革兰染色法 、细菌的特殊染色法 PPT课件
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微生物学实验细菌的简单染色和革兰氏染色(共7张PPT)
微生物学实验细菌的简单染色和革兰氏染色
二、实验原理
1、细菌的简染色原理
①细菌菌体微小而透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须通过染色来增加菌体的显示力， 从而更清楚地观察到其形态和结构。 ②在碱性、中性或弱酸性溶液中，细菌菌体通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染 色局部带正电荷〔酸性染料的染色局部带负电荷〕，因此，碱性染料很容易与菌体结合而是菌 体着色。
2、细菌革兰氏染色的原理
G+菌和G-菌的细胞壁结构和组成有较大的区别。 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小， 通透性降低，结晶紫-碘复合物被滞留在细胞内，因此细菌仍保存初染时的颜色，经番红复染后呈蓝紫 色。 G-菌细胞壁的外膜层富含类脂，而且其肽聚糖层次薄、交联度低；乙醇脱色时，细胞壁因类脂被 溶解而出现较大缝隙，使得菌体内的结晶紫-碘复合物较易渗出，而使菌体变成无色，再经番红 复染就成为红色。
〔 〔涂使混乙。乙。3直倾结右右G在 倾直5菌〔染倾G在②荷先结〔将①②荷右直将先将乙。2〔 m 〔 〔 水 〔〔、、++菌匀醇醇至去晶区区细去至体1色去细在〕用晶三玻细在〕区至染用玻醇三2、菌菌片〕固 水2415洗3i体 并 脱 脱 流 染 紫 — — 胞染 流 尚 时 染 胞 碱 ， 低 紫 区 片 菌 碱 ， — 流 好 低 片 脱细细〕n区定 洗涂〕染〕〕〕不固涂色色下液、——内 液下未间液内性因倍、：置菌性因—下的倍置色〕胞胞。；： ：片：枯定成时时的，碘大大， ，的成1，，、此镜碘左于体、此大的涂镜于时媒色复壁壁易初枯用 倒—-脱2于薄，，水用液肠肠因 用水熟用因中，找液区玻微中，肠水片找玻，倾左中中染m燥夹 去—染过载膜细细为洗、杆杆此 洗为或洗此性碱到、片小性碱杆为放到片细—染燥i肽肽色n子 染“去区。三玻〔胞胞无瓶菌菌细 瓶无菌瓶细或性视架而或性菌无空视架胞99—。及。聚聚厚夹 液55。及区片注壁壁色自区区菌 自色体自菌弱染野上透弱染区色气野上壁苏。%%—加染糖糖住 ，固滴〞，上：因因为载〕〕仍 载为过载仍酸料后，明酸料〕为中后，因云酒酒将 镜层层—载用卢将液涂。涂类类止玻。。保玻止老玻保性很，加，性很。止晾，加类金精精定加厚厚否玻 洗玻 检片苏片脂脂。片存 片。，片存溶容再适在溶容。干再适脂芽、、戈玻且且，片 瓶蕃。法那不被被的初 的可的初液易换量普液易或换量被孢沙沙交交云片 。氏一 自。易溶溶一染 一能一染中与油〔通中与者油〔溶杆黄黄片用红联联步么端 载金碘置 将过解解端时 端使端时，菌镜以光，菌用镜以解菌或或度度， 玻洗倾复造厚而而轻的 轻染轻的细体观覆学细体吸观覆而区骤蕃蕃芽液高高于 染迅 片〕出出轻颜 轻色轻颜菌结察盖显菌结水察盖出；红红瓶染斜，，成速 的同孢一。现现冲色 冲结冲色菌合菌微菌合纸菌现玻 好，，类类通 一自2局较较洗， 洗果洗，体而膜镜体而吸膜较，杆简滴并并脂脂过 端片 的m大大，经 ，呈，经通是为下通是干为大判判载质质部菌火 轻，连单缝缝直番 直现直番常菌度不常菌。度缝断 断架 涂含含i焰 轻区菌玻n染隙隙至红 至相至红带体〕易带体〕隙菌菌染续量量冲2上片，，流复 流反流复负着结识负着结，后～；体体少少色体片洗色使使下染 下的下染电色晶别电色晶使滴3的的，，，放，〔次中1脱得得的后 的结的后荷。紫，荷。紫得的革革经经法切加，菌菌水呈 水果水呈，染必，染菌立加空央兰兰脱脱m 色勿一体体为蓝 为。为蓝而液须而液体。氏氏色色9即区将适气i不内内无紫 无无紫碱染通碱染内端染染n剂剂5菌—的的色色 色色色性色过性色的水量中色色，处处完膜% 轻结结。。 。。。染染染结11反反理理—洗冲～～水〔晾全晶晶料色料晶响响后后轻掉22两乙紫紫在来在紫至洗性性反反以干mm，〕冲电增电---种ii。。碘碘碘而而nn醇流，。而覆或离加离；；复复复使使洗菌时菌时出脱合合合肽肽使盖者，体，的，物物物聚聚液色G其的其菌用较较较糖糖混直分显分无-易易易层层2膜吸菌合子示子至渗渗渗的的色0的力的呈为水区出出出孔孔～流染，染。，，，径径；现度纸色从色而 而 而缩缩下2局 而 局右革使使使小小〕吸5部更部的菌菌菌，，区兰s带清带结干体体体通通水至—正楚正氏变变变透透晶。电地电为成成成性性—流阳荷观荷紫先无无无降降大无〔察〔出性色色色低低染用酸到酸肠，，，，，色结液性其性再再再液低结结杆。染形染果经经经晶晶无染倍料态料菌番番番紫紫。的和的色红红红--区色镜碘碘染结染复复复复复〕，色构色找1染染染合合局。局～。就就就立到物物部部成成成被被2带带即视为为为滞滞负负红红红留留电电色色色 野脱后色时，间再对换革油兰镜氏观染察色结，果并的判影断响菌：体脱的色时革间兰过氏短染，色G反-菌响转性呈。革兰氏阳性结果；如果脱色时间过
