Smad234真核表达质粒的构建及重组蛋白表达
表达载体的构建方法及步骤
表达载体的构建方法及步骤一、载体的选择及如何阅读质粒图谱目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。
一个合格质粒的组成要素：（1）复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。
原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。
而真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。
（2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如 Amp+ ,Kan+（3）多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段（4） P/E 启动子/增强子（5）Terms 终止信号（6）加 poly（A）信号可以起到稳定 mRNA 作用选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。
如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。
载体选择主要考虑下述3点：【1】构建 DNA 重组体的目的，克隆扩增/基因表达，选择合适的克隆载体/表达载体。
【2】.载体的类型：（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。
如<10kb 选质粒。
（2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，哺乳类细胞表达载体。
（3）对原核表达载体应该注意：选择合适的启动子及相应的受体菌，用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。
【3】载体 MCS 中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不能产生阅读框架错位。
综上所述，选用质粒（最常用）做载体的5点要求：（1）选分子量小的质粒，即小载体（1－）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载体）；（2）一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般 10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。
（3）必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地；（4）必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位 Ampr（试一试）。
（5）满足自己的实验需求，是否需要包装病毒，是否需要加入荧光标记，是否需要加入标签蛋白，是否需要真核抗性（如Puro、G418）等等。
表达载体的构建方法及步骤
表达载体的构建方法及步骤一、载体的选择及如何阅读质粒图谱目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA 是一种新的非病毒转基因载体。
一个合格质粒的组成要素：（1）复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。
原核生物DNA 分子中只有一个复制起始点。
而真核生物DNA 分子有多个复制起始位点。
（2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+（3）多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段（4）P/E 启动子/增强子（5）Terms 终止信号（6）加poly（A）信号可以起到稳定mRNA 作用选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。
如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。
载体选择主要考虑下述3点：【1】构建DNA 重组体的目的，克隆扩增/基因表达，选择合适的克隆载体/表达载体。
【2】.载体的类型：（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。
如<10kb 选质粒。
（2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。
（3）对原核表达载体应该注意：选择合适的启动子及相应的受体菌，用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。
【3】载体MCS 中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不能产生阅读框架错位。
综上所述，选用质粒（最常用）做载体的5点要求：（1）选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载体）；（2）一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。
（3）必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地；（4）必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（试一试）。
（5）满足自己的实验需求，是否需要包装病毒，是否需要加入荧光标记，是否需要加入标签蛋白，是否需要真核抗性（如Puro、G418）等等。
Smad家族蛋白在真核细胞中的表达
实 用 医 学 杂 志 2009 年 第 25 卷 第 7 期
4℃），收集上清。 样品经 SDS-PAGE 后，电转移至硝酸 纤维素膜上，5％脱脂奶粉封闭过夜， 加入辣根过氧化 酶偶联的 FLAG 抗体，结合 1 h，TBST 洗膜 3 次，每次 7 min，用化学发光法显色 5 min，X 线片压片显影。 2 结果 2．1 PCR 扩增 以 人 肺 细 胞 文 库 为 模 板 ， 用 设 计 的 引 物 钓 取 smad1 、2 、3 、4 基 因 全 长 分 别 为 1 398 、 1 404、1 278 bp 及 1 659 bp， 琼 脂 糖 电 泳 图 中 显 示
