版药典微生物限度检查方法验证方案

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版药典微生物限度检查方法验证方案

版药典微生物限度检查方法验证方案

版药典微生物限度检查方法验证方案验证微生物限度检查方法的方案一、实验目的:验证药典中的微生物限度检查方法的准确性、可靠性和可行性。

二、实验材料:1.药典中规定的微生物限度检查方法;2.待验证的药品样品;3.适用的培养基和培养条件;4.培养基的质量控制菌种。

三、实验步骤:1.制备适用的培养基:按照药典中规定的方法和成分制备适用的培养基,并进行批次记录。

2.准备质量控制菌种:3.制备菌液悬液:从购买的质量控制菌种中,挑取一株菌种进行连续传代培养至活性最佳的生长阶段。

然后制备菌液悬液,以备后续试验使用。

4.扩大悬液应用范围:从第3步得到的菌液悬液中,取适量接种于适用培养基上,培养出代表性的细菌菌液悬液。

然后,通过菌液的光学检测、显微镜检查和菌落计数,确定菌液的细菌浓度。

5.验证方法的准确性:将待验证的药品样品加入培养基,根据药典中的方法将培养基分成不少于3组。

每组培养基中分别加入一定量的菌液悬液,并在药典规定的温度和时间下培养。

同时,设置对照组,只加入菌液悬液和培养基。

6.菌落计数:取适量的培养基样品,分别进行菌落计数,并根据培养基的数量、培养基总菌落数、对照组的菌落数等数据,计算菌落形成单位。

7.验证方法的可靠性:将待验证的药品样品按照药典中的方法进行连续验证,至少重复3次。

然后,对比不同验证结果的一致性和稳定性,评估方法的可靠性。

8.验证方法的可行性:根据实际的样品情况和验证结果,评估方法在操作上和技术上的可行性。

如,是否存在样品的特殊要求,检测方法是否能满足检测要求等。

四、数据处理与分析:根据实验结果的菌落计数和验证的次数,进行数据处理和统计分析。

评估验证结果的一致性、可靠性和可行性。

五、结论:根据实验结果和数据分析,得出关于药典中微生物限度检查方法的准确性、可靠性和可行性的结论。

如果验证结果与药典一致,说明方法可靠并可以使用。

如果验证结果与药典不一致,需要进一步分析原因和进行修正或优化。

微生物限度检查方法适用性验证方案

微生物限度检查方法适用性验证方案

目录1.概述 (2)1.1验证目的 (2)1.2验证频次 (2)1.3适用范围 (2)1.4参照标准 (2)1.5验证小组人员及职责 (2)2.试验前准备 (3)2.1验证所需的文件资料 (3)2.2验证条件 (3)2.3回收试验 (5)2.4结果判断 (7)1.概述1.1验证目的进行产品的微生物计数检查时,应进行方法适用性试验(即微生物回收试验),以确认所采用的方法适合于微生物限度检查。

本次验证的目的就是确认本法适合生产原料、初包装材料、一次性妇用(壳聚糖)生物高分子止血吸附栓的微生物限度检查。

1.2验证频次1.2.1建立生产原料、初包装材料一次性妇用(壳聚糖)生物高分子止血吸附栓的微生物限度检查法时。

1.2.2检验方法更改时。

1.2.3原料、初包装材料、产品发生变化或检验程序发生改变时。

1.3适用范围生产原料、初包装材料、一次性妇用(壳聚糖)生物高分子止血吸附栓的微生物限度检查。

1.4参照标准2015版《中国药典》第四部通则。

2.验证前准备2.1验证所需的文件资料2.2验证条件2.2.1环境要求微生物计数检查在万级洁净区内的百级单向流空气区域内进行,其全过程应严格遵守无菌操作,防止微生物污染。

单向流空气区与工作台面必须进行洁净度验证。

2.2.3验证用培养基所有培养基均采用即用型培养基,临用时按使用说明使用。

2.2.4验证用菌株:菌种来源()2.2.5菌液制备-表3-接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上,接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中,30〜35℃培养18〜24小时;接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上,20〜25℃培养24〜48小时,上述培养物用PH7.0无菌氣化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氣化钠溶液制成每lml含菌数小于l00cfu(菌落形成单位)的菌悬液。

接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上,20〜25℃培养5〜7天,加入3〜5ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的pH7无菌氣化钠-蛋白胨缓冲液或0.9% 无菌氣化钠溶液,将孢子洗脱。

益母草颗粒微生物限度检查方法验证2020年版药典

益母草颗粒微生物限度检查方法验证2020年版药典

益母草颗粒微生物限度检查方法验证试验方案及报告编号:页数:验证方案方案起草人:日期:方案审核人:日期:方案批准人:日期:计划实施日期:年月日至年月日目录1、概述2、验证小组及职责分工2.1、验证小组2.2、职责分工3、验证目的4、验证品种5、验证所需前提条件6、验证内容7、验证结论及综合评价8、验证报告9、再验证周期1、概述药品质量标准分析方法验证是通过有组织的系统方法得到的关于药品质量标准分析方法的书面证据,以证明采用的方法是否适合于相应检测要求。

在建立药品质量标准时,分析方法需经验证;在药品生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时,则质量标准分析方法也需进行验证。

方法验证理由、过程和结果均应记载在药品质量标准起草说明或修订说明中。

2验证小组及职责分工2. 1 验证小组组长:质量部部长小组成员:由各部门部长、QC科(微生物室检验员)、QA 验证小组成员签名:2.2 职责分工2.2.1组长职责(1)确定验证项目,制定、审批验证方案,负责验证管理的日常工作及公司内验证工作的调度协调及总结工作。

(2)负责验证任务下达及临时验证小组的确立工作。

(3)监督验证工作的落实进展情况。

(4)负责验证的文档管理。

(5)负责组织验证评价工作与再验证周期的制定。

(6)负责公司有关的验证培训工作。

2.2.2 小组成员职责(1)负责验证方案的起草,参与方案的讨论,确立工作(2)负责方案的实施工作(3)负责验证数据的收集,实施结果的报告工作。

(4)参与验证结果的评价工作2.2.3各部门职责生产技术部:负责保证在每批产品的生产过程中严格遵循批准生效的生产处方和生产规程。

质量管理部:负责生产过程中的质量监控,审核验证中的评价结果及方法。

负责按标准操作规程及验证方案规定的取样计划取样,负责按方法验证内容检验并及时报告检验结果。

负责保证在每批产品的生产过程中严格遵循批准生效的生产处方和生产规程。

负责组织验证方案、验证报告、验证结果的会审、会签;负责验证的协调工作,以保证本验证方案规定项目的顺利实施;负责建立验证档案,及时将批准实施的验证资料收存归档。

版药典药品微生物限度检查法

版药典药品微生物限度检查法

黑曲霉 1 61 57 68 65 0

2 49 47 51 54 0

3 95 94 105 96 0
回收率 84% 94% 88% 83% 86% 95% 80% 82% 89%
92% 91% 93%
89% 91% 94%
培养基稀释法
当供试品五种菌中有一种菌的回收率未达到 70%时,首先考虑用培养基稀释法。
供试液的制备
液体供试品 固体、半固体或粘稠性供试品
取供试品10 g(10ml) ,加pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液100ml,混匀,为1:10供试液,

需用特殊供试液制备方法的供试品

非水溶性供试品

膜剂供试品

肠溶及结肠溶制剂供试品

气雾剂、喷雾剂供试品
非水溶性供试品
取本品10g,置输液瓶中加无菌十四烷酸异丙 脂20ml,充分振摇,使供试品溶解。
举例
一.六味地黄丸微生物限度检查法
检验方法 取本品10g,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲
液100ml,使分散均匀,作为1:10供试液; 取供试液按常规法测定细菌数、霉菌及酵母 菌数,并进行控制菌和大肠菌群检查。
方法说明
六味地黄丸处方为熟地黄、山茱萸、牡丹皮、山药、茯苓、 泽泻,均没有明显抑菌作用。验证实验中,采用常规法测定 5株验证菌株(枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希 菌、白色念珠菌和黑曲霉)的回收率,均符合要求,故进行 细菌、霉菌及酵母菌计数时可采用常规法测定。对于控制菌 和大肠菌群检查,采用大肠埃希菌为对照,与不加供试液的 阳性对照比较,生长正常,故控制菌和大肠菌群检查亦可按 常规法检验。
(2阴性菌对照组 设立阴性菌对照组是为了 验证该控制菌检查方法的专属性。方法同试 验组,验证大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌 检查法时的阴性对照菌采用金黄色葡萄球菌; 验证铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌,梭菌 检查法时的阴性对照菌采用大肠埃希菌。阴 性对照菌不得检出。

