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分子生物学试验报告
分⼦⽣物学试验报告分⼦⽣物学实验报告实验⼀真核基因组DNA的制备与分析⼀、实验步骤1、材料处理（1）取0.5cm的⽼⿏尾巴组织块，⽤⽣理盐⽔洗净，剪碎⾄糜状。
（2）将上述组织碎末加⼊盛有500uL裂解液的2mL离⼼管中，37℃⽔浴1h。
2、⽤蛋⽩酶K和苯酚处理细胞裂解液（1）加50uL蛋⽩酶K，温和的将酶混⼊粘滞的溶液中。
（2）将裂解细胞的悬浮液置于55℃⽔浴3h，不时的温和旋动该粘滞溶液，⾄看不到明显的组织块为⽌。
（3）将溶液冷却⾄室温，加500uL的Tris平衡酚，缓慢的来回颠倒离⼼管⾄两相混合形成乳浊液，于室温以5000g离⼼10min，使两相分开。
（4）⽤⼤⼝径移液管将上层粘稠的⽔相移到⼀洁净的离⼼管中，⽤酚重复抽提2次。
（5）第三次酚抽提后，将⽔相移⾄另⼀离⼼管中，于室温加100uL的10M⼄酸铵和1000uL 的⼄醇，转动离⼼管使溶液充分混合，DNA⽴即形成沉淀，通常可⽤吸管将沉淀从⼄醇溶液中移除。
如果DNA沉淀为碎⽚，则与室温离⼼收集。
（6）DNA沉淀⽤70%的⼄醇洗涤，离⼼收集。
将离⼼管于室温下放置实验台上，直⾄⼄醇挥发殆尽。
不要使DNA沉淀完全⼲燥，否则极难溶解。
（7）待沉淀将近透明后加适量的TE溶解DNA，通常需要12-24⼩时使DNA完全溶解，将DNA 溶液存于4℃.3、DNA琼脂糖凝胶电泳检测（1）制备0.6%的琼脂糖凝胶。
（2）取适量DNA样品，与凝胶上样缓冲液混合，加⾄上述凝胶上样孔内。
（3）取适量标准DNA溶液同样加⾄凝胶上样孔内。
（4）电泳，电压为1V/cm，距离以阳极⾄阴极为准。
（5）电泳结束后，将凝胶放⼊含溴化⼄锭（0.5ug/mL）的⽔中室温浸染10min，⽤紫外灯观察凝胶和照相。
⼆、实验结果如上图所⽰，基因组DNA在0.6%琼脂糖凝胶上跑出30kb左右的单⼀条带（λDNA/Hin d III Marker），但有个别组的样没有明显的条带出现。
三、结果分析提取的基因组DNA⽚段只有30kb左右，偏⼩。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告
实验目的：
通过本次实验，我们旨在探究DNA复制、基因表达和蛋白质合成等分子生物学的基本原理，加深对分子水平生物学过程的理解，培养实验操作技能和科学思维能力。
实验材料与方法：
1. 实验材料：大肠杆菌（E. coli）细菌菌斑、DNA提取试剂盒、PCR试剂盒、琼脂糖、琼脂糖电泳试剂、PCR扩增仪、电泳仪等。
2. 实验步骤：
a. DNA提取：取一支含E. coli细菌菌斑的移液管，用DNA提取试剂盒提取DNA。
b. PCR扩增：将提取的DNA加入PCR试剂盒中进行PCR扩增反应。
c. 原核表达：将扩增后的DNA片段转入大肠杆菌进行原核表达。
d. SDS-PAGE电泳：将蛋白质样品加入琼脂糖凝胶，通过电泳进行蛋白质分子量的分离。
实验结果与分析：
1. DNA提取：成功提取到E. coli细菌的DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳观察到DNA的带型。
2. PCR扩增：成功扩增出目标DNA片段，并经过验证测序结果正确。
3. 原核表达：大肠杆菌成功表达了目标蛋白质，通过SDS-PAGE电泳观察到目标蛋白质的条带。
4. SDS-PAGE电泳：观察到蛋白质的分子量差异，验证了蛋白质的分离效果。
结论与讨论：
通过本次实验，我们成功实现了DNA提取、PCR扩增、原核表达和蛋白质分离等分子生物学实验步骤，从而全面了解了分子生物学过程的基本原理。
实验结果表明，实验操作规范，结果可靠，为今后的科研工作和实验基础奠定了坚实的基础。
同时，也发现了实验中的一些不足之处，提出了改进的建议，为进一步的研究工作提供了参考。
参考文献：
无。
现代分子生物学实验
分子生物学实验一、课程纲要说明分子生物学实验是生物科学的一门主干实验课程。
分子生物学技术作为现代生物技术中最为先进的实验手段之一，现在已经渗透到生命科学、医学及工农业生产等各个领域中，是一种非常重要的现代技术手段。
通过此实验教学使学生了解分子生物学技术发展的现状、未来及应用，使学生掌握分子生物学技术的基本原理及相关的实验操作技术，从而使学生更进一步加深理解和巩固所学的分子生物学课程的理论知识。
二、实验对象：生物科学专业本科学生三、实验学时数：18学时四、实验项目及内容：实验一质粒DNA的提取及酶切一、实验目的通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒和酶切的方法。
二、实验内容1、碱裂解法提取质粒DNA；2、酶切DNA。
三、实验仪器及用品1、仪器：恒温培养箱、恒温摇床、台式高速离心机、高压灭菌锅、指管（微量离心管）、指管（微量离心管）架、加样枪、移液器架子、超声波清洗仪、超净工作台、稳压稳流电泳仪、多用途紫外分析仪、微波炉、恒温磁力搅拌器2、用（药）品：葡萄糖、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、乙二胺四乙酸（EDTA）、NaOH、SDS、乙酸、钾、冰乙酸、氯仿、乙醇、胰RNA酶、氨卡青霉素、蔗糖、溴酚蓝、8-羟基喹啉、β疏基乙醇、盐酸、含pUC19质粒、EcoRI吸头、小指管四、实验人数：每班分2次，每次分6~8组，每组3~4人。
五、实验学时：3学时六、实验类型：设计实验要求：选修实验二琼脂糖凝胶电泳检测DNA一、实验目的：通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。
二、实验内容：1．制备琼脂糖凝胶2．加样3．电泳4．染色5．观察电泳结果、拍照三、实验仪器及用品1．仪器：恒温培养箱、琼脂糖凝胶电泳系统、台式离心机、高压灭菌锅、紫外线透射仪、指管（微量离心管）、指管（微量离心管）架2．用（药）品：蔗糖、三羟甲基、氨基甲烷（Tris）、乙二胺四乙酸（EDTA）、硼酸DNA marker、溴酚蓝、溴化乙、含pUC19质粒、吸头四、实验人数：每班分2次，每次分6---8组，每组3~4人。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告分子生物学实验报告引言分子生物学是一门研究生物大分子结构、功能和相互作用的学科，通过实验手段揭示生命现象的分子机理。
