细胞培养技术复习资料(全)题库
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细胞培养技术练习题选择题 1.接种工具灭菌常采用（A） A. 灼烧 B. 高压 C.过滤 D.熏蒸2.具有促进愈伤组织生产的物质是（ B ） A. 维生素 PP B. 维生素 B1 C.维生素 B6 D. 甘氨酸3.微量元素母液的配制浓度（ B ） A.10 倍 B.100 倍 C.1mg/ml D.10mg/ml4.配制 10 倍大量元素母液，所需硝酸铵（ C ） mg A.9000 B.3700 C.16500 D.44005.配制 100 倍有机物母液时，所需维生素B1 ( B )mg A.0.4 B.10 C.100 D.0.16.下列哪种不是组织培养常用的维生素（ A ） A. 维生素 B 2 B. 维生素 B 1 C.维生素 B6 D.维生素 C7.下列哪种激素不属于生长素类（ C ） A.IAA B.IBA C.6-BA D.NAA8.下面哪种是MS 培养基大量元素所用药剂（A） A.硫酸镁 B.硫酸亚铁 C. 硫酸锌 D.硫酸铜填空： 1、组织块的分离方法有机械分散法、剪切分离法、消化分离法。
2、目前，较常用的消化试剂有胰蛋白酶、胶原酶、EDTA 消化液。
3、接种培养瓶的细胞数量一般为5× 105-1× 106/ml。
4、培养细胞的污染一般包括微生物污染、细胞交叉污染、化学物质的污染。
5、细胞冻存时DMSO 常用的浓度为10%的浓度。
1. 体外培养的动物细胞其生长方式主要贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁型细胞和悬浮型细胞。
体外培养的动物细胞其生长方式以贴附生长为主。
2. 贴壁生长的体外培养动物细胞，按形态来分，大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多形细胞型四种类型，最常见的为前两种。
3. 细胞在体外生长时具有一些特点，其中主要是贴附生长、接触抑制和密度依赖性。
4. 培养细胞生命期可分为原代培养期、传代培养期、衰退期三个阶段。
名词解释1、原代培养：原代培养也叫初代培养，是从供体进行细胞分离之后至第一次传代之前的细胞培养阶段。
植物细胞培养测试题
植物细胞培养测试题(总8页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--实验室及设备单元复习题1．组培能够进行，其理论依据是＿＿＿＿和＿＿＿＿-。
2．接种室要求室内＿＿＿＿，墙面＿＿＿＿，门为＿＿＿＿，并设置＿＿＿＿，防止出入时带进杂菌。
3．紫外灯灭菌利用＿＿＿＿＿波长左右的紫外光，它的灭菌强度较弱，须离被灭菌物＿＿＿＿。
4．配制培养时，一般先配制母液，其目的在于＿＿＿＿-和＿＿＿＿-。
6．pH值一般调节为＿＿＿＿，常用＿＿＿＿和＿＿＿＿方法来进行。
7．压力单位中1kg/cm2＿＿＿＿Mpa,,在 mPa时锅内温度为＿＿＿＿。
9．蔗糖使用浓度为＿＿＿＿%，它主要起＿＿＿＿作用。
二、名词解释20分1.外植体2.愈伤组织3.灭菌4.细胞全能性5.脱分化三选择题10分1.接种工具灭菌常采用（）①灼烧②高压③过滤④熏蒸2.具有促进愈伤组织生成的物质是（）①VPP ②VB1 ③VB6 ④甘氨酸3.微量元素母液的配制浓度（）① 10倍②100倍③1mg/ml ④10mg/ml四、问答题40分1 配制培养基时，使用生长调节物质的原则是什么?2. 无菌接种室怎样做好接种前的灭菌工作3. 高压灭菌器的使用程序怎样4 MS培养基的名称来源及特点5 为什么要配制母液，配制时要注意什么6 表面灭菌如何操作?培养基章复习题一、填空（20分）1．配制培养时，一般先配制母液，其目的在于＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿。
2．培养架一般长为＿＿＿＿＿米，宽为＿＿＿＿米。
3．培养基PH值一般调节为＿＿＿＿＿，常用＿＿＿＿和＿＿＿＿＿方法来进行。
4．培养基中缺铁会使幼苗＿＿＿＿，培养基中以＿＿＿＿＿形式加入铁。
5．磷是构成＿＿＿＿的主要成分，这种物质又是细胞膜、细胞核的重要组成部分。
磷也是＿＿＿＿的成分、这是一种常见的直接能量物质。
6．琼脂加入浓度大约是___________，蔗糖加入浓度大约是______________ 。
细胞培养技术考试试题
细胞培养技术考试试题一、选择题1. 细胞培养的基本步骤是：A. 细胞获取和处理；B. 细胞传代；C. 培养基配置；D. 细胞实验操作答案：ABCD2. 细胞培养的最佳温度范围是：A. 4-10°C；B. 15-25°C；C. 28-37°C；D. 40-50°C答案：C3. 常用的细胞培养基包括：A. DMEM；B. RPMI 1640；C. MEM；D. FBS答案：ABCD4. 细胞分离的方法有：A. 酶消化；B. 机械分离；C. 磁珠分离；D. 筛选分离答案：ABCD5. 细胞培养器具清洗消毒的方法包括：A. 高温蒸汽消毒；B. 紫外线照射消毒；C. 化学消毒；D. 过滤器过滤消毒答案：ABCD二、简答题1. 请简述细胞培养的原理及意义。
细胞培养是将细胞从生物体中分离出来，在无菌条件下通过培养基提供养分和适宜环境，使细胞在体外持续增殖和生长的过程。
细胞培养技术的意义在于：①探究细胞的生理生化特性和功能；②研究生物发育和分化机制；③药物筛选；④生物工程和生物制造的基础；⑤治疗和诊断疾病。
2. 请简述细胞培养的几种常用技术方法。
（1）传代：将细胞从一代细胞培养物中分离出来，移植到新的培养基中，继续培养和传代。
传代通常采用酶消化和机械分离的方法进行。
（2）冻存：将细胞冻存保存，以备后续使用。
常用的冻存方法是将细胞与冻存液混合，缓慢冷却至低温下保存。
（3）细胞分化：通过调控培养条件，使细胞表现出特定的细胞型态和功能。
