利用SCAR标记鉴定‘陇椒5号’辣椒种子的纯度

差 的缺 陷 ， 又具 有简 单 、 实用 、 本 低 的优 点 ． 成 ］ 本 试验 选用 ‘ 陇椒 ５号 ’ 交一 代种及 其 亲本 为 杂 材料 ， 通过 ＲＡＰ Ｄ和 Ｂ Ａ 法 ｌ 相结 合 ， 立 ‘ Ｓ ５ 建 陇椒 ５ 号 ’ 椒种 子 纯 度 的 Ｓ ＡＲ标 记 检 测 体 系 ， 进 一 辣 Ｃ 并 步 以‘ 陇椒 ５号 ’ 椒 单株 为试 材 进 行 验 证 ， 辣 旨在 为
ｎ Ｉ 引 物 ｌ Ｌ Ｔ ｑ酶 ０ ４Ｕ，０ｎ ｇ・ ，ａ ． ５ ｇ模 版 １ Ｉ ，
ｄ Ｈ。 补足 ． ＡＰ 反应 扩 增 程 序为 ： ５℃预 变 ｄ Ｏ ］Ｒ Ｄ ９
性 ３ｍｉ ，４。 性 ２ ， １。 性 ４ ，２℃延 伸 ｎ ９ Ｃ变 ０ｓ４ Ｃ复 ０Ｓ７
Ｒ Ｄ 扩 增 体 系 ， 足 部 分 由 ｄ Ｈ。 补 齐 ． 增 程 ＡＰ 不 ｄ Ｏ 扩 序 为 ：５℃ 预 变 性 ５ｍｉ；５ ℃变 性 ３ ；０℃退 火 ９ ｎ９ ０Ｓ ６
图 ２ 引物 Ｒ ２ ５ ０和 Ｒ ８ ７ ０的 电泳 结 果
Ｆｉ ２ Ｅｌ ｃ ｇ． ｅ ”ｏｐ ｏｒ ｓｓ ｒ ｓ ｔ ｒｍ ｅ ｈ ｅ ｉ ｅ ｕｌｓｏｆｐ ｉ ｒ
以‘ 陇椒 ５号 ’ 辣椒 及 其父 、 本筛 选 Ｐ Ｄ 多 母 ＡＰ
态 性 引 物 ， 是 在 父 、 本 中能 扩 增 出 特 异 片 段 的 引 凡 母
图 ｌ ＲＡＰ 扩 增 电 泳 结 果 Ｄ
Ｆｉ Ｅ１ｃ ｒ ｈｏ ｅ ｉ ｅ ｕ ｔ ｇ．１ ｅ ｔｏｐ ｒ ｓｓｒ ｓ ｌｓｏｆＲＡ ＰＤ
‘ ｏ ｇｉｏＮｏ ５ ｙＳ Ｌ ｎ ｊ ． ’ｂ ＣＡＲ ａ
ＣＨＥＮ ｎ — ｈ 。 Ｌｉ ｇ ｚ ｉ 。 ＺＨＡＮＧ ｉｎ ｎ ｎ ， ＡＮＧ ｎ ｌ ｎ ， ＥＩＢ ｎ — ｉ ｎ 。 ＇ Ｊａ — ｏ ｇ Ｗ Ｌａ ａ 。 Ｗ ｉ ｇ ｑ ａ ｇ
（１ Ｃｏｌ ｇ ． ｌｅ ｅ ｏｆＡｇｒ ｏｍ ｙ， ａ ｕ Ａ ｇｒｃ ｔ ａｌＵ ｎｉｅ ｓｔ Ｌａ ｚ ｏｕ ７ ００７ Ｃｈ ｎ ２ ｎ ｔｔ ｅ ｏｆ ｏｎ Ｇ ｎｓ ｉｕｌｕｒ ｖ ｒ ｉｙ， ｎ ｈ ３ ０， ｉ ａ； ．Ｉ ｓ ｉｕｔ
辣 椒 杂 交 种 提 供 一 套 简 便 有 效 的 室 内种 子 纯 度 鉴 定
种植 和 国内种业 市 场 的 日趋 成 熟 ， 杂 交 种子 纯 度 其 的快 速检测 显得 越 来 越重 要 ． 统 的种 子 鉴定 主要 传 采用 种子形 态学 鉴定 、 苗特征 鉴定 等 ， 受环 境 因 幼 易
（． 肃农业大学农学院 ， １甘 甘肃 兰 州 ７ ０ ７ ； ． 肃 省 农 业 科 学 院 蔬 菜 研 究 所 ， 肃 兰 州 ７ ０ ７ ） ３００２甘 甘 ３ ０ ０