本实验旨在探究DNA复制过程中的关键步骤，以及RNA转录和蛋白质翻译的基本原理。
实验一：DNA复制DNA复制是细胞分裂过程中必不可少的步骤，它保证了遗传信息的传递和维持。
本实验通过模拟DNA复制过程，研究DNA复制酶的作用和复制的准确性。
材料：- DNA模板- DNA聚合酶- 引物- dNTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、DNA聚合酶、引物、dNTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察DNA复制产物。
结果：通过凝胶电泳分析，我们观察到DNA复制产物的出现。
这表明DNA聚合酶能够在模板DNA上合成新的DNA链，并且复制的过程较为准确。
讨论：DNA复制的准确性是生命传递遗传信息的基础。
DNA聚合酶具有校正功能，能够识别和修复错误的碱基配对。
这种精确性保证了基因组的稳定性和可靠性。
实验二：RNA转录RNA转录是将DNA信息转录成RNA的过程，它是基因表达的第一步。
本实验旨在研究RNA转录的机制和调控。
材料：- DNA模板- RNA聚合酶- 引物- NTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、RNA聚合酶、引物、NTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察转录产物。
结果：凝胶电泳分析显示出RNA转录产物的出现。
这表明RNA聚合酶能够在DNA模板上合成RNA链。
讨论：RNA转录是基因表达的第一步，它决定了细胞内特定基因的表达水平。
RNA聚合酶通过与DNA模板的互作用，选择性地合成特定的RNA链。
这种选择性转录是基因调控的关键。
实验三：蛋白质翻译蛋白质翻译是将RNA信息翻译成蛋白质的过程，它是生物体内蛋白质合成的关键步骤。
分子生物学实验报告全解(有图有真相)
分子生物学实验报告慕蓝有志班梦想学院目录实验一细菌的培养 (2)实验二质粒DNA的提取 (4)实验三琼脂糖凝胶电泳法检测DNA (7)实验四质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 (9)实验五聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA (11)实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 (14)实验七RNA分离与纯化 (17)实验八RT-PCR扩增目的基因cDNA (19)实验九质粒载体和外源DNA的连接反应 (21)实验十感受态细胞的制备及转化 (23)实验十一克隆的筛选和快速鉴定 (25)实验十二地高辛标记的Southern杂交 (27)实验十三阿拉伯糖诱导绿色荧光蛋白的表达 (31)思考题 (32)分子实验心得总结 (33)实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。
二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。
质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。
特别是常用的大肠杆菌。
大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。
它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。
当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。
然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。
最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。
此时菌体密度可达到1×109~2×109/mL。
培养基可以是固体的培养基，也可以是液体培养基。
实验室中最常用的是LB培养基。
三、实验材料、试剂与主要仪器（一）实验材料大肠杆菌（二）试剂1. 胰蛋白胨2. 酵母提取物3. 氯化钠4. 1mol/L NaOH5. 琼脂粉6. 抗生素（氨苄青霉素、卡那霉素等）（三）仪器1. 培养皿2. 带帽试管3. 涂布器4. 灭菌锅5. 无菌操作台（含酒精灯、接种环、灭菌牙签等）6. 恒温摇床四、操作步骤（一）LB培养基的配制配制每升培养基，应在950m1去离子水中加入：细菌培养用胰蛋白胨10g细菌培养用酵母提取物5gNaCl 10g摇动容器直至溶质完全溶解，用1mol/L NaOH调节pH位至7.0。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告重组质粒的pcr验证（目的基因的pcr扩增）姓名:xxx学号：xxx专业：xxx界别：xxx同组者：xxxx一．实验目的（1）自学掌控pcr反应的基本原理和实验技术。
（2）了解引物设计的基本要求。
1.pcr基本原理聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)，简称pcr，是一种分子生物学技术，用于在体外快速扩增dna，类似dna的细胞内复制过程:由一对引物介导，通过温度的调节，使双链dna变性为单链dna、单链dna能与引物复性（退火）成为引物-dna单链复合物、以及在dntps存在下dna聚合酶能使引物沿单链模板延伸成为双链dna（引物的延伸）；这种热变性-复性-延伸的过程，就是一个pcr循环；一般通过20-30个循环之后，就可获得大量的要扩增的dna片段。
pcr技术的基本原理类似dna的天然激活过程，其特异性依赖与靶序列两端优势互补的寡核苷酸引物。
pcr由变性--淬火--延展三个基本反应步骤形成：①模板dna的变性：模板dna经加热至90~95℃左右一定时间后，使模板dna双链或经pcr扩增形成的双链dna解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板dna与引物的淬火(复性)：模板dna经冷却变性成单链后，温度降到55℃左右，引物与模板dna单链的优势互补序列接合融合；③引物的延伸：dna模板--引物结合物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板dna链互补的复制链。