二、实验原理
1、细菌的简染色原理
①细菌菌体微小而透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须通过染色来增加菌体的显示力， 从而更清楚地观察到其形态和结构。 ②在碱性、中性或弱酸性溶液中，细菌菌体通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染 色局部带正电荷〔酸性染料的染色局部带负电荷〕，因此，碱性染料很容易与菌体结合而是菌 体着色。
2、细菌革兰氏染色的原理
G+菌和G-菌的细胞壁结构和组成有较大的区别。 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小， 通透性降低，结晶紫-碘复合物被滞留在细胞内，因此细菌仍保存初染时的颜色，经番红复染后呈蓝紫 色。 G-菌细胞壁的外膜层富含类脂，而且其肽聚糖层次薄、交联度低；乙醇脱色时，细胞壁因类脂被 溶解而出现较大缝隙，使得菌体内的结晶紫-碘复合物较易渗出，而使菌体变成无色，再经番红 复染就成为红色。
〔 〔涂使混乙。乙。3直倾结右右G在 倾直5菌〔染倾G在②荷先结〔将①②荷右直将先将乙。2〔 m 〔 〔 水 〔〔、、++菌匀醇醇至去晶区区细去至体1色去细在〕用晶三玻细在〕区至染用玻醇三2、菌菌片〕固 水2415洗3i体 并 脱 脱 流 染 紫 — — 胞染 流 尚 时 染 胞 碱 ， 低 紫 区 片 菌 碱 ， — 流 好 低 片 脱细细〕n区定 洗涂〕染〕〕〕不固涂色色下液、——内 液下未间液内性因倍、：置菌性因—下的倍置色〕胞胞。；： ：片：枯定成时时的，碘大大， ，的成1，，、此镜碘左于体、此大的涂镜于时媒色复壁壁易初枯用 倒—-脱2于薄，，水用液肠肠因 用水熟用因中，找液区玻微中，肠水片找玻，倾左中中染m燥夹 去—染过载膜细细为洗、杆杆此 洗为或洗此性碱到、片小性碱杆为放到片细—染燥i肽肽色n子 染“去区。三玻〔胞胞无瓶菌菌细 瓶无菌瓶细或性视架而或性菌无空视架胞99—。及。聚聚厚夹 液55。及区片注壁壁色自区区菌 自色体自菌弱染野上透弱染区色气野上壁苏。%%—加染糖糖住 ，固滴〞，上：因因为载〕〕仍 载为过载仍酸料后，明酸料〕为中后，因云酒酒将 镜层层—载用卢将液涂。涂类类止玻。。保玻止老玻保性很，加，性很。止晾，加类金精精定加厚厚否玻 洗玻 检片苏片脂脂。片存 片。，片存溶容再适在溶容。干再适脂芽、、戈玻且且，片 瓶蕃。法那不被被的初 的可的初液易换量普液易或换量被孢沙沙交交云片 。氏一 自。易溶溶一染 一能一染中与油〔通中与者油〔溶杆黄黄片用红联联步么端 载金碘置 将过解解端时 端使端时，菌镜以光，菌用镜以解菌或或度度， 玻洗倾复造厚而而轻的 轻染轻的细体观覆学细体吸观覆而区骤蕃蕃芽液高高于 染迅 片〕出出轻颜 轻色轻颜菌结察盖显菌结水察盖出；红红瓶染斜，，成速 的同孢一。现现冲色 冲结冲色菌合菌微菌合纸菌现玻 好，，类类通 一自2局较较洗， 洗果洗，体而膜镜体而吸膜较，杆简滴并并脂脂过 端片 的m大大，经 ，呈，经通是为下通是干为大判判载质质部菌火 轻，连单缝缝直番 直现直番常菌度不常菌。度缝断 断架 涂含含i焰 轻区菌玻n染隙隙至红 至相至红带体〕易带体〕隙菌菌染续量量冲2上片，，流复 流反流复负着结识负着结，后～；体体少少色体片洗色使使下染 下的下染电色晶别电色晶使滴3的的，，，放，〔次中1脱得得的后 的结的后荷。紫，荷。紫得的革革经经法切加，菌菌水呈 水果水呈，染必，染菌立加空央兰兰脱脱m 色勿一体体为蓝 为。为蓝而液须而液体。氏氏色色9即区将适气i不内内无紫 无无紫碱染通碱染内端染染n剂剂5菌—的的色色 色色色性色过性色的水量中色色，处处完膜% 轻结结。。 。。。染染染结11反反理理—洗冲～～水〔晾全晶晶料色料晶响响后后轻掉22两乙紫紫在来在紫至洗性性反反以干mm，〕冲电增电---种ii。。碘碘碘而而nn醇流，。而覆或离加离；；复复复使使洗菌时菌时出脱合合合肽肽使盖者，体，的，物物物聚聚液色G其的其菌用较较较糖糖混直分显分无-易易易层层2膜吸菌合子示子至渗渗渗的的色0的力的呈为水区出出出孔孔～流染，染。，，，径径；现度纸色从色而 而 而缩缩下2局 而 局右革使使使小小〕吸5部更部的菌菌菌，，区兰s带清带结干体体体通通水至—正楚正氏变变变透透晶。电地电为成成成性性—流阳荷观荷紫先无无无降降大无〔察〔出性色色色低低染用酸到酸肠，，，，，色结液性其性再再再液低结结杆。染形染果经经经晶晶无染倍料态料菌番番番紫紫。的和的色红红红--区色镜碘碘染结染复复复复复〕，色构色找1染染染合合局。局～。就就就立到物物部部成成成被被2带带即视为为为滞滞负负红红红留留电电色色色 野脱后色时，间再对换革油兰镜氏观染察色结，果并的判影断响菌：体脱的色时革间兰过氏短染，色G反-菌响转性呈。革兰氏阳性结果；如果脱色时间过