（4）细胞感染：将病毒或质粒导入细胞，使细胞表达外源蛋白或产生特定生理反应。
3. 请简述细胞培养中常见的细胞污染及预防方法。
常见的细胞污染包括细菌污染、真菌污染和其他细胞污染。
预防细胞污染的方法有：①无菌操作，使用无菌工具和无菌培养基；②定期检测细胞污染，如细菌和真菌检测；③定期更换培养器具和培养基；④定期消毒培养环境。
三、论述题细胞培养在生物科技领域的应用细胞培养技术在生物科技领域起着重要的作用。
细胞培养技术题库
细胞培养技术题库细胞培养技术准备⼯作常⽤设备准备室的设备：单蒸馏⽔蒸馏器、双蒸馏⽔蒸馏器、酸缸、烤箱、⾼压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭⼒天平和电⼦天平（称量药品）、PH计（测量培养⽤液PH值）、磁⼒搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、⽇光灯和紫外灯、空⽓净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、⼆氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在⽆菌间的设备：离⼼机（收集细胞）、超净⼯作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、⽔浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养⽤液）。
⽆菌操作⽆菌室的灭菌：1.定期打扫⽆菌室：每周打扫⼀次，先⽤⾃来⽔拖地、擦桌⼦、超净⼯作台等，然后⽤3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧⼄酸擦拭。
2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先⽤3‰新洁尔灭擦拭，然后⽤75％酒精擦拭或者0.5％过氧⼄酸，再⽤紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空⽓净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：⽤75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验⼈员的⽆菌准备：1.肥皂洗⼿。
2.穿好隔离⾐、带好隔离帽、⼝罩、放好拖鞋3.⽤75％酒精棉球擦净双⼿。
⽆菌操作的演⽰：1.凡是带⼊超净⼯作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋⽩酶的瓶⼦均要⽤75％酒精擦拭瓶⼦的外表⾯2.靠近酒精灯⽕焰操作。
3.器⽫使⽤前必须过⽕灭菌4.继续使⽤的器⽫（如瓶盖、滴管）要放在⾼处，使⽤时仍要过⽕。
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的使⽤液时要注意更换吸管，防⽌交叉污染。
器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：⼀、新的玻璃器⽫的洗消：1.⾃来⽔刷洗，除去灰尘。
2.烘⼲、泡盐酸：烤箱中烘⼲，然后再浸⼊5％稀盐酸中12⼩时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘⼲：12⼩时后⽴即⽤⾃来⽔冲洗，再⽤洗涤剂刷洗，⾃来⽔冲⼲净后⽤烤箱烘⼲。
细胞培养复习题
名称解释细胞培养动物细胞培养：动物细胞培养是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞悬液,然后放在类似于体内生存环境的体外环境中,进行孵育培养,使其生存、生长并维持其结构与功能的方法;组织培养：从生物体内取出活的组织多只组织块在体外进行培养的方法;有时泛指所有的体外培养;器官培养：是将活体内的器官一般是胚胎器官、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法;合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量,用人工方法模拟合成的、配方恒定的培养基;无血清培养基：由基础培养基和替代血清的补充因子生长因子和激素、结合蛋白等组成;完全培养基：在合成培养基里添加血清后的培养基;接触抑制：体外培养的细胞在贴附底物上连接成片、相互接触后失去运动的现象;无限细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态,只有部分细胞由于遗传物质的改变,使其在培养条件下可以无限制传代,这种传代细胞为细胞系;去分化脱分化：细胞在体外不可逆地失去原有特性;注意：去分化不意味分化能力完全丧失在适当调节信号刺激下仍能表现出分化特性;但分化能力会随培养时间延长而逐渐丧失;不适应：各种分化细胞,在体外培养时逐渐失去各自的形态与功能特征,表现出某种趋同性;原因：培养条件变化使分化发生阻抑细胞分裂指数MI：是指细胞群中每1000个细胞中的分裂相数量细胞群体倍增时间：是指培养物中细胞数量翻倍的时间;原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞;培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养; 