初始污染菌方法验证

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初始污染菌检验方法验证方案

初始污染菌检验方法适用性验证方案文件编号：编制/日期：审核/日期：批准/日期：XXXX有限公司1.验证目的---------------------------------------------------------32.范围-------------------------------------------------------------33.验证小组成员及职责-----------------------------------------------34.参考资料---------------------------------------------------------35.检验仪器及器具---------------------------------------------------36.菌种信息---------------------------------------------------------47.试验环境---------------------------------------------------------48.产品选择---------------------------------------------------------49.方法适用性验证---------------------------------------------------410.修正系数（校正因子）--------------------------------------------611.测试结果--------------------------------------------------------712.再验证周期------------------------------------------------------713.结论------------------------------------------------------------714.附表------------------------------------------------------------81.验证目的证明本公司医疗器械产品初始污染菌洗脱培养计数检验方法的适宜性和准确性。

初始污染菌实验方法验证(文件模板)

电子天平
已校量
在有效期内
符合要求
电热恒温培养箱
已校量
在有效期内
符合要求
霉菌培养箱
已校量
在有效期内
符合要求
确认人/日期：
审核/日期：
3.2 使用材料及菌种：胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培对照养基、沙氏葡萄糖琼脂对照培养基、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉（菌种购买单位均为微生物种质资源库）。
该实验使用仪器及器具主要有：灭菌移液管及移液枪吸嘴、无菌小泵管、培养皿、小型蠕动泵、薄膜过滤器、灭菌锅、百级工作台、生物安全柜、电子天平、电热恒温培养箱、霉菌培养箱。
设备名称
是否校量
是否在有效期内
结论
灭菌锅百级工作台生物安全柜
已校量已校量已校量
在有效期内在有效期内在有效期内
符合要求符合要求符合要求
表1
培养基菌落数 cfu
结论
加入菌种铜绿假单胞菌
培养
胰酪大豆胨琼脂
条件胰酪大豆胨琼脂培胰酪大豆胨琼脂对照培养基/胰酪大豆
养基
培养基
胨琼脂对照培养
基
平均值
金黄色葡萄球菌平均值
枯草芽孢杆菌平均值
白色念珠菌
33℃,48 小时
菌落形态大小于对照培养基上的菌落一致
平均值黑曲霉
23℃,72 小时
菌悬液若在室温下放置，应在 2 小时内使用；若保存在 2〜8 ℃在 24h 内使用。黑曲霉孢子悬液存在 2〜8℃，在验证过的贮存期内用。
3.4 培养基适用性检查 3.4.1 需氧菌的计数分别取 1ml 的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在 30-35℃，培养不超过 3 天；白色念珠菌、黑曲霉在 20-25℃，培养不超过 5 天。每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 3.4.2 霉菌和酵母菌的计数分别取 1ml 的白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。在 20-25℃，培养不超过 5 天。每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 3.4.3 结果判定被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在 0.5-2 范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。 3.4.4 试验结果见表 1

产品初始污染菌和微粒污染控制验证方案

产品初始污染菌和微粒污染控制验证方案产品初始污染菌和微粒污染是产品质量管理过程中非常重要的一环。

产品初始污染菌是指产品在生产过程中受到外界环境的污染，例如空气中的细菌和真菌；微粒污染则是指产品中存在的微小颗粒物质，例如灰尘、纤维和金属碎屑。

为了确保产品质量和用户安全，对于这两种污染的控制需要进行验证。

一、初始污染菌的验证方案初始污染菌的验证是为了检验产品在生产过程中是否受到了外界环境的污染，以下是一个可能的验证方案：1.选择合适的验证样本：根据产品的特性，选择适当的验证样本。

