紫外可见分光光度计的原理与使用方法
752紫外可见分光光度计使用方法解析
752紫外可见分光光度计一、仪器的工作原理分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光的吸收效应，物质对光的吸收是具有选择性的。
各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理—一比耳定律。
τ=I/Iolog I/Io=KCLA= KCL从以上公式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液的光径长度不变时．透过的光是根据溶液的浓度而变化的，752紫外可见分光光度计的基本原理是根据上述物理光学现象而设计的。
二、仪器的安装、使用、安装1 仪器在安装使用前应对仪器的安全性进行检查，电源电压是否正常，接地线是否牢固可靠，在得到确认后方和接通电源使用。
2 仪器经过运输和搬运等原因，会影响波长准确度，应进行仪器调校后使用。
使用：仪器使用前需开机预热30min。
本仪器键盘共有4个键，分别为； 1 A /τ/C/F1SD2 ▽／0％3?／100％4 A /τ/C/F键：每按此键来切换A、τ 、C、F之间的值。
A——吸光度（Absorbance）T——透射比（Trans）C——浓度（conc）F——斜率（Factor）(2)F值通过按键输入（后面介绍如何设置）5SD键：该键具有2个功能a)用于RS232串行口和计算机传输数据（单向传输数据，仪器发向计算机）。
b)当处于F状态时，具有确认的功能，即确认当前的F值，并自动转到C，计算当前的C 值（C=F*A）。
6 ▽／0％键：该键具有2个功能a）调零；只有在τ状态时有效，打开样品室盖，按键后应显示0.000。
b）下降键：只有在F状态时有效，按本键F值会自动减1，如果按住本键不放，目动减1会加快速度；如果F值为0后，再按键它会自动变为1999。
而按键开始自动减1。
7 ?／100％键；该键具有2个功能a）只有在A、τ状态时有效，关闭样品室盖，按键后应显示0.000、100.0。
紫外可见分光光度计的原理是怎样的？
紫外可见分光光度计的原理是怎样的？
紫外可见分光光度计具有灵敏度高、准确度高、选择性好、适用浓度范围广等优点，广泛地应用于化工、冶金、地质、医学、食品、制药等部门及环境监测系统。
紫外可见分光光度计的原理：
物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同；
因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
紫外可见分光光度计的使用方法：
（1）接好线路后，先检查各开关是否在“关”处，光路闸门放在黑点处，再将电源插头插入220V交流电源上，打开电源开关和光源开关，将光路闸门放在红点处。
（2）取出比色皿，将其中一只装空白溶液，其余三只装待测溶液，放在定位盒内，盖上暗箱盖，装溶液前比色皿用蒸馏水洗净；
并用溶液荡洗数次后，再盛至体积，池外应赶紧，若有水滴，应用镜头纸吸干，取用时用手捏住比色皿的毛玻璃面。
（3）用波长调节器调到所需的波长，将空白溶液正对光路，调光量调节器，使检
流计上光点准线对准透光率为100的位置；
拉动拉杆，使待测溶液进入光路，读取微电计标尺上的透光率，测定完毕，及时关闭光路闸门，检查电计的零点位置，保护硒光电池。
（4）紫外可见分光光度计应安放在清洁、干燥、无腐蚀气体和较暗的室内；
仪器使用完毕后应擦拭干净，各开关关闭，紫外可见分光光度计连续使用时间不应超过4h。
标签:
紫外可见分光光度计。
紫外可见分光光度计的使用课件PPT
定义与工作原理
定义
紫外可见分光光度计是一种基于 物质对紫外可见光的吸收特性进 行物质定量和定性分析的仪器。
工作原理
通过测量物质在特定波长下的吸光 度，利用朗伯-比尔定律（A=εbc） 计算物质的浓度。
类型与特点
类型
单光束分光光度计、双光束分光光度 计和双波长分光光度计。
特点
具有较高的测量精度和稳定性，广泛 应用于化学、生物学、医学、环境监 测等领域。
每次使用后记录仪器使用 情况，包括测试样品、测 试波长、测试结果等，以 便后续分析。
常见故障排除
波长不准确
检查仪器是否正确设置波长，并 确保仪器没有受到强烈震动或磁
场干扰。
读数不稳定
检查样品是否均匀，仪器是否处于 稳定状态，以及是否有外界干扰。
仪器无响应