实验一_革兰染色法、细菌的特殊染色法
实验结果
其它项目
预习酵母菌和霉菌的形态观察
讨论
革兰染色法中关键步骤是哪一步？为什么？ 为什么芽孢和菌体会被染成不同的颜色？
方法与步骤
1.革兰染色法
革兰染色法的简介
4年创立。鉴别不同类型 细菌的染色方法。 细菌分为两大类：一类被染成紫色， 称为革兰阳性细菌，另一类被染成红 色，称为革兰阴性细菌。染色的结果 主要与细胞壁结构和化学组成有关。
方法与步骤
涂片 干燥 固定 初染（结晶紫1分钟） 水洗 媒染（碘液1分钟内换2-3次） 水洗 脱色（95%乙醇20-30秒） 水洗 复染（番红花红5分钟） 水洗 吸水纸吸干 镜检
实验结果
方法与步骤
2.芽孢染色法
芽孢染色法原理
芽孢：圆形或椭圆形、厚壁、核心含水量极 低、抗逆性极强的休眠体。 染色特性：芽孢壁厚，透性低、不易着色。 一旦着色，又难以被水洗脱。 解决办法：采用着色力强的孔雀绿染色。水 洗脱色，再用对比度大的复染剂染色。
实验步骤
芽孢染色法 涂片 干燥 固定 初染（孔雀绿20 分钟） 水洗 复染（番红花红5分钟） 水洗 吸水纸吸干 镜检
演示1：接种环的灭菌
演示2：涂片 干燥 固定
实验原理
1.革兰染色法的原理 G-肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂质。 故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了类脂质，增加了 细胞的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易 于渗出，经沙黄复染呈红色。 G＋细胞壁肽聚糖层厚，交联度高，脂类含量少。 用脱色剂处理后，肽聚糖层孔径缩小，通透性降 低，故细菌仍保留初染时的紫色。
18-20h斜面
大肠埃希菌Escherichia coli 18-20h斜面 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 20-24h斜面
革兰染色法 ppt课件
P3
PPT课件
9
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注意事项
1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。 如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌。 如果脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响， 难以严格界定。
2. 染色过程中勿使染色液稀释。用水冲洗后，应吸去玻片上的 残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。
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研究细菌的致病性
• 革兰阳性菌可产生外毒素使人致病。 • 革兰阴性菌主要以内毒素使人致病。（ LPS作为G-菌内毒
素致病 ）
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细菌的特殊结构形态观察
实验步骤 • 观看鞭毛、荚膜、芽孢的示范片 • 绘图、写实验报告
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18
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细菌的特殊结构
芽胞(nuclear material ornucleoid)
• 复染法（鉴别染色）:采用两种或两种以上的不同 染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细 菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便鉴别 细菌。
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3
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革兰染色法
• 该染色法是丹麦细菌学家革兰于1884年创建的, 至今仍广泛应用用于细菌分类和鉴别
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4
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革兰染色法的原理