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出,配制成细胞悬浮液,分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养,称为传代培养;1体外培养细胞,其生长方式主要有贴壁生长和悬浮生长两种,分别称为贴壁细胞和悬浮细胞;2一般可将贴壁细胞生长的体外培养细胞大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多行细胞型四种类型,最常见的为前两种;3体外培养细胞的主要生长特点：①贴附生长②接触抑制③密度依赖性培养细胞分化状态的变化：①去分化脱分化②不适应1、细胞培养的基本要求有哪些和工作方法要求：1培养前准备2操作间消毒3洗手和着装4火焰消毒培养前的准备的基本要求：培养基的选择和无菌配制动物细胞培养用液的类型、配制和无菌处理方法：1操作程序规范2试剂设备专人负责3培养用品定点存放2、平衡盐溶液BBS：1成分：无机盐和葡萄糖,少量酚红;2作用：维持渗透压、缓冲和调节酸碱度3常用：Hanks液、PBS等消化液1作用：分散组织或细胞团;2常用：胰蛋白酶消化液、胶原酶消化液、EDTA-2Na液、蜗牛酶等2、消化液中的胰蛋白酶消化液、胶原酶消化液、EDTA-2Na液作用的原理是什么胰蛋白酶消化液主要作用是水解细胞之间的蛋白质,使细胞相互分离;EDTA-2Na液：是一种化学螯合剂,其溶液又称Versen液,对细胞有一定的离解的作用;EDTA-2Na液的主要作用是通过结合螯合细胞间质中的二价阳离子从而破坏细胞之间的细胞连接;达到分散细胞的目的;胶原酶溶液：胶原酶是从细胞中提取的一种酶,对胶原组织和细胞间质有较强的消化作用,而对培养细胞一般不产生损伤,常在上皮类细胞原代培养时用来离散细胞与胶原组织;3、1天然培养基：定义:主要指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基,如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等;优点：含有丰富的营养物质,渗透压、pH等也与体内环境相似,培养效果好;缺点：成分复杂,批间差异大,易被支原体污染;2合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量,用人工方法模拟合成的,配方恒定的培养基;成分：氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质;优点：标准化生产,组分和含量固定;成本低;缺点：缺少某些成分,不能促进细胞增殖生长;3完全培养基;定义：在合成培养基里添加血清后的培养基;细胞生长培养基:常用培养基,血清含量高, 10-20%;维持培养基:维持细胞不死或缓慢生长,血清含量低, 2-5%;4无血清培养基：定义：由基础培养基和替代血清的补充因子生长因子和激素、结合蛋白等组成;用途：用于研究细胞生长因子、单克隆抗体制备、细胞分泌产物研究等;优点：保证实验结果的准确性、可重复性和稳定性,减少细胞污染,简化提纯和鉴定等程序;3、完全培养基中各成分的作用是什么合成培养基基础培养基的成分只能维持细胞生存血清：常用牛血清,含有促进细胞增殖的各种生长因子和其他多种有利于细胞生存的物质;一定量的抗生素：防止污染4、体外培养细胞与体内培养细胞的差异都有哪些5、论述培养细胞的一代生存期可分为几个阶段及其特点培养细胞的“一代生存期”,是指从细胞接种后到再次传代培养之前的这一段时间,它与细胞世代或倍增时间不同;可分为潜伏期、指数生长期、停滞期平顶期1.潜伏期特点：1细胞适应新环境的恢复期包括悬浮期、贴壁期、潜伏期三个时期2可有运动活动,基本无增殖,少见分裂相;2.指数生长期特点：1细胞增殖最旺盛的时期,细胞数量呈指数生长,是实验研究和生产的主要阶段;2用细胞分裂指数和细胞群体倍增时间表示;3.停滞期特点：特点：细胞数量不再增加,仍有代谢活动6、动物细胞培养具有一系列优点：①可简化细胞的生长环境;在细胞存活的基础上独立研究细胞生命活动、逐项研究细胞生存条件和细胞功能;②能够方便地控制实验因素; 研究某种实验因素对细胞的生物学作用,只需在培养液中有针对性地加入或者删除这种成分;③易于观测实验结果;利用细胞培养技术研究细胞的生命活动规律,可以很方便地采用各种实验技术和方法来观察、检测和记录;④可供研究的细胞种类极其广泛;⑤可同时提供大量均一性较好的细胞群,降低实验成本;⑥能够进行大规模生物制品的生产;包括酶、单克隆抗体以及多种疫苗等生物制品或者基因工程产品;2、动物细胞培养的缺点：①体外培养的动物细胞对营养的要求较高;②动物细胞生长缓慢,对环境条件要求严格;③体外培养的细胞与体内生长的细胞存在或多或少的差异;形态和功能的差异7.动物细胞培养实验室有哪几个部分组成理想的培养实验室可分为：准备室、缓冲室与培养室相连的消毒房间,作为隔离培养室与外面非消毒房间的缓冲地带、培养室一间或几间,普通实验室、办公室;8.论述细胞培养的生长特点;培养细胞生命期：指细胞在培养中持续增殖和生长的时间;包括三个阶段：原代培养期、传代培养期、衰退期; 1.原代培养期也称初代培养,即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段,一般持续1一4周特点：二倍体,细胞分裂次数少,异质性,独立生存性差; 用途：药物测试,疫苗制备等;2.传代培养期定义：原代细胞接种到两个或以上的器皿继续进行培养标志进入传代培养期特点：细胞分裂增殖旺盛,去分化,在全生命期中此期的持续时间最长,传代10-50次;3.衰退期定义：传代培养一定代数后,细胞生命活动明显减弱,增殖很慢或不增殖,直至衰退死亡的时期;细胞特点：细胞形态轮廓增强,色泽变暗,细胞质内出现暗的颗粒样结构及空泡状结构,胞质突起回缩,最后衰退凋亡;9.论述玻璃制品清洗步骤10、论述动物细胞培养技术的应用1.在生物学领域基础研究中的应用1在细胞生物学上的应用研究细胞的形态、结构、生长发育、细胞营养、代谢以及病变等微观过程;2在遗传学上的应用染色体分析,杂交育种;3在胚胎学上的应用通过体外培养卵母细胞,进行体外受精、胚胎分割和移植;4在病毒学上的应用培养细胞为病毒的增殖提供场所;5在药理学领域的应用药品、食品添加剂等对机体的毒性及其产生不良影响的安全性调查;许多致畸、致癌物质加入动物细胞培养液后,培养细胞会发生染色体结构和数目的变异;2.