检查电源是否正常，仪器是否处于 正常工作状态，以及是否有硬件故 障。
THANKS
开始测量
点击开始按钮，仪器自动扫描并记录 数据。
数据处理
将测量数据导入计算机进行进一步处 理和分析。
实验操作技巧
保持样品池清洁
定期清洗样品池，避免残留物对测量结果的 影响。
选择合适的标准物质
选择与待测样品性质相近的标准物质进行校 准，提高测量准确性。
控制环境因素
确保实验室内温度、湿度和光照等环境因素 稳定，以减小误差。
多次测量求平均值
为减小误差，可以对同一样品进行多次测量， 取平均值作为最终结果。
常见问题及解决方案
波长校准不准确
可能是由于仪器内部棱镜或光路不干 净导致。解决方法是清洁仪器内部并 重新进行波长校准。
测量数据不稳定
数据处理软件崩溃
可能是由于计算机内存不足或软件 bug导致。解决方法是关闭不必要的 程序，释放计算机内存，或更新数据 处理软件。
UV752紫外可见分光光度计的使用
T：透光率； I：透过光强度； I0：入射光强度；
k：样品的吸光系数；
c：样品浓度；
L：吸收层厚度
二、使用方法
1、预热：打开仪器电源预热 30 分钟。 2、放样品：手持比色皿毛面，用参比（空白）或样品溶液润洗比色皿 2-3 次， 将参比（空白）或样品溶液倒入比色皿约 3/4 高度，用擦镜纸将比色皿外液体擦 干，将透光面擦拭干净，依次放入样品架，盖上样品室盖。置入样品架时，石英 比 色 皿 上 端 的 “Q” 、 玻 璃 比 色 皿 上 端 的 “G” 标 记 方 向 应 一 致 。 （ 紫 外 区 200-340nm 需使用石英比色皿，可见光区 340-1000nm 使用玻璃比色皿） 3、调波长：通过波长旋钮选择到所需波长位置。 4、选择模式：按 MODE 键切换测量值，A（吸光度）、T（透射比）、C（浓度）、 F（斜率）。指示灯亮的位置就表示切换到的位置。 5、调空白：
T 模式下：把黑体拉入光路，按【0%T】键，待显示 0.0，取出黑体； T/A 模式下：把装有参比溶液的比色皿拉入光路中，按【100%T/ABS0】键， 显示 0.0。 6、样品测量：将装有样品溶液的比色皿拉入光路中，读数即为该溶液的测量值。 7、实验结束：打开样品室盖，手持比色皿毛面并将其取出，盖上样品室盖，将 比色皿清洗干净，倒置滤纸上晾干。
UV752 紫外-可见分光光度计使用方法
一、仪器原理
物质对光的吸收具有选择性，在光的照射下产生吸收效应。不同的物质具有
不同的吸收光谱，当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减
弱的程度和物质的浓度呈一定的比例关系。在一定浓度范围内符合朗伯比尔定律：
A=lg1
紫外可见分光光度计的使用
比 值
显 示
组成：光源、单色器、样品池、检测器
1．光源： ①能提供连续的辐射；②光强度足够大；③在整个光谱区
内光谱强度不随波长有明显变化；④光谱范围宽；⑤使用
寿命长，价格低。 钨灯——可见光区 320～2500nm
氢灯或氘灯——紫外光区 195－375nm
U3010（碘钨灯、氘灯）波长范围190-900nm
。
二 分光光度计的使用-光度法
开始
方法正
将样品放入样品池 开始测量
打印数据 开始测量
测量参数设置
在[Edit]菜单中选择[Method…]选项。出现下列设置窗口.
具体操作程序
Method:
1. 2. general: 计测量） Quantitation定量参数设置页面： Measurement测量方式选择Photometry（光度
在measure中选择波长wavelength，在Calibration中选择 “1st order”， “2st order”， “3st order”，也可以不校准。 在concertration中键入标准浓度单位。 3. Instrument
4 standards标准参数设置 键入标系的样品浓度及名称
三 注意事项
1. 2. 开机预热15分钟左右。 测定时应注意：
参照池和吸收池应是一对经校正好的匹配的吸收
池，材料和规格一致。
使用前后应将洗手池洗净，测量时不能用手接触 窗口。
已匹配好的比色皿不能用炉子和火焰干燥，不能 加热，以免引起光程长度上的改变。
3.
测量条件的选择：
选择适宜波长的入射光:由于有色物质对光有选择性吸收, 为了使测定结果有较高的灵敏度,必须选择溶液最大吸收波 长的入射光。 控制吸光度A的准确的读数范围:由朗伯-比耳定律可知,吸 光度只有控制在0.2~0.7读数范围内时,测量的准确度较高.