比如，如果是食品类产品，可以选择食品样本进行验证。

2.收集样本：在生产过程中，从不同环节收集样本。

包括原材料、生产设备以及成品等。

3.分离和培养：使用适当的培养基将样本中的细菌和真菌分离出来，并培养出纯种。

4.定量检测：使用合适的方法对细菌和真菌进行定量检测，比如菌落数、菌群总数等。

5.数据分析：分析定量检测结果，并与相应的标准进行比较，以确定产品是否达到要求。

6.结果记录和分析：记录所有的验证结果，并进行数据分析。

如果产品未达到要求，需要进一步分析原因，并采取相应的措施进行改进。

7.验证报告编制：根据验证结果，编制相应的验证报告。

报告中应包括验证方法、样本信息、检测结果、分析和结论等内容。

二、微粒污染的验证方案微粒污染的验证是为了确保产品中不存在过多的微小颗粒物质，以下是一个可能的验证方案：1.选择合适的验证样本：根据产品的特性，选择适当的验证样本。

比如，如果是医疗器械，可以选择器械表面进行验证。

2.收集样本：在生产过程中，收集验证样本。

可以使用适当的方法，如粘取法、吸尘法等，将待验证的表面的微粒物质收集到相应的样品容器中。

3.预处理：对样品进行适当的预处理，如过滤、离心等，以获得适合检测的样品。

4.检测方法选择：选择合适的检测方法对样品中的微粒进行分析。

常用的方法有显微镜分析、粒径分析法等。

5.定量检测：使用选择的方法对样品中的微粒进行定量检测，并得到相应的数据。

2024初始污染菌实验方法验证

2024初始污染菌实验方法验证
2024年初始污染菌实验的方法验证可以包括以下几个方面的内容：
实验目的、实验设备和材料、实验步骤、实验结果及讨论等。

实验目的：验证2024年初始污染菌实验的方法是否可靠、有效，能
够准确测定菌的数量和种类。

实验设备和材料：实验设备包括培养皿、培养基、试管，实验材料包
括空气样品、表面拭子、蘑菇、硒酸纸等。

实验步骤：以下为可能的实验步骤，但实际步骤可能因具体实验设计
而有所不同。

1.收集空气样品：在实验环境中放置一定数量的培养皿，在一定时间
内吸取一定体积的空气样品。

2.采集表面拭子：使用含有菌落细栏的纹理拭子通过轻轻刷拭的方式
采集表面的微生物。

3.采集其他样品：根据具体实验设计，采集其他可能受污染的样品，
如食品、水源等。

4.制备培养基：按照一定比例配制适当的培养基，可以包括营养琼脂、血琼脂等。

5.接种培养基：将收集到的空气、表面拭子等样品分别接种到培养基中。

6.孵育培养基：将接种好的培养基置于恰当的温度和湿度条件下，进
行孵育。

7.菌落计数：根据特定的方法和标准，对培养基上的菌落进行计数，并记录下来。

8.分离和鉴定菌株：对菌落进行分离，选取单个菌落进行进一步的培养和鉴定，可以通过形态学、生理生化等方法鉴定。

实验结果及讨论：根据实验结果，分析验证的方法在初始污染菌实验中的可靠性和准确性，讨论可能存在的问题和改进方向，提出实验方法的优化建议。

总结：通过以上实验验证方法，可以确保2024年初始污染菌实验结果的准确性和可靠性，为后续的相关研究和实验提供了基础数据和方法参考。

2020初始污染菌实验方法验证

初始污染菌实验方法验证方案产品名称：一次性包皮环切缝合器编制：日期：审核：日期：批准：日期：江西狼和医疗器械股份限有限公司目录初始污染菌实验方法验证方案1．概述2．验证目的3．职责与验证申请4．验证依据5．验证计划6．验证内容初始污染菌实验方法验证方案1.概述：初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性，从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。

2.目的：通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。

3.职责与验证申请：3.1质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。

3.2生产技术部负责按验证方案生产相关样品初始污染菌实验方法验证申请表4.依据：《中国药典》2015版5.验证计划：5.1实验操作人员确认；5.2实验室实验设备及器材的确认；5.3产品取样及方法确认。

