菊花的组织培养(新)
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（三）接种 1、接种室消毒
污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室 消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消 毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射 20分钟
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都 需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
3、材料的切取和接种
3 植物激素的影响
▪ 常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素 ▪ 生长素、细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的
关键性激素 ▪ 在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈加强的趋势 ▪ 激素的使用顺序、使用的量及比例影响植物细胞的发育方
向
生长素类： 2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、 吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、 吲哚丁酸（IBA）
202Βιβλιοθήκη Baidu/4/27
2、配制培养基 ① 配制培养液 ② 调PH ③培养基的分装
分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或 1由0于0m菊l花的茎段的组织培养比较容易， 因此不必添加植物激素 3、灭菌
分装好的培养基连同其他器械一起进行高 压蒸汽灭菌
（二）外植体消毒
1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝
2、消毒
＝ 细胞分裂素
实验结果
有利于根的分化 有利于芽的分化，抑制根的分化 促进愈伤组织生长
4 pH、温度、光照
pH控制在5.8左右 温度控制在18－22℃ 每日用日光灯照射12h
六 菊花的组织培养
（一）制备MS固体培养基
（二）外植体消毒 （三）接种 （四）培养 （五）移栽 （六）栽培
（一）制备MS固体培养基
细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤 （ 6－BA）、玉米素（ZT）
赤霉素类： 赤霉酸（GA3）
使用顺序 先使用生长素，后使用细胞分裂素 先使用细胞分裂素后使用生长素 同时使用
实验结果 有利于细胞分裂，但不利分化 细胞既分裂、也分化 分化频率高
使用比例
生长素 生长素 生长素
> 细胞分裂素 < 细胞分裂素
MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用 4℃保存配制好的培养基母液来制备
1、配制各种母液
①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100 倍，常温保存
②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按 1mg/ml的质量浓度单独配制成母液
③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩 倍数，计算用量
答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无 机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘 氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正 常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。
微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不 同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物 包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。
2 MS培养基主要成分包括：
A、大量元素: N、P、 S 、 K、Ca、Mg等
B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、 I、Co等
C、有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、 蔗糖等
D、植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等
讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题 2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方 有哪些明显的不同？
课题1 菊花的组织培养 课题2 月季的花药培养
课题1 菊花的组织培养
一、植物组织培养概念
在无菌和人工控制条件下，将离体的植 物器官、组织、细胞，培养在人工配置的 培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其 产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植 株。
关键词：
外植体、脱分化、再分化、愈伤组织
外植体：离体的植物器官、组织或细胞。
幼苗长壮后，移栽到土壤中
（六）栽培
幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长 情况，适时浇水、施肥，直至开花
三、课题延伸
1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物， 也容易进行组织培养
2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季
五 影响植物组织培养的因素
n 材料的种类、年龄及保存时间长短 等
n 营养 n 植物激素 n PH、温度、光照等条件
1 植物材料（内因）的选择
不同植物的组织培养难度不同 同一种植物的不同组织培养难度不同
烟草和胡萝卜的组织培养较为容易
枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 同一植物材料的年龄、保存时间的长短
菊花的组织培养一般选择未开花植株的 茎上部新萌生的侧枝
①流水冲洗
菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻 轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右 ② 酒精处理
用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积 分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s， 立即将外植体取出，在无菌水中清洗
③消毒液处理
取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放 入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min， 取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液