紫外可见分光光度计的工作原理与应用 光度计工作原理
紫外可见分光光度计的工作原理与应用光度计工作原理产品原理分子的紫外可见吸取光谱是由于分子中的某些基团吸取了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸取光谱。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸取光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸取光谱曲线，可依据吸取光谱上的某些特征波优点的吸光度的高处与低处判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
分光光度分析就是依据物质的吸取光谱讨论物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息。
可以用标准光图谱再结合其它手段进行定性分析。
依据Lambert—Beer定律说明光的吸取与吸取层厚度成正比，比耳定律说明光的吸取与溶液浓度成正比；假相像时考虑吸取层厚度和溶液浓度对光吸取率的影响，即得朗伯—比耳定律。
即A=bc，（A为吸光度，为摩尔吸光系数，b为液池厚度，c为溶液浓度）就可以对溶液进行定量分析。
将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸取光谱。
若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。
假如没有标样，也可以和现成的标准谱图对比进行比较。
这种方法要求仪器精准，精密度高，且测定条件要相同。
试验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同，这可以利用紫外光谱来判定化合物在不同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂。
产品应用在水和废水监测中的应用，对于一个水系的监测分析和综合评价，一般包括水相（溶液本身）、固相（悬浮物、底质）、生物相（水生生物）。
在水质的常规监测中，紫外可见分光光度法占有较大的比重。
由于水和废水的成分多而杂多变，待测物的浓度和干扰物的浓度差别很大，在实在分析时必需选择好分析方法。
在农产品和食品分析中可用于检测的组分或成分有蛋白质、赖氨酸、葡萄糖、维生素C、硝酸盐、亚硝酸盐、砷、汞等；在植物生化分析中可用于检测叶绿素、全氮和酶的活力等；在饲料分析中可用于检测烟酸、棉酚、磷化氢和甲酯等。
可见分光光度计原理、工作环境及使用方法
可见分光光度计原理、工作环境及使用方法一、可见分光光度计工作原理可见分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。
常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
基本原理：分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。
它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息，可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。
朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即A=kcl式中比例常数k与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。
c为吸光物质浓度，l 为透光液层厚度。
二、可见分光光度计正常工作的环境要求1、避开高温高湿环境。
请不要将仪器安装在高温高湿的环境下。
仪器必须在5℃~35℃度温度、≤85%的湿度条件下安装使用。
2、避免仪器受外界磁场干扰。
请尽量远离发出磁场、电场、高频波的电器装置。
3、远离腐蚀气体。
请不要将仪器安装在空气中氯气、盐酸气体、硫化氢气体、亚硫酸气体等腐蚀性气体超标场所。
4、仪器应放置在稳定的工作台上。
放置仪器的工作台应水平、稳定、不能有振动；仪器的风扇附近应留有足够的空间，使其排风顺畅。
5、不要与其他用电设备共用电源插座。
请为仪器单独设计一个电源插座，不要与其它用电设备共用，电源应具备保护地线。
6、不要将仪器放置在阳光直接照射的地方。
7、避免灰尘多环境。
三、可见分光光度计的使用方法1、在接通电源之前，电表的指针必须位于“0”刻线上，否则应旋动电表上的校正螺丝调节到位。
2、打开比色皿室的箱盖和电源开关，使光电管在无光照射的情况下预热15分钟以上。
3、旋转波长调节器，选择测定所需的单色光波长。
选择适当的灵敏度，一般先将灵敏度旋钮至中间位置，用零点调节器调节电表指针至T值为0%处。
若不能调到，应适当增加灵敏度。
4、放入空白溶液和待测溶液，使空白溶液置于光路中，盖上比色皿室箱盖，使光电管受光，调节光量调节旋钮使电表指针在T值为100%处。
(完整版)紫外可见分光光度计--原理及使用
应用分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。
常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
我们实验室主要是用来测物质的光度以求得物质的浓度或者酶活。
基本原理分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。
它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息，可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。
朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即A= kcl式中比例常数k与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。
c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。
组成各种型号的紫外－可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由五个基本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。
1.光源在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气体放电光源。
