罗丹明B最新检测方法
分子荧光法测定罗丹明B的含量
分子荧光法测定罗丹明B的含量一、目的和要求：1．掌握荧光法测定罗丹明B的含量的基本原理。
2．了解分子荧光分光光度计的基本构造和原理，并能简单操作。
二、原理：罗丹明B在水中是强的荧光物质，并且在低浓度时，荧光强度与罗丹明B浓度呈正比： If=kc 基此，测定一系列已如浓度的罗丹明B的荧光强度，然后以荧光强度对罗丹明B浓度作标准曲线，再测定未知浓度罗丹明B的荧光强度，把它代入标准曲线方程求出其浓度。
图1罗丹明B的分子结构三、实验仪器与试剂：1．仪器RF-5301PC分子荧光分光光度计200 mL的容量瓶12支2 mL的吸量管12支250 mL烧杯12个2．试剂 l×l0-4 g∙mL-1的罗丹明B储备液四、操作步骤：1．标准溶液的配制取5只10 mL的容量瓶分别加入l×l0-4 g∙mL-1的罗丹明B储备液0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.20，1.40，1.60，1.80，2.00 mL,，用水稀释至刻度，摇匀。
2．绘制发射光谱激发波长固定在556 nm, 在500-700 nm范围内扫描荧光发射光谱。
3．绘制标准曲线荧光发射波长固定在640 nm处，从发射光谱上取系列标准溶液的荧光发射强度。
4．未知试样的测定在标准系列溶液同样条件下，测定未知样品的荧光发射强度。
5．绘制荧光强度If对罗丹明B溶液浓度c的标准曲线，并由标准曲线求算未知试样的浓度。
五、数据处理六、讨论：1.亮绿色闪光结晶粉状物，溶于水和酒精，呈带强荧光的蓝光红色溶液，易溶于溶纤素，微溶于丙酮；遇浓硫酸呈黄光棕色，有强的绿色荧光，稀释后呈大红色转为蓝光红色和橙色。
其水溶液加氢氧化钠后加热，形成玫瑰红绒毛状沉淀。
2.A. 光源：为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。
B．激发单色器：置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的激发光谱。
HPLC法快速测定竹凉席中的罗丹明B-4页word资料
HPLC法快速测定竹凉席中的罗丹明B 罗丹明B，又称玫瑰红B，或碱性玫瑰精，俗称花粉红，是一种具有鲜桃红色的人工合成染料。
罗丹明B在溶液中有强烈的荧光，用作实验室中细胞荧光染色剂及有色玻璃、特色烟花爆竹等行业。
本研究建立了一种准确、灵敏的检测竹凉席中的罗丹明B含量的方法，该方法样品前处理简单、罗丹明B的色谱峰形好、定量结果具有很好的重现性、精密度，该方法有着重要的实际应用价值。
1.试验部分1.1 仪器和试剂WH-400超声清洗器（济宁万和超声电子设备有限公司）；LC-MS2020液相色谱仪，带荧光检测器，（日本岛津公司）；LP502A型分析天平，感量0.0001g，（常熟市百灵天平仪器有限公司）；中草药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；标准筛100目；0.45μm有机微孔滤膜；超纯水器（艾柯公司）。
1.2 方法1.2.1 标准曲线各浓度溶液的配制标准溶液的配置：精密称取罗丹明B0.0500g置于100mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并准确定容至刻度，摇匀，配成质量浓度为0.5mg/mL的罗丹明B标准储备液。
标准工作液的配制：用流动相将上述标准液稀释为0.5ng/mL，1.0ng/mL， 5.0ng/mL，10ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，的工作液。
此工作液现配现用。
1.2.2 样品的制备取烘干至恒重的竹凉席块切小，放入中草药粉碎机中粉碎，过60目的分子筛，取混合均匀的样品2g，放入100mL的容量瓶中，加色谱纯甲醇至刻度，超声提取30min，静置5min后，取上清液过0.45μm有机微孔滤膜后，用液相色谱仪测定。
1.2.3 色谱分析条件色谱柱：C18，柱长150mm，内径4.6mm，粒度5μm；柱温：35℃。
进样量：10μL；流速：1.0mL/min；流动相：甲醇和水（比例为60：40）。
荧光条件：激发波长（Ex）550nm，发射波长（Em）580nm。
2.结果与讨论2.1 检测器及检测波长的选择因罗丹明B的甲醇溶液有强烈的荧光，相比紫外检测器，荧光检测器的灵敏度更高，而荧光检测器相比于质谱检测器，价格更优惠，实验室使用更普及些，因此选用荧光检测器作为高效液相的检测器测定罗丹明B；通过对罗丹明B的标准溶液进行光谱扫描可知，罗丹明B在550nm处吸收峰最大，因此将选定为550nm为激发波长（Ex），580nm为发射波长（Em）。
食品检测实验室质量控制与管理液相色谱-串联质谱法测定调味品中罗丹明B
FOOD INDUSTRY I THEORY 食品检测实验室质量控制与管理液相色谱-串联质谱法测定调味品中罗丹明B文王海澍王云衢鞍山市食品药品检验所罗丹明B (Rhodamine B) 又称玫瑰红B，或碱性玫瑰精，俗称花粉红，是一种具有鲜红桃色的人工合成染料，曾经用作食品添加剂，但后来实验证明罗丹明B致癌，现已不允许用作食品染色。
作为一种具有潜在的致癌、致突变性的心脏毒性的人工合成碱性荧光染料，罗丹明B在市场上被不法商贩添加于调味品如辣椒面、辣椒酱、花椒、火锅底料等中，从中牟取利益。
我国各地食品药品监督管理局曾多次对非法添加罗明丹B进行专项检查。
因此，调味品中罗丹明B的测定研究可为食品监管部门提供技术支持,在保障食品安全方面具有重大意义。