脱分化：让已经分化的细胞，经过诱导后， 失去其特有的结构和功能而转变成未分 化细胞的过程。
再分化：脱分化的细胞，在一定的条件下， 又重新分化成各种特异性的组织细胞 的过程。
愈伤组织：细胞排列疏松、无规则、高度
液泡化的无定形的薄壁细胞。
二、植物组织培养的理论基础——细胞全能性
n 概念：高度分化的植物细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能。 n 基础：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质。 n 表达条件：离体条件
4、接种注意事项
①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75 ％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧 一遍，冷却后再接种
②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根 据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4块，菊的茎 或叶6－8块，也不要太少，以充分利用培养基中的 营养成分和光照条件
③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插 入培养基利于吸收水分和养分
（四）培养
n 接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期 间应定期消毒
n 培养温度控制在18-22℃ n 每日用日光灯光照12h
（五）移栽 1、打开封口膜
移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶 的封口膜，让试管苗在培养间生长几日
2、清洗转移 用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消
过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间 3、移栽
菊花是菊科菊属的多年生宿根草本植物,是我国的传统 名花和世界四大切花(月季、康乃馨、菊花、唐菖蒲)之一。
长期以来菊花采用分株、扦插等无性繁殖方法进行繁殖 但是传统的繁殖方法易受环境影响,繁殖周期长,随着市场需 求的急剧增加,已经不能满足市场日益发展的需要。
植物组织培养具有增殖效率高、繁殖速度快的特点,可 以用较短的时间和较少的空间生产出大量的试管苗
举例
切取 形成层
移栽
无菌 接种
脱分化
培养室
诱导愈伤组织 的形成
再分化
试管苗的形成
四 植物组织培养的应用：
1、培育无病毒植株
2、 大规模培养愈伤组织（提取紫草素，治疗 烫伤和割伤的药物以及染料和化妆品的原料）
3、人工种子（解决有些作物品种繁殖能力差， 结子困难或发芽率低等问题）
4、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法 （受体细胞为植物细胞）
正常苗
污染苗
污染途径
1、外植体带菌 3、接种操作时带入
2、培养基及接种 器具灭菌不彻底
4、环境不清洁
思考：你打算做几组重复？你打算 设置对照实验吗？
答：每种材料或配方至少要做一组以上的重 复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的 装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形 瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没 有被杂菌污染。
无菌操作 适宜物质的诱导和调节（植物激素） 适宜的营养物质 温度、酸碱度、光照等条件 的控制 全能性的比较:
受精卵>生殖细胞>体细胞
三、植物组织培养过程:
植物细胞培养
细胞分裂
离
素>生长素
体 组
脱分化
愈 伤 再分化
芽
织 或 细
细胞分 裂素≈
组 织
根 细胞分裂
植 物 体
胞 生长素
素<生长素
不需要光
需要光
（三）接种 1、接种室消毒
污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室 消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消 毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射 20分钟
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都 需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
3、材料的切取和接种
3 植物激素的影响
▪ 常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素 ▪ 生长素、细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的
关键性激素 ▪ 在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈加强的趋势 ▪ 激素的使用顺序、使用的量及比例影响植物细胞的发育方
向
生长素类： 2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、 吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、 吲哚丁酸（IBA）
202Βιβλιοθήκη Baidu/4/27
2、配制培养基 ① 配制培养液 ② 调PH ③培养基的分装
分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或 1由0于0m菊l花的茎段的组织培养比较容易， 因此不必添加植物激素 3、灭菌
分装好的培养基连同其他器械一起进行高 压蒸汽灭菌
（二）外植体消毒
1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝
2、消毒
＝ 细胞分裂素
实验结果
有利于根的分化 有利于芽的分化，抑制根的分化 促进愈伤组织生长
4 pH、温度、光照
pH控制在5.8左右 温度控制在18－22℃ 每日用日光灯照射12h
六 菊花的组织培养
（一）制备MS固体培养基
（二）外植体消毒 （三）接种 （四）培养 （五）移栽 （六）栽培
（一）制备MS固体培养基
细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤 （ 6－BA）、玉米素（ZT）
赤霉素类： 赤霉酸（GA3）
使用顺序 先使用生长素，后使用细胞分裂素 先使用细胞分裂素后使用生长素 同时使用
实验结果 有利于细胞分裂，但不利分化 细胞既分裂、也分化 分化频率高
使用比例
生长素 生长素 生长素
> 细胞分裂素 < 细胞分裂素
MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用 4℃保存配制好的培养基母液来制备
1、配制各种母液
①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100 倍，常温保存
②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按 1mg/ml的质量浓度单独配制成母液
③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩 倍数，计算用量
答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无 机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘 氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正 常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。
