等都具有紫外吸收性质，因此HPLC-UV法在药用辅料检测中应用最为广泛。

苯甲醇是注射剂中常用的抑菌剂，但过量苯甲醇可对人体产生毒副作用，如静脉注射刺激性、鞘内注射神经毒性、过敏反应等不良反应。而采用C18色谱柱测得苯甲醇在线性范围内线性关系良好，且操作简便、准确、重复性好，为芳香醇类辅料应用HPLC-UV法检测提供了参考。

柠檬黄、苋菜红等是常用的人工合成色素，主要用作胶囊壳和糖衣的着色剂，收载于中国医药行业标准中。原标准采用三氯化钛滴定法测定含量，操作繁琐费时，测定结果误差较大。而在罗艳、章家伟等这两篇文献中，均采用安捷伦C18色谱柱，测得结果线性范围宽，样品处理简单，试验方法灵敏度高、专属性强，试验结果准确可靠，提高了检验效率。药用辅料色素的含量测定，为含芳香结构的色素辅料测定提供了参考。

羟苯酯类防腐剂如羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丁酯等作为抑菌剂用于药品中，其使用量有严格的限制。中国药典2005年版采用化学滴定法测定其在制剂中的含量，操作繁琐，重复性差。采用HPLC-UV法测定羟苯乙酯的含量，色谱柱为C18柱，流动相为甲醇-1%冰醋酸（（65：35），检测波长为254nm，线性范围为0.050-0.250mg.mL-1，回收率为99.9%，RSD为0.2%。应用HPLC法测定羟苯乙酯的含量，结果表明，方法操作简便、快速、准确、灵敏度高、重复性好。

2.2 HPLC-RID法

示差折光检测器（RID）是一种最早应用于HPLC的通用型检测器。其在聚合物、糖类、有机酸、甘油三酯、高分子化合物、脂肪烷烃等物质测定方面具有独特的优势。辅料中糖类、酯类物质种类多，用途广泛，因此HPLC-RID法在药用辅料检测中也发挥着重大作用。

麦芽糖在药物制剂中可作为等渗调节剂、黏合剂、赋形剂等，日本药局方XIV版、USP30版均已收载，并采用强酸性阳离子交换柱测定，但这种填料的色谱柱价格较昂贵、保存难度较大、柱效易降低，而且检测器温度过高，研究成本较高。而HPLC-RID法测定麦芽糖和蔗糖的含量，具有出峰时间快、分离效果好、结果准确、重现性好的特点，可作为辅料中单糖、二糖、多元糖类的分离和检测方法。

月桂酸钠为常见的药品表面活性剂，其紫外响应太小，不能用于定量检测，但可采用RID。RID是通过比较折光率的变化来检测流动相中的样品峰，对于无紫外吸收或只有紫外末端吸收的物质，用HPLC-UV检测时灵敏度相对较低，同时易发生基线漂移，而用HPLC-RID法可取得较为理想的结果。但是RID对多数检测物质检测灵敏度较低，对环境温度、流动相组成的微小变化非常敏感，还必须控温，且不适于梯度洗脱，这些固有的缺陷在某种程度上限制了其应用。

2.3 HPLC-ELSD法

目前蒸发光散射检测器（ELSD）越来越多的作为通用型检测器用于HPLC。其最大的优越性在于能检测不含发色团的化合物，如碳水化合物、脂类、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性剂，并能在没有标准品和化合物结构参数未知的情况下检测未知化合物，这些优势为其在药用辅料检测应用中奠定了良好的基础。

聚山梨酯80是一种非离子型表面活性剂，广泛用作药用辅料中的乳化剂和增溶剂，目前国内外均有其临床安全性问题的报道。2005年版中国药典收录了比色法测定聚山梨酯80含量的方法，虽然该方法对于设备要求较低，但其耗时较长，准确性及重复性都较差。而在黄芪注射液中药用辅料聚山梨酯80中含量测定方法的比较研究中，采用HPLC-UV和HPLC-ELSD法分别测定其含量[2】，HPLC-ELSD法测得结果约为UV法的0.65倍，与黄芪注射液中聚山梨酯80理论投料量进行比较，HPLC-ELSD法测定结果比HPLC-UV法更接近理论值。该报道说明对于紫外响应较弱的药用辅料检测，ELSD具有更大的优势。

ELSD对所有不挥发性溶质都有响应，是一种较理想的通用型检测器。相比于同为通用型检测器的RID，其灵敏度高，检出限约为10ng，不受溶剂成分及温度波动的影响，亦可用于梯度洗脱；其最大的缺陷在于其流动相需采用挥发性的盐（如醋酸盐、甲酸盐），但对于一些挥发性比较强的成分，可能在较高的温度下会随着流动相挥发成气体状态，故不适于用HPLC-ELSD检测。