1. 仪器设备安捷伦液相色谱-质谱联用仪1260-6460（软件版本：MassHunter Version B.06.00）；SPS202F 电子天平，梅特勒-托利多（常州）称量设备系统有限公司2. 试剂及标准物质甲醇，色谱纯；甲酸（纯度88%）；罗丹明B（纯度：98.6%）lot：40815。
标准溶液配制：准确称取按其纯度折算为100%质量的标准品0.0100g，置于100mL容量瓶中，甲醇定容，配制储备液（0.1mg/mL）；中间储备液：取1mL标准储备液于100mL容量瓶中，用甲醇水（1∶1）定容，中间储备液浓度（1000ng/mL）；标准使用液：取1mL中间储备液于100mL容量瓶中，用甲醇水（1∶1）定容，配制成标准使用液（10ng/mL）;分别移取标准使用液50、100、250、500、750μL，用甲醇水（1∶1）定容1mL，配制成0.5、1、2.5、5、7.5、10 ng/mL系列标准工作液。
3. 仪器测试条件ESI源；正模式；色谱柱：C18柱，2.1mm×100mm，1.7µm；柱温：35ºC；进样量：10µL；流速0.2mL/min;梯度洗脱条件见表1。
罗丹明紫外可见吸收实验
实验一标准曲线法测定罗丹明B的含量
1．实验目的
（1）了解紫外-可见分光光度计的结构及使用方法。
（2）掌握标准曲线法定量分析的技术，了解紫外可见光谱法进行纯组分定量分析的全过程。
（3）掌握不同浓度的配制和样品含量的计算。
2．实验原理
紫外可见定量分析的依据是Lamber-Beer定律。
3．仪器与试剂
仪器：紫外分光光度计，移液管，吸耳球，微量注射器。
试剂：罗丹明B溶液。
4．实验内容与步骤
（1）标准曲线的绘制
配制一系列标准浓度的罗丹明B水溶液，用水作空白溶液，测紫外吸收光谱，确定λmax，绘制c-A标准曲线。
（罗丹明B原液浓度1.000mM）
（2）未知罗丹明B溶液的紫外可见光谱
以水为空白溶液，测未知罗丹明B溶液的的紫外可见吸收光谱。
5．数据处理
（1）制作标准曲线。
（2）根据未知罗丹明B溶液在λmax的A，在标准曲线上查浓度。
6. 实验报告
(10,15,20,25,30)uL+3.5mLH2O。
分光光度法测定光催化活性
1.用去离子水为溶剂配置不同浓度的罗丹明B溶液，分别为5mg/L、10mg/L、
15mg/L、20mg/L、25 mg/L、30 mg/L，然后用紫外分光光度计测量不同浓度的罗丹明B溶液的吸光度，资料查询可知罗丹明B的最大吸收波长在
550nm，所以选定550nm处来测量罗丹明B的吸光度。
2.以罗丹明B溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，并进
行一元线性回归，得到线性标准方程。
3．取10ml浓度为10mg/L的罗丹明B溶液，在黑暗条件下，将处理后的钛板放至其中浸泡3小时，以便样品表面达到吸附平衡，然后用紫外光照射，每隔一段时间用紫外可见分光光度计测量罗丹明B溶液在550nm处的吸
光度。
最后通过η=（A0-A）/A0计算其降解率，并以时间为横坐标，降解率为纵坐标，绘制曲线。
4．用以上方法绘制不同钛板处理罗丹明B的降解曲线，通过其上升趋势判断光催化活性的大小，上升趋势越大，则光催化活性越高，反之越低。
罗丹明B分光光度法测定钢铁中的微量锑
罗丹明B分光光度法测定钢铁中的微量锑一、办法要点锑(Ⅲ、V)与I-形成[Sbl5]2-络阴离子，此络阴离子可与罗丹明类碱性染料阳离子形成离子缔合物，当溶液中有一定量的聚乙烯醇存在时，离子缔合物不以沉淀析出，并且陪同着离子缔合物的形成，溶液色彩发生显著变幻。
借此可挺直在水溶液中分光光度法测定微量锑，敏捷度高，其中罗丹明B和罗丹明6G的离子缔合物摩尔吸光系数分离达到1．8×105和3．5×105。
二、试剂与仪器 (1)：0．02％溶液。
(2)硫硝混酸：1000mL溶液中含硫酸50mL和硝酸8mL。
(3)碘化钾-抗坏血酸溶液：20g碘化钾和2g抗坏血酸溶于水中，稀释至100mL。
(4)：1％溶液。
(5)：称取酒石酸锑钾0．2743g溶于水中，移入1000mL容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀，吸取此溶液20mL于200mL容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀，此溶液含锑为10μg／mL。
(6)分光光度计。
三、分析步骤称取钢铁样品0．1000g，加入硝硫混合酸60mL，加热溶解，冷却，移入100mL容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀，吸取10mL 试液于干燥的150mL锥形瓶中，加水6mL、碘化钾-抗坏血酸溶液7mL，放置2min，加聚乙烯醇溶液2mL，然后于不断摇动下加入0．02％的罗丹明B5mL，于595nm波特长，用1cm比色皿，对比试剂空白，测定吸光度。
四、标准曲线的绘制吸取锑标准溶液10mL(100μg／mL)于100mL容量瓶中，加入2mol／L硫酸60mL，以水稀释至刻度，摇匀，分离吸取0．0、0．5、1．0、1．5、2．0、2．5mL锑标准溶液于干燥的150mL锥形瓶中，加水6mL、碘化钾一抗坏血酸溶液7mL，放置2min，加聚乙烯醇溶液2mL，在不断摇动下加入0．02％的罗丹明B5mL，于波长595nm处，用1cm比色皿，以试剂空白作参比，测其吸光度，绘制标准曲线。
五、注重事项 (1)在0．36～0．60mol／L的硫酸介质中，在0．25～0．4mo1／L左右的碘化钾存在下，锑与碘离子形成[SbI5]2- 络阴离子，它可与罗丹明B形成1：2的离子缔合物，吸光度2h内不变。
高效液相色谱_紫外光检测法测定食品中罗丹明B的含量_王勇_百(精)
图3
流动相为甲醇和水的罗丹明B