在临床医学上的应用1用于遗传疾病和先天畸型的产前诊断用羊膜穿刺技术获得胎儿细胞,培养后进行染色体分析,诊断胎儿是否患有遗传性疾病或先天畸型;2用于癌症的早期诊断和预防通过培养淋巴细胞,对其染色体进行对比分析检测出易患癌症的病人,进行及早的预防和治疗;3用于临床治疗目前已有将正常骨髓细胞经大量培养后植入患造血障碍症患者体内进行治疗的报道;4用于药物效应的检测检测的药物具有组织特异性时,可选用相应的细胞,如检测治疗肝病的药物可选用肝细胞、检测抗癌药物可选用癌细胞;3.在动物育种上的应用新品种的培育可大大缩短育种进程,且更加经济有效;胚胎干细胞的研究成果和克隆羊多莉的问世为动物遗传育种开辟了一条新途径;4.在生物制品生产上的应用用动物细胞可生产的生物制品有各类疫苗、干扰素、激素、酶、生长因子、病毒杀虫剂、单克隆抗体等; 11、血清种类：人血清、牛血清、马血清等;成分：基本营养物、激素、生长因子、结合蛋白、贴壁和扩展因子等;标准: 透明,淡黄色,无沉淀物,无细菌、支原体、病毒污染;使用：逐步解冻,热灭活, 10%浓度,超低温保存;牛血清又分胎牛血清和小牛血清,它们的区别胎牛血清是从母牛剖腹取出的胎牛中分离出来的血清,对许多细胞系均有促进生长作用,主要用于细胞株的保藏及特殊娇贵细胞株的体外培养,但价格昂贵;小牛血清是从刚出生但尚未哺乳的小牛分离出来的血清;12、细胞传代方法贴壁细胞的消化法传代步骤1吸出或倒掉瓶内的旧培养液;2加入适量的消化液消化;3镜检,发现细胞质回缩,细胞间隙增大后,应立即终止消化;4吹打瓶壁细胞,制成细胞悬液;5计数,接种到新的培养瓶;悬浮细胞多采用离心法传代将细胞连同培养液一并转移到离心管内,800-1000rpm离心5min,然后取出上清,加入新的培养液到离心管内,用吸管吹打使之形成细胞悬液,然后传代接种;13、培养细胞的观察和检测技术1培养液观察培养液的颜色和透明度的变化;正常培养液pH介于7.2～7.4之间,呈桃红色、清亮透明;培养中细胞代谢产生的酸性产物会使培养液pH值下降,引起颜色变浅变黄;2～3天或3～4天换液一次;2细胞生长状况倒置显微镜观察;原代细胞培养中最先可见从组织块中边缘“长出”细胞;成纤维细胞是最易生长的细胞;细胞长满瓶底80%应及时传代;3、细胞形状变化生长良好的细胞：透明度大,折光性强,轮廓不清;细胞生长状态不良的细胞：轮廓增强,细胞折光性变弱,边缘不齐,胞质中出现空泡、脂滴、颗粒状物质,细胞之间空隙增大,细胞表面及周围出现丝絮状物;采取措施：换液、排污、废弃;4、微生物污染细菌污染：培养液浑浊、漂浮菌丝;支原体污染：生长减缓、胞质颗粒增多、培养液不变混;细胞交叉污染;化学物质污染;14、去分化和不适应的区别“去分化”不可逆染色体变化;“不适应”可重新诱导培养条件变化关于去分化需要注意：①去分化并不意味着完全返回胚胎时期的原始细胞状态;如:高度分化的神经细胞和心肌细胞已经丧失的增生活性不可能恢复,但已经具备的生物电活动特性不会完全失去 ;②可重新表现出分化特点; 如：把表皮细胞放在气液界面上培养,可分化成含大量角蛋白丝的角质细胞、内皮细胞,但,这种能力会随着培养时间延长逐渐丧失;15、谷氨酰胺在培养基中的主要作用配液时应该注意哪些问题作用：在细胞代谢中有重要作用,是细胞合成核酸和蛋白质必需氨基酸,在缺少时,细胞生长不良死亡配液时：由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20度冰箱中保存,在使用前加入培养液内;已含谷氨酰胺的培养液在4度冰箱中储存2周以上时,还应重新加入原来的谷氨酰胺;第二章1、细胞冷冻的原理是什么细胞冻存的原则：慢冻快融 2加冷冻保护剂常用：甘油或二甲基亚砜DMSO主要原因：1冷冻速度过快,细胞内水分结冰形成冰晶,造成细胞膜和细胞器的破坏引起细胞死亡;冷却速度越快,冰晶损伤越大;2细胞悬浮在溶液中,随着温度的下降,细胞外部的水分会先结冰,从而使得未结冰的溶液中电解质的浓度升高;如果将细胞暴露在这样高溶质的溶液中且时间过长,细胞膜上脂质会受到损坏,细胞便发生渗漏;冷冻保护剂作用机理：1冷冻保护剂易同溶液中水分子结合,从而降低冰点,减少冰晶的形成；2通过其摩尔浓度降低未结冰溶液中电解质的浓度,使细胞免受溶质的损伤,细胞得以在超低温条件下保存;2、复苏原理复苏时融解细胞速度要快,使之迅速通过细胞最易受损的-5~0度,这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化,避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损害,以防止细胞内形成冰晶引起细胞死亡;3、细胞复苏的过程①将恒温水浴箱的温度调至37～40℃;②从液氮中取出冻存小管,立即投入37～40℃温水中快速晃动,直至冻存液完全融解;要在1～2min内完成复温;③将细胞冻存悬液移入离心管,加入约5m1培养液,轻轻吹匀;④将细胞悬液经800～1000 r/min离心5min;弃上清液;⑤给细胞沉淀物加入完全培养液,轻轻吹吸均匀;将细胞悬液移入培养瓶内,加培养液37℃、5%CO2培养;4、细胞活性检查1.染色法：使损伤或死亡细胞着色;结晶紫、台盼蓝、苯胺黑等;2.