经过“变性—淬火—延展”三个过程就可以赢得代莱dna分子，而且这种崭新dna分子又可以沦为下次循环的模板。
因此，变性、淬火和延展循环反复25~30次后，即可从少量的模板dna中扩充出来大量的目的产物。
pcr引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板dna序列，因此，引物的优劣直接关系到pcr的特异性与成功与否。
分子生物学实验3篇
分子生物学实验第一篇：PCR技术在分子生物学中的应用PCR（聚合酶链式反应）是分子生物学中一项广泛应用的技术，被用于DNA的扩增和检测。
PCR技术已经成为了分子生物学和生物医学研究的基础技术之一。
PCR技术被广泛的应用于遗传学、人类学、医学研究、植物学和动物学研究等各领域。
PCR技术的基本原理是：通过提取DNA，将DNA特异性引物与模板DNA相结合，利用热稳定DNA聚合酶和四种脱氧核苷酸为反应体系提供能量，使其在一定条件下循环扩增目标DNA片段。
通过PCR扩增后的DNA片段可以进行进一步的分析和检测。
PCR技术的扩增具有明显的优势，可同时扩增不同长度的DNA片段，扩增时间短，扩增的精度和重复性高，且所需的样本量小。
PCR技术在分子诊断、基因组学和分子系统学等领域的应用不断扩展和深化。
随着PCR技术的不断发展，PCR在分子生物学研究中的应用越来越广泛，成为分子生物学研究的重要工具。
第二篇：RNA干扰技术在分子生物学中的应用RNA干扰（RNAi）是分子生物学中一种重要的现象，其中小分子RNA片段通过RNAi途径参与靶基因的沉默和调节。
RNAi技术是人类基因功能研究中最具前途的一种技术之一。
RNA干扰技术的基本原理是通过利用RNAi分子的特异性配对功能，引导RNAi分子与靶基因mRNA相结合，导致mRNA的降解和翻译的抑制，实现对基因表达的调控。
RNA干扰技术在分子生物学研究中有广泛的应用，如：功能基因的筛选、基因表达调节、基因功能验证等。
RNA干扰技术具有多种优点，如高效性、特异性强、节约时间、资源和成本等方面的优势，逐步成为生命科学研究中的重要工具。
在研究过程中，RNA干扰技术常用于寻找分子病理学中新的治疗靶点，鉴定靶点基因和靶点蛋白，为新药物的开发和临床治疗提供了重要的理论和实验基础。
第三篇：基因克隆技术在分子生物学中的应用基因克隆技术始于20世纪70年代，是指将DNA分子导入到载体中，使其在细胞中进行表达的过程。
分子生物学实验_2
1 实验概述分子生物学试验指导1 实验概述1.1 实验目的实验过程中, 主要通过碱裂解法提取质粒DNA.对质粒进行双酶切、并连接构建成重组DNA分子、大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备、感受态细胞的转化以及目的蛋白质gfp 的正常表达, 来完成一系列分子生物学基础实验。
通过本实验, 学习并掌握碱裂解法、双酶切、氯化钙法制备感受态细胞的制备及采用α互补现象进行重组DNA鉴定的原理和方法。
1.2 实验原理质粒是细菌内共生型遗传因子, 它能在细菌中垂直遗传并且赋予宿主细胞特定的表型, 经过改造的基因工程质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的重要媒介, 这种基因的运载工具在基因工程中具有极广泛的用途。
本次实验中, 分子克隆质粒载体T所携带的外源基因是gfp绿色荧光蛋白, 实验的最终目的是将gfp基因插入表达载体P中, 组成重组子, 并导入到大肠杆菌细胞中并诱导其表达, 培养出绿色的大肠杆菌菌落。
为此, 我们要利用碱变性法将大肠杆菌中的质粒DNA提取出来, 并通过HandⅢ和NCO Ⅰ两种酶的双酶切作用, 从而获得目的外源基因片段gfp和表达载体-P质粒的DNA, 然后通过连接酶连接后形成重组子, 并通过氯化钙法导入大肠杆菌感受态细胞中, 让其在含有Amp和IPTG的LB琼脂平板上生长繁殖, 最后通过观察大肠杆菌能否在含有Amp 和IPTG的LB平板上长出绿色的菌落, 来判断gfp基因工程菌的构建效果。
广东工业大学现代分子生物技术实验报告2 实验流程2.1 实验安排表实验内容时间安排质粒T、质粒P的提取 3 h电泳检测质粒提取效果30～45 min确定质粒提取成功后, 利用HindⅢ、NcoⅠ这2种限制性内10～11 h切酶分别对质粒T、质粒P进行双酶切电泳检测酶切情况, 若酶切成功, 利用试剂盒回收DNA片断45 min利用T4 DNA连接酶进行连接14～16 h大肠杆菌感受态细胞的制备 3 h转化（gfp基因导入受体细胞） 2 h 重组子的筛选（在含有Amp的LB平板上筛选）12～16 h诱导表达与鉴定（加入诱导物IPTG诱导gfp表达）12～16 h2.2 实验流程图①质粒DNA的提取与纯化碱液裂解法；乙醇洗涤纯化（T-gfp质粒作为克隆载体、P32作为表达载体）②通过观察电泳图片, 来鉴定T、P两种质粒DNA的提取结果琼脂糖凝胶电泳的方法③对成功提取的T、P两种质粒DNA进行双酶切限制性内切酶Han dⅢ、NcoⅠ④T-gfp、P两种质粒的DNA片段的回收割胶（试剂盒快速回收）用刀片把凝胶上的目的DNA条带割取下来3 实验操作方法⑤连接T-gfp、P两种质粒的目的DNA T4噬菌体DNA连接酶（重组DNA分子的构建）⑥大肠杆菌感受态细胞的制备氯化钙法⑦将连接后的重组DNA分子导入大肠杆菌感受态细胞感受态细胞的转化⑧重组子的筛选含有AMP r的重组子才能在AMP平板上生长⑨将含有gfp、AMP r两种目的基因的重组子进行诱导表达重组DNA分子的鉴定在平板上加入底物IPTGgfp绿色荧光蛋白基因被诱导表达⑩gfp基因只有在诱导物IPTG和底物X-gal的存在时, 才能正常表达, 在平板上生成绿色的菌落构建出含有gfp绿色荧光蛋白基因的工程菌图2.1 gfp基因工程菌的构建与表达广东工业大学现代分子生物技术实验报告3实验操作方法3.1 质粒DNA的提取3.1.1 实验概述1.分子克隆载体载体是指运载外源DNA有效进入受体细胞内的工具。
分子生物学-实验二 PCR产物T-A连接及连接产物转化-精选文档
实验结束： • 整理实验台； • 值日生值日；