标准品色谱
图4流动相为甲醇和乙酸铵的罗丹明B标准品色谱
为0．99998(图5
。
图5标准曲线
2．4方法的回收率与精密度分别测定了在5、
10、50μg /kg加标水平时罗丹明B的回收率,结果见表1。由表1可知,该方法有较高的准确度和可靠性。
表1辣椒油与火锅底料中罗丹明B的加标回收率试验结果(n =6加标量
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淋洗液用量。经多次试验,一般样品用10ml正己烷
淋洗即可满足样品基质干净、
无干扰且回收率高的要求,但对含油脂较多的辣椒油样品,为净化氧化铝柱中含量较高的油脂,淋洗时需用20ml正己烷。2．1．3
洗脱液用量。分别对采用10ml甲醇洗脱、
10ml甲醇洗脱后再用5ml甲醇进行二次洗脱的样液进行测定发现,第2种洗脱样液中未发现有罗丹明B ,而大量水溶性色素等干扰成分仍保留在氧化铝萃取柱上,样品上机测定基质干净,
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荧光光谱法测定罗丹明b实验报告
荧光光谱法测定罗丹明b实验报告一、实验目的1.掌握荧光光度计的基本原理及使用。
2.了解荧光分光光度计的构造和各组成部分的作用。
3.掌握分子荧光光度计分析物质的特征荧光光谱：激发光谱、发射光谱的测定方法。
4.了解影响荧光产生的几个主要因素。
5.学会运用分子荧光光谱法对物质进行定性和定量分析。
二、实验原理原子外层电子吸收光子后，由基态跃迁到激发态，再回到较低能级或者基态时，发射出一定波长的辐射，称为原子荧光。
对于分子的能级激发态称为分子荧光，平时所说的荧光指分子荧光。
具有不饱和基团的基态分子经光照射后，价电子跃迁产生荧光，是当电子从第一激发单重态S1的最低振动能级回到基态S0各振动能级所产生的光辐射。
(1)激发光谱是指发光的`某一谱线或谱带的强度随激发光波长(或频率)变化的曲线。
横坐标为激发光波长，纵坐标为发光相对强度。
激发光谱反映不同波长的光激发材料产生发光的效果。
即表示发光的某一谱线或谱带可以被什么波长的光激发、激发的本领是高还是低；也表示用不同波长的光激发材料时，使材料发出某一波长光的效率。
荧光为光致发光，合适的激发光波长需根据激发光谱确定——激发光谱是在固定荧光波长下，测量荧光体的荧光强度随激发波长变化的光谱。
获得方法：先把第二单色器的波长固定，使测定的λem不变，改变第一单色器波长，让不同波长的光照在荧光物质上，测定它的荧光强度，以I为纵坐标，λex为横坐标所得图谱即荧光物质的激发光谱，从曲线上找出λex，，实际上选波长较长的高波长峰。
(2)发射光谱是指发光的能量按波长或频率的分布。
通常实验测量的是发光的相对能量。
发射光谱中，横坐标为波长（或频率），纵坐标为发光相对强度。
发射光谱常分为带谱和线谱，有时也会出现既有带谱、又有线谱的情况。
发射光谱的获得方法：先把第一单色器的波长固定，使激发的λex 不变，改变第二单色器波长，让不同波长的光扫描，测定它的发光强度，以I为纵坐标，λem为横坐标得图谱即荧光物质的发射光谱;从曲线上找出最大的λem。
高效液相串联质谱法检测辣椒油中的罗丹明B
THEORY 丨理i£fiH荇高效液相串联质谱法检测辣椒油中的罗丹明B罗丹明B是一种被怀疑致癌物质，又称玫瑰红B,或碱性玫瑰精，俗称花粉红，是一种具有鲜桃红色的人工合成的染料。
辣椒油中罗丹明B的检测是日常检测项目，一般采用液相串联质谱法进行检测。
本文优化了已有方法，简洁方便地检测辣椒油中的罗丹明B。
实验部分仪器、试剂与材料ACQUITY UPLC卜Class超高效液相色谱仪、XevoTQ-S m icro电喷雾串联四级杆质谱仪；PCX柱子；乙腈，色谱纯；正己院，色谱纯；实验用水为milli-Q高纯水；罗丹明B标准溶液。
实验条件液相色谱条件：Waters ACQUITY U PLC BEH C18柱（50mmx2.1mm,1.7|im)色谱柱；柱温40°C;进样量1HL;流速为0.3mL/min;流动相A为0.1%甲酸水溶液，B为乙腈。
梯度洗脱程序为：0.00~1.00min,85%~85%A;1.00~2.00m in,85%~15%A；2.00~3.00m in,15°/o~15%A；3.00~4.00min,15%~85%A；4.00~5.00min,85%~85%A〇质谱条件：电喷雾离子源；正离子扫描；毛细管电压0.5kV;离子源温度150°C;去溶剂气500°C;去溶剂气流量（氮气）800L/h;气帘气流量50L/h;多反应监测（MRM)模式检测；罗丹明B的离子监测条件为下表所示。
物质监测离子(m/z)Conev〇lt3g6(\/)Collision energy(V)罗丹明B443.3/399.23015443.3/355.23017样品处理：取l.Og辣椒油，加入10m l含2%三氯乙酸的正己院溶液，超声萃取5min。
依次用5m l甲醇，5m丨水，5ml 甲醇活化PCX柱子。
10m丨上述正己烷提取液直接上样净化，弃去滤液。
5m l氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液。
食品中罗丹明B的测定解决方案-八角茴香
订购电话：北京：400-608-7719上海：021-6126 3966 广州：020-8559 3520 食品中罗丹明B 的测定解决方案罗丹明B 又称玫瑰红B ，或碱性玫瑰精，是一种人工合成碱性荧光染料。
由于罗丹明B 具有价格低廉、色泽红艳、稳定性强等特点，部分不良商贩将其作为苏丹红替代品为花椒、辣椒等食品染色，取得好的卖相，以求以次充好，售高价。
有研究显示，罗丹明B 会直接危害到人体的身体健康，具有潜在的致癌、致突变性和心脏毒性。