6.验证内容：6.1菌种和菌液制备6.1.1 菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30〜35℃培养18〜24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20〜25℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。

接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，20〜25℃培养5〜7天，加人3〜5 ml 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。

然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。

初始染菌验证方案

初始染菌验证1.概述无菌试验是为测定必须经灭菌处理物品带微生物情况的一种试验。

由于多种原因及遵照概率函数，一些微生物总以有限机会得以生存，灭菌结果只能把微生物的存活概率降到最低限度(10－6)，即允许在100万个试验对象中，有1个以下的有菌生长就为无菌；另外无菌试验只能是一种抽样检验，所以其结果的可靠性是有限的，应与灭菌程序监测等结合进行才较安全。

选取样本量的大小：无菌试验抽样的数量取决于：(1)总体(被灭菌物品)的数量；(2)污染率；(3)原始微生物污染数量及要求无菌的概率；(4)不同物品种类及能接受的工作量等。

2.验证目的确定使用方法的正确性3.验证内容和方法3.1 仪器与试剂3.1.1 培养基营养琼脂培养基3.1.2 菌种金黄色葡萄球菌3.1.3 压力蒸汽灭菌器3.1.4 净化工作台3.1.5 电热鼓风干燥箱3.1.6 生化培养箱 (23～28℃)3.1.7 霉菌培养箱(35～37℃)3.2 验证方法3.2.1培养基和洗脱液制备方法：应选用卫生部认可单位生产的营养琼脂培养基和玫瑰红钠培养基等，准确称量、配制、培养基。

经115℃灭菌30分钟备用。

3.2.2对照用菌液：金黄色葡萄球菌菌液，取金黄色葡萄球菌(26003)的普通琼脂斜面新鲜培养物，接种1白金耳至需营养肉汤培养基内，在30～35℃培养16～18小时后，用灭菌的生理盐水稀释成50-100cfu即得。

3.2.3 洗脱液：制备的洗脱液应该是无菌的，并且能促使细菌从被检样品上脱离下来，又不影响悬液的渗透压。

常用的洗脱液含0.1%非离子活性剂(吐温－80)、1%蛋白胨和0.85%氯化钠。

本验证采用的为0.9%无菌氯化钠缓冲液。

3.2.4产品采集与样品处理3.2.4.1 随机抽取10件样品，供试品不能采用破坏性（如管道外部、非管道类）取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积＜100cm2取全部表面，被采表面积≥100cm2取100cm2.加入到10ml灭菌生理盐水中。

初始污染菌方法验证

1.目的验证产品初始污染菌数的试验方法。

2.范围适用于质量部门对产品初始污染菌数验证试验的检测。

3.职责质量检验人员负责执行此规程。

4.依据标准及相关文件2010 版《中华人民共和国药典第二部》附录ⅪJ微生物限度检查法GB/T19973.1-2005 《医疗器械的灭菌- 微生物学方法 - 第一部分产品中微生物数量的估计》GB15980-2009 《一次性使用医疗用品卫生标准》5.试验产品6.注意事项6.1本操作应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度 100级的无菌操作台内进行。

操作过程应尽量避免任何可能使结果发生偏差的污染。

6.215min 后方可进行实验操作。

6.3膜在过滤前后的完整性。

7.器材与试剂7.1器材35℃恒温培养箱、 23℃恒温培养箱、灭菌器、洁净工作台、无菌过滤装置、镊子、剪子、电子天平、移液器、接种环7.2稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后按说明书要求进行灭菌。

pH 7.0无菌氯化钠溶液—蛋白胨缓冲液0.9%无菌氯化钠溶液。

7.3培养基营养琼脂培养基：按说明书方法保存配制。

玫瑰红钠琼脂培养基：按说明书方法保存配制。

改良马丁液体培养基：按说明书方法保存配制。

改良马丁琼脂培养基：按说明书方法保存配制。

营养肉汤培养基：按说明书方法保存配制。

8.计数方法的验证试验当建立产品初始污染菌数检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证：以确认所采用的方法适合于该产品细菌、霉菌及酵母菌的测定。

