BG11液体培养配方
BG11液体培养配方
BG11液体培养基就是：Stock1 定容100mL柠檬酸0.3g柠檬酸铁胺0.3g EDTANa2 0.05gStock2 定容1000mL NaNO3 30gK2HPO4 0.78gMgSO4·7H2O 1.5gStock3 定容100mL CaCl2·2H2O 1.9gStock4 定容100mLNa2CO3 2gStock5 定容1000mLH3BO3 2.86gMnCl2·4H2O 1.81g ZnSO4·7H2O 0.222gNa2MnO4·2H2O 0.391g CuSO4·5H2O 0.079g Co(NO3)2·6H2O 0.049gStock1 取用2mL Stock2 取用20mL Stock3 取用2mL Stock4 取用1mL Stock5 取用1mL总定容1000mLD1 (Diatom medium)Component Amount Stock Solution(1) NaNO3 1 mL/L 12 g/100ml dH2O(2) K2HPO4 1 mL/L 4 g/100 mL dH2O(3) MgSO4·7H2O 1 mL/L 7g/100 mL dH2O(4 ) CaCl2·2H2O 1 mL/L 2 g/100 mL dH2O(5 ) KH2PO4 1 mL/L 8 g/100 mL dH2O(6 ) Na2SiO3.9H2O 1 mL/L 10g/100ml dH2O(7) MnSO4 0.1mL/L 0.2g/100ml dH2O(8) 柠檬酸铁 1 mL/L 0.5g/100ml dH2O(9) A5 （Trace mental solution）1ml/LH3BO3 2.86g/L dH2OMnCl2·4H2O 1.86g/L dH2OZnSO4·7H2O 0.22g/L dH2ONa2MoO4.2H2O 0.39g/L dH2OCuSO4. 5 H2O 0.08g/L dH2OCo(NO3)2.6 H2O 0.05g/L dH2O(10) 土壤提取液20 mL/L土壤提取液配制方法:取花园土未施过肥200g置于烧杯或三角瓶中，加入蒸馏水1000毫升，瓶口用透气塞封口，在水浴中沸水加热3小时，冷却，沉淀24小时，此过程连续进行3次，然后过滤，取上清液，于高压灭菌锅中灭菌后于4℃冰箱中保存备用。
小球藻的培养
一、小球藻小球藻是单细胞植物，种类较多，多数生活在淡水中，少数生活在海洋里。
按植物学分类，小球藻属于小球藻纲绿藻目原球藻科生物，其体型小，直径一般为3～5μm，在显微镜下，需要放大400～600倍才能看到，我们肉眼看到的只不过是含有小球藻的绿色的水。
小球藻所含的营养成分很高，其蛋白质含量达到50%～60%（相当于花生米的2倍、鸡蛋的5倍），含脂肪10%～30%，还含有多种维生素。
小球藻的生物活性物质糖蛋白和多糖体的含量也相当高，这些生物活性物质具有增强人体免疫力、抗癌、降血压、抑制血糖上升、排除体内毒素和迅速恢复机体损伤等功能。
因此，小球藻的培养前景广阔。
作为培养原料的小球藻，可以到较清洁的池塘、水坑中采集绿色的水，在显微镜下鉴定，然后再用。
也可以向培养它的人索取。
1 容器的准备小规模的培养可用瓶、缸等，大规模的培养可用水泥池。
首先，要对所使用的容器进行消毒，一般用100mg/L的漂白粉水溶液浸泡，再用水冲刷数次。
(100mg/L的漂白粉水溶液的配制：①天平称量5g2%漂白粉澄清液；②定量转移至容量瓶中；③加水至1L；④混匀。
2％漂白粉上清液的配制法：取漂白粉2克，加少量水搅匀，再加水至100毫升，充分调匀后，待澄清后取上清液使用。
）2 培养液的准备（1）BG11液体培养基配方：Stock1 定容100mL 柠檬酸柠檬酸铁胺 EDTANa2Stock2 定容1000mL NaNO3 30g K2HPO4 MgSO4·7H2OStock3 定容100mL CaCl2·2H2OStock4 定容100mL Na2CO3 2gStock5 定容1000mL H3BO3 MnCl2·4H2O ZnSO4·7H2O Na2MnO4·2H2O CuSO4·5H2O Co(NO3)2·6H2OStock1 取用2mL Stock2 取用20mL Stock3 取用2mL Stock4 取用1mL Stock5 取用1mL 总定容 1000mL（2）购买2000元/套，九种原液各200ml（稀释1000倍），10瓶。