FA-VD-108 水杨酸软膏(10%)微生物限度检查方法验证方案

FA-VD-108 水杨酸软膏(10%)微生物限度检查方法验证方案

解放军总医院第一附属医院
水杨酸软膏(10%)
微生物限度检查方法验证方案
1 目的
根据《中国药典》2015版草案中的相关规定,建立水杨酸软膏(10%)的微生物限度检查方法,并对其进行验证,保证其检验方法的科学性,使检验结果准确可靠。

2 范围
本验证方案适用于水杨酸软膏(10%)的微生物限度检查方法的验证。

3 人员与职责
质量控制人员负责验证方案与报告的起草,并按照批准的方案实施,完成检验相关数据的采集;质量保证人员负责验证方案和报告的审核;质量管理负责人负责验证方案和报告的批准。

4 培训
本方案实施前应对参加验证人员进行培训,并做好培训记录确保进行验证的人员均能熟悉、掌握验证过程。

5 验证方案
5.1 制剂信息
水杨酸软膏(10%)为水杨酸分散于冷却的凡士林、羊毛脂、液体石蜡融合物中配制而成,临床作为外用抗菌、消炎及溶解角质使用,有一定的抑菌作用。

其质量标准中规定应进行微生物限度检查,每1g样品中细菌数不得超过100cfu,霉菌和酵母菌数不得超过100cfu,并不得检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。

根据以上特点,本方案中按《中国药典》2015版草案《非无菌产品微
(1106)生物限度检查:微生物计数法》(1105)和《非无菌产品微生物限度检查:控制菌检查法》
中相关要求,决定采用稀释剂稀释法消除抑菌性成分对结果的影响,制备供试品溶液;采用平皿法中的倾注法对供试品中的需氧菌总数及霉菌和酵母菌总数进行计数,根据草案对其质量标准中规定的金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌进行检查,并对所选用的计数和检查方法进行验证。

板蓝根颗粒微生物限度检查检验方法验证方案版

板蓝根颗粒微生物限度检查检验方法验证方案版

1.概述1.1板蓝根颗粒是《中国药典》2015年版一部品种,批准文号:国药准字Z42020660,其处方由板蓝根组成,具有清热解毒,凉血利咽之功效,用于肺胃热盛所致的咽喉肿痛、口咽干燥、腮部肿胀;急性扁桃体炎、腮腺炎见上述证候者。

有效期:18个月。

1.2根据剂型与产品处方判断,板蓝根颗粒的微生物限度检查内容应包括需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数计数、大肠埃希菌检查;根据板蓝根颗粒的成分和历史验证数据分析,该产品无明显的抑菌活性,拟采用“平皿法”进行微生物限度检查,采用“常规法”进行控制菌检查。

2.目的确认所采用的方法适用于该产品的微生物计数,以确保测定方法的可靠性,确保检验结果的准确可靠。

若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时,计数方法应重新进行适用性试验。

3.依据《中国药典》2015年版四部“非无菌产品微生物限度检查:微生物计数法”、“非无菌产品微生物限度检查:控制菌检查法”、“非无菌产品微生物限度标准”。

4.范围本验证方案适用于公司板蓝根颗粒微生物限度检查检验方法的适用性试验。

5.职责5.1验证领导小组5.1.1负责验证方案的审批。

5.1.2负责验证的协调工作,以保证本验证方案规定项目的顺利实施。

5.1.3负责验证数据及结果的审核。

5.1.4负责验证报告的审批。

5.1.5负责发放验证证书。

5.2质量部5.2.1负责验证所需的培养基、样品、菌液、缓冲液等的准备。

5.2.2负责取样及对样品的检验。

5.3项目验证小组5.3.1负责拟订验证方案。

5.3.2负责验证方案的实施和收集各项验证试验记录,并对试验结果进行分析后,起草验证报告,报验证领导小组。

6.验证实施条件6.1验证方案培训:在验证实施前,应对参与验证的人员进行验证方案以及与验证相关的文件进行培训,确保相关人员掌握了验证的相关要求与知识。

6.2微生物限度检测室:检验所使用的检测室应经过HVAC系统确认,并符合要求。

6.3检验用水:验证过程使用的纯化水其制备系统应经过确认并符合要求,纯化水质量应经过检验并符合《中国药典》2015年版二部的要求。

微生物限度检查方法验证方案

微生物限度检查方法验证方案

微生物实验室检测设备配置方案微生物限度检查方法验证方案1.目的:为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查,包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查,特制定本验证方案,通过比较试验菌的恢复生长结果,来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性,以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计,所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。

验证过程应严格按照本方案规定的内容进行,若因特殊原因确需变更时,应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准2.范围:本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。

3.规范性引用文件:根据《中国药典》2010年版二部附录XI J微生物限度检查法的要求,由于某些供试品具有抗菌活性,在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时,可能影响检验结果的准确性,必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。

4.验证实施:4.1.1试验前的准备:4.1.1.1试验用具的准备:将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、滤膜(孔径0.22um、直径50mm)、平皿、空三角瓶、称量纸等,用牛皮纸包扎好后,放于湿热灭菌器中,在121℃,灭菌30 min,在3天内使用。

4.1.1.2试验用培养基的制备:取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基(BL)、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖甘酸培养基(MUG)等脱水培养基,按照相应的配制微生物实验室检测设备配置方案说明,用纯化水配制、分装后,在2小时内,放于湿热灭菌器中,在121℃, 灭菌15 min,在3周内使用。

4.1.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备:取在有效期内的试剂,按照相应的配制方法,配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液等,用纯化水配制,加热使溶,过滤,分装,在121℃,灭菌15 min,在3周内使用。