【Key Words】 Eukaryotic cells； Smad proteins； cloning
Smads是 生 长 转 化 因 子 （transforming growth factor β，TGF-β）的 胞 浆 递 质 ，对 TGF-β 信 号 传 导 通 路 有 重 要的调解作用。 TGF-β 超家族信号分子经过膜受体的 介导将信号传入细胞内， 其下游最主要的调控蛋白 Smads 在 细 胞 内 通 过 不 同 的 方 式 调 节 各 种 基 因 的 表 达［1］。 Smads 的缺失、变异或过度表达与肿瘤的发生、 发展密切相关。 研究 Smads 与肺癌发生、发展的相关
1027
outside the CNS and in cancer biology ［J］． Expert Opin Investig Drugs， 2005， 14（12）：1487－1496． ［3］ Bai L， Zhang X， Ghishan F K． Characterization of vesicular glutamate transporter in pancreatic alpha-and beta-cells and its regulation by glucose ［J］． Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol， 2003， 284（5）：G808－814． ［4］ Rzeski W， Turski L， Ikonomidou C． Glutamate antagonists limit tumor growth ［J］． Proc Natl Acad Sci USA， 2001， 98 （11）： 6372－ 6377． ［5］ 贾勇圣，魏晓莉，赵杰，等． 离子通道与肿瘤［J］． 生理科学进展， 2007， 38（3）：229－234．
表达载体的构建方法及步骤
表达载体的构建方法及步骤一、载体的选择及如何阅读质粒图谱目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA 是一种新的非病毒转基因载体。
一个合格质粒的组成要素：（1）复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。
原核生物DNA 分子中只有一个复制起始点。
而真核生物DNA 分子有多个复制起始位点。
（2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+（3）多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段（4）P/E 启动子/增强子（5）Terms 终止信号（6）加poly（A）信号可以起到稳定mRNA 作用选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。
如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。
载体选择主要考虑下述3点：【1】构建DNA 重组体的目的，克隆扩增/基因表达，选择合适的克隆载体/表达载体。
【2】.载体的类型：（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。
如<10kb 选质粒。
（2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。
（3）对原核表达载体应该注意：选择合适的启动子及相应的受体菌，用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。
【3】载体MCS 中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于，不能产生阅读框架错位。
综上所述，选用质粒（最常用）做载体的5点要求：（1）选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载体）；（2）一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。
（3）必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地；（4）必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（试一试）。
（5）满足自己的实验需求，是否需要包装病毒，是否需要加入荧光标记，是否需要加入标签蛋白，是否需要真核抗性（如Puro、G418）等等。
MIIP真核表达载体的构建及其稳定过表达MDA-MB-231细胞系的建立
MIIP真核表达载体的构建及其稳定过表达MDA-MB-231细胞系的建立徐荣荣;裴秀英;吕叶;马锐;苏芹;金彦国;陈捷珲;高玉婧【摘要】目的构建pCDNA3.0-MIIP真核表达载体并建立其稳定转染的MDA-MB-231细胞系.方法 pGEX-4T-1-MIIP重组质粒及pCDNA3.0真核表达载体分别经XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后,回收目的基因,T4 DNA连接酶连接后,转化得到pCDNA3.0-MIIP重组真核表达载体,对其进行双酶切和测序鉴定.脂质体法将鉴定后的pCDNA3.0-MIIP质粒转染至人乳腺癌MDA-MB-231细胞中,分别于转染后48和72h提取细胞总RNA,QRT-PCR法确定其转染.G418筛选转染细胞,Western blot检测目的蛋白表达.结果酶切及测序结果证实pcDNA3.0-MIIP 真核表达载体构建成功.pcDNA3.0-MIIP转染至MDA-MB-231细胞后,QRT-PCR 检测证实MIIP表达显著增强.G418筛选后得到单克隆细胞群,Western blot检测证实MIIP表达显著增强.结论成功构建出了可在真核细胞中高效表达MIIP基因的pcDNA3.0-MIIP重组质粒;建立了稳定过表达MIIP的MDA-MB-231细胞系.