小球藻的培养
小球藻的培养一、小球藻小球藻是单细胞植物，种类较多，多数生活在淡水中，少数生活在海洋里。
按植物学分类，小球藻属于小球藻纲绿藻目原球藻科生物，其体型小，直径一般为3～5μm，在显微镜下，需要放大400～600倍才能看到，我们肉眼看到的只不过是含有小球藻的绿色的水。
小球藻所含的营养成分很高，其蛋白质含量达到50%～60%（相当于花生米的2倍、鸡蛋的5倍），含脂肪10%～30%，还含有多种维生素。
小球藻的生物活性物质糖蛋白和多糖体的含量也相当高，这些生物活性物质具有增强人体免疫力、抗癌、降血压、抑制血糖上升、排除体内毒素和迅速恢复机体损伤等功能。
因此，小球藻的培养前景广阔。
作为培养原料的小球藻，可以到较清洁的池塘、水坑中采集绿色的水，在显微镜下鉴定，然后再用。
也可以向培养它的人索取。
1 容器的准备小规模的培养可用瓶、缸等，大规模的培养可用水泥池。
首先，要对所使用的容器进行消毒，一般用100mg/L的漂白粉水溶液浸泡，再用水冲刷数次。
(100mg/L的漂白粉水溶液的配制：①天平称量5g2%漂白粉澄清液；②定量转移至容量瓶中；③加水至1L；④混匀。
2％漂白粉上清液的配制法：取漂白粉2克，加少量水搅匀，再加水至100毫升，充分调匀后，待澄清后取上清液使用。
）2 培养液的准备（1）BG11液体培养基配方：Stock1 定容100mL 柠檬酸0.3g 柠檬酸铁胺0.3g EDTANa2 0.05gStock2 定容1000mL NaNO3 30g K2HPO4 0.78g MgSO4·7H2O 1.5gStock3 定容100mL CaCl2·2H2O 1.9g Stock4 定容100mL Na2CO3 2gStock5 定容1000mL H3BO3 2.86g MnCl2·4H2O 1.81g ZnSO4·7H2O 0.222gNa2MnO4·2H2O 0.391g CuSO4·5H2O 0.079g Co(NO3)2·6H2O 0.049gStock1 取用2mL Stock2 取用20mL Stock3 取用2mL Stock4 取用1mL Stock5 取用1mL 总定容1000mL（2）购买2000元/套，九种原液各200ml（稀释1000倍），10瓶。
小球藻的培养
小球藻的培养一、小球藻小球藻是单细胞植物，种类较多，多数生活在淡水中，少数生活在海洋里。
按植物学分类，小球藻属于小球藻纲绿藻目原球藻科生物，其体型小，直径一般为3～5μm，在显微镜下，需要放大400～600倍才能看到，我们肉眼看到的只不过是含有小球藻的绿色的水。
小球藻所含的营养成分很高，其蛋白质含量达到50%～60%（相当于花生米的2倍、鸡蛋的5倍），含脂肪10%～30%，还含有多种维生素。
小球藻的生物活性物质糖蛋白和多糖体的含量也相当高，这些生物活性物质具有增强人体免疫力、抗癌、降血压、抑制血糖上升、排除体内毒素和迅速恢复机体损伤等功能。
因此，小球藻的培养前景广阔。
作为培养原料的小球藻，可以到较清洁的池塘、水坑中采集绿色的水，在显微镜下鉴定，然后再用。
也可以向培养它的人索取。
1 容器的准备小规模的培养可用瓶、缸等，大规模的培养可用水泥池。
首先，要对所使用的容器进行消毒，一般用100mg/L的漂白粉水溶液浸泡，再用水冲刷数次。
(100mg/L的漂白粉水溶液的配制：①天平称量5g2%漂白粉澄清液；②定量转移至容量瓶中；③加水至1L；④混匀。
2％漂白粉上清液的配制法：取漂白粉2克，加少量水搅匀，再加水至100毫升，充分调匀后，待澄清后取上清液使用。
）2 培养液的准备（1）BG11液体培养基配方：Stock1 定容100mL 柠檬酸0.3g 柠檬酸铁胺0.3g EDTANa2 0.05gStock2 定容1000mL NaNO3 30g K2HPO4 0.78g MgSO4·7H2O 1.5gStock3 定容100mL CaCl2·2H2O 1.9g Stock4 定容100mL Na2CO3 2gStock5 定容1000mL H3BO3 2.86g MnCl2·4H2O 1.81g ZnSO4·7H2O 0.222gNa2MnO4·2H2O 0.391g CuSO4·5H2O 0.079g Co(NO3)2·6H2O 0.049gStock1 取用2mL Stock2 取用20mL Stock3 取用2mL Stock4 取用1mL Stock5 取用1mL 总定容1000mL（2）购买2000元/套，九种原液各200ml（稀释1000倍），10瓶。