四唑盐MTT比色法：活细胞可沉淀四唑盐并形成蓝紫色结晶,再用DMSO溶解结晶物,溶液颜色的深浅与所含的甲躜量成正比;用酶标仪在5 7 0nm波长处测定其吸光度OD值,可间接反映活细胞数;第三章1、原代细胞培养常用组织块培养法和消化培养法;2、组织块培养法定义：组织块培养是即将组织剪切成小块后,接种于培养瓶培养的方法;基本方法：将剪成的小组织团块接种于培养瓶或皿中,瓶壁可预先涂以胶原薄层,以利于组织块粘着于瓶壁,使周边细胞能沿瓶壁向外生长;特点：操作简便,组织块易损伤,细胞生长缓慢,适于组织量少的原代培养;基本过程：①取材修剪冲洗；②剪成1mm3左右的小块；③移入培养瓶；④间距5mm分布组织小块；⑤翻转培养瓶37℃静止2-4h；⑥翻正培养瓶培养；⑦原代细胞培养;3、消化培养法定义：利用组织消化分散法将细胞间质物质去除,使细胞分散,形成悬液培养的方法;特点：容易获得大量细胞,生长速度快,适于培养大量组织,但步骤繁琐,易污染,实验费用高;过程：①消化分离法消化细胞、镜检；②发现组织已分散成细胞团或单个细胞,终止消化,筛网过滤,大块继续消化；③过滤的消化液,低速离心,加培养液,细胞计数后,接入培养瓶;4、原代取材的基本要求1无菌取材：严格无菌操作;2取材器械锋利：防止机械损伤;3及时培养：可培养液4℃暂存;4去除无用组织,避免干燥;5营养丰富：添加10%血清;6采用易培养组织：组织类型、分化程度、年龄等;7作好记录：来源等信息及标本要保留;5、组织材料的分离1 细胞悬液的分离方法来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料,可采用离心法分离;一般采用5000~1000r/min的低速离心5~10分钟;2组织材料的分离方法可采用机械分散法物理裂解和消化分离法;1.机械分散法方法:注射针芯挤压法; 特点:简便、快速,但对组织机械损伤大,而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织;2.剪切分散法利用剪切法将组织剪切成1平方毫米的小块;3.消化分离法定义：消化法是结合生化和化学手段把已剪切成较小体积的组织进一步分散的方法; 种类：胰蛋白酶法、胶原酶法、EDTA法;6、应用体外培养技术进行中瘤研究具有的优点1,可以免受机体内部因素的影响,从而便于研究理化和生物等因素对肿瘤细胞生命的影响2、便与研究肿瘤细胞的结构和功能3、肿瘤细胞可长期保存以便观察其遗传行为的变化4、可用抗癌药物的快速筛选7、肿瘤细胞培养生物学特性：永生性、侵袭性,不受控增殖性,遗传性质改变,异质性、成瘤性;第四章动物细胞大规模培养技术：指在人工条件下,在细胞生物反应器中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术微载体：微载体指直径在60～250微米,能适用于细胞贴壁培养的微珠,一般由葡聚糖或各种合成聚合物组成;中空纤维培养技术：模拟细胞在体内生长的三维状态,利用中空纤维给培养细胞提供物质代谢条件而建立的一种大规模培养方法微囊化培养是指在无菌条件下将拟培养的细胞、生物活性物质以及生长介质共同包裹在薄的半透膜中形成微囊,再将微囊放入培养系统内进行培养的方法;1、动物细胞大规模培养的方法 1.贴壁培养2.固定化培养3.悬浮培养一贴壁培养定义：指细胞贴附在一定的固相表面进行的培养方式;优点：适用细胞种类多；容易采用灌流培养；容易更换培养液;缺点：操作比较复杂,需要合适的贴附材料和足够的面积,培养条件不易均一,传质和传氧较差,投资大;培养方式：旋转瓶培养、中空纤维培养、细胞工厂培养、微载体培养;二固定化培养定义：将动物细胞与水不溶性载体结合起来进行培养的方式;优点：既适用于贴壁依赖性细胞,又适用于非贴壁依赖性细胞的包埋培养,细胞密度高,抗剪切力和抗污染力强,易于分离纯化;方法：吸附法、包埋法、微囊法三悬浮培养定义：指细胞在生物反应器中自由悬浮生长的培养方法;优点：操作简单、培养条件均一、传质和传氧比较好,容易扩大培养规模,可借鉴细菌发酵的经验;缺点：体积小,较难采用灌流培养;常用反应器为搅拌式和气升式;2、微载体的选择有何要求①微载体表面性质与细胞有良好的相容性,适用细胞附着、伸展和增殖；②微载体无毒、惰性,不与培养基成分发生化学变化,也不会吸收培养基中的营养成分；③微载体的比重在1.030～1.045g/ml,使载体在低速搅拌下就可悬浮,而在静止时又可很快沉降,便于换液和收获；④粒径在60～250μm溶胀后之间,均一,差异不大于20 μm ;有利于细胞均匀分布在各微载体表面；⑤具有良好的光学透明性,利于观察细胞在载体上的生长情况；⑥可耐120℃高温,便于采用高压蒸汽灭菌；⑦原料充足,价廉,制备简便,经简单的适当处理后,可反复多次地使用;3、微载体培养的操作包括哪些步骤①培养初期阶段；②粘附贴壁阶段；③维持培养阶段；④细胞收获阶段；⑤微载体培养放大阶段4、大规模培养技术的应用5、微囊化培养中微囊的制备应注意哪些问题1温和、快速、不损伤细胞,尽量在液体和生理条件下操作2所用试剂和膜材料对细胞无毒害3膜的孔径可控制,必须使营养物和代谢物自由通过4膜应有足够机械强度抵抗培养中的搅拌;6、理想的动物细胞生物反应器应满足哪些基本要求使比较教材所介绍的几种生物反应器各自优缺点①能提供充足氧气；②良好的传质传热及密闭性能；③制备材料对细胞无毒；④有自动检测调控系统；⑤便于操作维护;1、搅拌式细胞生物反应器优点：避免向培养基直接通气时气泡损伤细胞,没有移动部件,密封好,氧转换率较高,便于放大; 缺点：氧传递系数小,气路系统不能就地灭菌;2、气升式动物细胞培养反应器优点:器内气流温和均匀剪切力小,完全密封,便于无菌操作,氧的转换率高,便于放大生产缺点：1这种生物反应器只能用于需要气体的反应,或者是需要有气体的场合2在培养细胞的过程中会产生大量的气泡,从而会对正在培养的细胞的生长产生影响3这种生物反应器,如果没有其他装置的帮助就只能培养悬浮生长的细胞;3、中空纤维细胞培养反应器优点1培养器体积小,细胞高细胞损害小；2浓缩产品；3易于分离产物,产物纯度高,不易污染；4自动化程度高,细胞生长周期长; 