ｊ 、
摘 要 ： ‘ 椒 ５号 ， 椒 及 其 父 、 本 为 试 材 ， 取 基 因组 ＤＮ ， ｒ Ｃ Ｒ 标 记 鉴 定 其 种 子 纯 度 ． 果 表 明 以 陇 辣 母 提 Ａ， ， Ｓ Ａ Ｉ ａ 结 从 辣 椒 多 态 性 丰 富 的 １ ０条 引 物 中 筛 选 获 得 １条 可 用 于 鉴 别 母 本 和 Ｆ 的 引 物 Ｒ ２ ， 条 可 用 于 鉴 别 父 本 和 Ｆ ５ Ｇ５ ０ １ 的 引 物 Ｒ ８ ； Ｒ ５ ０进 行 克 隆 、 序 ， 计 出 １对 Ｓ ＡＲ引 物 ， 特异 鉴别 Ｆ Ｇ７ ０ 将 Ｇ ２ 测 设 Ｃ 能 和母 本 ． 关键词 ： 椒 ；Ｃ 辣 Ｓ ＡＲ标 记 ； 度 鉴 定 纯
Ｖｅ ｅａ ｌｓ ｇ ｔ ｂ ｅ ．Ｇａ ｓ ａ ｅ ｆＡｇ ｉｕ ｔ ｒ ｌＳ ｉｎ ｅ ，Ｌａ ｚ ｏ ３ ０ ０，Ｃｈ ｎ ） ｎ ｕ Ａｃ ｄ ｍｙ ｏ ｒｃ ｌｕ ａ ｃｅ ｃ ｓ ｎｈ ｕ７ ０ ７ ｉａ
Ａｂ ｔａ ｔ Ｇｅ ｅｉ ｐ ｒｔ ｆｐ ｐ ｅ ｆ‘ ｎ ｊａ ． ｓｒ ｃ ： ｎ ｔｃ ｕ ｉｙ ｏ ｅ ｐ ｒｏ Ｌｏ ｇ ｏ Ｎｏ ５’ｗａ ｄ ｎ ｉ ｅ ｙ ＤＮＡ ｘ ｒ ｃｉｎ ａ ｄ Ｓ ｉ ｓ ｉｅ ｔｆ ｄ ｂ ｉ ｅ ｔａ ｔ ｎ ＣＡＲ ｏ
ｐａ ｅ ｒ ｍ ｂ ｉ ｒ ｎｔｆ ｏ Ｆ１ｈｙ ｒｄ．
Ｋｅ ｒ ｓ： ｅ ｐｅ ；ＳＣＡ Ｒ ａ ｋｅ ｙ ｗｏ ｄ ｐ ｐ ｒ ｍ ｒ ｒ；ｐｕ ｉｙ ｉ ｅ ｔｆｃ ｔｏｎ ｒｔ ｄ ｎ ｉｉａ ｉ
‘ 陇椒 ５ ’ 号 是甘 肃省 乃至 整个 西北地 区保 护地
及 露 地 辣 椒 种 植 的 主 栽 品 种 ｌ ． 着 该 品 种 的 广 泛 】 随 ］
Ｓ ＡＲ引 物 的 特 异 性 ． Ｃ — Ｃ 扩 增 体 系 为 ２ Ｃ Ｓ ＡＲ Ｐ Ｒ ５
Ｆ ｌ的 Ｒ Ｄ扩 增 产 物 ； ， ＡＰ １ ４为 Ｆ ； ， １ ２ ５为 父 本 ； ， ３ ６为母 本
Ｉ 除 引 物 分 上 、 游 各 加 １ Ｌ外 ， 余 用 量 同 ， 下 其
软 件 设 计 Ｓ ＡＲ 引 物 ， 天 根 生 化 科 技 有 限 公 司 合 Ｃ 由
成 引物 ． １５ Ｓ ． ＣＡＲ 标 记 鉴 别 ‘ 椒 ５号 ’ 品种 纯 度 陇 的
以 ‘ 椒 ５号 ’ 椒 ５ 陇 辣 Ｏ个 单 株 及 其 母 本 验 证
注 ： ～３为 Ｒ ２ １ ５来自百度文库０对 亲 本 及 Ｆ 的 产 物 ； ～６为 Ｒ ８ ｌ ４ ７ ０对 亲 本及
增 效率 较高 ， 但很 多 引物 的多 态性 不明显 （ １ ． 图 ）
２ ２ Ｒ Ｐ 引 物 的 稳 定 性 和 多 态 性 筛 选 ． Ａ Ｄ 本 试 验 中 ， 筛 选 出 了 ２条 特 异 Ｒ Ｄ 引 物 共 ＡＰ Ｒ５ ０和 Ｒ ８ （ ２ ， 过 扩 增 程 序 反 复 验 证 ２ ２ ７Ｏ 图 ）通 ０次