★渗透学说：与肽聚糖的结构有关
2.镜检后的染色玻片直接扔到专装废弃玻片的盒子。
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染色结果
金黄色葡萄球菌(10×100)
大肠杆菌(10×100)
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染色结果
螺形菌Spiral bacterium
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革兰氏染色课件PPT
复染
复染：将脱色后的涂片用复染液进行复染处理，以便更好地观察菌体或组织的形态和结构。
复染时应注意控制复染时间，避免过长或过短，以免影响染色效果。
冲洗和干燥
冲洗
将染色和脱色处理后的涂片用清 水冲洗干净，以便观察菌体或组 织的染色效果。
干燥
将冲洗干净的涂片放在干净的纸 巾上自然干燥，以便后续观察。
Part
固定时应注意控制火焰温度，避免过高或过低，以免影响 染色效果。
染色
染色：将涂片浸入革兰氏染色液中， 染色一定时间后取出晾干。
染色时应注意控制染色时间，避免过 长或过短，以免影响染色效果。
脱色
脱色：将染色后的涂片用脱色液进行脱色处理，以去除菌体或组织表面的色素。
脱色时应注意控制脱色时间，避免过长或过短，以免影响染色效果。
复染与初次染色要匹配
复染的颜色要与初次染色相匹配，以 便更好地观察染色效果。
其他注意事项
染色液要新鲜
染色液使用前要确保新鲜，过期 或变质的染色液会影响染色效果
。
避免交叉污染
在染色过程中要避免不同染色液之 间的交叉污染，以免影响染色结果 。
注意安全
染色过程中要注意安全，避免染色 液溅到皮肤或眼睛上，如不慎溅到 应立即用大量清水冲洗并及时就医 。
革兰氏染色还可以用于研究细菌的生 物学特性和分类学研究，有助于深入 了解细菌的生态学和进化关系。
Part
03
革兰氏染色的操作步骤
涂片
涂片：将待染色的菌体或组织薄而均匀地涂在洁净的玻片上，然后晾干或烘干， 以便后续染色。
涂片时应注意避免涂层过厚，以免影响染色效果。
固定
固定：将涂片在火焰上快速通过两次，使菌体或组织固定 在玻片上，以便后续染色。
细菌的革兰氏染色和形态观察.ppt
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[自读教材· 填要点] 一、铁路，更多的铁路 1．地位
铁路是
交通运输 建设的重点，便于国计民生，成为国民经济
发展的动脉。 2．出现 1881年，中国自建的第一条铁路——唐山 路建成通车。 1888年，宫廷专用铁路落成。 至胥各庄铁 开平
3．发展
(1)原因：
①甲午战争以后列强激烈争夺在华铁路的 ②修路成为中国人 (2)成果：1909年 权收归国有。 4．制约因素 政潮迭起，军阀混战，社会经济凋敝，铁路建设始终未入 修筑权 。
”；此后十年间，航空事业获得较快发展。
筹办航空事宜
处
三、从驿传到邮政 1．邮政
(1)初办邮政： 1896年成立“大清邮政局”，此后又设
邮传部 邮传正式脱离海关。
，
(2)进一步发展：1913年，北洋政府宣布裁撤全部驿站； 1920年，中国首次参加 万国邮联大会 。
2．电讯 (1)开端：1877年，福建巡抚在 办电报的开端。 (2)特点：进程曲折，发展缓慢，直到20世纪30年代情况才发生变 化。 3．交通通讯变化的影响
二、实验原理---革兰氏染色
当用结晶紫初染 后，像简单染色法一样，所有细菌都被染 成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成 结晶紫一碘的复合物 ，从而增强了染料与细菌的结合力。 当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的 。革兰 氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成， 壁厚、类脂质含量低，用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、 使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶 紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染 后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同，由于其 细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时， 类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫碘的复合物比较容易被洗脱出来 ，用复染剂复染后，细胞 被染上复染剂的红色。。