缺点:细胞生长速度慢,代谢物容易堵塞孔径,不易清洗维护,价格高第五章抗原上可以引起机体产生抗体的分子结构,叫做抗原决定簇;抗体：是指机体受抗原刺激后产生的能与相应抗原特异性结合具有免疫功能的球蛋白;单克隆抗体：即单个B淋巴细胞克隆所分泌的抗体;是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合,通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的;多克隆抗体：一个抗原上可以有好几个不同的抗原决定簇,进入机体后会刺激好几中B细胞增殖,因而使机体产生几种不同的抗体,成为多克隆抗体基因转染技术：将外源性基因采用化学或物理的方法人工导入细胞的技术;主要用于癌基因研究;1、什么是单克隆抗体其特性和局限性如何与多克隆抗体有何异同单克隆抗体是由一种B细胞克隆所产生的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子;局限性：固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围；反应强度不如多克隆抗体；制备技术复杂,费时费工,价格较高;特性：理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强,便于人为处理和质量控制不同：单克隆抗体的特异性强,只针对单一的抗原表位；而多克隆抗体则可以与多个抗原表位结合,当抗原的某个抗原表位改变时,单抗不能发挥其作用2、简述单克隆抗体的制备流程和应用;应用：1用于疾病的诊断和治疗：2作为载体制备导向药物;3、骨髓瘤细胞和脾细胞融合过程中应特别注意的几个问题是什么1细胞比例2反应时间3反应温度4PEG的选择4、杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理1要制备单克隆抗体需先获得能合成专一性抗体的单克隆B淋巴细胞,但B淋巴细胞不能在体外生长;2而骨髓瘤细胞可在体外生长繁殖,应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞融合,得到杂种骨髓瘤细胞; 3杂种细胞既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性,也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性,用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群,可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体;与多抗相比,单抗纯度高,专一性强、重复性好、且能持续地无限量供应;5、HAT筛选杂交瘤细胞原理细胞融合时加入HATH为次黄嘌呤、A为氨基喋呤、T为胸腺嘧啶选择系统,目的是保证只有杂交瘤细胞的生长;HAT培养基是含有由次黄嘌呤H、氨基喋呤A、胸腺嘧啶T、的一种选择性培养基,这三种成分与细胞DNA合成有关;A可阻断细胞利用正常途径合成DNA,细胞在含有氨基碟呤的培养基中不能通过正常途径合成DNA;这时正常细胞可以通过“补救合成途径”,由胸腺嘧啶激酶HK和次黄嘌呤磷酸核糖转移酶HGPRT利用T和H合成核酸而繁殖;骨髓瘤细胞都是HGPRT缺乏株,不能利用H和T合成DNA,而B细胞中有这种酶,但在体外培养只存活5·7天,所以只有脾-瘤才能在HAT选择培养基上生长;6、酶联免疫吸附法ELISA原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记;结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性;第六章外植体：用于植物组织细胞培养的器官或组织的切段;愈伤组织：在人工培养基上,由外植体的表面形成的一团不定形的排列疏松的薄壁细胞;细胞全能性：植物的每个细胞都携带一整套遗传信息,具有发育成完整植株的潜力;。
(完整版)细胞工程练习题(附答案)
细胞工程练习题一．选择题1.在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，以下哪一项条件是不需要的A ．消毒灭菌B．适合的温度C．充分的光照D．适合的养料和激素2.(08 江苏生物 )以下对于植物组织培养的表达中，错误．．的是A．培养基中增添蔗糖的目的是供给营养和调理浸透压B．培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化C．离体器官或组织的细胞都一定经过脱分化才能形成愈伤组织D．同一株绿色开花植物不一样部位的细胞经培养获取的愈伤组织基因同样3．以下选项中能正确说明生物工程技术的是（）A．植物组织培养是指离体的植物器官或细胞进行脱分化形成新个体B．动物克隆的技术的基础是动物的细胞培养C．人工诱变、细胞工程、基因工程等都能对微生物进行定向改造D．动物细胞交融技术当前的用途是培养拥有双亲优秀性状的经济动物4．以下图是“白菜—甘蓝”杂栽种株的培养过程。
以下说法正确的是A ．所获取的“白菜—甘蓝”植株不可以结籽B．愈伤组织是已高度分化的细胞C．上述过程中包含着有丝分裂、细胞分化和减数分裂等过程D．引诱原生质体交融时可用聚乙二醇5．下边是将四倍体兰花的叶片经过植物组织培养形成植株的表示图，有关表达中正确的选项是①②胚状体③四倍体兰花叶片愈伤组织植株A ．②阶段会发生减数分裂过程B．①阶段需生长素而③阶段需细胞分裂素C．此过程表现植物细胞拥有全能性D．此兰花的花药离体培养所得植株为二倍体6．右图为将胡萝卜的离体组织在必定条件下培养形成试管苗的过程表示图。
有关表达正确的选项是A.利用此过程获取的试管苗可能为杂合子B．①②过程中都会发生细胞的增殖和分化C.多倍体植株的培养需经过以下图过程D．此过程依照的生物学原理是细胞膜拥有流动性7.各项培养植物新品种的过程中，不经过愈伤组织阶段的是A ．经过植物体细胞杂交培养白菜——甘蓝杂栽种株B ．经过多倍体育种培养无子西瓜C．经过单倍体育种培养优良小麦D ．经过基因工程培养转基因抗虫水稻8.（ 09 浙江卷）用动、植物成体的体细胞进行离体培养，以下表达正确的选项是A ．都需用CO2培养箱B ．都须用液体培养基C．都要在无菌条件下进行 D ．都可表现细胞的全能性D．植物体细胞杂交过程中，需用不一样浓度的细胞分裂素和生长素培养杂种体细胞9.动物细胞培养必要条件的是A. 无菌、无毒的环境B.适合的温度和pHC.O2等气体环境D.适合的光照条件10.物的肝肿瘤细胞进行细胞培养。