• 写实验报告。
2. 42oC，45秒。然后迅速放回冰中 5 分钟；
6. 将上述菌液涂匀于含有Amp的LB琼脂培养板；
7. 待菌液被平板吸收后，将平皿倒置于37oC孵箱中培养12-16h。
思考题：
1. 影响T-A连接效率的因素有哪些？ 2. 感受态细胞制备、转化过程中的主要注意事项是 什么？转化后的平皿为什么需要倒置培养？
GAPDH gene 片段 (746bp)
实验第二部分 PCR产物与T载体的连接
T-A 连接原理：
1. Taq DNA聚合酶：PCR产物 的3’端突出一个A
A-3
2. 商业化的T载体：在3’端多 出一个T
5
T -3
3- T
5
3 -A
T - Vector
3. 两者的互补碱基先退火结合(粘 性末端连接)，然后连接酶在 缺口形成磷酸二酯键。
T-A连接的步骤：
1. 按下列配方进行连接反应： 回收的PCR产物（DNA片段） T-载体 10 X Ligation buffer T4 DNA ligase 终体积 7 1 l l 1 l 1 l 10 l
注：最后加入工具酶（T4 DNA ligase ） 2. 轻弹管底混合，离心机甩一下。 3. 将连接反应管置25℃水浴20min。
实验第一部分pcr产物的电泳及回收gapdhgene片段746bp750bp2000bp1000bp500bp250bp100bpmarkerpcr产物的电泳结果观察及分析gapdhgene片段746bp750bp2000bp1000bp500bp250bp100bpmarker1在uv灯下用手术刀片将含dna片段的琼脂糖凝胶切下放入封口膜中
分子生物学实验
分子生物学实验分子生物学实验I. 实验概述分子生物学是生物学的一个重要分支，主要研究生物分子的结构、功能及其在生命过程中的作用。
在现代生命科学研究中，分子生物学技术的应用越来越广泛，包括基因克隆、基因表达、蛋白质结构、信号转导等多个方面。
本实验将介绍几种基本的分子生物学实验操作，包括DNA的提取、PCR扩增、电泳检测和蛋白质的SDS-PAGE分析，旨在提高学生对分子生物学基础知识和实验技能的掌握。
II. 实验材料及设备1. 细菌培养基、磷酸盐缓冲液、EDTA、裂解液等试剂；2. 离心管、洗涤管、PCR管、电泳槽等设备；3. 离心机、PCR仪、电泳仪等设备。
III. 实验步骤1. DNA的提取(1) 收集细胞收集需要提取DNA的细胞，如细菌、白细胞等。
将细胞转移到1.5mL离心管中。
(2) 细胞裂解加入200μl裂解液，轻轻摇晃离心管，使细胞充分裂解。
离心管可置于65°C水浴中处理10分钟，使DNA完全裂解。
(3) DNA提取加入500μl磷酸盐缓冲液和10μl EDTA，混匀后离心5分钟。
取上清液转移至新的离心管中，加入等体积的异丙醇，并轻轻倒置，使DNA在异丙醇界面上结团。
放置室温下10分钟，使用洗涤管将DNA结团转移到另一离心管中。
加入70%乙醇溶液洗涤2-3次，最后去除乙醇，用无菌水溶解DNA。
2. PCR扩增(1) 设计引物、制备PCR反应液按照所需扩增的DNA序列设计引物，制备PCR反应液，包括所需模板DNA、引物、Taq聚合酶、MgCl2等。
(2) PCR条件将PCR反应管放置PCR仪中，经过若干个循环，达到最终PCR产物的扩增。
PCR条件通常应选择对应引物特异性、Tm温度适中，并根据Taq聚合酶的活性和反应体系的最适条件优化所得。
常用的PCR条件为95℃预变性5min，94℃变性30s，Tm温度退火30s，72℃延伸1min，循环30-35次，最后72℃加延伸10min。
分子生物学实验方案设计（五篇模版）
分子生物学实验方案设计（五篇模版）第一篇：分子生物学实验方案设计梅衣属ITS条形码物种的快速鉴定实验目的：一、学习并熟练地衣DNA提取技术二、掌握PCR技术的原理及操作三、DNA条形码技术的应用实验技术路线：1、地衣总DNA的提取2、PCR扩增3、基因测序4、基因序列对比地衣总DNA提取：1.取带有子囊盘或未有子囊盘的带藻地衣体30~300mg，用无菌水冲洗，除去表面杂质，再用DNA提取液浸泡2~3h（4℃）。
2.将地衣体取出，滤纸吸干表面液体，剪碎放于预冷的研钵中，加入液氮研磨至粉末状。
3.将粉末小心、全部转入1.5ml离心管中，加入400μL DNA提取液，混匀。
4.加入10% SDS 50μL、氯化苄150μL，振荡混合，于50℃保温1h，每隔10min振荡混合一次。
5.保温1h后，每管加入3mol/L NaAc 50μL，混匀冰浴15min.6.用等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）和等体积酚：氯仿（1：1）各抽提一次，直至无白色沉淀为止。
7.移上清液于另一离心管，加入2倍体积无水乙醇，4℃放置2~3h，15000r/min，离心10min（4℃），弃上清液。
8.将沉淀用70%乙醇冲洗2次后，真空干燥，再加入50~80μL TE 缓冲液，保存于冰箱（4℃）PCR扩增：稀释50 倍用于后续 PCR 操作。
真菌 ITS rDNA 由通用引物 ITS5（5′-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3′）、ITS4（5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′）。
PCR 反应条件：95℃预变性5min；95℃变性30s，52℃退火30s，72℃延伸 2min，反应 32 个循环；72℃延伸 10min，4℃保存。
反应结束后，PCR 产物通过0.8%的琼脂糖凝胶电泳检验,ABI3730DNA 分析仪测序。
序列比对：所获测序结果序列包含小亚基部分结尾序列、ITS1-5.8S-ITS2、大亚基部分起始序列，去除大小亚基部分序列后所得片段大小约500bp，即为所需的序列利用 DNAMAN（Lynnon Biosoft）软件将测序结果同 GenBank 下载数据进行比对分析，如果序列长度不同，则只保留共有区段。
分子生物学实验
分子生物学实验实验一、菌株复壮与单菌落菌株的获取一、实验目的学习细菌培养的LB培养基及抗生素抗性筛选培养基的配制，掌握高压灭菌和获取细菌单菌落菌株两种基本实验操作技能。