微生物革兰氏染色法和芽孢染色法ppt课件
注：乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，脱色不 足，阴性菌被染成阳性菌；脱色过度，阳性菌被染成 阴性菌
精品
5
实验结果
阳性菌（蓝紫色） 阴性菌（红色）
精品
6
细菌芽孢染色法
实验目的
学习并掌握芽孢染色方法；初步了解芽孢杆 菌的形态特征。
实验原理
芽孢：某些细菌在一定的环境条件下，能在 菌体内部形成一个圆形或卵圆形小体，是细菌的 休眠形式。产生芽孢的都是革兰氏阳性菌。
2
革兰氏染色原理
第一步：初染:结晶紫使菌体着上蓝紫色； 第二步：媒染:碘和结晶紫形成大分子复 合物，能被细胞壁阻留在细胞内；第三 步：酒精脱色:细胞壁成分和构造不同， 出现不同的反应——G+菌：细胞不能被 酒精脱色，仍呈紫蓝色；G-菌：酒精将 细胞脱色，细胞无色；第四步:番红复染， G-菌呈红色， G+菌呈紫蓝色。
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9
细菌芽孢染色法
实验步骤
1）改良的Schaeffer-Fulton氏染色法 制备菌悬液 孔雀绿染液(2滴)水浴加热染色15-20 min 取1小滴，涂片，固定 水洗 番红染液复染23min，倾去染液，水洗 镜检 2）Schaeffer-Fulton氏染色法 涂片固定 孔雀绿染液在微火上加热染色5min 水洗 番红染液复染2min 水洗 镜检
实验二
革兰氏染色法和芽孢染色法
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1
革兰氏染色法
实验目的
学习并掌握革兰氏染色方法；了解革兰氏染 色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
实验原理
革兰氏染色法是细菌细胞的复合染色法，由 丹麦病理学家Hans Christian Gram 于1884年 创立。该法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
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5
实验结果
阳性菌（蓝紫色） 阴性菌（红色）
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6
细菌芽孢染色法
实验目的
学习并掌握芽孢染色方法；初步了解芽孢杆 菌的形态特征。
实验原理
芽孢：某些细菌在一定的环境条件下，能在 菌体内部形成一个圆形或卵圆形小体，是细菌的 休眠形式。产生芽孢的都是革兰氏阳性菌。
2
革兰氏染色原理
第一步：初染:结晶紫使菌体着上蓝紫色； 第二步：媒染:碘和结晶紫形成大分子复 合物，能被细胞壁阻留在细胞内；第三 步：酒精脱色:细胞壁成分和构造不同， 出现不同的反应——G+菌：细胞不能被 酒精脱色，仍呈紫蓝色；G-菌：酒精将 细胞脱色，细胞无色；第四步:番红复染， G-菌呈红色， G+菌呈紫蓝色。
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9
细菌芽孢染色法
实验步骤
1）改良的Schaeffer-Fulton氏染色法 制备菌悬液 孔雀绿染液(2滴)水浴加热染色15-20 min 取1小滴，涂片，固定 水洗 番红染液复染23min，倾去染液，水洗 镜检 2）Schaeffer-Fulton氏染色法 涂片固定 孔雀绿染液在微火上加热染色5min 水洗 番红染液复染2min 水洗 镜检
实验二
革兰氏染色法和芽孢染色法
精品
1
革兰氏染色法
实验目的
学习并掌握革兰氏染色方法；了解革兰氏染 色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
实验原理
革兰氏染色法是细菌细胞的复合染色法，由 丹麦病理学家Hans Christian Gram 于1884年 创立。该法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
精品
细菌染色技术ppt课件
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五、临床意义
➢ 鉴别细菌：
•
用革兰氏染色法可将所有细菌分为阳性与阴性两类，可初步识别细菌，
以利进一步鉴定。
➢ 选择药物：
•
可根据革兰氏染色性的不同，供临床初步选择用药方向。
➢ 与致病性相关：
•
大多数革兰氏阳性菌的致病物质为外毒素，而大多数革兰氏阴性菌的致
病物质为内毒素。由此，可采取有针对性的治疗方案。
➢ 基本形态
球菌 杆菌 弧菌
➢ 特殊结构
芽孢：枯草杆菌、破伤风梭菌 荚膜：肺炎链球菌 鞭毛：变形杆菌
.