细胞培养复习题(含答案)
1.体外培养的细胞按生长方式可分为哪二种? 按细胞在体外生长的形态特征,可分为哪几种常见类型?⑴按生长方式分为二型:粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。
悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面, 而在悬浮状态下即可生长的细胞。
（绝大多数有机体细胞属粘附型细胞。
）⑵可分四型: (1)上皮型细胞 (2)成纤维型细胞 (3)游走型细胞 (4)多形型细胞2.简述体外培养细胞的整个生命活动过程的分期及每代贴附生长细胞的生长过程⑴通常, 体外培养细胞的全部生命期大致可被分为以下三个阶段:①原代培养期: 也称初代培养, 是指从机体中取出细胞接种培养到第一次传代之前的这一阶段。
此期的细胞呈现出活跃移动的特点, 可见细胞分裂, 但不旺盛。
处于原代培养阶段的细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上有很大的相似性。
细胞群具有明显的异质性, 细胞间的相互依存性强, 在软琼脂培养基培养时细胞集落形成率很低。
②. 传代期：通常是培养细胞全生命期中持续时间最长的时期, 原代培养的细胞经传代后常被称做细胞系。
一般情况下, 正常体细胞在传代10-50次左右后, 细胞分裂的能力就会逐渐减弱, 甚至完全丧失, 细胞便进入衰退期。
③衰退期：处于衰退期的培养细胞, 增殖速率已经变得很慢或不再增殖, 直至最后衰退死亡。
以上特点, 主要是针对体外培养的机体正常细胞, 对于体外发生转化的细胞和肿瘤细胞而言, 永生性或恶型性的获得使得这类细胞获得持久性的增殖能力, 这样的细胞群体常被称为无限细胞系或连续细胞系。
⑵每代贴附生长细胞的生长过程：①游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态, 也称悬浮期。
此时细胞质回缩, 胞体呈圆球形。
时间：10分钟一4小时②贴壁期：细胞附着于底物上, 游离期结束。
底物：玻璃、塑料、胶原、其它细胞等③潜伏期：此时细胞有生长活动, 而无细胞分裂。
细胞株潜伏期一般为6～24小时。
④对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长, 活力最佳, 最适合进行实验研究。
细胞培养复习题
名称解释细胞培养（动物细胞培养）：动物细胞培养是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞悬液，然后放在类似于体内生存环境的体外环境中，进行孵育培养，使其生存、生长并维持其结构与功能的方法。
组织培养：从生物体内取出活的组织（多只组织块）在体外进行培养的方法。
有时泛指所有的体外培养。
器官培养：是将活体内的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。
合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的、配方恒定的培养基。
无血清培养基：由基础培养基和替代血清的补充因子（生长因子和激素、结合蛋白等）组成。
完全培养基：在合成培养基里添加血清后的培养基。
接触抑制：体外培养的细胞在贴附底物上连接成片、相互接触后失去运动的现象。
无限细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。
去分化（脱分化）：细胞在体外不可逆地失去原有特性。
注意：去分化不意味分化能力完全丧失！在适当调节信号刺激下仍能表现出分化特性。
但分化能力会随培养时间延长而逐渐丧失。
不适应：各种分化细胞，在体外培养时逐渐失去各自的形态与功能特征，表现出某种趋同性。
原因：培养条件变化使分化发生阻抑细胞分裂指数（MI）：是指细胞群中每1000个细胞中的分裂相数量细胞群体倍增时间：是指培养物中细胞数量翻倍的时间。
原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。
培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。
传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。
1）体外培养细胞，其生长方式主要有贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁细胞和悬浮细胞。
3）完全培养基;定义：在合成培养基里添加血清后的培养基。
细胞生长培养基:常用培养基，血清含量高, 10-20%。
维持培养基:维持细胞不死或缓慢生长，血清含量低, 2-5%。
细胞培养技术考题整理
1.为什么要热灭活血清？加热可以灭活补体系统。
激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞核血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。
（在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。
）2.谷氨酰胺在细胞培养中起什么作用及使用方法？作用：几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
使用方法：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃放置1周可分解50％，故应单独配制，置于-20℃保存，临用前加入培养液。