热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。
2．单色器单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜等部分。
单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。
色散元件常用棱镜和光栅。
3.吸收池吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。
吸收池的种类很多，其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池最为常用。
4、检测器检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。
现今使用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。
5、信号显示系统常用的信号显示装置有直读检流计，电位调节指零装置，以及自动记录和数字显示装置等。
操作步骤操作之前1.1开启电源进行初始化开启主机电源，分光光度计将按屏幕所显示的项目进行自检和初始化，如下图所示。
所有项目检测完毕，初始化结束，整个过程大约需要4min（若使用多池检测需5min）。
每个项目进行初始化操作时将被加亮显示，当初始化完成后，该项右边的星标也将加亮显示。
紫外可见分光光度计 普析
紫外可见分光光度计普析紫外可见分光光度计（UV-Vis spectrophotometer）是一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、生物、环境等领域的研究和实验中。
本文将从紫外可见分光光度计的原理、应用以及操作步骤等方面进行介绍。
一、紫外可见分光光度计的原理紫外可见分光光度计是利用物质对紫外可见光的吸收特性进行定量分析的仪器。
根据光的波长范围，可分为紫外光区和可见光区两部分。
紫外光区的波长范围为200-400 nm，可见光区的波长范围为400-800 nm。
紫外可见分光光度计的工作原理是通过光源产生的光经过样品后，被光电二极管或光电倍增管接收，形成光谱图，再通过计算机进行数据处理和分析。
在分析过程中，样品溶液的吸收特性会使光强发生变化，根据吸光度与物质浓度之间的线性关系，可以通过测量吸光度来确定物质的浓度。
二、紫外可见分光光度计的应用紫外可见分光光度计在科研和实验中有着广泛的应用。
以下是其中几个常见的应用领域：1. 生物化学分析：紫外可见分光光度计可用于蛋白质、核酸、酶等生物大分子的浓度测定和纯度分析，如蛋白质含量的测定、核酸的纯度检测等。
2. 药物分析：紫外可见分光光度计可用于药物的含量测定、质量控制和稳定性研究，如药物溶液的吸光度测定、药物的光解动力学研究等。
3. 环境监测：紫外可见分光光度计可用于水质、大气和土壤等环境样品的污染物分析和监测，如水中重金属离子的测定、大气中挥发性有机物的测定等。
4. 食品安全检测：紫外可见分光光度计可用于食品中添加剂、农药残留、重金属等有害物质的检测，如食品中硝酸盐含量的测定、食品中防腐剂的测定等。
三、紫外可见分光光度计的操作步骤使用紫外可见分光光度计进行实验时，需要按照以下步骤进行操作：1. 打开仪器电源，并预热一段时间，使光源和光电二极管稳定工作。
2. 根据实验需要选择合适的光源和检测器，设置光的波长范围。
3. 取一定量的样品溶液，注入样品池中，并调节样品池的位置，使光线通过样品溶液。
紫外可见分光光度计原理及操作.ppt
吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或
测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。 3）紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律(Lambert－Beer)。
朗伯-比耳定律是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法
定量分析的依据和基础。
朗伯-比耳定律
一、透射率T%
dT d lg T 0.434 bdc T
将上两式相比，并将 dT 和 dc 分别换为T 和 c，得
c 0.434T c T lg T
当相对误差 c/c 最小时，求得T=0.368 或 A=0.434。即当A=0.434 时，吸光度读数误差最小！ 通常可通过调节溶液浓度或改变光程 b来控制A的读数在0.15~1.00范类型来自3.比例双光束分光光度计
由同一单色器发出的光被分成两束，一束直接到达检测器，另一束 通过样品后到达另一个检测器。这种仪器的优点是可以监测光源变化带
来的误差，但是并不能消除参比造成的影响
UV-2550的特点
6 挡狭缝可选
PC 控制存储、调用方便 可采用复制、拷贝方法在电子表格和字处理软件中处理数据和打印报 告 可加载膜厚、动力学、多波长、色彩分析等软件 DDM（双闪耀波长双单色器）降低杂散光，提高长波长区的能量响应 （UV-2550）
它的作用是放大信号并以适当方式指示或记录下来。现在一般的紫
外可见分光光度计有计算机控制和主机单片机控制两种类型，功能基本 类似。
类型
紫外-可见分光光度计的类型很多，但可归纳为三种类 型，即单光束分光光度计、双光束分光光度计和比例双光束 分光光度计。
1.单光束分光光度计 经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以 进行吸光度的测定。这种简易型分光光度计结构简单，操作方便，维修 容易，适用于常规分析。
UV-3型紫外分光光度计的原理及应用
紫外分光光度计应用系统
样品测定
1.在定量分析窗口中，单击“测量方法” 输入测量点数和相应的波长值及K0，K1 值，即可完成标准曲线的建立。
样品测量
2.单击“样品测量”选项进入测 试界面。
3.将参比溶液放入光路并校满刻度
紫外分光光度计应用系统
样品测定
4.将待测样品放入多联池架中,样品走到光路，单击工具栏中“ ” 弹出“样品测试”窗口，测试完成后输入样品名称，单击“确认” 添加到样品测试列表中，单击“取消”放弃本次测量值。
紫外可见分光光度计
内容导览
1
UV-3紫外可见分光光度计基本介绍
2
紫外可见分光光度计应用系统简易操作
UV-3紫外可见分光光度计
是分析试验行业中重要的质量控制仪器 之一，是常规实验室的必备仪器。
波长范围宽 190-1100nm 特 点
灵敏度高 功能强大
UV-3紫外可见分光光度计
分光光度法分析的原理
紫外分光光度计应用系统
应用系统操作（标准曲线的建立）
3.单击“标准样品”选项进入标样 测试界面.