2008年，我国将其列入第一批《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》中，明确规定不允许用作食品添加剂及食品染色。
目前，罗丹明B 的检测常用中性氧化铝固相萃取柱进行前处理净化，但要控制氧化铝的活性，且操作步骤繁琐，回收率结果无法保证；也有行业标准《SN/T 2430－2010进出口食品中罗丹明B 的检测方法》以乙酸乙酯/环己烷提取罗丹明B ，凝胶渗透色谱系统净化后，液相色谱荧光检测器或液相色谱 质谱/质谱仪测定，但该方法需购置凝胶渗透色谱仪，且前处理有机溶剂消耗量大，耗时长，不能被广泛使用。
迪马科技在克服上述两种方法缺陷基础上开发出ProElut PXC 固相萃取柱净化，液相色谱荧光检测器测定方法，对多种食品基质中罗丹明B 进行测定。
该方法无需使用大型设备凝胶渗透色谱仪，具有简便，快速，溶剂消耗少，回收率结果稳定，易于广泛使用等优势。
以下为详细解决方案，供您参考！八角茴香中罗丹明B 的测定1 适用范围适用于八角茴香中罗丹明B 的检测。
2 样品准备(1) 取1 g 样品于50 mL 离心管中，加入10 mL 提取液*，均质1 min ， 6000 rpm 下离心2 min ，收集上清液；订购电话：北京：400-608-7719 上海：021-6126 3966 广州：020-8559 3520 (2) 残渣再用10 mL 提取液* 涡旋混合提取2 min ，6000 rpm 下离心2 min ；合并两次提取液；(3) 在40 ℃下用减压蒸馏将提取液蒸干，然后用6 mL 1%磷酸水溶液超声溶解，待净化。
食品中罗丹明B的现场快速检测及实验室方法1
食品中罗丹明B（玫瑰红）的现场快速检测及实验室检测方法1 实验材料1.1 固相萃取柱：Cleanert AL-N，500mg/6ml1.2 色谱柱：Venusil MP C18，4.6mm X 150mm（5μm）2 现场快速检测2.1 辣椒粉取辣椒粉一小勺（约5g）放入小烧杯中，加入约40ml含20%丙酮的正己烷，摇动或搅拌2分钟，静置，待样品杯上方澄清后，慢慢倒入小柱中，下端接一废液杯，视颜色深浅倒入2-5ml，注意不要倒入太多，保证小柱的中下部仍为白色，此时，含罗丹明B的样品在柱上部会出现鲜亮的粉红色的荧光条带，条带边缘清晰，粉红色随含量的增加而加深和加宽，不含罗丹明B的样品提取液不会出现粉红色条带，只会出现黄红色的界面不清晰的宽带，然后用含20%丙酮的正己烷20ml慢慢倒入小柱，粉红色的条带不下移，但更清晰，其余的黄红色带下移，可大部分被洗脱出，即可判断为含罗丹明B的可疑样品。
2.2 辣椒油取辣椒油一小勺（约2g）放入小烧杯中，加入约10ml正己烷，混匀。
按2.1项操作。
2.3 判定初步判断为含罗丹明B的可疑样品需送实验室中进行液相色谱确证检验。
3实验室验证方法3.1．仪器3.2．提取和纯化3.2.1 辣椒粉：取辣椒粉1g，加入20ml含20%丙酮的正己烷，震摇10分钟，静置或过滤使分离出上层清液，残渣加入10ml含20%丙酮的正己烷重复提取一次，合并2次提取液，混匀，用滴管将上清液加入氧化铝小柱（1.1）中，视颜色深浅决定上柱量，保证上完样的小柱中下部仍为白色，含罗丹明B的样品提取液在柱上部会出现鲜亮的粉红色的荧光条带，且粉红条带随含量的增加而加深和加宽，不含罗丹明B 的样品提取液不会出现粉红色条带，只会出现黄红色的不清晰的宽带，用含20%丙酮的正己烷洗小柱，粉红色的条带不下移，但更清晰，其余的黄红色带下移可大部分被洗脱出，可判断为含罗丹明B的可疑样品，待洗柱的流出液无色时，滴入5-10ml甲醇，将罗丹明B色带洗下并收集，用甲醇定容后，注入高效液相色谱仪进行确认。
食品中罗丹明B的测定(BJS,202105)(Word最新版)
食品中罗丹明B的测定（BJS,202105）通过整理的食品中罗丹明B的测定（BJS,202105）相关文档，渴望对大家有所扶植，感谢观看！食品中罗丹明B的测定BJS 2021051 范围本方法规定了食品中罗丹明B的液相色谱测定方法及液相色谱-质谱/质谱确证方法。
本方法适用于半固态调味料、花椒及花椒粉、花椒油、牛肉干、蜜饯、水果干制品中罗丹明B的测定和确证。
2 原理试样中罗丹明B用含酸的甲醇水溶液提取后，经混合型阳离子固相萃取小柱净化，接受液相色谱荧光检测器检测，外标法定量。
试样中检出罗丹明B后接受液相色谱质谱/质谱法进行确证。
3 试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。
3.1 甲醇（CH3OH）：色谱纯。
3.2 乙腈（C2H3N）：色谱纯。
3.3 甲酸（CH2O2）：色谱纯。
3.4 氨水（NH₃·H₂O）：色谱纯。
3.5 含0.1%甲酸的水溶液: 取甲酸（3.3）1 mL用水稀释至1000 mL，用滤膜（0.22 μm，水相）过滤后备用。
3.6 50%甲醇水溶液:精确量取500 mL甲醇（3.1）于1 L容量瓶中，用水定容至刻度。
3.7 含0.1%甲酸的甲醇水溶液：取1 mL甲酸（3.3），用甲醇水溶液（3.6）稀释至1000 mL。
3.8 含0.1%甲酸的乙腈溶液：取1 mL甲酸（3.3），用乙腈（3.2）稀释至1000 mL，滤膜（0.22 μm，有机相）过滤后备用。
3.9 含0.1%甲酸的乙腈水溶液：取0.1 mL甲酸（3.3）和35 mL 乙腈（3.2），用水稀释至100 mL，混匀。
3.10 含5%氨水的甲醇溶液：取5 mL氨水（3.4），用甲醇稀释至100mL，混匀。
（临用现配）3.11 罗丹明B标准品：罗丹明B标准品的分子式、相对分子量、英文名称、CAS登录号见表1，纯度≥99%。