二、实验材料、设备及试剂1、实验材料大肠杆菌（E. coli）DH5α菌株：R-，M-，Amp-2、实验设备恒温摇床，电热恒温培养箱，无菌工作台，高压灭菌锅3、试剂酵母浸膏，蛋白胨，氯化钠，琼脂，卡那霉素三、实验步骤液体LB（Luria-Bertain）培养基配方：蛋白胨(typtone) 1.0% （1 g/100 ml）酵母提取物(Yeast extraction)0.5% （0.5g/100 ml）氯化钠 1.0% （1 g/100 ml）PH 7.0固体LB培养基：每100 ml液体培养基中加入1.5g琼脂粉请按试剂瓶上的编号使用相应编号的药勺取药，防止药品相互污染！(1)每组按上述液体LB培养基配方，以配制100ml的量称取药品放入烧杯。
(2)用量筒量取约80 ml 蒸馏水注入烧杯中，玻棒搅拌使药品完全溶解后用100ml量筒定容至100ml。
(3)pH试纸检测pH值，并用1 N NaOH或1 N HCl调节pH值至7.0。
(4)将100ml溶液分装入两个三角瓶，每瓶为50ml。
(5)按固体培养基配方称取适量琼脂粉分别放入两个三角瓶中，以配制成两瓶50ml固体LB培养基。
(6)两个三角瓶分别用锡纸包扎瓶口。
并用记号笔在三角瓶上标注各组标记。
(7)把装有培养基三角瓶放入灭菌锅中，盖上锅盖，以对称方式拧紧锅盖，打开排气阀通电加热，至有连续的白色水蒸气从排气阀排出时，关闭排气阀。
当高压锅温度（气压）指示器指示锅内温度升高至121℃（0.1Mpa）时，调节电压（或利用手动开关电源的方式）使高压锅稳定在该温度（压力）下20 min，然后断开电源。
待指示器指示压力降为0时，方可打开排气阀，然后再打开锅盖小心取出锅内物品。
(8)取出三角瓶后，在酒精灯火焰旁进行下述操作。
分子生物学实验
实验一植物基因组DNA的提取及其定性定量分析【实验目的】通过本实验学习利用CTAB法从植物组织中提取DNA并通过琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度法对DNA进行定性定量分析。
【实验原理】CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)是一种阳离子型去污剂，可溶解细胞膜，在高离子强度下(大于0.7 M NaCl)，与蛋白和中性多糖形成复合物沉淀出来。
利用液氮对植物组织进行研磨，从而破碎细胞。
然后加入CTAB缓冲液将DNA溶解出来，再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，最后经乙醇沉淀得到DNA。
琼脂糖凝胶电泳是分离和纯化DNA片段的常用技术。
把DNA样品加入到一块包含电解质的多孔支持介质(琼脂糖凝胶)的样品孔中，并置于静电场上。
DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。
由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此，在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA 分子本身的大小和构型。
DNA分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系，分子量小的DNA分子比分子量大的DNA分子迁移速率快，迁移距离远，由此得到分离。
凝胶电泳也可以分离相对分子质量相同，但构型不同的DNA分子，超螺旋质粒DNA(cccDNA)泳动最快，其次为线状DNA(L DNA)，最慢的为开环质粒DNA(ocDNA)。
核酸分子(DNA或RNA)由于含有嘌呤环和嘧啶环的共轭双键，在260 nm波长处有特异的紫外吸收峰，其吸收强度与核酸的浓度成正比，这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础。
1 OD260相当于dsDNA 50 μg/m l，ssDNA 33 μg/m l和ssRNA 40 μg/m l。
可以此来计算核酸样品的浓度。
紫外分光光度法不但能确定核酸的浓度，还可通过测定260 nm和280 nm 的紫外线吸收值的比值(A260/A280)估计核酸的纯度，若DNA的A260/A280比值高于2.0，则可能有RNA污染，低于1.8则有蛋白质污染。
分子实验[优秀范文五篇]
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分子实验[优秀范文五篇]第一篇：分子实验分子生物学实验设计方案学院：专业班级：课程：实验名称：组员：实验日期：一、实验目的1、学习与掌握利用ITS序列鉴定真菌的原理；2、掌握用ITS序列鉴定真菌的方法有步骤。
二、实验原理1、菌物是真核生物的重要类别，传统的菌物分类以子实体形态特征和生理生化指标为分类基础，由于部分菌物的子实体不易获得，形态特征不易掌握，少数形态特征和生理生化指标随着环境的变化而不稳定，是传统的菌物鉴定工作困难或分类系统意见分歧。
内转录间隔区ITS(internal transcribed space), 位于5.8S和18S之间（ITS1）以及5.8S和28SrDNA之间(ITS2)，ITS1和ITS2常被合称为ITS，并且5.8SRNA基因也被包括在ITS之内。
近年来，利用真核生物在rDNA 的ITS区域既具保守性又在科、属、种水平上均有特异性序列的特性，对ITS区进行PCR扩增、测序。
随着核糖体rDNA ITS序列分析技术在菌物研究中的应用，一些分类地位不明确、亲缘关系不清楚的物种通过该技术得到了解决，一些重要的菌物遗传信息得到阐明。
2、ITS（Internal Transcribed Spacer）：内转录间隔区。
是真菌核糖体RNA（rRNA）基因非转录区的一部分。
用于真菌鉴定的ITS 序列通常包括ITS1、5.8 S 和ITS2。
真菌ITS 区域长度一般在650 ～750 bp(碱基对)。
ITS（Internal Transcribed Spacer）鉴定是指对ITS序列进行DNA测序，通过将测序得到的ITS序列与已知真菌ITS序列比较，从而获得未知真菌种属信息的一种方法。
ITS鉴定的原理：rDNA 上的5.8、18 和28 SrRNA 基因有极大的保守性, 即存在着广泛的异种同源性。
而由于ITS 区不加入成熟核糖体, 所以ITS 片段在进化过程中承受的自然选择压力非常小,因此能容忍更多的变异。
分子生物学实验-文档资料
提纯的思路
1.