Ｍ ｌ ２ ３ ４ ５ ６
物 都 可用于 品种纯度 鉴定 ， 共筛 选 ｌ Ｏ条 引物． ５ １４ 特异片 段 的回收 、 ． 克隆和 测序
用 凝 胶 回 收 试 剂 盒 回 收 目 的 片 段 ， 过 与 经
Ｐ ＧＭ— Ｔ载体 的连接 、 转化 及菌落 的 Ｐ Ｒ鉴定后 ， Ｃ 送 天根生 化科 技 有 限公 司进 行测 序． 用 Ｐ ｉ ｒ５ ０ 利 ｒ ｍｅ ．
基金 项 目 ： 肃 省 自然科 学 基 金 （Ｚ ０ １Ａ２ —４ ） 甘 ３ Ｓ ４－ ５０ ２ ．
收 稿 日期 ： Ｏ ００ １ 修 回 日期 ： Ｏ ０ ０ ６ ２ １ ５１ ； ２ １ ９０
甘 肃 农 业 大 学 学 报
种及 其亲 本材 料 ；０ ８年 ６月 ， 杂 交种 及 其 亲 本 ２０ 当
中 图分 类 号 ： ４ ． Ｓ６ １３ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：１ ０ ３ ５ ２ １ ） １０ ５ — ３ ０ ３４ １ （ ０ １ ０ —０ ５０
Ｉ ｅ ｔｆｃ ｔｏ ｆｇｅ ｅ ｉ ｒｔ ｆｐ ｐ ｅ ｆ ｄ ｎ ｉｉａ ｉ ｎ ｏ ｎ ｔｃ ｐｕ ｉｙ ｏ ｅ ｐ ｒ ｏ
供 试 材 料 ‘ 椒 ５号 ’ 椒 及 其 亲 本 由 甘 肃 省 农 陇 辣 业 科 学 院 辣 椒 研 究 组 提 供 ． ０ ８年 ２月 ， 种 杂 交 ２０ 播
高到 ５～ ６ Ｏ Ｏ℃ ， 克 服 了 Ｒ Ｄ 不 稳 定 和 重 复 性 既 ＡＰ
作者 简 介 ： 灵 芝 （ ９ １） 女 ， 研 究 员 ， 陈 １７ － ， 副 主要 从 事 辣 椒 育 种 及 栽 培 工 作 ． Ｅｍａ ： ｓ ｈｚ ３ ＠ ｓ ａ ｃ ｒ ｉ ｇ ｃ ｌｈ ８ ｉ ． ｏ ｌ ｎ ｎ
２１ Ｏ １年 ２月
甘
肃
农
业
大
学
学
报
第 ４ ６卷
双 月 刊
第 １期 ５ ～ ５ ５ ７
Ｊ ＯＵＲＮＡＩ ＯＦ ＧＡＮＳ ＡＧＲＩ Ｕ ＣＵＩＴＵＲＡＩ ＵＮＩ ＶＥＲＳ ＴＹ Ｉ
利 用 Ｓ ＡＲ标 记 鉴 定 ‘ Ｃ 陇椒 ５号 ， 椒 种 子 的纯度 辣
陈灵 芝 张建 农 王 兰 兰 ， 兵 强。 ～， ， 魏
ｗ ｉｈ ｔ ｉ ｕ ｖ ｒａ ｔ ａ ｅ ｓ ａ ａ ｅ ｉ ｌ．