小球藻的培养知识分享
小球藻的培养知识分享一、小球藻小球藻是单细胞植物，种类较多，多数生活在淡水中，少数生活在海洋里。
按植物学分类，小球藻属于小球藻纲绿藻目原球藻科生物，其体型小，直径一般为3～5μm，在显微镜下，需要放大400～600倍才能看到，我们肉眼看到的只不过是含有小球藻的绿色的水。
小球藻所含的营养成分很高，其蛋白质含量达到50%～60%（相当于花生米的2倍、鸡蛋的5倍），含脂肪10%～30%，还含有多种维生素。
小球藻的生物活性物质糖蛋白和多糖体的含量也相当高，这些生物活性物质具有增强人体免疫力、抗癌、降血压、抑制血糖上升、排除体内毒素和迅速恢复机体损伤等功能。
因此，小球藻的培养前景广阔。
作为培养原料的小球藻，可以到较清洁的池塘、水坑中采集绿色的水，在显微镜下鉴定，然后再用。
也可以向培养它的人索取。
1 容器的准备小规模的培养可用瓶、缸等，大规模的培养可用水泥池。
首先，要对所使用的容器进行消毒，一般用100mg/L的漂白粉水溶液浸泡，再用水冲刷数次。
(100mg/L的漂白粉水溶液的配制：①天平称量5g2%漂白粉澄清液；②定量转移至容量瓶中；③加水至1L；④混匀。
2％漂白粉上清液的配制法：取漂白粉2克，加少量水搅匀，再加水至100毫升，充分调匀后，待澄清后取上清液使用。
）2 培养液的准备（1）BG11液体培养基配方：Stock1 定容100mL 柠檬酸0.3g 柠檬酸铁胺0.3g EDTANa2 0.05gStock2 定容1000mL NaNO3 30g K2HPO4 0.78gMgSO4·7H2O 1.5gStock3 定容100mL CaCl2·2H2O 1.9gStock4 定容100mL Na2CO3 2gStock5 定容1000mL H3BO3 2.86g MnCl2·4H2O 1.81g ZnSO4·7H2O 0.222g Na2MnO4·2H2O 0.391g CuSO4·5H2O 0.079g Co(NO3)2·6H2O 0.049gStock1 取用2mL Stock2 取用20mL Stock3 取用2mL Stock4 取用1mL Stock5 取用1mL 总定容1000mL（2）购买2000元/套，九种原液各200ml（稀释1000倍），10瓶。
查氏、TBS、LB培养基等培养基的制备
1. 查氏培养基--Czapek–Dox Medium蔗糖 30 g，NaNO3 3 g，K2HPO4 1 g， KCl 0.5 g， MgSO4· 7H2O 0.5 g，FeSO4 · 7H2O 0.01 g，琼脂 15 g，水 1000 mL，并用氢氧化钠调节 pH 至7.2-7.4。
121℃灭菌 20 min，冷却后备用。
液体培养基不加琼脂，用于菌种的扩大培养。
成分:硝酸钠3g磷酸氢二钾1g硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.5g氯化钾0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂20g蒸馏水1000mL制法: 加热溶解，分装后121℃灭菌20min。
用途: 青霉、曲霉鉴定及保存菌种用。
2. TSB 培养基--牛肉膏蛋白胨培养基：(牛肉膏 5g, 蛋白胨 10g, NaCl 5g, H2O 1000mL, pH 调至 7.2 ~7.4。
)胰蛋白胨 15 g，大豆蛋白胨 5 g，NaCl 5 g，牛肉膏 5 g，琼脂 15 g，水 1000 mL，并用氢氧化钠调节 pH 至 7.2-7.4。
121℃灭菌 20 min，冷却后备用。
液液体培养基不加琼脂，用于菌种的扩大培养。
3. LB 培养基---细菌基础培养基(Tryptone 10g, Yeast extract 5g, NaCl 10g, 水1000mL, pH 调至7.2 ~7.4。
)胰蛋白胨 10 g，酵母提取物 5 g，NaCl 5 g，琼脂 15 g，水 1000 mL，并用氢氧化钠调节 pH 至 7.2-7.4。
121℃灭菌 20 min，冷却后备用。
液体培养基不加琼脂，用于菌种的扩大培养。