4.将参比溶液放入光路，点击工具栏B 图标校满刻度。
紫外分光光度计应用系统
应用系统操作（标准曲线的建立）
5.将待测标准样品放入多联池架中
6.将待测标样走到光路中，单击“启动”按钮弹出 “标准样品测试”窗口，测试完成后输入标准样品 浓度和样品名称，单击“确认”添加到结果测试列 表中，单击“取消”放弃本次测量。
7.重复步骤6 完成所有标样测试，标准 曲线建立完成.
紫外分光光度计应用系统
应用系统操作（标准曲线的建立）
8.在“拟合参数”中记录K0，K1值。 如图1 9.单击“拟合曲线”选项可查看到建立 的标准曲线和拟合方程，图二示
紫外可见分光光度计的介绍及使用
32
在measure中选择波长wavelength，在Calibration中选择 “1st order”， “2st order”， “3st order”，也可以不校准。 在concertration中键入标准浓度单位。
3. Instrument
可编辑ppt
33
4 standards标准参数设置 键入标系的样品浓度及名称
可法可以开始测量： ❖ 使用菜单方式
选择[Spectrophotometer]菜单下Start]选项开始测量 ❖ 使用按钮方式 ：按按钮 开始测量 ❖ 如果要终止扫描按按钮 。
可编辑ppt
29
二光度扫描
开始 方法设定
样品名输入 将空白样品分别放入参比池和样品池
进行用户基线校正 将样品放入样品池 开始测量
打印数据
可编辑ppt
30
开始测量
测量参数设置
在[Edit]菜单中选择[Method…]选项。出现下列设置窗口.
可编辑ppt
31
具体操作程序
Method:
1. general: Measurement测量方式选择Photometry（光度 计测量）
2. Quantitation定量参数设置页面：
可编辑ppt
可编辑ppt
紫外可见分光光度计的原理与使用方法
紫外可见分光光度计的原理与使用方法单光束分光光度计的原理是：光源发出光束通过准直系统，经过光栅
的分光作用后进入样品池，与样品发生相互作用后经过检测器，最后由显
示器显示吸光度数值。
双光束分光光度计的原理是：光源发出光束，一部分经过参比池进行
比较，另一部分经过样品池与样品相互作用，分别被检测器检测后与参比
值进行比较，最后由显示器显示吸光度数值。
使用紫外可见分光光度计的方法如下：
1.准备工作：
-检查仪器是否处于正常工作状态，确认光源、检测器和显示器的功
能正常。
-清洁样品池，确保无杂质和残留。
2.样品处理：
-准备需要测量的样品溶液，并将其转移到清洁的样品池中。
-如果样品浓度过高，可能会引起光透过度低，此时可进行适当稀释。
3.测量步骤：
-打开仪器电源，进行预热，通常需要一段时间让光源稳定。
-选择合适的波长范围和检测模式（吸光度/透过度）。
-调节仪器，使得显示器上的示数为零或基线稳定。
-将样品池放入样品室，尽量避免空气泡存在。
-记录或保存测量数据，可以进行后续数据处理和分析。
4.清洁和维护：
-测量完成后，及时清洁样品池和其他相关部件，防止污染和积累。
-关闭仪器电源，注意安全操作。
总结一下，紫外可见分光光度计是一种基于比尔－朗伯定律原理的实验仪器，主要用于测量物质溶液或气体的光吸收特性。
使用时需要进行准备工作，处理样品并进行测量，同时注意仪器的清洁和维护。
紫外可见分光光度法的原理及应用
物质颜色和吸收光颜色的关系
物质颜色
黄绿 黄 橙 红
紫红 紫 蓝
绿蓝 蓝绿
吸
颜
色
紫 蓝 绿蓝 蓝绿 绿 黄绿 黄 绿 红
收 波
光 长(nm)
400 ~ 450 450 ~ 480 480 ~ 490 490 ~ 500 500 ~ 560 560 ~ 580 580 ~ 600 600 ~ 650 650 ~ 750
用经过分光后的不同波长的光依次透过该物质，通过测 量物质对不同波长的光的吸收程度（吸光度）， 以波长为横 坐标，吸光度为纵坐标作图，就可以得到该物质在测量波长 范围内的吸收曲线。这种曲线体现了物质对不同波长的光的 吸收能力，称为吸收光谱。
吸收光谱
透射光 检测器
入射光 不同波长光
紫外-可见分光光度法的原理
2．分子吸收光谱的分类：
分子吸收光谱涉及三种跃迁能级，所需能量大小顺序
? E电 ? ? E振 ? ? E转