版中国药典微生物限度检查方法验证方案

版中国药典微生物限度检查方法验证方案

人工牛黄甲硝唑胶囊微生物限度检查方法验证方案下表用于记录修订/变更主要内容及历史..目录1. 概述2. 验证目的和范围3. 组织及职责4. 验证进度计划表5. 验证所需要的仪器设备及相关文件的确认6. 验证所需要的菌种、培养基、检验样品的确认7.验证项目和验证方法7.1试验菌株7.2需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证的菌液制备7.3需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证--常规倾注平皿法7.4需氧菌总数检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法7.5控制菌检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法8.偏差与漏项控制9.验证报告会审1. 概述我公司生产品种人工牛黄甲硝唑胶囊;产品微生物限度检查项目为需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、以及大肠埃希菌检查和沙门菌检查..参照中国药典2015版四部附录1105:微生物计数法;以及1106:控制菌检查法的规定;本公司对该产品的微生物限度检查方法予以验证..通过验证以确认所采用的微生物限度检查方法适用..人工牛黄甲硝唑胶囊处方中含有甲硝唑、人工牛黄以及常用辅料成分;文献资料介绍甲硝唑对细菌有抑菌特性;对霉菌和酵母菌无抑菌活性..甲硝唑在水中微溶;可以通过离心沉淀-薄膜过滤法去除其对微生物生长的影响..本验证方案通过试验菌株的回收率测试;首先确认常规倾注平皿法是否适用于本品的微生物限度检查;如常规倾注平皿法不适用;则进一步验证可去除供试品抑菌物质的离心沉淀-薄膜过滤法是否适用于本品的微生物限度检查..本验证方案根据样品特性制定微生物限度检查方法和检验条件;按制定的方法进行试验;根据验证结果判断是否符合验证标准..2. 验证目的和范围验证该产品的微生物限度检查方法的适用性;对其有效性进行评价;保证检验结果的可靠性..本验证方案采用3批按GMP要求组织生产的人工牛黄甲硝唑胶囊;进行微生物限度检查方法的验证..3.组织及职责3.1验证方案和验证报告的起草、审核、批准验证方案由质量部QC组负责起草;由质量部审核;最终由质量负责人批准..验证方案实施完成后;由QC组负责汇总微生物限度检查法验证的结果、撰写报告;由质量部审核;最终由质量负责人批准报告..3.2验证方案的培训验证方案在经质量负责人批准后;;由QC组组长对本次验证实施的相关人员组织培训工作;并将该次的培训记录归档..3.3验证方案实施过程中的变更和偏差验证方案实施过程中如有变更和偏差;质量负责人应当组织进行评估并采取相应的控制措施..3.4 验证工作小组成员表4. 验证进度计划表本次微生物限度检查方法验证的计划安排时间是2015年12月至2016年1月..5. 验证所需要的仪器设备及相关文件的确认5.1.主要检验仪器设备确认表检查人/日期:复核人/日期:5.2.验证所需文件的确认表检查人/日期:复核人/日期:6. 验证所需要的菌种、培养基、检验样品的确认6.1.试验菌种检查表检查人/日期:复核人/日期:6.2试验所需的培养基检查检查人/日期:复核人/日期:6.3.检验样品确认表检查人/日期:复核人/日期:7.验证项目和验证方法7.1试验菌株人工牛黄甲硝唑胶囊需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证所用的菌株为金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉;控制菌检查方法验证所用的菌株为大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌..试验菌株的传代次数不得超过5代;并采用适宜的菌种保藏技术进行保存;以保证试验菌株的生物学特性..7.2 需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证的菌液制备分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml胰酪大豆胨液体培养基中;30~35℃培养18~24小时;取此培养液1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml;采用10倍递增稀释法;稀释至10-5~10-7;制成50~100cfu/ml的菌悬液备用..接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml沙氏葡萄糖液体培养基中;20~25℃培养2~3天;取此培养液1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml;采用10倍递增稀释法;稀释至10-5~10-7;制成50~100cfu/ml的菌悬液备用..接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面上;20~25℃培养5~7天;直到获得丰富的孢子..加入3~5ml含有0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液;将孢子洗脱;吸至无菌试管中;取1ml加含有0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液9ml;采用10倍递增稀释法;稀释至10-5~10-7;制成50~100cfu/m的孢子悬液备用..菌液制备后若在室温下放置;应在2 小时内使用;若保存在2~8℃;可在24小时内使用..黑曲霉孢子悬液可保存在2~8℃ ;在验证过的贮存期内使用..验证时;对各试验菌的回收率逐一进行验证..7.3. 需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证--常规倾注平皿法7.3.1.供试液的制备取供试品10g;加0.9%无菌氯化钠溶液至100ml;振摇;制成1:10的供试液..7.3.2.试验组取1:10的供试液1ml和7.2项下制备的50~100cfu的试验菌;分别注入平皿中;立即倾注不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基20ml混匀;每株试验菌株平行制备2个平皿..置30~35℃培养箱中培养3天金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌;或培养5天白色念珠菌、黑曲霉;点计菌落数..另取1:10的供试液1ml和7.2项下制备的50~100cfu的白色念珠菌、黑曲霉;分别注入平皿中;立即倾注不超过45℃的沙氏葡萄糖琼脂培养基20ml混匀;每株试验菌株平行制备2个平皿..置20~25℃培养箱中培养5天;点计菌落数..取1:10的供试液1ml注入平皿中;立即倾注不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基20ml混匀;平行制备2个平皿..置30~35℃培养箱中培养5天;点计菌落数..另取1:10的供试液1ml注入平皿中;立即倾注不超过45℃的沙氏葡萄糖琼脂培养基培养基20ml混匀;平行制备2个平皿..置20~25℃培养箱中培养5天;点计菌落数..取0.9%无菌氯化钠溶液1ml和7.2项下制备的50~100cfu的试验菌;分别注入平皿中;立即倾注不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基20ml混匀;每株试验菌株平行制备2个平皿..置30~35℃培养箱中培养3天金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌;或培养5天白色念珠菌、黑曲霉;点计菌落数..另取0.9%无菌氯化钠溶液1ml和7.2项下制备的50~100cfu的白色念珠菌、黑曲霉;分别注入平皿中;立即倾注不超过45℃的沙氏葡萄糖琼脂培养基培养基20ml混匀;每株试验菌株平行制备2个平皿..置20~25℃培养箱中培养5天;点计菌落数..常规倾注平皿法方法验证的接受标准试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值即试验菌的回收率应在0 .5 2 范围内..常规倾注平皿法方法验证的结果常规倾注平皿法测定需氧菌总数方法验证结果试验次数1:人工牛黄甲硝唑胶囊批号: ;胰酪大豆胨琼脂培养基配制批号:培养箱型号编号;培养温度:;培养时长:金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌3天;白色念珠菌、黑曲霉5天试验人/日期:复核人/日期:试验次数2:人工牛黄甲硝唑胶囊批号: ;胰酪大豆胨琼脂培养基配制批号:培养箱型号编号;培养温度:;培养时长:金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌3天;白色念珠菌、黑曲霉5天试验人/日期:复核人/日期:试验次数3:人工牛黄甲硝唑胶囊批号: ;胰酪大豆胨琼脂培养基配制批号:培养箱型号编号;培养温度:;培养时长:金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌3天;白色念珠菌、黑曲霉5天试验人/日期:复核人/日期:常规倾注平皿法测定霉菌与酵母菌总数方法验证结果试验次数1:人工牛黄甲硝唑胶囊批号: ;沙氏葡萄糖琼脂培养基配制批号:培养箱型号编号;培养温度:;培养时长:5天试验人/日期:复核人/日期:试验次数2:人工牛黄甲硝唑胶囊批号: ;沙氏葡萄糖琼脂培养基配制批号:培养箱型号编号;培养温度:;培养时长:5天试验人/日期:复核人/日期:试验次数3:人工牛黄甲硝唑胶囊批号: ;沙氏葡萄糖琼脂培养基配制批号:培养箱型号编号;培养温度:;培养时长:5天试验人/日期:复核人/日期:常规倾注平皿法测定需氧菌总数、霉菌与酵母菌总数方法验证小结按照验证方案的要求进行试验;若各试验菌株的回收率在0.5~2范围内;则可确认常规倾注平皿法适用于本品的需氧菌总数、霉菌与酵母菌总数检查..如常规倾注平皿法适用于霉菌与酵母菌总数检查;但不适用于需氧菌总数检查;则下面进一步验证可去除供试品抑菌物质的离心沉淀-薄膜过滤法是否适用于本品的需氧菌总数检查..7.4. 需氧菌总数检查—离心沉淀-薄膜过滤法7.4.1.供试液的制备取供试品10g;加0.9%无菌氯化钠溶液至100ml;振摇;制成1:10的供试液贮备液..取1:10的供试液贮备液50ml;经500转/分钟离心3分钟;取上清液得供试液..7.4.2.试验组取供试液1 ml;加至100 ml 0.9%无菌氯化钠溶液中;混匀;全量通过薄膜孔径0.45μm混合纤维素膜后;以0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜2次100ml/次;然后在第3次冲洗液100ml0.9%无菌氯化钠溶液中加入7.2项下制备的50~100cfu 的试验菌;过滤..每株试验菌株平行制备2张滤膜..取出滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平皿上;30~35℃倒置培养3天金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌;或培养5天白色念珠菌、黑曲霉;点计菌落数..7.4.3.供试品对照组取供试液1 ml;加至100 ml 0.9%无菌氯化钠溶液中;混匀;全量通过薄膜孔径0.45μm混合纤维素膜后;以0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜3次100ml/次;平行制备2张滤膜..取出滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平皿上;30~35℃倒置培养5天;点计菌落数..7.4.4.