【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2016(038)004【总页数】5页(P376-380)【关键词】MIIP基因;真核表达载体;MDA-MB-231;细胞转染【作者】徐荣荣;裴秀英;吕叶;马锐;苏芹;金彦国;陈捷珲;高玉婧【作者单位】宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室,基础医学院生物化学与分子生物学系,银川750004;宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室,基础医学院生物化学与分子生物学系,银川750004;宁夏医科大学总医院肿瘤医院肿瘤内科,银川750004;宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室,基础医学院生物化学与分子生物学系,银川750004;宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室,基础医学院生物化学与分子生物学系,银川750004;宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室,基础医学院生物化学与分子生物学系,银川750004;宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室,基础医学院生物化学与分子生物学系,银川750004;宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室,基础医学院生物化学与分子生物学系,银川750004【正文语种】中文【中图分类】Q786乳腺癌是全球范围内女性最常见的恶性肿瘤，也是女性因癌死亡的首要病因[1-2]。
表达载体的构建方法及步骤
For personal use only in study and research; not for commercial use表达载体的构建方法及步骤一、载体的选择及如何阅读质粒图谱目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA 是一种新的非病毒转基因载体。
一个合格质粒的组成要素：（1）复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。
原核生物DNA 分子中只有一个复制起始点。
而真核生物DNA 分子有多个复制起始位点。
（2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+（3）多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段（4）P/E 启动子/增强子（5）Terms 终止信号（6）加poly（A）信号可以起到稳定mRNA 作用选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。
如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。
载体选择主要考虑下述3点：【1】构建DNA 重组体的目的，克隆扩增/基因表达，选择合适的克隆载体/表达载体。
【2】.载体的类型：（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。
如<10kb 选质粒。
（2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。
（3）对原核表达载体应该注意：选择合适的启动子及相应的受体菌，用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。
【3】载体MCS 中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不能产生阅读框架错位。
综上所述，选用质粒（最常用）做载体的5点要求：（1）选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载体）；（2）一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。
（3）必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地；（4）必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（试一试）。
表达载体的构建方法及步骤
表达载体的构建方法及步骤一、载体的选择及如何阅读质粒图谱目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA 是一种新的非病毒转基因载体。
一个合格质粒的组成要素：（1）复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。
原核生物DNA 分子中只有一个复制起始点。
而真核生物DNA 分子有多个复制起始位点。
（2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+（3）多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段（4）P/E 启动子/增强子（5）Terms 终止信号（6）加poly（A）信号可以起到稳定mRNA 作用选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。
如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。
载体选择主要考虑下述3点：【1】构建DNA 重组体的目的，克隆扩增/基因表达，选择合适的克隆载体/表达载体。
【2】.载体的类型：（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。
如<10kb 选质粒。
（2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，哺乳类细胞表达载体。