7
标本处理
➢痰液：用无菌棉签挑取干酪样或脓性痰部分0.05-0.1ml，
涂于载物玻片右2/3 处，均匀涂抹成卵圆形痰膜（约2cm长),
每张玻片只涂一份标本。
➢脓液： 同痰涂片法。
➢病灶组织或干酪块等：先用组织研磨器磨碎后再
行涂片。大小、厚度同痰涂片。
➢体液标本：取标本10ml，3000rpm,离心30min，取沉
渣涂片。大小、厚度同痰涂片。
➢脑脊液：将脑脊液离心或甩片集菌后涂片备用。
.
8
标本处理注意事项
➢标本应以打圈的方式反复涂抹均匀，避 免标本涂布不均影响结果判读，或使染 色不均造成阴阳不定。
➢标本涂布不能过厚，影响染色效果。
于结核病、麻风病等
• 荧光染色：敏感性强、效率高、易观察；
用于结核分枝杆菌等
• 其它：鞭毛染色鞭毛有无、位置、数量；
•
异染颗粒染色白喉棒状杆菌；
• 荚膜染色
.
3
常用燃料
• 碱性染料 带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。常用的染
料有碱性复红、结晶紫、亚甲蓝等。
实验细菌革兰氏染色法.ppt
【方法步骤】
D. 水洗
A. 初染 B. 水洗 C. 媒染 E. 脱色 F. 水洗 G. 复染 H. 水洗 图4-1 革兰氏染色程序
I. 吸干
【方法步骤】
★ 获得本实验成功的关键： 1）选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染 成红色而造成假阴性。 2）涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。 3）脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性， 脱色过度造成假阴性。
香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，试管架，镊子，载玻 片夹子，载玻片支架，滤纸，滴管和无菌生理盐水等。
【方法步骤】
1. 涂片：将大肠杆菌（16h）和金黄色葡萄球菌（16h）分别
涂片、干燥、固定。 2. 染色： 1）初染：加草酸铵结晶紫一滴（以刚好将菌膜覆盖为宜）， 染色1～2min后倾去染液，水洗至流出水无色； 2）媒染：先用卢戈氏碘液冲去残留水迹，再用碘液覆盖1min， 倾去碘液，水洗至流出水无色。 3）脱色：用滤纸吸去玻片上的残水（从边缘吸，以防擦去菌 体），将玻片倾斜，并衬以白背景，用95%乙醇滴洗至刚刚无紫 色为止，约20～30秒，立即用水冲去乙醇；
★ 可知n（介质折射率）对提高显微镜的分辩力起着关键性的作
【基本原理】
2. 革兰氏染色 革兰氏染色法可将细菌分成革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性 （G-）两种类型，细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们 细胞壁的成分和结构不同而造成的。 首先利用草酸铵结晶紫初染，所有细菌都会着上结晶紫的蓝 紫色。然后利用卢戈氏碘液作为媒染剂处理，由于碘与结晶 紫形成碘-结晶紫复合物，增强了染料在菌体中的滞留能力。 之后用95%乙醇作为脱色剂进行处理时，两种细菌的脱色效果 不同。
依据材料概括晚清中国交通方式的特点，并分析其成因。
革兰氏染色原理课件
通过革兰氏染色对细菌细胞壁的 影响，可以进一步了解细菌的生 理特性和结构特点，为临床诊断
和治疗提供依据。
03
革兰氏染色的操作流程
涂片与固定
涂片
将待染色的样品涂布在载玻片上 ，确保涂层均匀。
固定
通过加热或化学固定剂使涂片上 的微生物细胞固定在载玻片上， 防止在染色过程中细胞被冲走。
脱色与复染
脱色
此外，在法医学中，革兰氏染色也常用于刑 事侦查和尸体解剖，帮助鉴定死者是否死于 细菌感染以及细菌的种类和来源。总之，革 兰氏染色作为一种经典的染色技术，在医学 诊断、研究和其他领域中发挥着重要作用。
06
革兰氏染色的优缺点及未来展望
革兰氏染色的优点与局限性
优点 操作简便，结果准确可靠，是鉴别细菌的重要工具之一。
在肠道菌群检测中的应用