若产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。

验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。

对各试验菌的回收率应逐一进行验证。

8.1菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过 5 代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为0 代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。

金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus〔 CMCC B26 003 〕大肠埃希菌 Escherichia coli〔 CMCC B 11 102 〕枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis〔CMCC B 63 501 〕白色念珠菌 Candida albicans〔 CMCC F 98 001 〕黑曲霉 Aspergillus niger〔 CMCC F98 003 〕8.2菌液制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，30-35 ℃培养 18-24 小时，接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上23-28 ℃培养 24-48小时。

产品初始污染菌和微粒污染控制验证方案

初始污染菌和微粒污染控制验证方案1. 目的通过设计试验确认XX半成品的储存环境和存放有效期。

其可能存在的环节如下：（1）在内包装封口前初始污染菌是否满足控制要求（定期监控）；（2）等待灭菌的产品，密封严实存放在外包间，其初始污染菌随储存时间变化。

2. 适用范围本验证方案适用于本产品，通过试验研究，以确定在各种情况下的储存有效期。

3. 发放范围管理者代表、生产部和质量部等有关部门及人员。

4. 规范性引用文件《中华人民共和国药典》2015版附录微生物限度检查法5. 组织和职责根据验证工作量的大小，本公司成立验证组，由公司管理者代表任组长，生产部、质量部、有关部门及人员任组员。

验证小组职责：负责验证方案的起草、批准；负责验证的协调工作，以保证验证方案规定项目的顺利实施；负责验证数据结果的审核；负责验证报告的审批；负责发放验证证书；负责确定该项验证的再验证周期。

主责部门本方案的主责部门为公司管理者代表，其职责为：负责审批验证方案和验证报告，颁发验证证书。

相关部门本方案的相关部门为质量部，其职责为：按标准操作规程及验证方案进行各项确认，及时报告确认结果，形成验证报告；负责操作培训和现场监督。

6. 步骤和方法计划及进度本验证由质量部提出完整的验证计划，经验证小组批准后实施，由质量部完成，整个验证活动分为两个阶段完成：运行确认（0Q）从 _________ 年_月______________ 日到_________ 年________ 月__________ 日性能确认（PQ）从 _________ 年_______ 月 _______ 日到_________ 年________ 月__________ 日初始污染菌和微粒检测方法及可接受标准抽样方法和抽样规律以每一个生产批为产品抽样批，随机抽取样品1片（长宽约5cm X 2cm）记为1单位，在洁净条件下精确称重，并标记。

需要临时或长期存放时间预计不超过30天（1个月），综合细菌的生长规律及可能存在的存放天数，其抽样检测的时间设计为存入后：第1天、第2天、第3天、第5天、第7天、第15天、第30天。

初始污染菌检验操作规程

初始污染菌检验操作规程1.目的测定样品细菌总数可用来判明样品细菌污染的程度，以及生产单位工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况，是对样品进行卫生学评价的综合依据，确定灭菌前产品中微生物的数量和性质，为下一步灭菌提供参考依据。

2.适用范围适用于所有需要消毒灭菌前的产品、洁净车间3．作业条件：3.1无菌检测在洁净度为100级单向流空气区域内进行，严格遵守无菌操作，避免污染。

3.2超净台及工作台面，必须进行洁净度验证。

4．作业方法与步骤4．1制作营养琼脂培养基（参见《培养基制作作业指导书》），培养基需按要求培养16-18H 后，检查无菌生长方可使用。

4．2无菌室洁净度验证4．2．1取3只培养皿在超净工作台平均位置打开上盖，暴露30min后盖好置30～35℃培养48h后检查，3只培养皿上生长的菌落数平均应不超过1个4．3产品采集与样品处理（制备供试液）4.3.1用无菌手续称取10g可以破坏性类供试品,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡，保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇。