? E电 ? 1 ~ 20ev ? ? ? 0.06 ~ 1.25?m ? 紫外 ? 可见吸收光谱 ? E振 ? 0.05 ~ 1ev ? ? ? 25 ~ 1.25?m ? 红外吸收光谱 ? E转 ? 0.005 ~ 0.05ev ? ? ? 250 ~ 25?m ? 远红外吸收光谱
比耳定律实验
当一束平行的单色光通过液层厚度一定的溶液时，在入射光波长、
强度和溶液温度等不变时，吸光度Ａ与溶液浓度 c 关系：Ａ＝k c
3．紫外-可见吸收光谱的产生 由于每个电子能级上耦合有许多的振-转能级，所以处
于紫外 -可见光区的电子跃迁而产生的吸收光谱具有 “带状吸收” 的特点。
分光光度计使用原理及操作方法
分光光度计使用原理及操作方法分光光度计使用原理及操作方法一、分光光度计的原理分光光度计是一种测量样品溶液中吸收或透射光强的仪器。
它的基本原理是通过将可见光或紫外光通过样品溶液后，测量出光强的变化，从而得知样品溶液中物质的浓度或其他性质。
分光光度计的原理可以分为下面几个步骤：1. 光源发射：分光光度计通常使用可见光或紫外光作为光源。
这些光经过滤波器减少杂散光，通过准直系统形成平行光束。
2. 样品测量：经过准直系统形成的平行光束通过样品溶液，样品中吸收或透射一部分光。
被吸收的光与未经样品的光进行比较，通过这种比较可以得到吸光度或透光度。
3. 光电传感器检测：被吸收或透射后的光通过光电传感器检测并转化为电信号。
光电传感器常用的有光电二极管或光电倍增管。
4. 信号处理和显示：光电传感器转化的电信号经过放大和滤波处理后，通过计算机或显示器显示出吸光度或透光度的数值。
二、分光光度计的操作方法1. 准备工作：在使用分光光度计之前，需要进行准备工作。
这包括检查仪器是否处于正常工作状态，校准仪器的零点，确认样品槽或比色皿是否清洁干净。
2. 设定波长：根据需要测量的物质，设定合适的波长。
分光光度计通常具有可以选择波长的旋钮或按钮，通过旋转或按键来设定所需的波长。
3. 参比校正：为了确保测量结果的准确性，需要进行参比校正。
这可以通过将参比溶液放入样品槽，并记录下参比物质的吸光度或透光度值。
然后将样品溶液放入样品槽中进行测量。
4. 测量样品：将待测样品溶液放入样品槽中，确保溶液填满槽，并将样品槽放入分光光度计中。
根据需要选择透射模式或吸收模式，开始测量。
5. 记录和分析：根据测量结果记录样品的吸光度或透光度值。
可以根据所测得的数值进行进一步的数据分析和计算。
6. 清洁操作：在使用完毕后，及时清洁分光光度计的样品槽和其他部件，以确保下次使用时的准确性和可靠性。
三、注意事项1. 避免阳光直射：分光光度计的使用需要避免阳光直射，以免影响测量的准确性。
紫外可见分光光度计原理及操作
紫外可见分光光度法的原理及应用原理：紫外可见分光光度法基于物质对紫外-可见光的吸收特性进行测定。
当光线通过样品时，样品中的分子会吸收特定波长的光，从而产生吸收峰。
通过测量样品吸收的光强，可以得到样品在不同波长下的吸光度。
常用的光谱仪器是分光光度计，它能够实现对不同波长光的选择和测量。
应用：1.定量分析：紫外可见分光光度法可以用于定量分析各种物质。
根据比尔定律，吸光度与物质浓度之间存在一定的线性关系，因此可以根据吸光度测量值推算出物质的浓度。
这在医药、环境监测、食品安全等领域中具有重要意义。
2.药物分析：紫外可见分光光度法广泛应用于药物分析中。
例如，可以利用紫外光谱测定药物的浓度、纯度和含量，评价药物的质量。
同时，通过分析药物在不同波长下的吸收特性，可以了解药物的结构和反应机理，为新药的研发提供重要的信息。
3.生化分析：生物体内的很多生物分子都具有紫外可见吸收特性，这使得紫外可见分光光度法成为生化分析中常用的工具。
例如，可以通过测定蛋白质和核酸在特定波长下的吸光度来研究其构象和浓度。
此外，也可以用于测定血液中的代谢产物、激素和维生素等的浓度。
4.环境监测：在环境监测中，紫外可见分光光度法可用于分析水质、空气中的有害物质和污染物。
例如，可以利用其测定水中化学需氧量（COD）、氨氮（NH3-N）和磷酸盐等的浓度。
这对于环境保护和水质安全具有重要意义。
5.食品检测：紫外可见分光光度法在食品行业中也具有广泛应用。
可以通过测定食品中的营养成分和添加剂的含量来评价食品质量和安全性。
例如，可以测定维生素、氨基酸、酚类和色素等在食品中的含量。