菌液对照组取0.9%无菌氯化钠溶液300 ml;200ml通过薄膜孔径0.45μm混合纤维素膜后;在余下的100ml0.9%无菌氯化钠溶液中加入7.2项下制备的50~100cfu的试验菌;过滤..每株试验菌株平行制备2张滤膜..取出滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平皿上;30~35℃倒置培养3天金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌;或培养5天白色念珠菌、黑曲霉;点计菌落数..稀释剂对照组依照7.2项下菌液制备方法;以0.9%无菌氯化钠为稀释液;将各菌液稀释至含菌50~100cfu/ml;然后以500转/分钟离心3分钟;取上层菌液作下面的试验..取上层菌液1 ml;加至100 ml 0.9%无菌氯化钠溶液中;混匀;全量通过薄膜孔径0.45μm混合纤维素膜后;以0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜3次100ml/次;每株试验菌株平行制备2张滤膜..取出滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平皿上;30~35℃倒置培养3天金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌;或培养5天白色念珠菌、黑曲霉;点计菌落数..7.4.6. 离心沉淀-薄膜过滤法测定需氧菌总数方法验证的接受标准试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值即试验菌的回收率应在0 .5 2 范围内;同时稀释剂对照组与菌液对照组菌落数的比值应也在0 .5 2 范围内..7.4.7.离心沉淀-薄膜过滤法测定需氧菌总数方法验证的结果试验次数1:人工牛黄甲硝唑胶囊批号: ;胰酪大豆胨琼脂培养基配制批号:培养箱型号编号;培养温度:;培养时长:金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌3天;白色念珠菌、黑曲霉5天试验人/日期:复核人/日期:试验次数2:人工牛黄甲硝唑胶囊批号: ;胰酪大豆胨琼脂培养基配制批号:培养箱型号编号;培养温度:;培养时长:金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌3天;白色念珠菌、黑曲霉5天试验人/日期:复核人/日期:试验次数3:人工牛黄甲硝唑胶囊批号: ;胰酪大豆胨琼脂培养基配制批号:培养箱型号编号;培养温度:;培养时长:金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌3天;白色念珠菌、黑曲霉5天试验人/日期:复核人/日期:7.4.8. 离心沉淀-薄膜过滤测定需氧菌总数方法验证小结按照验证方案的要求进行试验;若试验组各试验菌株的回收率在0.5~2范围内;稀释剂对照组各试验菌株的的回收率也在0.5~2范围内;则可确认离心沉淀-薄膜过滤法适用于本品的需氧菌总数检查..人工牛黄甲硝唑胶囊照此验证过的供试液制备方法及计数方法进行需氧菌总数计数..7.5.控制菌检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法若在7.3需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证--常规倾注平皿法的试验中;证实了人工牛黄甲硝唑胶囊有抑菌性;不能使用常规倾注平皿法进行需氧菌总数检查;则为了确保控制菌检查的可靠性;采用可去除供试品抑菌物质的离心沉淀-薄膜过滤法进行控制菌检查;按照以下方案进行方法学验证..7.5.1试验菌株人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准中规定检查的控制菌为大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌;所以选择这两种菌株进行控制菌检查的方法学验证..试验菌株的传代次数不得超过5代;并采用适宜的菌种保藏技术进行保存;以保证试验菌株的生物学特性..7.5.2 控制菌检查方法验证的菌液制备分别接种大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌的新鲜培养物至10ml胰酪大豆胨液体培养基中;30~35℃培养18~24小时;取此培养液1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml;采用10倍递增稀释法;稀释至10-5~10-7;制成50~100cfu/ml的菌悬液备用..菌液制备后若在室温下放置;应在2 小时内使用;若保存在2~8℃;可在24小时内使用..验证时;对各试验菌的回收率逐一进行验证..7.5.3大肠埃希菌检查方法验证供试液的制备取供试品10g;加0.9%无菌氯化钠溶液至100ml;振摇;制成1:10的供试液贮备液..取1:10的供试液贮备液50ml;经500转/分钟离心4分钟;取上清液得供试液..取供试液10ml;加至100 ml0.9%无菌氯化钠溶液中;混匀;全量通过薄膜后;以0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜2次100ml/次;然后在第3次冲洗液100ml0.9%无菌氯化钠溶液中加入~100cfu的大肠埃希菌;过滤..取膜接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中;混匀;30~35℃培养18~24小时..取上述增菌培养物1ml接种至100ml麦康凯液体培养基中;42~44℃培养24~48小时..取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上;30~35℃培养18~72小时..麦康凯琼脂培养基平板上应有大肠埃希菌典型菌落生长..组~100cfu/ml;然后以500转/分钟离心3分钟;取上层菌液作下面的试验..取上层菌液1 ml;加至100 ml 0.9%无菌氯化钠溶液中;混匀;全量通过薄膜孔径0.45μm混合纤维素膜后;以0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜3次100ml/次..取膜接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中;混匀;30~35℃培养18~24小时..取上述增菌培养物1ml接种至100ml麦康凯液体培养基中;42~44℃培养24~48小时..取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上;30~35℃培养18~72小时..麦康凯琼脂培养基平板上应有大肠埃希菌典型菌落生长..取0.9%无菌氯化钠溶液300 ml;全量通过薄膜孔径0.45μm混合纤维素膜后;取膜接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中;混匀;30~35℃培养18~24小时..阴性对照应无菌生长..试验次数1:人工牛黄甲硝唑胶囊批号:大肠埃希菌对照菌来源批号菌种编号试验人/日期:复核人/日期:试验次数2:人工牛黄甲硝唑胶囊批号:大肠埃希菌对照菌来源批号菌种编号试验人/日期:复核人/日期:试验次数3:人工牛黄甲硝唑胶囊批号:大肠埃希菌对照菌来源批号菌种编号试验人/日期:复核人/日期:大肠埃希菌检查方法验证结果小结按照验证方案的要求进行试验;若试验组与阳性对照组均检出典型大肠埃希菌;阴性对照组无菌生长;则可确认离心沉淀-薄膜过滤法适用于本品的大肠埃希菌检查..人工牛黄甲硝唑胶囊照此验证过的供试液制备方法及大肠埃希菌检查方法进行检查..菌检查方法验证7.5.4.1供试液的制备取样品10g加0.9%无菌氯化钠溶液至100 ml制成1:10的供试液..取全部供试液经500转/分钟离心4分钟;取全部上清液为供试液..7.5.4.2.试验组取全部供试液;加至100 ml 0.9%无菌氯化钠溶液中;混匀;全量通过薄膜后;以0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜2次100ml/次..然后在第3次冲洗液100ml0.9%无菌氯化钠溶液中加入~100cfu的乙型副伤寒沙门菌;过滤..取膜接种至200ml 胰酪大豆胨液体培养基中;混匀;30~35℃培养18~24小时..取上述增菌培养物0.1ml接种至10mlRV沙门增菌液体培养基;30~35℃培养18~24小时..取少量RV沙门菌增菌液体培养物划线接种于木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上;30~35℃培养18~48小时..沙门菌在木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上应生长良好;菌落为淡红色或无色、透明或半透明、中心有或无黑色..用接种针挑选出木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上的典型菌落;于三糖铁琼脂培养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种;培养18~24小时.. 7.5.4.3阳性对照组~100cfu/ml;然后以500转/分钟离心3分钟;取上层菌液作下面的试验..取上层菌液1 ml;加至100 ml 0.9%无菌氯化钠溶液中;混匀;全量通过薄膜孔径0.45μm混合纤维素膜后;以0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜3次100ml/次..取膜接种至200ml胰酪大豆胨液体培养基中;混匀;30~35℃培养18~24小时..取上述增菌培养物0.1ml接种至10mlRV沙门增菌液体培养基;30~35℃培养18~24小时..取少量RV沙门菌增菌液体培养物划线接种于木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上;30~35℃培养18~48小时..沙门菌在木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上应生长良好;菌落为淡红色或无色、透明或半透明、中心有或无黑色..用接种针挑选出木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上的典型菌落;于三糖铁琼脂培养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种;培养18~24小时..7.5.4.4阴性对照组取0.9%无菌氯化钠溶液300 ml;全量通过薄膜孔径0.45μm混合纤维素膜后;取膜接种至200ml胰酪大豆胨液体培养基中;混匀;30~35℃培养18~24小时..阴性对照应无菌生长..7.5.4.5离心沉淀-薄膜过滤法测定乙型副伤寒沙门菌方法验证结果试验次数1:人工牛黄甲硝唑胶囊批号:乙型副伤寒沙门菌对照菌来源批号菌种编号试验人/日期:复核人/日期:试验次数2:人工牛黄甲硝唑胶囊批号:乙型副伤寒沙门菌对照菌来源批号菌种编号试验人/日期:复核人/日期:试验次数3:人工牛黄甲硝唑胶囊批号:乙型副伤寒沙门菌对照菌来源批号菌种编号试验人/日期:复核人/日期:7.5.4.6乙型副伤寒沙门菌检查方法验证结果小结按照验证方案的要求进行试验;若试验组与阳性对照组均检出典型乙型副伤寒沙门菌;阴性对照组无菌生长;则可确认离心沉淀-薄膜过滤法适用于本品的乙型副伤寒沙门菌检查..人工牛黄甲硝唑胶囊照此验证过的供试液制备方法及乙型副伤寒沙门菌检查方法进行检查..8.偏差与漏项控制:微生物限度检查方法验证过程中存在和发现的任何偏差与漏项;都应进行详细的记录;并应按公司GMP文件偏差处理规程进行调查与处理..偏差调查与处理的报告和支持文件;应作为此确认方案的附录部分..检查人/日期:复核人/日期:9.验证报告会审验证报告会审表。