4、soc培养基---改良的LB培养基SOC培养基组份浓度：2% (W/V) Tryptone ，0.5% (W/V) Yeast Extract ，0.05% (W/V) NaCl ，2.5 mM KCl 10 mM MgCl2，20 mM glucose。
藻种培养方法
藻种培养方法一、藻种的两种培养类型一般来说藻种的培养有两种方式：一种是长期保存所需要的培养方法，一种是以实验为目的，短期内保藏藻种的培养方法。
长期培养最主要的问题是选择一种合适的培养基，可以在3个月到一年的时间内连续培养藻种。
最适合长期培养藻种的培养基是agar（固体琼脂培养基），但是使用agar有一个弊端，即培养物保持无菌的问题；我们可以加一层蒸馏水（咸水的藻类可以加灭菌过人工的海水）在agar上，这种做法可以保证在长期保种的过程中减少agar水分和营养的流失。
长期保种使用的培养基，不要选择营养过于丰富的，因为多数的藻，尤其是丝状藻，在营养丰富的环境生长，会发生形态结构上的变化，如果要做生理生态方面研究，实验材料的形态结构是不能异常的。
适合长期保种的贫营养的培养基有这些：Bold’s基础培养基，以及该培养基加上蛋白胨或者琼脂制成的a gar，适合长期培养绿藻；Allen及其改良后的配方可以长期培养一般常见的蓝藻和绿藻；土水培养基和它的一个改良的系列也实用培养多数藻种。
对于我库提供的藻种，由于藻种长期习惯的原因，建议使用我们提供的原配方来培养，在长期培养的时候，可以适当稀释原培养基，在藻种培养过程中，生长速率会变慢，可以保持其形态结构不变。
另外，长期培养的时候，除了选择适当的培养基，还可以降低温度5～8C（降温的过程最好能循序渐进，突然改变环境温度，可能会导致藻种不适应而死亡）。
光照强度可以减小为原先的一半。
在实验之前3到4周，将长期培养的藻种接种到我们提供的培养基中（培养基必须灭菌），按照我们给予的培养条件培养，在实验前6天左右，再次接种。
短期培养则可以直接按照我们提供的培养基和培养条件培养。
由于试验的需要，常常要求在短期时间内获得大量的培养物，我们可以采用通气培养和摇床培养。
通气培养可以通CO2或洁净的空气，视培养物的多少来决定通气泵的大小，在通气的硅胶管中设置一个缓冲瓶，塞上灭菌后的脱脂棉，帮助净化空气，如果对通气有更高的要求，可以在通气管中加上一层滤膜。
BG11液体培养配方
BG11液体培养基就是：Stock1 定容100mL柠檬酸0.3g柠檬酸铁胺0.3g EDTANa2 0.05gStock2 定容1000mL NaNO3 30gK2HPO4 0.78gMgSO4·7H2O 1.5gStock3 定容100mL CaCl2·2H2O 1.9gStock4 定容100mLNa2CO3 2gStock5 定容1000mLH3BO3 2.86gMnCl2·4H2O 1.81g ZnSO4·7H2O 0.222gNa2MnO4·2H2O 0.391g CuSO4·5H2O 0.079g Co(NO3)2·6H2O 0.049gStock1 取用2mL Stock2 取用20mL Stock3 取用2mL Stock4 取用1mL Stock5 取用1mL总定容1000mLD1 (Diatom medium)Component Amount Stock Solution(1) NaNO3 1 mL/L 12 g/100ml dH2O(2) K2HPO4 1 mL/L 4 g/100 mL dH2O(3) MgSO4·7H2O 1 mL/L 7g/100 mL dH2O(4 ) CaCl2·2H2O 1 mL/L 2 g/100 mL dH2O(5 ) KH2PO4 1 mL/L 8 g/100 mL dH2O(6 ) Na2SiO3.9H2O 1 mL/L 10g/100ml dH2O(7) MnSO4 0.1mL/L 0.2g/100ml dH2O(8) 柠檬酸铁 1 mL/L 0.5g/100ml dH2O(9) A5 （Trace mental solution）1ml/LH3BO3 2.86g/L dH2OMnCl2·4H2O 1.86g/L dH2OZnSO4·7H2O 0.22g/L dH2ONa2MoO4.2H2O 0.39g/L dH2OCuSO4. 5 H2O 0.08g/L dH2OCo(NO3)2.6 H2O 0.05g/L dH2O(10) 土壤提取液20 mL/L土壤提取液配制方法:取花园土未施过肥200g置于烧杯或三角瓶中，加入蒸馏水1000毫升，瓶口用透气塞封口，在水浴中沸水加热3小时，冷却，沉淀24小时，此过程连续进行3次，然后过滤，取上清液，于高压灭菌锅中灭菌后于4℃冰箱中保存备用。