表1 罗丹明B标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量罗丹明BRhodamine B81-88-9C28H31ClN2O3479.013.12 罗丹明B标准储备液：精确称取罗丹明B标准品10 mg（精确至0.0001 g），置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成浓度为100 μg/mL的标准储备液。
分光光度法测定罗丹明B的实验设计4
分光光度法测定罗丹明B的实验设计摘要:设计了一个分光光度法教学实验“分光光度法测定罗丹明B”,采用电脑处理实验数据,对所设计的实验的可行性及教学效果进行了探讨. 关键词:分光光度法;罗丹明B;实验设计;实验教学可见分光光度法是分析工作中最常用的方法之一,这种方法所用仪器价格低廉,操作简便,方法易于推广.广泛应用于工业分析,环境分析等方面.在分析化学和仪器分析的实验教学中,分光光度计的使用和用分光光度法测定样品的含量是必教的内容.在现有的多种教材中[1,2],都用“铁的比色测定”作为实验教学内容,教学时间为4—6学时.但在实际的教学过程中,很难连续安排4—6学时进行实验教学,而仪器分析实验要求一次性完成所有实验过程.实验课一般安排在下午或晚上,通常为3个学时.因此,在保证教学质量的前提下,一个实验尽可能在3学时内完成.根据教学经验,设计了一个可见分光光度法的教学实验.1 实验设计分光光度法测定罗丹明B.1.1 目的要求1.1.1 了解分光光度计的性能、结构及使用方法.1.1.2 掌握测量最大吸收波长的方法.1.1.3 掌握用标准曲线法测定试样的方法.1.2 原理罗丹明B对不同波长的光的吸收能力不同,根据吸光度A波长的关系,找出最大的吸收波长;罗丹明B在一定浓度范围内,在最大波长处的吸光度A与它的浓度C成正比,由标准曲线方程求出水样的浓度.1.3 实验用品试剂:罗丹明B标准液称取0.2500g罗丹明B,加入少量水溶解,移至250mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀.此罗丹明B溶液浓度为1.000g・L-1 .吸取此溶液1.0mL于100mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至标线,摇匀.此罗丹明B溶液为10mg・L-1 .仪器:10mL比色管、各种刻度的移液管.7200型或722型分光光度计.1.4 实验步骤1.4.1 吸收曲线的绘制在一支25mL的比色管中加入4mL10mg・L-1的罗丹明B,加蒸馏水至10mL刻度.在分光光度计上,用1cm的比色皿,以蒸馏水为空白,在450～650nm之间,每隔10nm测定一次吸光度.在吸光度极大值对应的波长左右各10nm的范围内每隔2nm测定一次吸光度.找出最大吸收波长.1.4.2 标准曲线的绘制在5支25mL的比色管中,用吸量管分别加入1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL罗丹明B标准溶液(10mg ・L-1),然后加蒸馏水至10mL刻度,摇匀.用上面所求得的最大波长为测量波长,用1cm比色皿,以蒸馏水作参比溶液测其吸光度.1.4.3 水样中罗丹明B的测定取2mL水样于25mL的比色管中,加蒸馏水至10mL刻度,其它步骤同上,测出吸光度.1.4.4 数据处理(1)在电脑上,打开Excel程序,新建表格文档,将1.4.1所测的数据输入表格中,A列为波长(横坐标),B列为吸光度(纵坐标),按下列步骤操作:点击“插入”、“图表”,在“图表类型”对话框中选择“XY散点图”中的“平滑线散点图”,按“下一步”;进入“图表源数据”,按“下一步”;在“图表选项”中填入“图表标题”、“数值(X)轴”、“数值(Y)轴”,按“完成”.页面上得到吸收曲线,找出最大波长,打印吸收曲线图.(2)新建一个Excel表格文档,将1.4.2所测的数据输入表格中,A列为浓度(横坐标),B列为吸光度(纵坐标),按下列步骤操作:点击“插入”、“图表”,在“图表类型”对话框中选择“XY散点图”中的“散点图”,按“下一步”;进入“图表数据”,按“下一步”;在“图表选项”中填入“图表标题”、“数值(X)轴”、“数值(Y)轴”,按“完成”.在页面上得到散点图,点击图中的数据点,右击,再单击“添加趋势线”,出现对话框后,点击“选项”,在“显示公式”和“显示R平方值”处打“√”,按“确定”,得到标准曲线及线性方程公式,打印标准曲线.(3)由线性方程公式求出水样中罗丹明B的浓度.2 实验可行性按照所设计的实验步骤进行实验.测得罗丹明B 最大吸收峰为554nm.线性方程为A=0.214C+0.0049,R2=0.9998.对合成水样进行测定结果如表1.稳定性试验表明罗丹明B的稳定时间超过30min.实验用水是蒸馏水,实验过程没有干扰物质影响.表1 水样测定结果水样测量值(mg・L-1)平均值(mg・L-1)RSD13.54 3.56 3.503.533.1%23.12 3.08 3.083.092.3%3 实际教学效果罗丹明B的检测用于可见分光光度法实验教学,突出了教学重点,原理易于讲清,操作简单,相关性好,精密度高,学生容易接受,能很好的体现教学要求.本实验设计为3个学时.教师准备好浓度为1.000g・L-1罗丹明B储备液,配制适当浓度的待测水样.在教学过程中,用15分钟讲解实验原理,仪器原理及仪器使用方法,剩余时间为学生实验.对二个班72位学生实验过程进行了考察.结果是:全部学生基本掌握仪器操作31 第2期占达东,王开强,陈多谋:分光光度法测定罗丹明B的实验设计方法,都能在3个学时内完成实验;全部学生都能够找出最大吸收波长,67位学生对标准曲线实验的测定结果:R2大于0.990.