作为1：10供试液。

4.3.2对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。

保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇。

作为1：10的供试液。

4.3.3采样数量：各类产品每批随机抽取10件样品。

4.3.4供试液10倍递减稀释4.3.5待上述供试液自然沉降后取上清液1ml，加入9ml生理盐水，制备1：100的供试液。

制备过程中尽量避免碎片等杂物的混入。

4.4接种检验4.4.1取上述供试液上清液作初始污染菌数检测，取4个培养皿，每个稀释级各吸取1ml至每个灭菌平皿，每个稀释级注2个平皿。

4.4.2经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至45-50 ℃时，倾注上述各个平皿15ml，另倾注一个不加样品灭菌空平皿作空白对照。

以顺时针或逆时针方向快速转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。

初始污染菌实验方法验证

初始污染菌实验方法验证集团标准化工作小组 #Q8QGGQT-GX8G08Q8-GNQGJ8-MHHGN#初始污染菌实验方法验证方案产品名称：一次性包皮环切缝合器编制：日期：审核：日期：批准：日期：江西狼和医疗器械股份限有限公司目录初始污染菌实验方法验证方案1．概述2．验证目的3．职责与验证申请4．验证依据5．验证计划6．验证内容初始污染菌实验方法验证方案1.概述：初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性，从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。

2.目的：通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。

3.职责与验证申请：质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。

生产技术部负责按验证方案生产相关样品初始污染菌实验方法验证申请表4.依据：《中国药典》2015版5.验证计划：实验操作人员确认；实验室实验设备及器材的确认；产品取样及方法确认。

6.验证内容：菌种和菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

菌液制备接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，3035℃培养1824小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，2025℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。

接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，2025℃培养57天，加人35 ml %(ml/ml) 聚山梨酯80的无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。

然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用% (ml/ml)聚山梨醋80的无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。