Ｔｈｅ ｒ ｓ ｔ ｈｏ ｅ ｈａ ｈｅ ｐｒｍ ｅ ｓ ｏｆＲ Ｇ５ ｎ ｔ ｈ ｓ ｃ ｈｉ ａ ｎｄ ｉｓ ｐ ｒ ｎｔ ｓ ｍ ｔ ｒａ ｓ ｅ ｕｌｓ ｓ ｗ ｄ ｔ ｔｔ ｉ ｒ ２０ ａ ｄ ＲＧ ７ ０ ８ ｃ ｕｌ ｅ ｏ ｅ ｒ ｔｎ ｅ ａ ｅ ａ ａ ｅｐａ ｅ ｒ ｏ ｄ ｂｅｕｓ ｄ ｆ ｒｓ ｐａ ａ ｉ ｇ ｆ ｍ ｌ ｎｄ ｍ ｌ ｒ ｎｔｆｏｍ ｙｂ ｉ ｒ ｍ ５ ｒ ｔ ｒ ｌｇ ｎｕｃ ｏｔｄｅ ｐ ｉ — Ｆｌｈ ｒｄ ｆ ｏ １ ０ ａ ｂｉａ ｙ ｏ ｉ ｏ ｈｅ ｉ ｒｍ ｅ ｓ Ｔｈ ａ ｄ ｏ ｒ． ｅ ｂ ｎ ｆＲＧ ５ ０ ｗ ａ ｌ ｎｅ ｎ ｅ ｅ ｃ ｄ ｔ ｅ ｉ ｎｅ ｓ ａ Ｓ ２ ｓｃ ｏ ｄ ａ ｄ ｓ ｑｕ ｎ ｅ ｏ ｂｅ ｄ ｓｇ ｄ ａ ＣＡ Ｒ ａ ｋｅ ｏｒｓ ｐａ ａ ｉ ｅ ａ ｅ ｍ ｒ ｒｆ ｅ ｒ ｔｎｇ ｆ ｍ ｌ
素 的影 响 ， 果 不 够 准 确 ； 问 种 植 鉴 定 周 期 太 长 ， 结 田 费 时 费 力 ， 利 于 种 子 及 时 销 售 ｊ 利 用 ＲＡＰ 技 不 ． Ｄ
体系， 为辣椒 新 品种 的推广 提供 一定 的技 术保 障．
术进行 种子 纯度 鉴定 ， 由于方 法简 单 、 捷 、 快 可靠 ， 已
ＰＣＲ ｆｅ ． ｂｕ ｆ ｒ２ ５ ｕＬ ， ． ｍ ｏ ２ ５ｍ ｌ・Ｌ ｄＮ ＴＰ ｕ ， ０ ２ Ｌ ５
左右， 扩增 图谱 差异 很少 ， 明引物 的可靠性 和稳 定 说 性较 好 （ ３ ． ５ Ｏ为父 本 和 Ｆ 特 有 的标 记 ， 图 ）Ｒ ２ 此标
记 可 特 异 鉴 别 母 本 和 Ｆ ． ７ ０为 母 本 和 Ｆ ．Ｒ ８ 特 有 的 Ｒ Ｄ标 记 ， 标 记 可 特 异 鉴 别 父 本 和 Ｆ ． ＡＰ 此
材料 在 田间能观 察 到材 料 本 身 的特 征 特性 时 ， 摘 采
植 株 茎 端 嫩 叶 提 取 ＤＮＡ．
１ ２ ＤＮＡ 提 取 及 ＲＡＰ 反 应 体 系建 立 ． Ｄ
辣椒基 因组 Ｄ ＮＡ 的提 取 采用 北 京 天根 生物 公
司 的植 物 基 因 组 快 速 提 取 试 剂 盒 ； ＲＡＰ 引 物 购 自 Ｄ 天 根 生 物 公 司 和 上 海 生 工 生 物 工 程 技 术 服 务 有 限 公 司． Ｐ —Ｃ ＲＡ Ｄ Ｐ Ｒ体 系 （５ Ｉ） 包 括 ２ ２ ： ０ｍｍｏ ・Ｌ ｌ 一
广泛应 用于 西瓜 、 瓜种 子 的纯度 鉴定 ｌ． Ｒ Ｄ 甜 ３ 但 ＡＰ ｊ
１ 材 料 与 方 法
１ １ 试 验 材 料 ．
方 法 的稳 定性 和重 复性 尚有 不 足 ， Ｓ ＡＲ标 记 的 而 Ｃ
引 物 比 ＲＡＰＤ 引 物 多 十 几 个 碱 基 ， 且 退 火 温 度 提 而
８ ，０个循 环 ， 后 １个循环 再延 伸 ３ｍｉ ， Ｃ保 ０Ｓ４ 最 ｎ ４。 存 备用 ． ］
１３ Ｒ Ｐ 引 物 多 态 性 筛 选 ． Ａ Ｄ
注 ： ～１ １ ２为 亲 本 及 Ｆ １的 Ｒ Ｄ扩 增 结 果 ；４ ５为 不 同 ＡＰ １ ～２ 物对亲本及 Ｆ 的 ＲＡＰ Ｄ扩 增 结 果．