图1和图2是某一位学生的实验结果,最大吸收波长是554nm,R2=0.9966,两个水样测量结果分别是3.51mg・L-1和3.03mg・L-1,说明实验效果良好.用电脑辅助处理数据,数据处理快,教师在课内能判断学生的测量结果.如果R2小于0.990,说明学生的测量误差较大.电脑辅助数据处理使学生将所学的电脑知识与专业知识结合起来,提高了学生信息处理能力.4 结论教学实践证明,分光光度法测定罗丹明B的实验相关性好,精密度高,能满足实验教学要求.学生能在较短时间内掌握分光光度法的基本操作,掌握测量最大吸收波长的方法,掌握用标准曲线法测定试样的方法,获得很好的教学效果.所以,本文提出的“分光光度法测定罗丹明B”的实验教学设计是合理可行的/view/a02524212f60ddc cda38a073.html。
最新药物SRB法实验步骤
药物SRB法实验步骤(根据原方案)SRB（黄酰罗丹明B）比色分析1.1%乙酸：量取2ml乙酸，定容到200ml。
4℃保存2.0.4%SRB200ML：称取0.8gSRB，溶于200ml乙酸中。
室温保存。
3.1 %TCA（三氯乙酸MV163.39）250ML:称取2.5gTCA加水定容至250ml，4℃棕色瓶或锡纸避光保存。
4．50%TCA100ml ：称取50gTCA，加入水定容至100ml。
4℃棕色瓶或锡纸避光保存5.10mM unbuffered Trisbase(PH10.5)500ML:称取0.6057g Trisbase（三羟甲基氨基甲烷MV121.14）加水定容至500ml4℃保存1青蒿素、双氢青蒿素、青蒿琥酯和蒿甲醚的配制青蒿素、双氢青蒿素、青蒿琥酯和蒿甲醚采用DMSO溶解，使用终浓度皆为0、3、10、30、100、300μg/ml。
阴性对照为1%的DMSO溶液。
青蒿素55mg/400ul 137.5μg/ ul 分子量：282.33蒿甲醚51mg/600ul 83.33 μg/ ul 分子量：298.37双氢青蒿素30mg/ml 30μg/ ul 分子量：284.35青蒿琥酯120Mm 46.13μg/ ul 分子量：384.42青蒿琥酯50mg/200ul 250μg/ ul将每种药稀释成30μg/ ul：a．取30ul 137.5μg/ ul的青蒿素，加107.5ul的DMSOb．取30ul 83.33 μg/ ul的蒿甲醚，加53.33ul的DMSOc．取30ul 46.13 μg/ ul的青蒿琥酯，加16.13ul的DMSO药物终浓度（μg/ ul）0 3 10 30 100 300 每孔药物体积（ul）0 0.02 0.0667 0.2 0.667 2 5孔药物体积（ul）0 0.1 0.333 1 3.33 10 补的DMSO体积(ul) 10 9.9 9.667 9 6.67 0 备注：上述的药物为稀释成30μg/ ul的药物。
BJS201905食品中罗丹明B的测定
食品中罗丹明B的测定BJS 2019051 范围本方法规定了食品中罗丹明B的液相色谱测定方法及液相色谱-质谱/质谱确证方法。
本方法适用于半固态调味料、花椒及花椒粉、花椒油、牛肉干、蜜饯、水果干制品中罗丹明B的测定和确证。
2 原理试样中罗丹明B用含酸的甲醇水溶液提取后，经混合型阳离子固相萃取小柱净化，采用液相色谱荧光检测器检测，外标法定量。
试样中检出罗丹明B后采用液相色谱质谱/质谱法进行确证。
3 试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。
3.1 甲醇（CH3OH）：色谱纯。
3.2 乙腈（C2H3N）：色谱纯。
3.3 甲酸（CH2O2）：色谱纯。
3.4 氨水（NH₃·H₂O）：色谱纯。
3.5 含0.1%甲酸的水溶液: 取甲酸（3.3）1 mL用水稀释至1000 mL，用滤膜（0.22 μm，水相）过滤后备用。
3.6 50%甲醇水溶液:准确量取500 mL甲醇（3.1）于1 L容量瓶中，用水定容至刻度。
3.7 含0.1%甲酸的甲醇水溶液：取1 mL甲酸（3.3），用甲醇水溶液（3.6）稀释至1000 mL。
3.8 含0.1%甲酸的乙腈溶液：取1 mL甲酸（3.3），用乙腈（3.2）稀释至1000 mL，滤膜（0.22 μm，有机相）过滤后备用。
3.9 含0.1%甲酸的乙腈水溶液：取0.1 mL甲酸（3.3）和35 mL乙腈（3.2），用水稀释至100 mL，混匀。
3.10 含5%氨水的甲醇溶液：取5 mL氨水（3.4），用甲醇稀释至100mL，混匀。
（临用现配）3.11 罗丹明B标准品：罗丹明B标准品的分子式、相对分子量、英文名称、CAS登录号见表1，纯度≥99%。
表1 罗丹明B标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量3.12 罗丹明B标准储备液：准确称取罗丹明B标准品10 mg（精确至0.0001 g），置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成浓度为100 μg/mL的标准储备液。
罗丹明B-Mn2+-H2O2体系同步荧光分光光度法
罗丹明B-Mn2+-H2O2体系同步荧光分光光度法测定水果的抗氧化活性摘要在稀硫酸介质中, Mn2+ - H2O2体系产生的羟自由基迅速氧化罗丹明B使其褪色。
在579 nm 处测定吸光度的变化, 可间接测定羟自由基的生成量。
水果提取物可以消除溶液中的羟自由基, 从而使溶液的吸光度下降程度减弱。
据此建立了一种测定水果对羟自由基的清除率的新方法。
测定了4种常见水果的抗氧化性, 其中苹果和橙子的抗氧化性较强。
1 前言羟自由基(·OH)是活性氧中对生物体毒性最强、危害最大的一种自由基。