基因组DNA的特性：分子量较大、易断（如何保证 DNA分子的完整性？）
2. 组织和细胞的破碎 3. 要去除的物质： 蛋白、多糖、脂类、RNA和小分子物质
一、材料 哺乳动物新鲜组织。
二、设备 移液管 高速冷冻离心机 台式离心机 水浴锅。
三、试剂：
1. 组织匀浆液 200 mL 灭菌备用 10mmol/L Tris-HCl pH 8.0
可能的结果：
由于基因组DNA比较难溶、且容易被降解，电泳时经常 会出现弥散的或不均一的条带（如左图）。所以实验时 一定要注意机械力对大分子DNA的破坏作用，如避免振 荡、使用扩口枪头等。另外要适当的延长溶解时间。
实验的常见问题、关键问题及难点：
基因组DNA的断裂、 蛋白和色素去除不干净 基因组DNA难溶、电泳时凝胶易碎
超净台中干燥加 50uL TE, 40C溶解过夜，-200C保存
基因组DNA的检测
前述方法得到的DNA一般可以用作Southern, RFLP、 PCR等分析。由于所用材料的不同,得到的DNA产量及 质量均不同,有时DNA中含有酚类和多糖类物质,会影 响酶切和PCR的效果。所以获得基因组DNA后,均需检 测DNA的产量和质量。
不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方 法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构 及所含的成分不同，分离方法也有差异。在提取某种特殊组 织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获 得可用的DNA大分子。尤其是组织中的多糖和酶类物质对 随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类 物质的材料提取基因组DNA时, 应考虑除去多糖和酚类物质。 本实验以动物肝脏为材料,学习基因组DNA提取的一般方法。
分子生物学实验
分子生物学实验报告一.实验内容1.基因组的获取DNA/RNA的提取和电泳2.将基因组进行PCR扩增,电泳3.将DNA电泳片断切胶回收4.扩增,回收后进行连接载体（PMD18 puc18 载体）A.B片断比例1:25.转化连接的片断转化到感受态细菌中二.实验目的1.基因组的获取:掌握最常用的提取基因的方法，了解琼脂糖电泳的基本原理，掌握基本的操作方法2.PCR过程:了解反转录PCR(RT-PCR)的基本原理,并掌握RT-PCR的基本操作过程3.切胶回收:了解分离纯化DNA片段中的污染物方法和原理4.连接载体:学习提取基因工程菌中运载基因的载体，掌握最常用的体躯质粒DNA的方法5.转化:以质粒转化感受态细胞为例，学习转化的基本原理及方法6.主要目的：通过掌握质粒的提取、RNA的提取、RT-PCR技术、琼脂糖凝胶电泳以及胶回收、DNA的转化和酶切等实验，将这些实验连成一片，掌握一套验证目的基因功能的流程。
三.实验原理1.基因组的获取①DNA提取本实验采用碱裂解法进行质粒的小量制备。
十二烷基磺酸钠（SDS SDS）是一种阴离子表面活性剂，它既能使细菌细胞裂解，又能使一些蛋白质变性。
用SDS 处理细菌后，会导致细菌细胞破裂，释放出质粒DNA 和染色体DNA 。
两种DNA 在强碱环境都会变性。
当加入pH4.8 的酸性乙酸钾降低溶液pH 值后，质粒DNA 将迅速复性，而染色体DNA 分子巨大，难以复性。
通过离心，大部分细胞碎片、染色体DNA 、RNA 及蛋白质沉淀（SDS 的作用下）除去，而质粒DNA 留在上清中。
再用异丙醇沉淀、乙醇洗涤，可得到纯化的质粒DNA 。
②RNA提取Trizol 是一种新型总RNA 抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。
TRIzol的主要成分是酚。
主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。
酚虽可有效的变性蛋白质，但是它不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase。
分子生物学实验 (1)
实验一感受态细胞制备（4学时）一、实验目的：通过本实验，掌握大肠杆菌感受态细胞制备的方法和技术。
二、实验原理：细菌处于容易吸收外源DNA的状态称感受态。
其原理是细菌处于0℃、CaCl2的低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。
三、仪器、材料和试剂（一）仪器：1.超净工作台2.离心机3.恒温摇床4.高压灭菌锅5.移液枪6.振荡器7.天平8.恒温水浴9.离心管10.锥形瓶（二）材料：大肠杆菌DH5α（三）试剂：1. 0.1mol/l CaCl2溶液 2. LB液体培养基 3.70%酒精四、实验步骤1.从大肠杆菌DH5α平板上挑取一个单菌落接于3ml LB液体培养基的试管中，37℃震荡培养过夜。
2.取1 ml菌夜转接到一个含有50ml LB液体培养基的锥形瓶中，37℃震荡培养2-3h（此时，A600应在0.4-0.5之间，细胞数务必﹤108/ml，此为实验成功的关键）。
3.用移液枪取2ml菌液转移到离心管中，冰上放置10min。
（1000µl的枪，蓝色枪头，旋转不要太快，不能超过量程，每组至少做6管）4.离心10min（4000r/min）。
（离心机，严禁空转和不平衡，使用之前用太平平衡，对称放。
上离心机之前，用卫生纸擦离心管。
不要贴标签。
用记号笔标记就可以。
盖紧离心管口。
盖好离心机内盖）5.倒出培养液，将管倒置1min，以使培养液流尽。
（在超净工作台中操作）6.用冰冷的0.1mol/l CaCl2200µl悬浮沉淀（用振荡器），立即放在冰上保温30min。
（200µl的枪，黄色枪头）7.低温离心10min（4000r/min），回收细胞。
8.用冰冷的0.1mol/l CaCl2 200µl悬浮细胞（用振荡器）。