微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不 同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物 包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。
2 MS培养基主要成分包括：
A、大量元素: N、P、 S 、 K、Ca、Mg等
B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、 I、Co等
C、有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、 蔗糖等
D、植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等
讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题 2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方 有哪些明显的不同？
课题1 菊花的组织培养 课题2 月季的花药培养
课题1 菊花的组织培养
一、植物组织培养概念
在无菌和人工控制条件下，将离体的植 物器官、组织、细胞，培养在人工配置的 培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其 产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植 株。
关键词：
外植体、脱分化、再分化、愈伤组织
外植体：离体的植物器官、组织或细胞。
幼苗长壮后，移栽到土壤中
（六）栽培
幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长 情况，适时浇水、施肥，直至开花
三、课题延伸
1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物， 也容易进行组织培养
2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季
五 影响植物组织培养的因素
n 材料的种类、年龄及保存时间长短 等
n 营养 n 植物激素 n PH、温度、光照等条件
1 植物材料（内因）的选择
不同植物的组织培养难度不同 同一种植物的不同组织培养难度不同
烟草和胡萝卜的组织培养较为容易
枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 同一植物材料的年龄、保存时间的长短
菊花的组织培养一般选择未开花植株的 茎上部新萌生的侧枝
①流水冲洗
菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻 轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右 ② 酒精处理
用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积 分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s， 立即将外植体取出，在无菌水中清洗
③消毒液处理
取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放 入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min， 取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液
脱分化：让已经分化的细胞，经过诱导后， 失去其特有的结构和功能而转变成未分 化细胞的过程。
再分化：脱分化的细胞，在一定的条件下， 又重新分化成各种特异性的组织细胞 的过程。
愈伤组织：细胞排列疏松、无规则、高度
液泡化的无定形的薄壁细胞。
二、植物组织培养的理论基础——细胞全能性
n 概念：高度分化的植物细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能。 n 基础：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质。 n 表达条件：离体条件
4、接种注意事项
①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75 ％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧 一遍，冷却后再接种
②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根 据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4块，菊的茎 或叶6－8块，也不要太少，以充分利用培养基中的 营养成分和光照条件
③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插 入培养基利于吸收水分和养分
（四）培养
n 接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期 间应定期消毒
n 培养温度控制在18-22℃ n 每日用日光灯光照12h
（五）移栽 1、打开封口膜
移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶 的封口膜，让试管苗在培养间生长几日
2、清洗转移 用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消
过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间 3、移栽
菊花是菊科菊属的多年生宿根草本植物,是我国的传统 名花和世界四大切花(月季、康乃馨、菊花、唐菖蒲)之一。
长期以来菊花采用分株、扦插等无性繁殖方法进行繁殖 但是传统的繁殖方法易受环境影响,繁殖周期长,随着市场需 求的急剧增加,已经不能满足市场日益发展的需要。
植物组织培养具有增殖效率高、繁殖速度快的特点,可 以用较短的时间和较少的空间生产出大量的试管苗
举例
切取 形成层
移栽
无菌 接种
脱分化
培养室
诱导愈伤组织 的形成
再分化
试管苗的形成
四 植物组织培养的应用：
1、培育无病毒植株
2、 大规模培养愈伤组织（提取紫草素，治疗 烫伤和割伤的药物以及染料和化妆品的原料）
3、人工种子（解决有些作物品种繁殖能力差， 结子困难或发芽率低等问题）
4、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法 （受体细胞为植物细胞）
正常苗
污染苗
污染途径
1、外植体带菌 3、接种操作时带入
2、培养基及接种 器具灭菌不彻底
4、环境不清洁
思考：你打算做几组重复？你打算 设置对照实验吗？
答：每种材料或配方至少要做一组以上的重 复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的 装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形 瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没 有被杂菌污染。
无菌操作 适宜物质的诱导和调节（植物激素） 适宜的营养物质 温度、酸碱度、光照等条件 的控制 全能性的比较:
受精卵>生殖细胞>体细胞
三、植物组织培养过程:
植物细胞培养
细胞分裂
离
素>生长素
体 组
脱分化
愈 伤 再分化
芽
织 或 细
细胞分 裂素≈
组 织
根 细胞分裂
植 物 体
胞 生长素
素<生长素
不需要光
需要光