它可以通过电子转移、加成以及脱氢等方式与生物体内的多种分子作用，造成糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等物质的氧化性损伤，使细胞坏死或突变。
羟自由基还与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬有关。
对机体适当补充外源性抗氧化剂或给予能促使机体内源性物质恢复到一定水平的药物，可改善这些状况。
由于长期使用化学合成的抗氧化剂对入体有一定的副作用，所以，寻找天然、安全、无毒的抗氧化剂就越来越受到入们的重视。
对羟自由基的研究有许多，例如：荧光法研究高粱红色素清除羟自由基活性，为高粱红色素的合理开发和利用提供了一定的参考依据；罗丹明6G-Co2+-H2O2体系荧光法测定常见蔬菜的抗氧化活性，测定了14种常见的蔬菜的抗氧化活性，其中菠菜、油菜、韭菜、香菜、雪里蕻5种绿叶蔬菜的抗氧化活性较强；丁基罗丹明B-Fe2+-H2O2体系荧光法测定茶叶的抗氧化活性，对多种茶叶及枸杞的清除羟自由基作用进行了研究，充分利用了丰富的茶叶资源提高入体抗氧化性能。
目前，离体检测羟自由基的方法主要有电子自旋共振（ESR）法、化学发光法、光度法及荧光法，这些方法多是用传统的Fe2+-H2O2体系产生羟自由基，或Cu+、Co2+、代替Fe2+[5、6]使灵敏度提高，对水果抗氧化活性的研究已有报道。
本文采用罗丹明B作指示剂，在Mn2+-H2O2体系产生羟自由基(·OH)，测定水果的抗氧化活性。
[新版]罗丹明b
![[新版]罗丹明b](https://img.taocdn.com/s3/m/8a7ab8210a4c2e3f5727a5e9856a561252d3212d.png)
罗丹明B玫瑰红Ｂ玫瑰红Ｂ：也称罗丹明B，俗称花粉红,是一种碱性荧光染料。
罗丹明B，经老鼠试验发现，会引致皮下组织生肉瘤，被怀疑是致癌物质。
玫瑰红Ｂ-定义罗丹明B是一种具有鲜桃红色的人工合成的染料；英文名：Rhodamine B；分子式：C28H31ClN2O3；分子量：479.0175；玫瑰红Ｂ-特征及用途罗丹明B亮绿色闪光结晶粉状物，溶于70份冰水中，10份乙醇中，150份氯仿中，呈带强荧光的蓝光红色溶液，易溶于溶纤素，微溶于丙酮；遇浓硫酸呈黄光棕色，有强的绿色荧光，稀释后呈大红色转为蓝光红色和橙色。
其水溶液加氢氧化钠后加热，形成玫瑰红绒毛状沉淀。
主要用于造纸工业染蜡光纸、打字纸、有光纸等；与磷钨钼酸作用生成色淀，用于制造油漆、图画等颜料、也可用于腈纶、麻、蚕丝等织物以及麦秆、皮革制品的染色。
任何染料都有脂团，所以至少可以透过皮肤，所以在高浓度时毕竟会有所谓的毒性，还是要注意，至于低浓度，至少也可以透皮肤的。
玫瑰红Ｂ-现场快速检测及实验室检测方法检测原理罗丹明B具有脂溶性，被用作调味品(主要是辣椒粉和辣椒油)染色剂。
使用了被污染的调味品制作食品时会造成残留。
调味品使用罗丹明B染色时含量较高，甚至直接掺入，可进行现场检测。
食品中因其含量较低，需送实验室检测。
现场检测中使用非极性有机溶剂(例正己烷、正己烷+丙酮等)将其溶解并提取出，提取液流过中性氧化铝固相萃取小柱吸附罗丹明B，用非极性有机溶剂(例正己烷)淋洗小柱，洗脱样品油脂和食品内源性干扰物，用肉眼可观测到在小柱上出现鲜亮的粉红色条带，判定为可疑样品，该样品需送实验室作进一步确证检验。
实验室检测法仍然采用非极性有机溶剂(例正己烷、正己烷+丙酮等)将罗丹明B 从食品中溶解并提取出，提取液流过中性氧化铝固相萃取小柱吸附罗丹明B，用非极性有机溶剂(例正己烷)洗脱样品油脂和食品内源性干扰物，再用极性有机溶剂(例甲醇)将罗丹明B从小柱上洗脱并收集，用反相高效液相色谱仪-紫外/可见光检测器进行定性定量检测。
罗丹明b标记蛋白质步骤
罗丹明b标记蛋白质步骤1.引言1.1 概述罗丹明b标记蛋白质是一种常用的蛋白质标记方法，它广泛应用于生物学研究领域。
该方法通过将罗丹明b染料与目标蛋白质结合，使得蛋白质能够在荧光显微镜下被观察和检测。
罗丹明b标记蛋白质的原理是基于罗丹明b染料的荧光特性。
罗丹明b作为一种荧光物质，能够在特定条件下发出强烈的红色荧光。
当罗丹明b与目标蛋白质结合时，其荧光信号会随着蛋白质的分布而发生变化，从而可以通过观察荧光信号的强弱和分布情况来定位和研究目标蛋白质。
罗丹明b标记蛋白质的步骤主要包括样品制备、罗丹明b染色、荧光显微镜观察等。
首先，准备样品并将其固定在载玻片上。
然后，在适当的条件下，将罗丹明b染料添加到样品中，并进行染色反应。
随后，通过荧光显微镜观察和拍摄样品中罗丹明b的荧光信号。
最后，根据观察结果分析并解释蛋白质的分布和功能。
罗丹明b标记蛋白质具有许多优点，如灵敏度高、操作简便、成本较低等，因此被广泛应用于细胞生物学、蛋白质定位和功能研究等领域。
此外，随着技术的不断发展和改进，罗丹明b标记蛋白质的应用前景也在不断扩大，未来有望在疾病诊断和治疗等方面发挥更大的作用。
综上所述，罗丹明b标记蛋白质是一种有效的蛋白质标记方法，通过其特殊的荧光性质，可以实现对目标蛋白质的定位和研究。
该方法具有许多优点，并且在各个生物学研究领域有着广泛的应用前景。
1.2文章结构文章结构部分内容如下：文章结构本文将按照以下步骤进行描述和分析罗丹明b标记蛋白质的过程。
首先，引言部分将对整篇文章进行概述，并介绍文章的目的。
接下来，正文部分将分两个小节进行阐述。
第一个小节将详细介绍罗丹明b标记蛋白质的原理和作用，包括其在蛋白质研究领域中的重要性和应用价值。
第二个小节将详细描述罗丹明b标记蛋白质的步骤，包括实验的准备工作、样品的处理过程、实验操作步骤等。
最后，在结论部分，将对实验结果进行总结，并展望罗丹明b标记蛋白质在未来的应用前景。