9.分装细胞，毎200ul一份，此细胞为感受态细胞。
五、实验结果：有白色细胞细胞沉淀出现，该白色沉淀即为大肠杆菌感受态细胞。
六、分析讨论：1.为什么实验步骤中A600应在0.4-0.5之间，细胞数务必﹤108/ml？2.步骤6和8中都加入了CaCl2目的一样吗？它们的作用分别是什么？3.本实验的注意事项有哪些？实验二阳性克隆的筛选与鉴定、质粒DNA的提取（5学时）一、实验目的：通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒的技术和克隆载体的筛选与鉴定方法。
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分子生物学实验文档分子生物学基础实验分子生物学实验技术已成为生物化学及分子生物学以及相关学科院系教学科研不可缺少的一部分。
为提高学生在分子生物学技术方面的动手能力，生物技术综合实验室主要开设常用而基本的分子生物学实验技术。
它的内容包括质粒DNA的制备；DNA的重组；PCR基因扩增等等。
实验一质粒DNA的小量制备一、实验原理要把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进细胞中去进行繁殖和表达，需要运载工具，携带外源基因进入受体细胞的这种工具就叫载体（vector）。
载体的设计和应用是DNA体外重组的重要条件。
作为基因工程的载体必须具备下列条件:(1)是一个复制子，载体有复制点才能使与它结合的外源基因复制繁殖；（2）载体在受体细胞中能大量增殖，只有高复制率才能使外源基因在受体细胞中大量扩增；（3）载体DNA链上有1到几个限制性内切酶的单一识别与切割位点，便于外源基因的插入；（4）载体具有选择性的遗传标记，如有抗四环素基因（Tc r），抗新霉素基因（Ne r）等，以此知道它是否已进入受体细胞，也可根据这个标记将受体细胞从其他细胞中分离筛选出来。
细菌质粒具备上述条件，它是基因工程中常用的载体之一。
质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小在1～120kb之间，具有双链闭合环状结构的DNA分子，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。
质粒具有自主复制和转录能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。
它可独立游离在细胞质内，也可以整合到细菌染色体中，它离开宿主的细胞就不能存活，而它控制的许多生物学功能也是对宿主细胞的补偿。
质粒在细胞内的复制，一般分为两种类型：严密控制型（stringent control）和松弛控制型（relaxed control）。
前者只在细胞周期的一定阶段进行复制，染色体不复制时，它也不复制。
每个细胞内只含有1个或几个质粒分子。
后者的质粒在整个细胞周期中随时复制，在细胞里，它有许多拷贝，一般在20个以上。
通常大的质粒如F因子等，拷贝数较少，复制受到严格控制。
小的质粒，如ColE Ⅰ质粒（含有产生大肠杆菌素E1基因），拷贝数较多，复制不受严格控制。
在使用蛋白质合成抑制剂－氯霉素时，染色体DNA复制受阻，而松弛型ColEⅠ质粒继续复制12－16h，由原来20多个拷贝可扩增至1000－3000个拷贝，此时质粒DNA占总DNA的含量由原来的2％增加到40％－50％。
质粒pBR322、pUC19就是由ColE Ⅰ衍生的质粒。
所有分离质粒DNA的方法都包括三个基本步骤:培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细菌；分离和纯化质粒DNA。
采用溶菌酶可破坏菌体细胞壁，十二烷基硫酸钠（SDS）可使细胞壁解，经溶菌酶和阴离子去污剂（SDS）处理后，细菌染色体DNA缠绕附着在细胞壁碎片上，离心时易被沉淀出来，而质粒DNA则留在清液中。
用乙醇沉淀、洗涤，可得到质粒DNA。
质粒DNA的相对分子量一般在106－107范围内，如质粒pBR322的相对分子质量为2.8×106，质粒pUC19的相对分子质量为1.7×106。
在细胞内，共价闭环DNA （covalently closed circular DNA，简称cccDNA）常以超螺旋形式存在。
如果两条链中有一条链发生一处或多处断裂，分子就能旋转而消除链的张力，这种松弛型的分子叫做开环DNA（open circular DNA，简称ocDNA）。
在电泳时，同一质粒如以cccDNA 形式存在，它比其开环和线状DNA的泳动速度快，因此在本实验中，自制质粒DNA在电泳凝胶中呈现3条区带。
二、实验目的1．掌握最常用的提取质粒DNA的方法和检测方法。
2．了解制备原理及各种试剂的作用。
三、实验材料和试剂材料：大肠杆菌E.coli，质粒pegf。
试剂：1.LB培养基：10g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，10g/L NaCl，用NaOH调pH至7.3左右。
如固体培养基则添加15g/L琼脂。
2.溶液Ⅰ（pH8.0G.E.T缓冲液）：50 mmol/L葡萄糖，25mmol/LTris-HCl，10mmol/L EDTA。
灭菌后存放。
3.溶液Ⅱ（0.2mol/LNaOH(内含1％SDS)）：预先配制1％SDS母液，临用前一天晚上加入0.2mol/LNaOH，4℃保存。
4.溶液Ⅲ（pH4.8乙酸钾溶液）：5mol/L乙酸钾60mL、冰乙酸11.5mL、双蒸馏水28.5mL。
5.酚/氯仿液(V/V＝1/1)：酚为重蒸酚，配制时，先将氯仿中加入异戊醇，使其体积比为24:1，然后等量的加入重蒸酚，混匀，并用0.1mol/LTris-HCl (pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，于棕色瓶中存放，并在上面覆盖等体积的0.01 mol/LTris-HCl(pH7.6)，4℃保存。