总之，紫外可见分光光度法具有简单、快速、高灵敏度和高选择性等优点，且适用范围广泛。
它在化学、制药、环保、医疗和食品等领域中都有不可替代的地位，对于研究物质性质和反应机理，以及保障人类健康和环境安全都起着重要作用。
紫外可见分光光度计操作步骤及工作原理
紫外可见分光光度计操作步骤及工作原理紫外可见分光光度计操作步骤紫外可见分光光度计属于精密光学仪器，出厂前经过精细的装配和调试，假如能对仪器进行恰当的维护和修理与保养，不仅能保证仪器的牢靠性和稳定性，也可以延长仪器的使用寿命。
1、工作环境检查：1）放置要求：仪器应平稳的摆放在水平固定的桌面上。
（由于分光光度计为精密光学仪器,在运行的过程中假如桌面不稳，会影响其工作状态,且仪器处在工作状态时，灯丝处于高温状态,此时假如有猛烈的震动会导致灯丝折断。
）2）温度要求：工作环境的温度在5—35度之间。
（仪器在工作状态时内部较热需要用仪器自身的散热风扇与外界空气进行热交换散热,假如外界温度过高,会导致仪器内部温度过高,从而加速仪器电器件与灯的老化速度,从而影响仪器的使用寿命。
）3）湿度要求：工作环境的相对湿度不超过85%。
（仪器内部有很多电器元件与光学件，在湿度太高的情况下，电器件简单老化或烧坏，光学件表面的镀铝膜也简单发霉。
）4）空气情形：空气中不应有足以引起腐蚀的有害气体和过多的尘土存在。
2、样品室检查：1）在开机之前，先要检查样品室中是否有比色皿或其他物品，由于仪器在开机后要进行一系列的功能自检，假如有物品放在样品室中会导致自检出错。
2）每次使用后应检查样品室是否积存有溢出溶液，须常常擦拭样品室，以防止废液对部件或光路系统的腐蚀。
3）在测试完成后，请适时将样品从样品室中取出，否则，液体挥发会导致镜片发霉。
对易挥发和腐蚀性的液体，尤其要注意！假如样品室中有漏液，请适时擦拭干净，否则会引起样品室内的部件腐蚀和螺钉生锈。
3、仪器的表面清洁：仪器外壳表面经过喷漆工艺处理过，假如不当心将溶液漏洒在外壳上，请立刻用湿毛巾擦拭干净，杜绝使用有机溶液擦拭。
假如长时间不用时，请注意适时清理仪器表面的灰尘。
4、比色皿清洗：在每次测量结束或溶液更换时，您需要对比色皿进行适时清洗，然后放在低浓度酸性溶液里浸泡，浸泡后用蒸馏水冲洗比色皿的内外壁，否则比色皿壁上的残留溶液会引起测量误差。
紫外可见分光光度计原理及应用
紫外可见分光光度计原理及应用紫外可见分光光度计是一种常用的光谱仪器，主要用于测量样品溶液的吸光度。
它利用紫外可见光的吸收特性来分析物质的结构和浓度，并在化学、生物、药学和环境监测等领域有广泛的应用。
紫外可见分光光度计的原理基于比尔-朗伯定律和兰伯特-比尔定律。
紫外可见分光光度计的工作原理是利用可见光和紫外光穿过溶液时，溶液中的分子或离子会吸收特定波长的光线。
光的吸收会使得光通过溶液的强度减弱，即溶液中的吸光度增加。
光度计测量的就是经过溶液前后的光强度差值，也就是吸光度。
从而根据吸光度的变化来推断溶液中所含的分析物的浓度或结构。
紫外可见分光光度计可以在190nm至1100nm的波长范围内测量光强度的变化。
常用波长为190nm至800nm之间。
紫外可见分光光度计的光源通常是一束连续的白光，经过光栅或棱镜分散成不同波长的光束，然后通过一个进样室和样品溶液接触。
样品溶液会吸收特定波长的光，其余波长的光会通过样品溶液，最后被一个光敏探测器接收。
光敏探测器会将光信号转换成电信号，并转化成数字信号通过计算机处理。
应用方面，紫外可见分光光度计广泛应用于化学、生物、药学和环境监测等领域。
在化学领域，它可以用于分析溶液中化合物的浓度，并用于酸碱度的测量。
生物领域常用紫外可见分光光度计来测量DNA和蛋白质的浓度，以及酶促反应的速率。
在药学领域，它用于药物的质量控制，测量药物和其他添加剂在制剂中的含量。
在环境监测领域，紫外可见分光光度计被用于测量水体和大气中污染物的浓度，如有机物、重金属和氮浓度等。
总之，紫外可见分光光度计利用吸光度的测量原理，能够准确测量样品溶液中特定波长的光线的吸收程度，从而推断出溶液中所含的分析物的浓度或结构。
它在化学、生物、药学和环境监测等领域中都有重要的应用价值，并在科学研究和工业生产中发挥着重要的作用。
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235
257
313
温度 /℃