通过以上结构安排，本文将全面而系统地介绍罗丹明b标记蛋白质的步骤，以期能够提供给读者一个清晰的了解。
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罗丹明B最新检测方法
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罗丹明B检测套装：
固相萃取柱：HiCapt罗丹明B专用柱(500mg/6mL，订货号：25-05006)
液相色谱柱：Hisep C18-T 150 mm×4.6 mm i.d., 5 μm（订货号：0246150）
罗丹明B又称玫瑰红B,是一种具有鲜桃红色的人工合成的染料。
曾经用作食品添加剂，但后来实验证明罗丹明B会致癌，现在已不允许用作食品染色。
然而, 仍有不少食品生产企业将其作为食用色素。
因此，建立快速可靠的检测方法非常重要。
维泰克科技成功开发了罗丹明B专用SPE柱，建立了罗丹明B的快速检测方法和实验室液相色谱检测方法，该方法快速、简单、溶剂用量少，回收率稳定重现，克服了传统方法中氧化铝固相萃取柱活性不易控制，方法回收率难以保证等缺陷。
方法的优势：
∙专利创新的罗丹明B专用萃取填料，有效去除食品中的天然色素和植物油等杂质干扰
∙回收率稳定、重现，克服了传统方法中氧化铝活性不稳定的缺陷
∙方法简单、快速、节省溶剂
现场快速检测
1. 样品提取：
1.1 辣椒粉取辣椒粉一小勺（约1g）放入10mL离心管中，加入6mL提取液（乙酸乙酯/环己烷（1:1，v/v）），涡混1分钟，静置，待上层液较为清澈，取上清液3mL，准备过SPE柱。
1.2 辣椒油取辣椒油一小勺（约0.5g）放入5 mL离心管中，加入3mL提取液（乙酸乙酯/环己烷（1:1，v/v）），涡混1分钟，准备过SPE柱。
2. 过固相萃取（SPE）柱：HiCapt 罗丹明B专用SPE柱（500mg/6mL）
将1.1或1.2中准备的样品慢慢倒入小柱中，然后取3mL甲醇慢慢倒入小柱，含罗丹明B的样品在柱上部会出现红色条带，在紫外灯照射下为颜色明亮的桃红色荧光色带，条带边缘清晰，粉红色随含量的增加而加深和加宽，不含或者含量极低（低于0.1μg/g，罗丹明B的着色下限）的罗丹明B的样品，提取液不会出现粉红色条带。
发现罗丹明B的阳性样品需进行液相色谱实验确证。
液相色谱检测方法
1 实验部分
1.1 液相色谱条件
色谱柱：HiSep C18 （4.6mm X 15cm，5μm）
流动相：甲醇/20 mM甲酸铵溶液(用甲酸调pH 2.5)=7/3(v/v)
流速：1 mL/min 进样量：20 μL
检测器: 紫外UV/VIS）检测器检测器波长：550nm
1.2 标准溶液的配制
称取50 mg 罗丹明B于50 mL棕色容量瓶，用甲醇定容，即为1 mg/mL。
接着取母液500 μL于50mL 棕色容量瓶，用提取液（乙酸乙酯/环己烷（1:1，v/v））稀释到50 mL，即为10 μg/mL，作为储备液于4 ℃避光保存，且每周重新配制。
每天所用的溶液是将储备液稀释为0.2-5 μg/mL。
1.3 样品前处理
1.3.1样品提取：
1.3.1.1 辣椒粉取辣椒粉1.0 g，放入10 mL离心管中，加入6mL的提取液（乙酸乙酯/环己烷（1:1，v/v）），涡混1分钟，超声10分钟，接着10000 r/min离心5分钟，取上清液3 mL，准备过SPE柱。
1.3.1.2 辣椒油取辣椒油0.5 g，放入5mL离心管中，加入3mL的提取液（乙酸乙酯/环己烷（1:1，v/v）），涡混1分钟，准备过SPE柱。
1.3.1.3 腊肠、果脯等食品将食品切成小丁，再称取1.0 g, 放入10 mL离心管中，然后步骤同
2.
3.1.1。
1.3.2固相萃取柱净化：HiCapt罗丹明B专用柱(500mg/6mL)
（1）活化：在HiCapt罗丹明B专用柱中依次加入2 mL提取液（乙酸乙酯/环己烷（1:1，v/v））活化。
（2）萃取：将待净化液加入柱中，再用200μL提取液（乙酸乙酯/环己烷（1:1））淋洗样品管，一并加入SPE柱中，让其自然地流过萃取柱。
流出液弃去。
（3）清洗：待上样液完全流出后，用3 mL甲醇淋洗，淋洗液弃去。
（4）解吸：3 mL 5%氨水的甲醇溶液解吸，用5mL的小样品管收集解吸液。
（5）吹干及定容：解吸液50℃氮气吹干，加入200 μL流动相溶解并定容。
2 结果与讨论
2.1 标准曲线与检出限
将10 μg/mL的罗丹明B储备液用流动相逐级稀释，配制1、0.5、0.2、0.1、0.05μg/mL标准溶液，制作标准曲线。
由表1可见，罗丹明B的线性关系良好，相关系数的平方为0.99999。
以性噪比的3倍和10倍分别计算检出限（LOD）和定量限(LOQ),分别为16 ng/g和53 ng/g。
* y = a x + b, y = peak area, x = mass concentration [μg/mL]
2.2 回收率和精密度
分别加入低、中、高3种质量浓度的罗丹明B标准溶液于辣椒油样品中，然后按照本实验方法进行测定，回收率为84.14%-88.23%（见表2）。
图1为添加罗丹明B的辣椒油样品的色谱图。
从该图可以看出，没有杂质干扰。
且该方法具有较好的日内及日间精密度（见表2），其标准偏差分别小于4.73%和3.47%。
图1.经固相萃取净化后的加标辣椒油的色谱图
(a.空白辣椒油；b.辣椒油中添加0.02 μg/g 罗丹明B；c.辣椒油中添加0.1μg/g罗丹明B；d.辣椒油中添加0.5μg/g罗丹明B)
2.3实际样品分析
按本方法测定不同来源的辣椒粉、辣椒油、香肠、果脯、甜辣酱等共17件。
其中从b辣椒粉中检出罗丹明（图2），经LC-MS/MS检测，确证为阳性。