肠道菌群是人体内重要的微生物群落，对维持人体健康起着重要作用。肠道菌群失调可能导 致多种疾病，如肠道感染、消化不良等。革兰氏染色在肠道菌群检测中也有广泛应用。
通过革兰氏染色，可以区分肠道中的有益菌、有害菌和条件致病菌。有益菌如乳酸菌多为革 兰氏阳性菌，而有害菌如大肠杆菌多为革兰氏阴性菌。了解肠道中的菌群分布和种类，有助 于评估肠道健康状况和制定相应的治疗措施。
革兰氏染色结果的判定标准
革兰氏阳性菌
染色后呈蓝紫色，细胞壁厚，肽聚糖网状结构致密，脂质含量高。
革兰氏阴性菌
染色后呈红色，细胞壁薄，肽聚糖网状结构稀疏，脂质含量低。
革兰氏染色结果的分析与解读
01
02
03
形态学观察
观察染色后的细菌形态， 如球状、杆状、螺旋状等， 有助于初步判断细菌类型。
生理学特性分析
对某些化学物质容易透过。
革兰染色PPT课件
四、实验方法
1、制片（涂片，干燥，固定） 2、初染（革兰Ⅰ液 1 min，水洗）结晶紫 3、媒染（革兰Ⅱ液 1 min，水洗）卢戈碘液 4、脱色（革兰Ⅲ液 20s ，2次，水洗）
95%酒精 5、复染（革兰Ⅳ液 30 s，水洗）稀释石炭
酸复红 6、滤纸吸干玻片水分 7、镜检（油镜）
实验结果
G+菌
G-菌
革兰染色法
革兰染色法
一、实验目的 掌握革兰染色的操作技术及油镜的使用。
二、实验原理 1、G+菌肽聚糖层数多，结构致密，不易脱色。
2、G+菌等电点较低，在碱性染料中带较多负电 荷，与碱性染料结合力牢固，不易脱色。
三、材料与器材
菌种： 大肠杆菌，金黄色葡萄球菌 革兰氏染色液 载玻片、酒精灯、显微镜。
染色： 形态： 排列方式：
革兰染色过程
注意事项
涂片不宜多。Leabharlann 注意控制好脱色程度。分析与讨论
分析染色过程
实验4细菌革兰氏染色法 ppt课件
10 Central Laboratory of Biology
【方法步骤】
4）复染：将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色 2min，水洗，吸去残水晾干（图4-1）。 3.镜检：干燥后，油镜观察。以分散开的细菌颜色为准，革兰 氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 4.混合制片观察：一载玻片上两种菌混合制片，对比观察。菌 龄和脱色程度对染色结果影响较大。
2020/12/12 College of Life Sciences, Hubei Normal University
6 Central Laboratory of Biology
【基本原理】
革兰氏阳性细菌细胞壁肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低， 肽聚糖本身并不结合染料，但其所具有的网孔结构可以滞留碘结晶紫复合物，现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩 而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。 而革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄且 脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原先 滞留在细胞壁中的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来，菌体变为 无色，用复染剂（如番红）染色后又变为复染剂颜色（红）。
用。
2020/12/12 College of Life Sciences, Hubei Normal University
5 Central Laboratory of Biology
【基本原理】
2. 革兰氏染色 革兰氏染色法可将细菌分成革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性 （G-）两种类型，细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们 细胞壁的成分和结构不同而造成的。 首先利用草酸铵结晶紫初染，所有细菌都会着上结晶紫的蓝 紫色。然后利用卢戈氏碘液作为媒染剂处理，由于碘与结晶 紫形成碘-结晶紫复合物，增强了染料在菌体中的滞留能力。 之后用95%乙醇作为脱色剂进行处理时，两种细菌的脱色效果 不同。