微生物限度检查方法验证方案

微生物限度检查方法验证方案

微生物限度检查方法验证方案微生物限度检查法验证方案1。

目的:为确认所采用的方法适用于药品微生物限度检查,包括细菌、霉菌、酵母菌和对照菌的计数,特制定本验证方案。

通过比较试验菌的复苏生长结果,评价整个试验方法的准确性、有效性和重现性,从而确定试验样品在实验条件下无抑菌活性或抑菌活性可忽略不计。

所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。

验证过程应严格按照本计划规定的内容进行。

因特殊原因确需变更的,应填写《验证计划变更申请书》,报验证领导小组批准。

2.范围: 本验证计划适用于微生物限度检查方法的验证。

3。

规范性引用文件:根据《中国药典》XXXX版附录二附录九J微生物限度检查法的要求,由于部分试验品的抗菌活性,当已建立的微生物检查方法或产品的成分发生变化或原检查方法的检查条件发生变化时,可能会影响检查结果的准确性。

因此,必须验证测试物品的抗菌活性和测试方法的可靠性。

4.验证和实施:4.4.1试验前准备:4.4.1.1试验设备的准备:试管、刻度移液器、薄膜过滤器、滤膜(孔径0.22um,直径50毫米)、平皿、空三角瓶、称重纸等。

试验要求用牛皮纸包裹,放在湿热灭菌器中,在121℃灭菌30分钟,3天内使用4.4.1.2试验培养基的制备:取脱水培养基如营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基(BL)、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡萄糖醛酸苷培养基(MUG)等经适用性检验合格的脱水培养基,按相应的制备说明用纯净水配制,分装,2小时内放入湿热灭菌器中,121℃灭菌15分钟,3周内使用4.4.1.3试验用稀释液/缓冲液和冲洗液的配制:取有效期内的试剂,配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%(毫升/毫升)聚山梨酯80无菌氯化钠溶液和0.05%(毫升/毫升)0.9%氯化钠溶液等。

按照相应的制备方法,用纯净水配制,加热溶解,过滤,分装,121℃灭菌15分钟,3周内使用4.4.2试验菌的制备和稀释:4.4.2.1细菌、霉菌和酵母菌计数法验证菌液:4.4.2.1.1取少量新鲜培养的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌,接种于10毫升营养肉汤中,在30-35℃培养18-24小时;将新鲜白色念珠菌培养物接种到改良的马丁培养基中,在23-28℃培养24-48小时;将黑曲霉的新鲜培养物接种到改良的马丁琼脂斜面培养基上,在23-28℃培养5-7天4.4.2.1.2将上述大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和白色念珠菌的均匀培养物(细菌悬液)用0.9%无菌氯化钠溶液稀释两次,以制备每毫升细菌含50-100伏的测试细菌溶液。

微生物限度检查方法验证方案

微生物限度检查方法验证方案

微生物限度检查法验证方案文件编号:起草人:起草日期:_________ 审核人:审核日期:_________ 批准人:批准日期:_________********有限公司****有限公司文件编号:FA-YZ-微生物限度检查法验证方案1.概述药典微生物限度检查法中要求在建立药品的微生物限度检查法时,应进行方法的验证,以证明所采用的方法适合于微生物限度检查。

所以对******微生物限度检查进行方法的验证。

2.目的为了保证检验质量,对所用的检验方法必须经过验证,才能确保检验结果的准确可靠。

3.适用范围本方案适用于****微生物方法学的确认与验证。

4.验证人员职责4.1.验证小组:组长:质量管理部经理成员:QC主管、微生物操作人员4.2.职责及分工:QC主管组织起草该验证方案,并组织实施该方案;微生物操作人员具体实施该方案;质量管理部经理协助和监控该方案的实施。

4.3.验证方案批准后,应进行培训。

由验证小组指定人员负责对小组成员及和验证有关的人员进行培训。

5.验证依据中国药典2015年版通则“1105”、“1106”6.****生物限度检验方法验证风险分析6.1 结果分析:通过以上采取的措施,风险均控制在可接受范围内。

7. 人员培训确认表8.验证方法6.1验证用样品: ****** 规格: 批号:****** 规格: 批号: ****** 规格: 批号:6.2. 验证用培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基 生产厂家: 批号: 配制批号: 沙氏葡萄糖琼脂培养基 生产厂家:批号: 配制批号: 营养琼脂培养基 生产厂家: 批号: 配制批号: 胰酪大豆胨液体培养基 生产厂家: 批号: 配制批号: 沙氏葡萄糖琼脂培养基 生产厂家: 批号 : 配制批号:麦康凯液体培养基生产厂家:批号:配制批号:麦康凯琼脂培养基生产厂家:批号:配制批号:6.3验证用菌种:金黄色葡萄球菌(CMCC(B)26 003)、大肠埃希菌(CMCC(B)44 102)、枯草芽孢菌(CMCC(B)63 501)、白色念珠菌(CMCC(F)98 001)、黑曲霉菌(CMCC(F)98 003)6.4菌液制备:6.4.4取经30℃~35℃培养18~24小时的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌与枯草芽孢杆菌营养肉汤液体培养物1ml加入9ml 0.9%氯化钠溶液中,10倍稀释至10-5~10-7为不大于100cfu/ml 备用。

中国药典微生物限度检查法

中国药典微生物限度检查法

中国药典微生物限度检查法
中国药典是中华人民共和国国家药品监督管理局编制的用于药品质量标准和规范的权威性文献。

其中,微生物限度检查是对药物产品中的微生物污染进行评估和控制的重要环节。

中国药典中的微生物限度检查法主要包括以下几个方面:
1.检测项目:微生物限度检查主要关注细菌、真菌和酵母菌
的存在与数量。

通常会检测大肠杆菌、铜绿假单胞菌、霉
菌和酵母菌等常见微生物。

2.样品准备:样品准备过程中,要根据具体要求制备适当稀
释的样品溶液。

根据不同产品的特点和要求,可能需要使
用适当的培养基进行预处理。

3.检测方法:中国药典中提供了一系列的微生物限度检测方
法,包括涂片法、水洗法、滤膜法等。

这些方法可以根据
不同的样品类型和特性选择适合的检测方法。

4.培养和观察:按照检测方法的要求,将样品接种在适当的
培养基上,进行培养并观察一定时间。

观察期间,需要注
意各种细菌、真菌和酵母菌的生长情况。

5.计数和判定:根据培养结果,进行微生物数量的计数,并
与规定的限度标准进行比较。

根据比较结果,判定样品是
否符合微生物限度标准。

通过微生物限度检查,可以评估药物产品中的微生物污染状况,并确保其在接受者使用时的安全性。

中国药典中的微生物限度
检查法为药品质量控制提供了重要的指导和标准。

纯化水的微生物限度检查方法验证

纯化水的微生物限度检查方法验证

纯化水的微生物限度检查方法验证//////////// 制药有限公司微生物限度检查方法验证验证方案制定人:部门:日期:验证方案审核人:部门:日期:验证方案批准人:部门:日期:1//////////// 制药有限公司1验证目的:当建立纯化水的微生物限度检查法时,应进行细菌、霉菌和酵母菌检查方法的验证,以确认所采用的方法适合于纯化水的细菌、霉菌和酵母菌检查。

2验证方案:照《中国药典》2021版二部附录Ⅺ J 方法。

2.1仪器与试药2.1.2仪器:STV3无菌检查薄膜过滤器(浙江宁海白石药检仪器厂),微孔滤膜(孔径0.45um,直径50mm)。

2.1.3试药:2.1.4培养基:营养琼脂培养基,玫瑰红钠琼脂培养基,营养肉汤培养基。

来源:北京三药科技开发公司生产中国药品生物制品检定所监制 2.1.5试液:生理盐水,pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。

(均按照《中国药典》2021版二部附录Ⅺ H、J要求配制)2.1.6对照菌株:大肠埃希菌[CMCC(B) 44 102]、金黄色葡萄球菌[CMCC(B) 26 003]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63 501]、白色念珠菌[CMCC(F) 98 001]、黑曲霉 [CMCC(F) 98 003]。

来源:广州药物研究中心 2.2对照菌液的制备:取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的营养琼脂斜面新鲜培养物各1环分别接种于15ml 营养肉汤培养基内,于30~35℃培养18~24小时后,稀释至1:10~1:10,,取1ml注入平皿中,注入约45℃的营养琼脂培养基约15ml,混匀,凝固后置30~35℃培养48h,进行活菌计数。

取白色念珠菌的玫瑰红钠琼脂斜面新鲜培养物1环接种于改良的马丁琼脂培养基内,于25~28℃培养24~48小时后稀释至1:10~1:10,取1ml注入平皿中,注入约45℃的玫瑰红钠琼脂培养基约15ml,混匀,凝固后置25~28℃培养72h,进行活菌计数。