6.无水乙醇7.70％乙醇8.pH8.0 TE缓冲液：10mmol/LTris-HCl、1mmol/LEDTA，其中含RNA酶20μg/mL。
仪器：恒温培养箱、恒温摇床、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、台式高速离心机、台式小型振荡器、EP管(1.5mL微量离心管)、加样器(20uL～lmL)、吸头。
四、操作步骤（一）培养细菌将带有质粒pegf的大肠杆菌接种在含50μg/mL卡那霉素(Ka+)的LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜。
注意：添加Ka+时，须待LB培养基冷却到50℃左右方可加入。
（二）从菌落中快速提取制备质粒DNA1．取1.5mL(750uL取两次)菌液置于1.5mL Ep管中，10000rpm离心3min。
2．弃上清，重复步骤1，弃上清，加入150μL GET缓冲液，在涡旋混合器上充分混匀。
3．加入300μL新配制的0.2mol/L NaOH(内含1％SDS)，加盖，颠倒（不要振荡）3次，使之混匀。
4．加入225μL冰冷的乙酸钾溶液。
加盖后，颠倒（不要振荡）3次使之混匀。
5．10000rpm离心5min，上清液吸至另一干净的1.5mL Ep中，如上清液浑浊则需重新离心一次。
6．于上清液中加等体积氯仿，振荡混匀， 10000rpm离心5min，小心吸取上清液，转移至另一支1.5mL Ep管中，注意勿将两液相中间的白色蛋白薄层吸出。
7．向上清液加入2倍体积无水乙醇，混匀，用离心机于10000rpm离心5min。
小心吸去上清液。
8．用0.5mL 70％乙醇洗涤沉淀一次，10000rpm离心5min，除尽乙醇，室温自然干燥(将离心管倒置于一张纸巾上)，备用。
9．用20uL TE重新溶解DNA，置于4℃保存，供电泳使用。
贮存于-20℃备用，可长期保存。
五、思考题1．裂解细菌时需注意的事项有哪些？2．质粒的基本性质有哪些？3．碱裂解法提取质粒DNA中各溶液的作用是什么？4．抽提质粒DNA的方法包括哪几个步骤？5．如何提高质粒DNA的产量？6．为什么质粒DNA不能反复在4℃、-20℃、室温中放置？为达到这一目的，需要注意些什么？实验二 DNA的含量、纯度与分子量的电泳法测定一、实验原理测定核酸通常采用两种方法：即紫外分光光度法与琼脂糖凝胶电泳法。
1．紫外分光光度法DNA或RNA定量时，应在260nm和280nm两个波长下读数。
根据计算在260nm波长下，每1ug/mL DNA钠盐的A值为0.20，即在A260=1时，双链DNA含量为50ug/mL，单链DNA与RNA含量为40ug/mL，单链寡核苷酸的含量为33 ug/mL。
双链DNA含量＝A260×50×稀释倍数（ug/mL）RNA含量＝A260×40×稀释倍数（ug/mL）单链DNA含量＝A260×33×稀释倍数（ug/mL）此外还可以根据260nm和280nm的读数间的比值（A260/A280）估计核酸的纯度。
2．琼脂糖凝胶电泳法根据DNA分子量不同，采用外加电场使其分开，用EB嵌入DNA分子后在紫外下显荧光。
而荧光强度正比于DNA的含量，如将已知浓度的标准样品表2－1作为电泳对照，就可以估计出待测样品的浓度。
电泳后的琼脂凝胶糖直接在紫外灯下拍照，只需要5－10ngDNA，就可以从照片上比较鉴别。
由于电泳时所用的样品量非常少，只要将浓度控制在几十纳克即可，所以在基因工程中经常被用做检测DNA样品。
表2－1 λDNA/ Hind Ⅲ中DNA片断二、实验目的1．从以上实验中提取到的质粒DNA，为了能作下一步的酶切，连接及转化实验，必须测定DNA的纯度、含量以及分子量大小。
2．本实验旨在学习水平式琼脂糖凝胶电泳，学习检测DNA、含量与相对分子质量大小。
三、实验材料和试剂材料：自制的质粒DNA、λDNA/ Hind Ⅲ、。
试剂：1．标准DNAmarker(λDNA/ Hind Ⅲ)2．限制性内切酶HindⅢ和10X缓冲液3．酶反应中止液：0.2 5％溴酚蓝(含40％蔗糖)，已配好。
4．溴化乙锭染液（EB）：使用前稀释1000倍，母液已配好。
注意：EB是一种诱变剂，配制和使用时应戴好手套，并且不能将该染液洒在桌面或地面上！使用后立即用大量的水冲洗干净。
5．0.5×TBE缓冲液：Tris 2.18g、硼酸1.10g、EDTA-Na20.14g用蒸馏水定容至400mL。
可配成5×TBE母液，使用时稀释10倍即可。
6．0.7％琼脂糖仪器：37℃水浴锅、微波炉、稳压电泳仪、凝胶成像系统、电泳槽、Eppendorf架、恒温摇床、台式小型振荡器、Ep管(1.5mL)、加样器(20uL～lmL)、吸头。
四、实验操作（一）质粒DNA的酶解1．新提的质粒，在10uL的体系中用单一酶（如E co RⅠ）进行处理，即：质粒DNA 2μL10×缓冲液 1μLE co RⅠ 0.5μLddH2O 6.5μL2．37℃，保温30min。
3．加入1/10体积的酶反应终止液，混匀以停止酶解反应。
各酶解样品于冰箱中贮存备用。
（二）琼脂糖凝胶板的制备1．琼脂糖凝胶的制备称取1.0g琼脂糖，置于锥形瓶中，加入100mL TBE缓冲液，瓶口倒扣一小烧杯，于电炉上加热，注意：防止溢出，由于琼脂糖较难溶解，如果水分损失较大，则补充一定量的蒸馏水，使其终浓度为1％。
2．胶板的制备将有机玻璃内槽洗净、晾干。
取胶带纸将有机玻璃内槽的两端边缘封好，形成一个边脚模子。
注意：将橡皮膏紧贴在有机玻璃内槽两端边上，不能留空隙。
将有机玻璃内槽置于水平位置，放好样品槽模板(一般称之为梳子)，将冷却至65℃左右的琼脂糖凝胶，小心地倒在内槽上，控制灌胶速度，使胶液缓慢地展开，直到整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层。
室温下静置1h左右，待凝固完全后，轻轻拔出样品槽模板，撕去胶带纸，胶板上即形成相互隔开的样品槽。