A5微量元素溶液
Na2MoO4·2H2O……………………………0.390g
Co(NO3)2·6H2O ………………………… 0.049g
BG11蓝绿藻nobacteria (= BG 11)
working solution [g/l]
bg11蓝绿藻培养基配方a5微量元素溶液基本介绍a5微量溶液组成成分bg11蓝绿藻培养基配方基本介绍微量元素溶液a5bg11培养基微量元素的重要组成部分
BG11蓝绿藻培养基配方
A5微量元素溶液
基本介绍
A5微量溶液组成成分
BG11蓝绿藻培养基配方
基本介绍
微量元素溶液A5是BG-11培养基微量元素的重要组成部分。
Ferric ammonium citrate（柠檬酸铁铵）……… 0.006
EDTA (dinatrium-salt) ……………………………0.001
Na2CO3……………………………………………0.02
A5 + Co solution *（A5溶液）………………1ml
Distilled Water（蒸馏水）………………………919ml
BG-11是培养蓝藻使用最广泛的培养基，除了极少数蓝藻，大部分都可以用BG-11培养基。
A5微量溶液组成成分
将以下物质称量并定容至1000ml
H3BO3…………………………………………2.86g
MnCl2·H2O …………………………………1.81g
ZnSO4·7H2O ………………………………0.222g
参考：中科院水生生物研究所淡水藻种库
BG11蓝绿藻培养基配方
NaNO3……………………………………………… 1.5
藻
脆杆藻：将所购藻种在MGC- 300B型微电脑控制-光照培养箱中进行无菌驯化培养,选用D1培养基,培养条件:光照强度2000lux;温度(25± 1)℃ ;光暗比:12h/12h;经过14～ 21d的驯化培养,藻种可达到实验要求。
接种：将预培养的脆杆藻藻种液,用722S分光光度计测出细胞光密度值为0.1～0.2时接种。
取一定体积的藻液,3500r/min下离心10min,弃上清液,沉淀的细胞用无菌15‰碳酸氢钠水溶液重新悬浮,再离心10min,以除去营养物质及其他物质。
这样的洗涤过程进行两次,最后用碳酸氢钠水溶液再悬浮,接种到装有150ml培养基的体积为250ml的锥形瓶中,锥形瓶用透气膜封盖,以防污染。
小环藻：使用 D1 培养液进行培养保存，培养于恒温培养箱中，温度设置为 25℃，光照强度 2600lx，光暗比 14h:10h。
D1 培养液的配方培养液 p H 使用 HCl、Na OH 标准液调整到 7 左右。
配好的 D1 培养液盛放在三角瓶中，使用高压灭菌法进行灭菌，设置数值是 121℃，时间 20 分钟。
水华束丝藻：以BG11培养基保种和培养。
实验培养物的培养条件:温度(25±1)℃ ,光照强度20μE/m2·s,培养基pH8.0。
将培养10天左右的藻种用无菌双蒸水洗涤两遍后按一定的密度重新接种到BG11培养基中,在上述培养条件下,每天摇匀后取样 3 mL,于UV3000紫外/可见分光光度计上直接测定培养物在665 nm的吸光度值,以此表示水华束丝藻的生长[8]。
比生长速率计算:μ=(At1-At2)/Δt;式中:μ—比生长速率;At1—培养物在t1时刻的吸光度值;At2—培养物在t2时刻的吸光度值;Δt—两次测定之间的时间间隔,d。
BG11液体培养基就是：Stock1 定容100mL 柠檬酸0.3g 柠檬酸铁胺0.3g EDTANa2 0.05gStock2 定容1000mL NaNO3 30g K2HPO4 0.78g MgSO4·7H2O 1.5g Stock3 定容100mL CaCl2·2H2O 1.9gStock4 定容100mL Na2CO3 2gStock5 定容1000mL H3BO3 2.86g MnCl2·4H2O 1.81g ZnSO4·7H2O0.222g Na2MnO4·2H2O 0.391g CuSO4·5H2O 0.079g Co(NO3)2·6H2O 0.049g针杆藻：培养条件：培养温度控制在 (15±1)℃，p H 为7.2，光照强度 2600 lux，光期：暗期 =16h ：8h。