（3）对原核表达载体应该注意：选择合适的启动子及相应的受体菌，用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。
【3】载体MCS 中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不能产生阅读框架错位。
综上所述，选用质粒（最常用）做载体的5点要求：（1）选分子量小的质粒，即小载体（1－）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载体）；（2）一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。
（3）必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地；（4）必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（试一试）。
（5）满足自己的实验需求，是否需要包装病毒，是否需要加入荧光标记，是否需要加入标签蛋白，是否需要真核抗性（如Puro、G418）等等。
高效表达Smad2蛋白的A549细胞模型的建立
体系 ： Ｌ ｉ ｇ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｈ ｉ ｇ ｈ连 接酶 ｍｉ ｘ ５ Ｌ， ｐ Ｃ ＤＨ— Ｃ ＭＶ－ ＭＣ Ｓ － Ｅ Ｆ １ 一 Ｇ Ｆ Ｄ片段 ５ ｎ ｇ ， Ｓ ｍａ ｄ ２片段 ２ ５ ｎ ｇ 。将 酶
要 的作 用 。ＴＧ Ｆ － １ ３ 信 号 的起 始 是 通 过 配 体 招 募 并 激 活 受 体 丝 氨 酸／ 苏 氨 酸 激 酶， 磷 酸化 Ｒ － Ｓ ｍａ ｄ
（ Ｓ ｍａ ｄ ｌ ， ２ ， ３ ， ５ ， ８ ） ， 活 化 的 Ｒ— Ｓ ｍａ ｄ与 Ｃ ｏ ～ Ｓ ｍａ ｄ
１ ． ５
１ ． ５ １ ３ ３
出超 级 干 扰 素是 否通 过 负 调 控 Ｓ ｍａ ｄ ２来 起 到 其 抗 癌 作用 。本 文 主要 基 于 这 一 背景 ， 开 展建 立 稳 定 表
达 Ｓ ｍａ ｄ ２蛋 白 的 Ａ５ ４ ９细 胞 模 型 ， 这将为 ｓ Ｉ Ｆ Ｎ 抗 肺 癌 的机理 的探 究奠 定 一定 的研究 基础 。
将测序正确 的 ｐ Ｃ Ｄ Ｈ－ Ｃ ＭＶ － Ｓ ｍａ ｄ ２ 一 Ｅ Ｆ １ 一 Ｇ Ｆ Ｐ和
ｐ Ｃ Ｄ Ｈ－ Ｃ ＭＶ ＿ ＭＣ Ｅ Ｆ １ － ＧＦ Ｐ阳性 菌株 ， 在Ｌ Ｂ培 养 基
中３ ７ ℃震 荡 培养 过 夜， 收集 菌体 ， 大 量 抽 提 质 粒 Ｄ ＮＡ， 并用 Ｎ ａ ｎ ｏ Ｄｒ ｏ ｐ ２ ０ ０ ０ 微 量紫 外分 光 光度计 对 其 进行 Ｏ Ｄ（ ２ ６ ０ ／ ２ ８ ０ ） 值浓度测定 ， －２ ０ ｏ Ｃ 保 存备用 。
一
（ Ｓ ｍａ ｄ ４ ） 结 合形成 Ｓ ｍａ ｄ ｓ 复 合体 ， 将 信 号 传 递到 细 胞 核 内 。在 细胞核 内 ， 活化的 Ｓ ｍａ ｄ ｓ 复合 体 再 与相
表达载体的构建方法及步骤
表达载体的构建方法及步骤一、载体的选择及如何阅读质粒图谱目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。
一个合格质粒的组成要素：（1）复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。
原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。
而真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。
（2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如 Amp+ ,Kan+（3）多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段（4） P/E 启动子/增强子（5）Terms 终止信号（6）加 poly（A）信号可以起到稳定 mRNA 作用选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。
如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。
载体选择主要考虑下述3点：【1】构建 DNA 重组体的目的，克隆扩增/基因表达，选择合适的克隆载体/表达载体。
【2】.载体的类型：（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。
如<10kb 选质粒。
（2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，哺乳类细胞表达载体。
（3）对原核表达载体应该注意：选择合适的启动子及相应的受体菌，用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。
【3】载体 MCS 中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不能产生阅读框架错位。
综上所述，选用质粒（最常用）做载体的5点要求：（1）选分子量小的质粒，即小载体（1－）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载体）；（2）一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般 10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。
（3）必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地；（4）必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位 Ampr（试一试）。
（5）满足自己的实验需求，是否需要包装病毒，是否需要加入荧光标记，是否需要加入标签蛋白，是否需要真核抗性（如Puro、G418）等等。
AQP4真核表达载体的构建和AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达