革兰氏染色试验步骤ppt课件
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二、基本原理
1 、革兰氏染色原理
通过结晶紫液初染和碘液媒染后，在细菌的细胞膜内可 形成不溶于水的结晶紫液和碘液的复合物，G+细菌由于 其细胞壁较厚，肽聚糖网层次多和交联致密，因此遇脱 色剂乙醇处理时，因失水而使网孔缩小，再加上它不含 类脂，故乙醇的处理不会溶出缝隙，因此能把结晶紫与 碘的复合物牢牢留在壁内，使其保持紫色。
乳酸石炭酸棉蓝染色优点：细胞不变形，不易干燥，防腐，保存时间较长，
25
三、实验器材
1、菌种：细黄链霉（Streptomyces microflavus） 红酵母（Rhodotorula SP） 产黄青霉（Penicillium chrysogenum） 黑曲霉（Aspergillus niger） 黑根霉（Rhizopus nigricans ） 总状毛霉（Mucor racemosds）
24
酵母菌：单细胞真核生物
真
形态：卵圆形、圆形、椭圆形或圆柱形等
繁殖方式：无性：主要为出芽繁殖，产生芽孢子
菌
有性：产生子囊孢子
美篮染色优点：可区分死活细胞，活细胞能使蓝 色变无色，死细胞一直呈蓝色。
霉菌：霉菌可产生复杂分枝的菌丝体（基内菌丝和气生菌丝），
气生菌丝长到一定阶段分化产生分生孢子梗，分生孢子梗上 产生生孢子。分生孢子梗和分生孢子的形态特征是分类的重 要依据。 繁殖方式：主要产生无性孢子和产生有性孢子繁殖
2、培养基：高氏1号琼脂、麦芽汁琼脂、马铃薯葡萄糖琼 脂或查氏培养基。
3、试剂：0.1%美蓝染液、乳酸石炭酸棉蓝染色液、 50% 乙醇。
4 、器具：显微镜、培养皿、载玻片、盖玻片、镊子、接 种杯、解剖针、擦镜纸等。
26
四、实验步骤
放线菌形态观察方法（扦片法）
二、基本原理
1 、革兰氏染色原理
通过结晶紫液初染和碘液媒染后，在细菌的细胞膜内可 形成不溶于水的结晶紫液和碘液的复合物，G+细菌由于 其细胞壁较厚，肽聚糖网层次多和交联致密，因此遇脱 色剂乙醇处理时，因失水而使网孔缩小，再加上它不含 类脂，故乙醇的处理不会溶出缝隙，因此能把结晶紫与 碘的复合物牢牢留在壁内，使其保持紫色。
乳酸石炭酸棉蓝染色优点：细胞不变形，不易干燥，防腐，保存时间较长，
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三、实验器材
1、菌种：细黄链霉（Streptomyces microflavus） 红酵母（Rhodotorula SP） 产黄青霉（Penicillium chrysogenum） 黑曲霉（Aspergillus niger） 黑根霉（Rhizopus nigricans ） 总状毛霉（Mucor racemosds）
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酵母菌：单细胞真核生物
真
形态：卵圆形、圆形、椭圆形或圆柱形等
繁殖方式：无性：主要为出芽繁殖，产生芽孢子
菌
有性：产生子囊孢子
美篮染色优点：可区分死活细胞，活细胞能使蓝 色变无色，死细胞一直呈蓝色。
霉菌：霉菌可产生复杂分枝的菌丝体（基内菌丝和气生菌丝），
气生菌丝长到一定阶段分化产生分生孢子梗，分生孢子梗上 产生生孢子。分生孢子梗和分生孢子的形态特征是分类的重 要依据。 繁殖方式：主要产生无性孢子和产生有性孢子繁殖
2、培养基：高氏1号琼脂、麦芽汁琼脂、马铃薯葡萄糖琼 脂或查氏培养基。
3、试剂：0.1%美蓝染液、乳酸石炭酸棉蓝染色液、 50% 乙醇。
4 、器具：显微镜、培养皿、载玻片、盖玻片、镊子、接 种杯、解剖针、擦镜纸等。
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四、实验步骤
放线菌形态观察方法（扦片法）