中国药典微生物限度检查方法验证方案

中国药典微生物限度检查方法验证方案

中国药典微生物限度检查方法验证方案一、引言药品的质量与安全性是保障患者用药安全的重要方面。

微生物限度检查是药品质量控制的重要环节,用于评价药品中微生物的污染情况。

为确保检测结果的准确性和可靠性,本文旨在制定中国药典微生物限度检查方法验证方案。

二、背景微生物限度检查方法验证是指确定某一方法在特定条件下的适用性,方法验证的结果直接影响到药品生产和品质控制。

为了保证方法验证的可靠性,必须按照一定的规范和要求进行操作。

三、验证目的验证中国药典中所规定的微生物限度检查方法在实际应用中的准确性和可靠性,以确保药品的微生物限度符合国家及相关法规的要求。

四、验证程序1. 确定验证方法:根据中国药典中规定的微生物限度检查方法,选择合适的验证样品和验证条件。

2. 准备验证样品:从实际生产过程中随机选取药品样品,确保样品的代表性。

3. 执行验证实验:按照中国药典中的方法操作,对验证样品进行微生物限度检查。

4. 数据分析和评估:根据验证实验的结果,进行数据分析和评估,评估方法的准确性和可靠性。

5. 结果判定:根据数据评估结果,对微生物限度检查方法进行判定,判断方法是否适用于实际生产中的微生物限度检查。

6. 验证报告编制:根据验证实验的结果和结论,编制验证报告。

五、验证内容本次验证主要包括如下内容:1. 对选择的验证样品进行微生物限度检查。

2. 对验证样品进行菌落计数。

3. 对验证样品进行培养方法的验证。

4. 对不同微生物种类的检查方法进行验证。

5. 对不同微生物菌株的适应性进行验证。

六、风险评估在验证过程中,存在一定的风险因素,需进行风险评估,确保验证结果的可靠性和准确性。

风险评估主要包括验证样品来源的可靠性、实验操作的准确性、验证条件的合理性等。

七、验证结果与讨论根据验证实验的结果和数据分析,可以得出下列结论:1. 所验证的微生物限度检查方法在实际应用中的准确性和可靠性较高。

2. 所验证的微生物限度检查方法适用于不同药品制剂类型的微生物限度检查。

微生物限度方法学验证完整版

微生物限度方法学验证完整版

微生物限度方法学验证 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】微生物限度检查方法学验证一、检验方法依据微生物计数法(中国药典2015年版四部1105);控制菌检查法(中国药典2015年版四部1106);非无菌药品微生物限度标准(中国药典2015年版四部1107);抑菌效力检查法(中国药典2015年版四部1121)检查。

二、菌种、培养基及稀释液表2培养基表3对照用培养基表4试剂稀释液:(1)缓冲液取L磷酸二氢钾溶液250ml,加L氢氧化钠溶液118ml,用水稀释至1000ml,摇匀,既得。

(2)%无菌氯化钠溶液取氯化钠,加水溶解使成1000ml,过滤,分装、灭菌。

(3)%(ml/ml)聚山梨酯80的%无菌氯化钠溶液取聚山梨酯80 ,用%无菌氯化钠溶液溶解并稀释至1000ml,滤过,分装,灭菌,备用。

(4)靛基质试液取对二甲氨基苯甲醛,加入95%乙醇95ml,充分振摇,使完全溶解后,取盐酸20ml徐徐滴入。

三、菌液的制备1细菌、霉菌、酵母菌接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中,培养24小时;接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上,培养48小时。

上述培养物用%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液备用。

接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上,培养7天,加入5ml含%(ml/ml)聚山梨酯80的%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱,然后吸出孢子悬液(用带有无菌棉花的能过滤菌丝的无菌毛细吸管)用%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含孢子数50~100cfu的孢子悬液。

菌液制备后若在室温下放置,应在2小时内使用,若保存在2~8℃可在24小时内使用。

2控制菌接种大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中,培养24小时。

用%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10~100cfu 的菌悬液。

2022版药典微生物限度微生物无菌方法学验证流程

2022版药典微生物限度微生物无菌方法学验证流程

2022版药典微生物限度微生物无菌方法学验证流程1.:提交单位购买申请菌种的购买:需要1.5个月单位介绍信证明工作用途等文件,并向中检院网站提交申请,接到申请后一个月后中检院会把有的菌种邮寄到使用单位,中检院菌种经常缺货并不是很齐全,不能一次买齐所需要的8种菌一次性买齐,2.每种从菌复活、分离、纯化复壮:共需要30天药典规定进行药品检验所需8种标准阳性菌,购买中检院冻干菌粉后进行复活与保藏1大肠埃希菌2金黄色葡萄球菌3枯草芽孢杆菌4生孢梭菌5铜绿假单胞菌6沙门菌(细菌每种冻干菌粉复活到分离纯化保藏各需要3-4天时间)7白色念珠菌8黑曲霉菌(霉菌酵母菌冻干菌粉从复活到分离纯化制备孢子菌悬液需要至少7天时间)3.培养基适用性/灵敏度验证:需要60-80天实验中使用的培养基需要进行与中检院提供的标准培养基进行培养基适用性验证每种培养基不同批号之间也需要进行验证之后方可以进行微生物检验用药检室现有培养基种类20余种,每种培养基验证需要3-4天,完成所有培养基适用性验证需要60-80天。

恩替卡韦分散片微生物限度方法学适用性验证:1.回收率验证:回收率验证实验共需要26天(若回收率达不到药典规定需要重新选用另一种方法进行验证)五种实验菌分别验证1金黄色葡萄球菌2铜绿假单胞菌3枯草芽孢杆菌4白色念珠菌5黑曲霉菌五种阳性菌的回收率验证需使标准阳性菌回收率在阳性对照组计数达到50%-200%之间假设验证一次成功3种细菌回收率各需要4天时间,2霉菌酵母菌各需要7天时间2.控制菌适用性验证:共需要20天大肠埃希菌控制菌方法:需要5天时间其他制剂含药材原粉的中药制剂需要检查沙门菌、耐胆盐革兰式阴性菌各需要7天时间共1周实验室消毒实验用具灭菌,实验细菌培养物灭活处理,实验用具洗涮等方法学验证一次顺利完成共需要46天,验证方法过程需要重复一遍作为方法学适用性确认复方茵陈注射液无菌方法学适用性验证:1.方法适用性验证:验证实验共需要30天(若回收率失败或达不到药典规定回收率需要重新选用方法进行验证)五种实验菌分别验证1金黄色葡萄球菌2大肠埃希菌菌3枯草芽孢杆菌4生孢梭菌5白色念珠菌6黑曲霉菌6种实验组阳性菌需与对照管组进行对照,含供试品的实验菌均生长良好则说明方法可行假设验证一次成功每种菌分别按规定温度培养,培养时间不得超过5天实验室消毒实验用具灭菌,实验细菌培养物灭活处理,实验用具洗涮等,方法学验证一次顺利完成共需要30余天,验证方法过程需要重复一遍作为方法学适用性确认。

版中国药典纯化水微生物限度检测方法验证方案

版中国药典纯化水微生物限度检测方法验证方案

1. 审批起草人签名:审核人签名:批准人签名:2. 目录1.审批 (1)2.目录 (2)3.目的 (3)4.范围 (3)5.职责 (3)6.执行程序 (4)7.描述 (4)8.方法验证 (4)8.1.人员培训 (4)8.2.文件确认 (5)8.3.仪器确认 (5)8.4.供试品确认 (6)8.5.培养基及缓冲液确认 (6)8.6.菌种确认 (7)8.7.培养基 (7)8.8.菌种:枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌。

(7)8.9.供试品制备 (8)8.10.试验结果 (9)8.11.验证结果分析与评价 (10)9.偏差处理 (10)10.变更控制 (10)11.附件日志 (11)12.再验证 (11)13.参考书目 (11)14.修订历史 (12)3. 目的纯化水微生物限度检查采用薄膜过滤法,验证该方法适用于纯化水中需氧菌总数的测定。

4. 范围本验证方案适用于上海XXXX有限公司QC实验室,对纯化水微生物限度检查方法(薄膜过滤法)适用性的验证。

5. 职责5.1. 验证小组组成:5.2. 验证小组组长负责5.2.1. 组织起草或审核验证方案及变更申请;5.2.2. 对验证小组成员进行培训;5.2.3. 验证方案的组织实施;5.2.4. 对验证过程中的记录审核,保证其真实性、可靠性和完整性;5.2.5. 组织验证报告的起草、汇总并参与对其进行审核及验证周期的拟定。

5.3. QA参与人员负责5.3.1. 审核验证方案、报告及报告中出现的偏差、变更;5.3.2. 参与验证方案的实施及评价;5.3.3. 对验证方案及报告进行编号并纳入验证文件系统且归档。

5.4. QC参与人员负责5.4.1. 起草验证方案;5.4.2. 已经批准的验证方案的具体实施;5.4.3. 收集测试数据,应评估数据并对测试数据做出评论;5.4.4. 参与偏差调查、变更申请等;5.4.5. 起草验证报告。

6. 执行程序6.1. 一旦方案被批准和发布,组长对本验证小组人员进行本方案的培训;6.2. 所有用于测试的仪器/仪表都必须经过校验/验证后才能用于测试;6.3. 验证小组负责核查所有完成的测试结果和附件的完整性;6.4. 测试完成后,由组长及相关部门做出确认结论。