产品初始污染菌及微粒污染控制验证规划方案

产品初始污染菌及微粒污染控制验证规划方案一开始，我就想谈谈这个方案的核心目标，那就是确保产品在初始阶段就远离污染的困扰。

这不仅是质量控制的必然要求，更是对消费者健康的承诺。

那么，我们该如何实现这个目标呢？我会用我十年的经验，带你一起探索这个问题的答案。

一、污染菌及微粒污染的来源分析污染菌和微粒污染，说到底，都是从哪里来的呢？这就需要我们对生产环境、生产设备和原材料进行全面的分析。

生产环境中的空气、水源、人员流动等都可能成为污染的源头。

生产设备的老化、磨损也可能导致微粒污染。

至于原材料，更是重中之重，因为原材料本身的质量就直接关系到产品的安全性。

二、污染控制措施的设计明确了污染来源，就要设计针对性的控制措施。

对于生产环境，我们可以采取空气净化、消毒等措施，减少污染菌和微粒的滋生。

对于生产设备，我们要定期进行维护和清洗，确保其处于良好状态。

至于原材料，我们要严格把控供应商的质量标准，确保原材料的安全性。

1.生产环境控制采用高效空气净化系统，定期更换过滤器，确保空气质量达标。

对生产区域进行定期消毒，减少污染菌的滋生。

严格控制人员流动，设置专门的更衣室和缓冲区，减少交叉污染。

2.生产设备控制定期对设备进行维护和清洗，确保设备表面无污染。

采用防尘、防菌的材料，减少微粒和污染菌的产生。

对设备进行定期检测，确保其性能稳定。

3.原材料控制严格筛选供应商，确保原材料的质量。

对原材料进行严格检测，确保其符合标准。

加强对原材料储存环境的控制，防止污染。

三、验证方法的确定1.微生物检测：通过采样、培养等步骤，检测产品中的污染菌数量，判断是否达到标准。

2.微粒检测：使用专业的检测设备，对产品中的微粒进行计数和分析，判断是否满足要求。

3.环境监测：对生产环境中的空气质量、水质等进行监测，确保环境指标符合标准。

四、实施计划的制定1.成立专门的项目组，负责方案的制定和实施。

2.对项目组成员进行培训，提高其专业素养。

3.制定详细的实施时间表，确保各项工作按时完成。

初始污染菌实验方法验证

2.目的：通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。

3.职责与验证申请：3.1质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。

6.验证内容：6.1菌种和菌液制备6.1.1 菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），验证组姓名职务单位黄燕组长质量管理部经理江西狼和医疗器械股份有限公司龙章宏组员化验员苏俊组员化验员胡梓鹏组员化验员批准经研究：同意以上成员组成验证小组，按照此方案对本公司的产品的初始污染菌实验方法进行验证。

批准人：年月日并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

6.1.2菌液制备接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30〜35℃培养18〜24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20〜25℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。

初始污染菌回收率方法验证

类别：编号：部门：页码：初始污染菌回收验证方案版次：□新订□替代:制定人: 年月日审批会签:**人：***生效日期：年月日1．验证目的初始污染菌是产品屏障系统表面或内的活微生物数量。

初始污染菌回收率用于补偿无法从产品和/或培养基中完全取出的微生物的数值。

也是对某一特定的技术从产品上移除和/或培养微生物的能力的测定值。

2．适用范围适用于我公司一次性使用活检钳的初始污染菌的检测3．检验依据《中国药典》2010版附录微生物限度检查法ISO11737-1:2006 医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定GB/T19973-1 2005 医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的估计GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准4．实验设备与材料4.1 设备百级超净工作台、无菌检查膜过滤器、电动吸引器、电热干燥箱、电热恒温培养箱、生化培养箱、压力蒸汽灭菌器、电子天平、pH计、冰箱。

4.2 培养基及稀释液营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.1%蛋白胨溶液。

4.3 其他实验材料微孔滤膜（孔径≤0.45um，直径约50mm）、量筒、剪刀、镊子、吸管、酒精灯、三角烧瓶、试管、培养皿。

5．实验程序5.1 抽样。

从每个清洗批次的产品中随机抽样，抽取3件。

5.2 洗脱在阴性实验室里以无菌操作方式将实验样品分别浸入装有已知容量的300ml的0.1%蛋白胨溶液的适当容器中，运用手工振动法洗脱产品上的微生物，用于洗脱产品外表面初始污染菌。

5.3 接种5.3.1 采用薄膜过滤法，将供试液平均倒入两个滤杯中进行抽滤，用100ml(每张滤膜每次冲洗量) pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，每张滤膜冲洗三次，将滤膜（菌面朝上）分别置于营养琼脂和玫瑰红钠琼脂平板上培养。

将冲洗过的供试品以上述方法再冲洗两次，共三次。

再将剩余供试品加入灭菌好融化的50ml营养琼脂培养基中作为琼脂覆盖。

(019)初始污染菌检验方法

5 检验方法5.1 营养琼脂培养基的配制：成份：NaCl 5g胨 10g琼脂 15-20g制法：取牛肉膏3g，加水1000ml，配制成肉浸液，将胨、NaCl、琼脂加入肉浸液内，微温溶解后，调节PH值，为弱碱性煮沸，滤清，调节PH值使灭菌后为7.2±0.2，分装后置压力蒸汽灭菌器内于115℃灭菌30min即得。

5.3 供试液制备5.3.1.供试品是敷料、可以破坏性类可用无菌手续称取10g,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。

作为1：10的供试液。

5.3.2.供试品是液体取10ml加至100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。

作为1：10的供试液。

5.3.3.对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积为100cm2，加入灭菌生理盐水100ml。