BG11培养基
BG11液体培养基按照表3.2配置母液。
母液
质量（g）
备注
母液1
柠檬酸
柠檬酸铁铵EDTA Na2
0.3g
0.3g
0.05g
定容至100Ml
(现配现用)
母液2
NaNO3
K2HPO4
MgSO4·7H2O
(MgSO4)
30g
0.8g
1.5g
(0.732g )
定容至1000mL
（一个月换一次）
1.5% BG11固体培养基：1000mL液体培养基中加入15g琼脂粉。
0.8% BG11固体培养基：1000mL液体培养基中加入8g琼脂粉。
（4）0.5mol/LEDTA(PH8.0)
称取乙二胺四乙酸二钠二水物(C10H14N2O8Na2·2H2O)186.1g，NaOH约2g于1L烧杯中，加入约800mL超纯水中，在磁力搅拌器上搅拌至全溶，再用NaOH调节溶液的pH值至8.0，用超纯水定容至1L，分装，高压蒸汽灭菌备用。
0.049g
定容至1000ml
（一个月换一次）
BG11液体培养基配置：母液1 2mL
母液2 50mL
母液3 2mL
母液4 1mL
母液5 1mL
定容至：1000mL
使用BG11液体培养基，按照表3.2将配置好的5种母液，按照顺序依次加入容量瓶中，用超纯水定容至1000mL，分装后高压蒸汽灭菌，121℃，30min。
母液3
CaCl2·2H2O (CaCl2 )
1.8g
(1.341g)
定容至100mL
母液4
Na2CO3
2g
定容至100mL
母液5
பைடு நூலகம்H3BO4
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BG11液体培养基就是：Stock1 定容100mL柠檬酸 0.3g柠檬酸铁胺 0.3gEDTANa2 0.05gStock2 定容1000mLNaNO3 30gK2HPO4 0.78gMgSO4·7H2O 1.5gStock3 定容100mLCaCl2·2H2O 1.9gStock4 定容100mLNa2CO3 2gStock5 定容1000mLH3BO3 2.86gMnCl2·4H2O 1.81gZnSO4·7H2O 0.222gNa2MnO4·2H2O 0.391gCuSO4·5H2O 0.079gCo(NO3)2·6H2O 0.049gStock1 取用2mLStock2 取用20mLStock3 取用2mLStock4 取用1mLStock5 取用1mL总定容 1000mLD1 (Diatom medium)Component Amount Stock Solution(1) NaNO3 1 mL/L 12 g/100ml dH2O(2) K2HPO4 1 mL/L 4 g/100 mL dH2O(3) MgSO4·7H2O 1 mL/L 7g/100 mLdH2O(4 ) CaCl2·2H2O 1 mL/L 2 g/100 mLdH2O(5 ) KH2PO4 1 mL/L 8 g/100 mL dH2O(6 ) 1 mL/L 10g/100ml dH2O(7) MnSO4L 0.2g/100mldH2O(8) 柠檬酸铁 1mL/L 0.5g/100ml dH2O(9) A5 （Trace mental solution） 1ml/LH3BO3 2.86g/L dH2OMnCl2·4H2O 1.86g/L dH2OZnSO4·7H2O 0.22g/L dH2O0.39g/L dH2OCuSO4. 5 H2O 0.08g/L dH2OCo(NO3) H2O 0.05g/L dH2O(10) 土壤提取液 20 mL/L土壤提取液配制方法:取花园土未施过肥200g置于烧杯或三角瓶中，加入蒸馏水1000毫升，瓶口用透气塞封口，在水浴中沸水加热3小时，冷却，沉淀24小时，此过程连续进行3次，然后过滤，取上清液，于高压灭菌锅中灭菌后于4℃冰箱中保存备用。