微生物限度检查方法适用性验证方案

微生物限度检查方法适用性验证方案

微生物限度检讨办法实用性实验计划验证计划组织与实行微生物限度检讨办法实用性实验工作应由质量治理部分负责组织,质量治理部分有关人员构成验证小组,介入实行.计划草拟计划审核计划同意目录一、概述二、验证目标和风险评估三、验证内容四.办法剖断五.再验证周期六.参考文献七.成果评价及结论1.概述:微生物限度检讨法系检讨非划定灭菌制剂及其原料.辅料受微生物污染程度的办法.检讨项目包含需氧菌数.霉菌数和酵母菌数及掌握菌检讨.当树立产品的微生物限度检讨法时,应进行需氧菌.霉菌和酵母菌计数办法的实用性实验和掌握菌检讨办法的实用性实验,以确认所采取的办法合适于该产品的需氧菌.霉菌和酵母菌数的测定和掌握菌检讨.按照中国药典2015版,需氧菌.霉菌和酵母菌及掌握菌均采取平皿法进行办法实用性实验.2.实验目标和风险评估:验证目标:确认所采取的需氧菌.霉菌和酵母菌计数办法及掌握菌检讨办法合适我公司所临盆产品的微生物限度检讨.风险评估:3.验证内容:3.1.造就基起源:确认人:确认日期:3.2.检讨用造就基配制办法:确认人:确认日期:3.3.应用仪器确认人: 确认日期:3.4.验证实验用菌种:确认人:确认日期:3.5实验办法:取供试品10 ml加至100ml→1:10供试液.需氧菌.霉菌和酵母菌.掌握菌采取通例法.3.6菌液的制备:取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.大肠埃希菌.枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨琼脂斜面培物一铂金饵,参加胰酪大豆胨液体造就基中置30~35℃造就箱中造就18~24h,取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.大肠埃希菌.枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨液体造就物1ml参加%无菌氯化钠溶液中,制成10-1 的菌液,依法10倍稀释至10~7,分取各菌悬液1ml注入平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂造就基20ml,各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法造就计数,取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用.取白色念珠菌的沙氏葡萄糖琼脂斜面造就物,参加沙氏葡萄糖液体造就基中置20~25℃造就箱中造就24~48h,取白色念珠菌的沙氏葡萄糖液体造就物1ml参加%无菌氯化钠溶液中,制成10-1 的菌液,依法10倍稀释至10~7,取菌悬液1ml注入平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基25ml,各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法造就计数,取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用.取黑曲霉的新颖造就物接种子沙氏葡萄糖琼脂斜面上,20-25℃造就5-7天,参加3-5ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱.取1ml参加含0.05%聚山梨酯80的9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中,制成10-1的菌液,依法10倍稀释至10~7,取,取菌悬液1ml注入平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基25ml,各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法造就计数,取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用.3.7需氧菌.霉菌和酵母菌计数办法实用性实验:供试液制备:取供试品10 ml,加至100ml→1:10供试液.实验前提:需氧菌造就温度:30~35℃3~5天造就箱:霉菌和酵母菌造就温度:20~25℃ 5~7天造就箱:3.7.3实验办法:.1实验组:3.7.3.1.1分离取供试液9.9ml,分离铜绿假单胞菌.金黄色葡萄球菌.枯草芽孢杆菌,混匀后取个中1ml注皿,倾泻温度不超出45℃的胰酪大豆胨琼脂造就基20ml,置30~35℃或造就箱中造就不超出3天,计数,每株实验菌平行制备2个平皿.3.7.3.1.2分离取供试液9.9ml,分离白色念珠菌.黑曲霉菌液,混匀后分离取个中1ml注皿,倾泻温度不超出45℃的胰酪大豆胨琼脂造就基20ml,置30~35℃或造就箱中造就不超出5天,计数,每株实验菌平行制备2个平皿.另分离取个中1ml注皿, 倾泻温度不超出45℃的沙氏葡萄糖琼脂造就基20ml,置20~25℃或造就箱中造就不超出5天,计数,每株实验菌平行制备2个平皿. .2菌液对比组:分离取稀释液9.9ml,分离菌液,按实验组操纵,倾泻温度不超出45℃的胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基,置与实验组雷同前提下造就, 计数.每株实验菌平行制备2个平皿..3供试品对比组:取供试液1ml,倾泻温度不超出45℃的胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基,置与实验组雷同前提下造就, 计数.每株实验菌平行制备2个平皿.实验成果~2规模内.比值=实验组菌落数~供试品对比组的菌落数*对比组菌落数实验次数:1 供试品批号:磨练人:日期:复核人:日期:实验次数:2 供试品批号:磨练人:日期:复核人:日期:实验次数:3 供试品批号:磨练人:日期:复核人:日期:实验次数:1 供试品批号:磨练人:日期:复核人:日期:实验次数:2 供试品批号:磨练人:日期:复核人:日期实验次数:3 供试品批号:磨练人:日期:复核人:日期3.7.5结论:磨练人:日期:复核人:日期:掌握菌微生物检测办法实用性实验:.1实验办法:3.8.1.1实验组:取供试液10ml及不大于100cfu大肠埃希菌菌液参加胰酪大豆胨液体造就基中,置30~35℃造就18-24小时, 取上述造就物1ml接种至100ml麦康凯液体造就基中,42~44℃造就24-48小时.取麦康凯液体造就物划线接种于麦康凯琼脂造就基平板上30~35℃造就18-72小时.实验组应发展优越.3.8.1.2阴性对比组:取稀释剂10ml,参加胰酪大豆胨液体造就基中,置30~35℃造就18-24小时,阴性对比应无菌发展.3.8.1.3阳性对比组:取不大于100cfu大肠埃希菌菌液参加胰酪大豆胨液体造就基中,置30~35℃造就18-24小时, 取上述造就物1ml接种至100ml麦康凯液体造就基中,42~44℃造就24-48小时.取麦康凯液体造就物划线接种于麦康凯琼脂造就基平板上30~35℃造就18-72小时.阳性对比组应发展优越.实验成果:实验次数:1 供试品批号:磨练人:日期:复核人:日期:实验次数:2 供试品批号:磨练人:日期:复核人:日期:实验次数:3 供试品批号:结论:磨练人:日期:复核人:日期:4. 办法剖断:本品按《中国药典》2015年版(1105).(1106)非无菌产品微生物限度检讨项下:“微生物计数法”“掌握菌检测法”进行实验.细菌数测定可用.霉菌.酵母菌数测定可用.掌握菌,可用.5.再验证周期:当产品的微生物限度检讨办法转变.产品组分.工艺转变时,应进行再实验. 6.参考文献:中国药典2015版7.成果评价及结论:验证尺度,该实用性实验办法接收 .审核人/日期:同意人/日期:。

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版药典微生物限度检查方法验证方案Document number:WTWYT-WYWY-BTGTT-YTTYU-2018GT人工牛黄甲硝唑胶囊微生物限度检查方法验证方案下表用于记录修订/变更主要内容及历史。

目录1. 概述2. 验证目的和范围3. 组织及职责4. 验证进度计划表5. 验证所需要的仪器设备及相关文件的确认6. 验证所需要的菌种、培养基、检验样品的确认7.验证项目和验证方法试验菌株需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证的菌液制备需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证--常规倾注平皿法需氧菌总数检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法控制菌检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法8.偏差与漏项控制9.验证报告会审1. 概述我公司生产品种人工牛黄甲硝唑胶囊,产品微生物限度检查项目为需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、以及大肠埃希菌检查和沙门菌检查。

参照《中国药典》2015版四部附录1105:微生物计数法,以及1106:控制菌检查法的规定,本公司对该产品的微生物限度检查方法予以验证。

通过验证以确认所采用的微生物限度检查方法适用。

人工牛黄甲硝唑胶囊处方中含有甲硝唑、人工牛黄以及常用辅料成分,文献资料介绍甲硝唑对细菌有抑菌特性,对霉菌和酵母菌无抑菌活性。

甲硝唑在水中微溶,可以通过离心沉淀-薄膜过滤法去除其对微生物生长的影响。

本验证方案通过试验菌株的回收率测试,首先确认常规倾注平皿法是否适用于本品的微生物限度检查;如常规倾注平皿法不适用,则进一步验证可去除供试品抑菌物质的离心沉淀-薄膜过滤法是否适用于本品的微生物限度检查。