AQP4真核表达载体的构建和AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达许会静; 李艳; 刘晴; 闫冰; 刘微; 张磊; 郭健; 姜琳; 李淼; 孙美艳【期刊名称】《《吉林大学学报（医学版）》》【年(卷),期】2019(045)006【总页数】7页(P1193-1198,封2)【关键词】视神经脊髓炎; 水通道蛋白4; 真核表达载体; 基因转染; 仓鼠【作者】许会静; 李艳; 刘晴; 闫冰; 刘微; 张磊; 郭健; 姜琳; 李淼; 孙美艳【作者单位】吉林医药学院检验学院实验中心吉林吉林132013; 吉林医药学院抗体中心吉林吉林132013; 吉林大学中日联谊医院神经外科吉林长春130033【正文语种】中文【中图分类】Q71视神经脊髓炎(neuromyelitis optica，NMO)是一种特发性中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病，典型特征为反复发作，病变主要侵犯视神经和脊髓，早期很少侵犯脑组织[1]。
研究[2-5]表明：NMO 的主要发病原因是在患者血清和脑脊液中出现了针对髓鞘星形胶质细胞膜上的水通道蛋白4(aquaporin 4，AQP4)的自身抗体NMO-IgG，NMO-IgG与 AQP4 结合导致星形胶质细胞膜上水通道蛋白(aquaporin,AQP)功能障碍而发病。
因此阻断NMO-IgG与星形胶质细胞膜表面AQP4结合成为治疗NMO的新策略。
基于这一策略,研究者[6-7]合成了一种具有高亲和力、非致病性的单克隆抗体aquaporumab，其可以与致病性 NMO-IgG抗体竞争性结合AQP4，从而达到缓解疾病的目的；但这些抗体可能激活补体系统产生NMO 类似的病理变化，从而减弱其保护作用。
因此，目前亟待研发毒性小、阻断效果明显的小分子化合物，尤其是直接作用于星型胶质细胞表面AQP4进而阻断NMO-IgG与AQP4 结合的小分子化合物。
NMO患者血清中NMO-IgG自身抗体能识别AQP4的3种胞外区多克隆混合物，研究者[8]利用表达AQP4的CHO细胞和重组单克隆抗体rAb-53通过检测辣根过氧化物酶催化红色荧光物质建立了筛选NMO小分子阻断剂的方法。
弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒的构建与表达
弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒的构建与表达林绮萍;潘晖榕;温见翔;吴少庭;翁亚彪;秦莉;张仁利;高世同;黄达娜;袁仕善;雷明军【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2005(021)009【摘要】目的构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA4的真核表达质粒,并研究其在体外与体内细胞中的表达情况.方法采用PCR方法及克隆技术,构建pVAC-GRA4重组质粒;利用脂质体介导转染法,将该重组质粒导入HEK-293细胞,用RT-PCR法及Western-blot法检测其表达情况;利用基因枪导入法将该重组质粒导入BALB/c小鼠体内细胞,测定免疫鼠T淋巴细胞亚群及IFN-γ、IL-4含量,并观察攻毒试验后小鼠存活情况,以评价其免疫保护力.结果从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出GRA4基因片段,成功构建重组表达质粒pVAC-GRA4;转染GRA4的HEK-293细胞,RT-PCR检测可见一条约987bp的目的条带,表达产物经Western-blot鉴定,其分子量约为41kD,能被特异性免疫血清所识别;经pVAC-GRA4免疫后的小鼠,其CD4+T细胞百分率无明显变化(P＞0.05),CD8+T细胞百分率明显增加(与pVAC 对照组比较P＜0.05,与空白对照组比较P＜0.01),CD4+/CD8+比值也较空白对照组明显降低(P＜0.01);pVAC-GRA4免疫鼠IFN-γ的A值比对照组略高,但差异无显著性(P＞0.05),IL-4 A值各组间无明显变化(P＞0.05);pVAC-GRA4免疫鼠存活率显著高于两对照组,死亡小鼠的平均存活时间延长(与空白对照组比较P＜0.05).结论构建的真核表达质粒pVAC-GRA4能在HEK-293细胞中和小鼠体内细胞中表达,为弓形虫疫苗的进一步研究打下基础.【总页数】6页(P788-792,747)【作者】林绮萍;潘晖榕;温见翔;吴少庭;翁亚彪;秦莉;张仁利;高世同;黄达娜;袁仕善;雷明军【作者单位】华南农业大学兽医学院,广州,510642;华中科技大学同济医学院;广东医学院微生物学教研室;深圳市疾病预防控制中心,深圳,518020;华南农业大学兽医学院,广州,510642;华中科技大学同济医学院;深圳市疾病预防控制中心,深圳,518020;深圳市疾病预防控制中心,深圳,518020;深圳市疾病预防控制中心,深圳,518020;深圳市疾病预防控制中心,深圳,518020;华中科技大学同济医学院【正文语种】中文【中图分类】R382.5【相关文献】1.弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒的构建与表达 [J], 林绮萍;吴少庭;翁亚彪;秦莉;黄达娜;袁仕善2.弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究 [J], 林绮萍;吴少庭;翁亚彪;高世同;张仁利;黄达娜;袁仕善;雷明军;温见翔;潘晖榕;秦莉3.弓形虫SAG1-GRA1复合基因真核表达重组质粒的构建与表达 [J], 綦廷娜; 石畅; 汪政勇; 宗永丽; 李金福4.含弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究Ⅴ.IFN-γ基因真核表达重组质粒的构建及其在DNA免疫中基因佐剂的作用 [J], 郭虹;陈观今;郑焕钦5.弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究Ⅰ.pcDNA3-ROP1真核表达重组质粒的构建 [J], 郭虹;陈观今;周永安;郑焕钦;刘彦文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。