f/2 mediumComponent Amount(1) NaNO3 75 mg/L(2) NaH2PO4 · 2H2O mg/L(3) Vitamin B12 μg/L(4) Biotin μg/L(5) Thiamine HCl 100μg/L(6) Na2SiO3 · 9H2O10 mg/L(7) f/2 metals 1 mL/LNa2EDTA · 2H2O 4.4gFeCl3 · 6H2O 3.16 gCoSO4 · 7H2O 0.012gZnSO4 · 7H2O 0.021gMnCl2 · 4H2O0.18 gCuSO4 · 5H2O 0.007gNa2MoO4 · 2H2O0.007gDistilled water 1000 mL(8) Seawater 1000 mLBG-11是培养蓝藻使用最广泛的培养基，微量元素溶液 A5 是BG-11培养基微量元素的重要组成部分。
一、目的要求了解培养基的配制原理。
了解培养基常规配制程序。
了解培养基配制过程各环节的要求和注意事项。
二、基本原理正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础，由于微生物种类及代谢类型的多样性因而用于培养微生物培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。
但一般培养基的配制程序却大致相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相向。
三、实验材科(一)药品待配各种培养的组成成分，琼脂，1mol/L NaOH溶液，1mol/L (升，统一用大写)HCl溶液。
(二)仪器天平或台秤，高压蒸汽灭菌锅。
(三)玻璃器皿移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
(四)其他物品药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。
四、实验内容(一)玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将锥形瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中，用毛刷刷然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡。
再用自来水及蒸馏水冲洗，洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2．灭菌前玻璃器皿的包装(1)培养皿的包装培养皿由一盖—底组成一套。
可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
(2)移液管的包装在移液管的上端塞入—小段棉花(勿用脱脂棉)。
它的作用是避免外界及口中杂菌，并防止菌液等吸入口中。
塞入此小段棉花应距管口约左有。
棉花自身长度约1-1．5cm。
塞棉花时，可用一外圈拉直的曲别针，将少许棉花塞入管口内。
棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。
先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，右手将移液管压紧，在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。
上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。
(二)液体及固体培养基的配制过程1．液体培养基配制(1)称量一般可用1/100粗天平称量配制培养基所需的各种药品。
先按培养基配方计算各成分的用量，行准确称量。
(2)溶化将称好的药品置于一烧杯中，先加入少量水(根据实验需要可用自来水或蒸馏水)，用玻棒热溶解。
(3)定容待全部药品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需体积。
如某种药品用量太少时，可预先配液，然后按比例吸取一定体积溶液，加入至培养基中。
(4)调pH 一般用pH试纸测定培养基的pH。
用剪刀剪出一小段pH试纸，然后用镊子夹取此段pH试中蘸一下，观看其pH范围，如培养基偏酸或偏碱时，可用1mol/l NaOH或1mol/l HCl溶液进行调节。
调节pH 逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。
边加边搅拌，并不时用pH试纸测试，直到所需pH为止。
(5)过滤用滤纸或多层纱布过滤培养基。