25
18.2
13.7
51.3
350 22.9
以0.001mol.L-1HClO4为参比，以1cm的石英比色皿做吸收 池，分别在235、257、313、350波长处测定相应溶液的透 射比。
紫外可见分光光度计的校准(三)
吸收池成套性检验
JJG178-96规定 ：石英吸收池：220nm、蒸馏水； 350nm、 0.001mol.L-1HClO4溶液； 玻璃吸收池：600nm、蒸馏水；
紫外可见分光光度计的特点
• 1 与其它光谱分析方法相比，其仪器设备和操作都比较简单，费用少， • 分析书读快。 • 2 灵敏度高 • 3 选择性好 • 4 精密度和准确度较高 • 5 用途广泛
紫外可见分光光度计的组成结构
பைடு நூலகம்
组成结构
光源
单色器
吸收池
检测器
信号显示系统
光源
光源：提供符合要求的入射光。 要求：在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱， 具有足 够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。
光栅单色器 ➢ 一系列等宽、等距离的平行狭缝 ➢ 以光的衍射现象和干涉现象为基础（平面反射光栅和平面凹面光栅）
吸收池
吸收池：又叫比色皿，用于盛放待测溶液和决定透光液层 厚度的器件。
主要有石英吸收池和玻璃吸 收池两种。 在紫外区须采用石英吸收池， 可见区一般用吸收玻璃池。 主要规格0.5cm、1.0cm、2.0cm、3.0cm和5.0cm
紫外光源---氘灯(185-375 nm)
可见光源---钨灯(320-1000nm)
单色器
单色器：将光源发射的复合光分解成连续光谱并可从中选出任一波长 单色光的光学系统。 单色器主要由狭缝、色散元件 和透镜系统组成。 ➢ 色散元件是棱镜和反射光栅的组合 ➢ 狭缝和透镜系统控制光的方向
棱镜单色器 ➢ 利用不同波长的光在棱镜内折射 率不同将复合光色散为单色光。
相对校正法：
K2Cr2O7
用一套比色皿装待测试样的溶剂，以其中一个为参比，测定其他吸收池 的吸光度。
若吸光度为零，或相等，即可配对。
若不相等，可选最小吸光度值的作参比，测定其它的吸光度，求修正值 。
紫外可见分光光度计的日常维护，保养
对仪器工作环境的要求 稳固的工作台 温度、湿度合适
仪器保养和维护方法 仪器工作电源 光源使用注意事项 单色器使用注意事项 正确使用吸收池
打开电源开关 检验吸收池的成套性 （具体过程在后面内容中操作） 选择工作波长（按设定键，以及增加、减小按钮，进行设定）
选择测量方式（按方式键选择透射比模式与吸光度模式） 润洗比色皿，依次装入参比溶液和测量溶液 参比溶液于光路中，透射比模式下同时调0和100% 在吸光度模式下，测定测量溶液的吸光度
紫外可见分光光度计的常见故障排除
紫外可见分光光度计的常见故障排除
注意事项：手执两侧的毛面，盛放液体高度四分之三。
检测器
检测器：利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号。 常用的检测器有光电池、光电管及光电倍增管。
光电池
光电管
光电倍增管
信号显示系统
信号显示器
以检流计或微安表指示仪表 数字显示和自动记录型装置
紫外可见分光光度计的操作步骤
紫外可见分光光度计的原理与使用方法
目录
• 紫外可见分光光度计的原理 • 紫外可见分光光度计的组成结构 • 紫外可见分光光度计的操作步骤 • 紫外可见分光光度计的校准 • 紫外可见分光光度计的日常维护，保养 • 紫外可见分光光度计的常见故障排除
紫外可见分光光度计的原理
• 它是利用物质的分子或离子对某一波长 • 范围的光吸收作用，对物质进行定性分析， • 定量分析及结构分析，所依据的光谱 • 是分子或离子吸收入射光中特定波长的光 • 而产生的吸收光谱。 • 按照所吸收光的波长区域不同，分为 • 紫外分光光度法和可见光光度法，合称 • 为紫外-可见分光光度法
紫外可见分光光度计的校准（一）
波长准确度的准确检查
同学们根据教师的要求用白纸片遮住光路，改变波长从750nm到 400nm，观察白纸片中颜色的变化。
谱钕滤光片吸收曲线
苯蒸汽的吸收曲线
紫外可见分光光度计的校准（二）
透射比正确度的检验
WK2Cr2O7 0.006000 % 的溶液的透射比
波长 /nm