作为1：10的供试液。

5.3.4.可用破坏性方法取样供试品：（参照中华人民共和国药典2005年规定进行)5.3.5 供试品为输液器及注射器产品的供试液制备5.3.5.1内腔供试液制备：每套输液（血）器内腔注入20mL灭菌生理盐水,振摇5次，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。

作为1：1的供试液。

每支注射器抽取灭菌生理盐水至公称容量，振摇5次，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。

作为1：1的供试液。

5.3.5.2外部供试液制备：按产品外表面积每10cm2用1mL的灭菌生理盐水冲洗，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。

作为1：1的供试液。

5.3.6 供试品为注射针产品的供试液制备除去单包装，内外表面积每10cm2用10mL的灭菌生理盐水冲洗，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中[或将1支注射针直接完全浸入5mL无菌、无热原的生理盐水中每支注射针内外表面积约5cm2）]。

作为1：10的供试液。

5.3.7供试品为输液针（采血针）产品的供试液制备5.3.7.1内腔供试液制备：每支输液针内腔缓慢注入5 mL灭菌生理盐水，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。

作为1：5的供试液。

初始污染菌检验操作规程

初始污染菌检验操作规程方法：每个培养皿上菌落数超过300个，以最近的一个稀释级计数。

每个培养皿上菌落数在30-300个之间，以最近的两个稀释级计数，如最近的两个稀释级计数相差大于10倍，则应重新进行稀释。

4.6.3结果判定：若每个培养皿上菌落数均小于规定标准，则样品合格；若有一定数量的培养皿上菌落数超过规定标准，则进行进一步检验。

若进一步检验结果仍然超过规定标准，则样品不合格。

初始污染菌检验操作规程目的：本规程的目的是为了测定样品细菌总数，以判断样品细菌污染的程度，并评估生产单位的卫生状况，为下一步的灭菌提供参考依据。

适用范围：本规程适用于所有需要消毒灭菌前的产品和洁净车间。

作业条件：1.无菌检测需要在洁净度为100级单向流空气区域内进行，严格遵守无菌操作，避免污染。

2.超净台及工作台面必须进行洁净度验证。

作业方法与步骤：1.制作营养琼脂培养基，并按要求培养16-18小时后，检查无菌生长方可使用。

2.进行无菌室洁净度验证。

3.进行产品采集与样品处理，制备供试液。

4.进行供试液的10倍递减稀释。

5.进行接种检验。

6.进行培养。

结果与判定：1.计数方法：每个培养皿上菌落数超过300个，以最近的一个稀释级计数。

每个培养皿上菌落数在30-300个之间，以最近的两个稀释级计数，如最近的两个稀释级计数相差大于10倍，则应重新进行稀释。

2.结果判定：若每个培养皿上菌落数均小于规定标准，则样品合格；若有一定数量的培养皿上菌落数超过规定标准，则进行进一步检验。

若进一步检验结果仍然超过规定标准，则样品不合格。

菌落计数是食品微生物学检验中常用的方法之一。

在进行菌落计数时，需要注意以下基本规则。

首先，不宜采用菌落层片状生长的平板。

其次，计数符合要求的平板上的菌落，按照公式计算结果。

具体而言，菌数除以每件次（或g）的重量，等于件次或重量（g）。

选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。

如果只有一个稀释级平均菌落数在30～300之间，则将该稀释级的菌落数乘以稀释倍数进行报告。

初始污染菌方法验证

常州贺利氏医疗器械有限公司初始污染菌方法检查验证方案编制: 日期：审核：日期：批准：日期：初始污染菌检查验证方案目录1. 验证目的2. 参照标准3. 验证项目4. 验证小组及职责5. 合格标准6. 试验材料：7. 菌液制备8. 菌液计数9. 培养基的制备10.细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证11.菌回收率计算公式12.结果及结论1. 验证目的：建立本公司医疗器械产品表面微生物限度检查方法，本公司产品初始污染菌系采用平皿法现对该方法进行验证，以确认该方法适合于产品表面初始污染菌的检查。