本验证方案根据样品特性制定微生物限度检查方法和检验条件,按制定的方法进行试验,根据验证结果判断是否符合验证标准。

2. 验证目的和范围验证该产品的微生物限度检查方法的适用性,对其有效性进行评价,保证检验结果的可靠性。

本验证方案采用3批按GMP要求组织生产的人工牛黄甲硝唑胶囊,进行微生物限度检查方法的验证。

3.组织及职责验证方案和验证报告的起草、审核、批准验证方案由质量部QC组负责起草,由质量部审核,最终由质量负责人批准。

验证方案实施完成后,由QC组负责汇总微生物限度检查法验证的结果、撰写报告,由质量部审核,最终由质量负责人批准报告。

验证方案的培训验证方案在经质量负责人批准后,,由QC组组长对本次验证实施的相关人员组织培训工作,并将该次的培训记录归档。

验证方案实施过程中的变更和偏差验证方案实施过程中如有变更和偏差,质量负责人应当组织进行评估并采取相应的控制措施。

验证工作小组成员表4. 验证进度计划表本次微生物限度检查方法验证的计划安排时间是2015年12月至2016年1月。

5. 验证所需要的仪器设备及相关文件的确认.主要检验仪器设备确认表检查人/日期:复核人/日期:.验证所需文件的确认表检查人/日期:复核人/日期:6. 验证所需要的菌种、培养基、检验样品的确认.试验菌种检查表检查人/日期:复核人/日期:试验所需的培养基检查检查人/日期:复核人/日期:.检验样品确认表检查人/日期:复核人/日期:7.验证项目和验证方法试验菌株人工牛黄甲硝唑胶囊需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证所用的菌株为金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉;控制菌检查方法验证所用的菌株为大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌。

试验菌株的传代次数不得超过5代,并采用适宜的菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株的生物学特性。

需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证的菌液制备分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml 胰酪大豆胨液体培养基中,30~35℃培养18~24小时,取此培养液1ml加%无菌氯化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10-5~10-7,制成50~100cfu/ml的菌悬液备用。

接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml沙氏葡萄糖液体培养基中,20~25℃培养2~3天,取此培养液1ml加%无菌氯化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10-5~10-7,制成50~100cfu/ml的菌悬液备用。

接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面上,20~25℃培养5~7天,直到获得丰富的孢子。

加入3~5ml含有%聚山梨酯80的%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱,吸至无菌试管中,取1ml加含有%聚山梨酯80的%无菌氯化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10-5~10-7,制成50~100cfu/m的孢子悬液备用。

菌液制备后若在室温下放置,应在2 小时内使用;若保存在2~8℃,可在24小时内使用。

黑曲霉孢子悬液可保存在2~8℃ ,在验证过的贮存期内使用。

验证时,对各试验菌的回收率逐一进行验证。

. 需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证--常规倾注平皿法供试液的制备取供试品10g,加%无菌氯化钠溶液至100ml,振摇,制成1:10的供试液。

试验组取1:10的供试液1ml和项下制备的50~100cfu的试验菌,分别注入平皿中,立即倾注不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基20ml混匀,每株试验菌株平行制备2个平皿。

置30~35℃培养箱中培养3天(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌),或培养5天(白色念珠菌、黑曲霉),点计菌落数。

另取1:10的供试液1ml和项下制备的50~100cfu的白色念珠菌、黑曲霉,分别注入平皿中,立即倾注不超过45℃的沙氏葡萄糖琼脂培养基20ml混匀,每株试验菌株平行制备2个平皿。

置20~25℃培养箱中培养5天,点计菌落数。

取1:10的供试液1ml注入平皿中,立即倾注不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基20ml混匀,平行制备2个平皿。

置30~35℃培养箱中培养5天,点计菌落数。

另取1:10的供试液1ml注入平皿中,立即倾注不超过45℃的沙氏葡萄糖琼脂培养基培养基20ml混匀,平行制备2个平皿。

置20~25℃培养箱中培养5天,点计菌落数。

取%无菌氯化钠溶液1ml和项下制备的50~100cfu的试验菌,分别注入平皿中,立即倾注不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基20ml混匀,每株试验菌株平行制备2个平皿。

置30~35℃培养箱中培养3天(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌),或培养5天(白色念珠菌、黑曲霉),点计菌落数。

另取%无菌氯化钠溶液1ml和项下制备的50~100cfu的白色念珠菌、黑曲霉,分别注入平皿中,立即倾注不超过45℃的沙氏葡萄糖琼脂培养基培养基20ml混匀,每株试验菌株平行制备2个平皿。

置20~25℃培养箱中培养5天,点计菌落数。

常规倾注平皿法方法验证的接受标准试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值(即试验菌的回收率)应在0 .5?2 范围内。

常规倾注平皿法方法验证的结果常规倾注平皿法测定需氧菌总数方法验证结果试验次数1:人工牛黄甲硝唑胶囊批号: ;胰酪大豆胨琼脂培养基配制批号:培养箱型号编号;培养温度:;培养时长:金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌3天,白色念珠菌、黑曲霉5天试验人/日期:复核人/日期:试验次数2:人工牛黄甲硝唑胶囊批号: ;胰酪大豆胨琼脂培养基配制批号:培养箱型号编号;培养温度:;培养时长:金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌3天,白色念珠菌、黑曲霉5天试验人/日期:复核人/日期:试验次数3:人工牛黄甲硝唑胶囊批号: ;胰酪大豆胨琼脂培养基配制批号:培养箱型号编号;培养温度:;培养时长:金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌3天,白色念珠菌、黑曲霉5天试验人/日期:复核人/日期:常规倾注平皿法测定霉菌与酵母菌总数方法验证结果试验次数1:人工牛黄甲硝唑胶囊批号: ;沙氏葡萄糖琼脂培养基配制批号:;培养温度:;培养时长:5天培养箱型号编号试验次数2:人工牛黄甲硝唑胶囊批号: ;沙氏葡萄糖琼脂培养基配制批号:培养箱型号编号;培养温度:;培养时长:5天试验次数3:人工牛黄甲硝唑胶囊批号: ;沙氏葡萄糖琼脂培养基配制批号:培养箱型号编号;培养温度:;培养时长:5天试验人/日期:复核人/日期:常规倾注平皿法测定需氧菌总数、霉菌与酵母菌总数方法验证小结按照验证方案的要求进行试验,若各试验菌株的回收率在~2范围内,则可确认常规倾注平皿法适用于本品的需氧菌总数、霉菌与酵母菌总数检查。

如常规倾注平皿法适用于霉菌与酵母菌总数检查,但不适用于需氧菌总数检查,则下面进一步验证可去除供试品抑菌物质的离心沉淀-薄膜过滤法是否适用于本品的需氧菌总数检查。

. 需氧菌总数检查—离心沉淀-薄膜过滤法供试液的制备取供试品10g,加%无菌氯化钠溶液至100ml,振摇,制成1:10的供试液贮备液。

取1:10的供试液贮备液50ml,经500转/分钟离心3分钟,取上清液得供试液。

试验组取供试液1 ml,加至100 ml %无菌氯化钠溶液中,混匀,全量通过薄膜(孔径μm混合纤维素膜)后,以%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜2次(100ml/次),然后在第3次冲洗液(%无菌氯化钠溶液)中加入项下制备的50~100cfu的试验菌,过滤。

每株试验菌株平行制备2张滤膜。

取出滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平皿上,30~35℃倒置培养3天(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌),或培养5天(白色念珠菌、黑曲霉),点计菌落数。

供试品对照组取供试液1 ml,加至100 ml %无菌氯化钠溶液中,混匀,全量通过薄膜(孔径μm混合纤维素膜)后,以%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜3次(100ml/次),平行制备2张滤膜。

取出滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平皿上,30~35℃倒置培养5天,点计菌落数。

菌液对照组取%无菌氯化钠溶液300 ml,200ml通过薄膜(孔径μm混合纤维素膜)后,在余下的%无菌氯化钠溶液中加入项下制备的50~100cfu的试验菌,过滤。

每株试验菌株平行制备2张滤膜。

取出滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平皿上,30~35℃倒置培养3天(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌),或培养5天(白色念珠菌、黑曲霉),点计菌落数。

稀释剂对照组依照项下菌液制备方法,以%无菌氯化钠为稀释液,将各菌液稀释至含菌50~100cfu/ml,然后以500转/分钟离心3分钟,取上层菌液作下面的试验。

取上层菌液1 ml,加至100 ml %无菌氯化钠溶液中,混匀,全量通过薄膜(孔径μm混合纤维素膜)后,以%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜3次(100ml/次),每株试验菌株平行制备2张滤膜。

取出滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平皿上,30~35℃倒置培养3天(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌),或培养5天(白色念珠菌、黑曲霉),点计菌落数。

离心沉淀-薄膜过滤法测定需氧菌总数方法验证的接受标准试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值(即试验菌的回收率)应在0 .5?2 范围内,同时稀释剂对照组与菌液对照组菌落数的比值应也在0 .5?2 范围内。

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