一般无特殊要求时，此步可省去。
2．固体培养基的配制配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸，再将称好的琼脂(1．5％-2％)加入，并用玻棒搅拌，以免糊底烧焦。
继续加热至琼脂全部融化，最后补足因蒸发而失去水分。
(三) 培养基的分装根据不同需要，可将己配好培养基分装入试管或锥形瓶内，分装时注意不要使培养基沾污管口或瓶口，污染。
如操作不小心，培养基沾污管口或瓶口时，可用镊子夹一小块脱脂棉，擦去管口或瓶口的培养基，并将脱脂棉弃去。
1．试管的分装取一个玻璃漏斗，装在铁架上，漏斗下连一根橡皮管，橡皮管下端再与另一玻璃管相接，橡皮管的中部弹簧夹。
分装时，用左手拿住空试管中部，并将漏斗下的玻璃管嘴插入试管内，以右手拇指及食指开放弹簧夹，中指及无名指夹住玻璃管嘴，使培养基直接流入试管内。
装入试管培养基的量视试管大小及需要而定，若所用试管大小为15×150 mm时，液体培养基可分装至度1／4左右为宜；如分装固体或半固体培养基时，在琼脂完全融化后，应趁热分装于试管中。
用于制作斜面的体培养基的分装量为管高1／5(约3—4m1)；半固体培养基分装量为管高的1／3为宜。
2．锥形瓶的分装用于振荡培养微生物用时，可在250 m1锥形瓶中加入50 ml的液体培养基，若用于制作平板培养基用250 m1锥形瓶中加入150ml培养基，然后再加入3g琼脂粉(按2％计算)，灭菌时瓶中琼脂粉同时被融化。
(四)棉塞的制作及试管、锥形瓶的包扎为了培养好气性微生物，需提供优良通气条件，同时为防止杂菌污染，则必须对通入试管或锥形瓶内空先进行过滤除菌。
通常方法是在试管及锥形瓶口加上棉花塞等。
1．试管棉塞的制作制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的圆孔上，用右手食指花从中央压入团孔中制成棉塞，然后直接压入试管或锥形瓶口。
也可借用玻璃棒塞入，也可用折叠卷塞法制作棉塞。
制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿缝隙侵入。
棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提试管不下落为准。
棉塞的2／3在试管内，1／3在试管外(图5—1—4)。
目前也有采用金属或塑料试管帽代替棉塞。
直接盖在试管口上。
灭菌待用。
将装好培养基并塞好棉塞或盖好管帽的试管拥成一捆，外面包上一层牛皮纸。
用铅笔注明培养基名称及日期，灭菌待用。
2．锥形瓶棉塞制作通常在棉塞外包上一层纱布，再塞在瓶口上。
有时为了进行液体振荡培养加大通气量，则可用8层纱布棉塞包在瓶口上。
目前也有采用无菌培养容器封口膜直接盖在瓶口，既保证良好通气，过滤除菌又操作简便，故极受欢迎。
在装好培养基并塞好棉塞或包上八层纱布或盖好培养容器封口膜的锥形瓶口上，再包上一层牛皮纸并用捆好，灭菌待用。
(五)培养基的灭菌培养基经分装包扎之后，应立即进行高压蒸汽灭菌，100Pa灭菌20min（灭菌条件根据培养基不同有所含糖培养基105℃，30min）。
如因特殊情况不能及时灭菌，则应暂存于冰箱中。
(六)斜面和平板的制作1．斜面的制作将已灭菌装有琼脂培养基的试管，趁热置于木棒上，使成适当斜度，凝固后即成斜面(图5—1—5)。
斜不超过试管长度1／2为宜。
如制作半固体或固体深层培养基时，灭菌后则应垂直放置至冷凝。
2．平板的制作将装在锥形瓶或试管中已灭菌的琼脂培养基融化后，待冷至50℃左右倾入无菌培养皿中。
温度过高时上的冷凝水太多，温度低于50℃，培养基易于凝固而无法制作平板。
平板的制作应采用无菌操作，左手拿培养皿，右手拿锥形瓶的底部或试管，左于同时用小指和手掌将棉开，灼烧瓶口，月左手大拇指将培养皿盖打开一缝，至瓶口正好伸入，倾入10-12m1的培养基，迅速盖好皿盖，于桌上，轻轻旋转平皿、使培养基均匀分布于整个平皿中、冷凝后即成平板。
(七)培养基的无菌检查灭菌后的培养基，一般需进行无菌检查。
最好从中取出1-2管（瓶），置于37℃恒温箱中培养1—2天菌后方可使用。
(八)无菌水的制备在每个250 mL的锥形瓶内装99mL的蒸馏水并塞上棉塞。
在每支试管内装蒸馏水。
塞上棉塞或盖上塑料管盖。
再在棉塞上包上一张牛皮纸。
高压蒸汽灭菌，100 Pa灭菌20分钟。