2. 参照标准：2010版中国药典二部附录XI J微生物限度检查法。

3. 验证项目：本公司医疗器械产品表面微生物限度检查。

4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员:4.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。

4.2.2认真观察并做好验证原始记录。

4.2.3对实施验证的结果负责。

4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。

4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。

4.3.1.3负责验证方案的批准工作。

4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。

4.3.1.5负责验证报告的批准工作。

4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。

4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。

4.3.2.3负责验证方案的实施。

4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。

4.3.2.5参与验证结果的评价工作。

4.3.3质量部职责4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。

4.3.3.2负责验证方案的审核工作。

4.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。

4.3.3.4负责检验仪器及检验方法的验证。

4.3.3.5负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。

4.3.3.6负责对验证人员的培训、考核工作。

初始污染菌回收率方法验证

初始污染菌回收率用于补偿无法从产品和/或培养基中完全取出的微生物的数值。

也是对某一特定的技术从产品上移除和/或培养微生物的能力的测定值。

4.2 培养基及稀释液营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.1%蛋白胨溶液。

4.3 其他实验材料微孔滤膜（孔径≤0.45um，直径约50mm）、量筒、剪刀、镊子、吸管、酒精灯、三角烧瓶、试管、培养皿。

5．实验程序5.1 抽样。

从每个清洗批次的产品中随机抽样，抽取3件。

将冲洗过的供试品以上述方法再冲洗两次，共三次。

再将剩余供试品加入灭菌好融化的50ml营养琼脂培养基中作为琼脂覆盖。

初始污染菌实验方法验证

初始污染菌实验方法验证背景在生命科学领域，微生物污染在实验中是一个非常普遍的问题。

不仅会影响实验结果的准确性和可靠性，还会影响重要的生产过程。

因此，为了保证实验的成功，必须开发出一种可靠的方法来验证实验室中的物品是否存在微生物污染。

本文将介绍一种简单的方法来验证初始污染菌。

必备材料•无菌纯水•Tryptic Soy Broth（TSB）•青霉素和链霉素组合液•离心管•移液器•微量移液器步骤步骤一：制备TSB培养基取适量的TSB培养基，按照说明书的指示加入适量的无菌纯水，在无菌条件下进行混合并调整pH值至7.2-7.4。

步骤二：检查无菌水和青霉素和链霉素组合液的无菌性取适量的无菌纯水和青霉素和链霉素组合液，并在15ml的离心管中进行热处理。

在121℃下进行30分钟烘烤。

热处理之后，检查管子是否依然无菌。

步骤三：制备初始污染菌样品选取一种已知的细菌菌株，并放入无菌纯水的250ml Erlenmeyer三角瓶中，密封好瓶口，并在温育箱中以37℃的恒温培养24小时，制备出初始污染菌样品。

步骤四：制备验证菌液取一定量的TSB培养基，加入青霉素和链霉素组合液（最终浓度为10ug/ml），并进行热处理，待培养基冷却后，取一定量的初始污染菌样品用微量移液器加入到青霉素和链霉素培养基中，制备出验证菌液。

步骤五：分配验证菌液将验证菌液分别加入到无菌纯水的离心管中，接种量为1ml、0.1ml、0.01ml、0.001ml、0.0001ml等不同容量，序列号编好，每种容量配制三个重复。

这些离心管可在30℃下进行24小时的培养，检查有无微生物的生长。

步骤六：观察结果观察离心管培养基中有无微生物的生长。

如果所有序列号中均无微生物的生长，即可认为实验室物品无微生物污染，反之则有微生物污染。

初始污染菌实验方法验证可以有效地检查实验室物品中的微生物污染情况。

它易于操作，实验过程简单明了，并且针对不同容量的接种进行了细致的设计，以检查有无微生物生长。