人工牛黄检验操作规程

目的
明确人工牛黄检验方法，规范人工牛黄检验程序，确保检验结果准确。

范围
本规程适用于进厂原料人工牛黄的检验。

责任
质检处负责制订本规程；质检处原料组和仪器组化验员按本规程操作；质检处监督检查。

内容
1 品名：
1.1 中文名：人工牛黄
1.2 英文名：Bovis Calculus Artifactus
1.3 汉语拼音名：Renggong Nuhuang
2 引用标准
中国药典2010年版(ChP2010)。

3 执行质量标准：《人工牛黄质量标准》
4 性状
本品为黄色疏松粉末。

味苦，微甘。

6 鉴别
6.1 (1) 取胆红素（含量测定）项下溶液，照紫外-可见分光光度法（附录V A）测定，在453nm波长处有最大吸收。

6.2 薄层色谱法：胆酸、去氧胆酸的鉴别
6.2.1 供试品溶液的制备：取本品0.1g，置10ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理5分钟，加甲醇稀释至刻度，摇匀，静置，取上清液作为供试品溶液。

6.2.2 对照溶液的制备: 取胆酸、猪去氧胆酸对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg
的混合溶液，作为对照品溶液。

6.2.3 展开剂：正己烷－乙酸乙酯－醋酸-甲醇(20：25：2：3) 上层溶液为展开剂。

6.2.4 薄层板：硅胶G
6.2.5 测定方法: 吸取上述供试品溶液4μl, 对照品溶液2μl,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上,置于展开剂中展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

6.2.6 标准规定：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

6.3 薄层色谱法：牛胆粉对照药材的鉴别
6.3.1 对照药材溶液的制备：牛胆粉对照药材10mg，加甲醇适量，超声处理使充分提取，再加甲醇至10ml，摇匀，静置，取上清液作为对照药材溶液。

6.3.2 供试品溶液的制备：鉴别（2）项下的供试品溶液。

6.3.3 展开剂：以甲苯一冰醋酸一水((
7.5：10：0.3)为展开剂
6.3.4 薄层板：硅胶G
6.3.5 测定方法：吸取供试品溶液及上述对照药材溶液各8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上展开，取出，晾千，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

6.3.6 标准规定：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

6.4 薄层色谱法：牛磺酸的鉴别
6.4.1 供试品溶液的制备：取本品50mg，加水5m1,超声处理5分钟，加甲醇至10m1,静置，取上清液作为供试品溶液。

6.4.2 对照品溶液的制备：取牛磺酸对照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

6.4.3 薄层板：硅胶G薄层板。

6.4.4 展开剂：以正丁醇一乙醇一冰醋酸一水（4:1:2:1）为展开剂
6.4.5 测定方法：吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上展开，取出，晾于，在105℃加热10分钟，喷以1%茚三酮乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

6.4.6 标准规定：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

7 检查
7.1 水分
7.1.1 仪器与设备：烘箱、万分之一分析天平、称量瓶
7.1.2 操作方法
称取约2-5g样品，在100-105℃干燥5小时后，取出置于干燥器中放置30分钟，称量，再在上述温度下干燥1小时，取出置于干燥器中放置30分钟后称量，两次称量值不超过5mg。

7.1.3 计算公式：
干燥前称量瓶与样重-干燥后称量瓶与样重
干燥失重=───────────────────×100％
干燥前称量瓶与样重-空称量瓶重
7.2 含量测定
7.2.1 胆酸的测定
7.2.1.1 仪器与设备:紫外分光光度计,万分之一分析天平,容量瓶，冰水浴。

7.2.1.2 试药:60%冰醋酸,新制的糠醛溶液（1→100）, 硫酸溶液(取硫酸50m1与水65 ml混合)。

7.2.1.3 对照品溶液的制备：胆酸对照品12.5mg ,精密称定，置25ml量瓶中，加60%冰醋酸溶液使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml 中含胆酸0.5mg )。

7.2.1.4 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.2 ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml与1ml，分别置具塞试管中，各管加入60%冰醋酸溶液稀释成1.0 ml,再分别加新制的糠醛溶液（1→100）1.0 ml，摇匀，在冰浴中放置5分钟，精密加人硫酸溶液(取硫酸50m1与水65 ml混合)13ml,混匀，在70℃水浴中加热10分钟，迅速移至冰浴中，放置2分钟，以相应的试剂为空白，照紫外一可见分光光度法(附录V A)，在605nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

7.2.1.5 供试品溶液的制备：本品0.1g,精密称定，置50m1量瓶中，加60%冰醋酸溶液适量，超声处理5分钟，用60%冰醋酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液各1 m1，分别置甲、乙两个具塞试管中，于甲管中加新制的糠醛溶液1m1，乙管中加水1ml作空白，在冰浴中放置5分钟，精密加人硫酸溶液(取硫酸50m1与水65 ml 混合)13ml,混匀，在70℃水浴中加热10分钟，迅速移至冰浴中，放置2分钟。

7.2.1.6 测定方法：以相应的试剂为空白，照紫外一可见分光光度法(附录V A)，在605nm波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含胆酸的重量，计算，即得。

含量=
%100-1⨯⨯水份）
（表
M M
式中：M 表为从标准曲线中读取的胆酸含量；
M 为样品称样量。

7.2.1.8 标准规定：本品按干燥品计算，含胆酸（C 24H 40O 5）不得少于13.0%。

7.2.2 胆红素
7.2.2.1 仪器与设备:紫外分光光度计,万分之一分析天平,容量瓶，超声清洗机。

7.2.2.2 试药与试剂：三氧甲烷。

7.2.2.3 对照品溶液的制备：取胆红素对照品1Omg,精密称定，置100ml 棕色量瓶中，加三氯甲烷80ml,超声处理使充分溶解，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀。

精密量取10ml, 置50ml 棕色量瓶中，用三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml 中含胆红素20μg)。

7.2.2.4 标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液4m1、5m1、6m1、7ml 与8ml ，分别置25ml 棕色量瓶中，用三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，照紫外一可见分光光度法(附录V A)，在453nm 处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

7.2.2.5 供试品溶液的制备：本品80mg,精密称定，置100ml 棕色量瓶中，加三氯甲烷80ml 超声处理使充分溶解，用三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液做为供试品溶液。

7.2.2.6 测定方法：以相应的试剂为空白，在453nm 波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含胆红素的重量，计算，即得。

7.2.2.7 计算公式:
含量=
%100-1⨯⨯水份）
（表
M M
式中：M 表为从标准曲线中读取的胆红素含量；
M 为样品称样量。

7.2.2.8 标准规定: 本品按干燥品计算，含胆红素（C 33H 36N 4O 6）不得少于0.63% 。

8 复检规定
若检验结果与标准不符或异常，则上报质检处，按《化验室超标结果与非期望结果处理规程》处理。

9 取样办法
参见《原料取样规程》。

10 检验记录填写
检验要及时填写《人工牛黄检验原始记录》和相关仪器使用记录，并出具检验报告单，详见《检验记录管理规程》。

相关文件和记录
变更/修订记录：
(以下为空白)。