配制方法：谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml即配成200mmol/L的溶液，充分搅拌溶解后，过滤除菌，分装小瓶，-20℃保存，使用时可向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液。
3.如何用台盼兰计数活细胞？正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。
台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
（用无血清培养基把细胞悬液稀释到200-2000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。
轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。
）4.如何消除组织培养的污染？确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。
（一）认真做好外植体的选择和消毒工作，防止外植体带菌。
（二）改善接种室和培养室的环境条件，保证接种与培养环境清洁无菌。
（三）操作人员严格遵守无菌操作规程。
（四）培养基及接种工器具要严格灭菌，确保灭菌质量。
（五）在培养基中加入适量的抗生素。
（六）利用病毒在植株体内分布不均匀的原理，生产脱毒苗。
（七）利用培养基中高盐或高糖的浓度，抑制微生物的生长。
（八）减少培养基中的某些有机成分，可抑制微生物的生长繁殖。
细胞生物学题库第3章(含答案)
《细胞生物学》题库第三章细胞生物学研究方法一、名词解释1．Resolution2. fluorescence3. Fluorescence microscope4. Phase contrast microscope5. autoradiography6. scanning electron microscopy，SEM7. scanning transmission electron microscopy，STEM8. high-voltage electron microscopy，HVEM9. negative stainning10. shadow casting11. scanning tunneling microscope，STM12.enzyme cytochemistry13. immunofluorescence14. immunoelectron microscopy15. chromosome sorting16. microspectrophotometry17. microfluorometry18. nuclear magnetic resonance，NMR19. cell engineering20. primary culture21. callus，culli22. cell fusion23. monoclonal antibody technique24. micromanipulation25. differential centrifugation26. isodensity centrifugation27. chromatography28. gel filtration chromatography29. affinity chromatography30. gene engineering31. gene cloning32. gene knockout33.karyoplast34.cytoplast35.cell culture36.贴壁生长37.contact inhibition38.mass culture39.clonal culture40. primary culture41.subculture42.单层细胞培养：43.转鼓培养44.primary cell45.subculture cell46.cell strain47.cell line49.clone50.explant二、填空题1. 物质经过紫外线照射后发出荧光的现象可分为两种情况，第一种是，如叶绿素、血红素等经紫外线照射后，能发出红色的荧光；第二种是，即物体经荧光染料染色后再通过紫外线照射发出荧光。
动物细胞工程(动物细胞培养、核移植)练习题
动物细胞工程（动物细胞培养、核移植）练习题1．一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件( )①无毒的环境②无菌的环境③培养液中需加血清④温度与动物体温相近⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能维持培养液的pHA．①②③④⑤⑥B．①②③④C．①③④⑤⑥D．①②③④⑥2．下列对动物核移植技术的描述不正确的是( )A．哺乳动物核移植包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植B．体细胞核移植过程中可通过显微操作去除卵母细胞的细胞核C．通过体细胞核移植方法生产的克隆动物是无性繁殖D．通过体细胞核移植方法生产的克隆动物是对动物进行了100%的复制4．在动物细胞培养前胰蛋白酶所起的作用是( )A．分解细胞膜易于融合B．分解培养基的蛋白质供给细胞营养C．使组织分散成单个细胞D．用于细胞内物质的分解5．下列动物细胞工程技术利用了细胞膜流动性原理的是( )①动物细胞培养②动物细胞融合③核移植④胚胎移植A．①④B．②③C．①②D．③④10．现将“细胞工程”中动、植物细胞培养技术列表比较如下，你认为哪一项比较有错误( )C．结果D．培养目的6．有关全能性的叙述，不正确的是( )A．克隆羊的诞生证明了已分化动物细胞的细胞核仍具有全能性B．生物体内细胞由于分化，全能性不能表达C．卵细胞与受精卵一样，细胞未分化，全能性最高D．植物细胞离体培养在一定条件下能表现出全能性7．下列属于动物细胞培养与植物组织培养区别的是( )A．动物细胞培养所用的培养基的成分与植物的不同B．动物细胞培养需在无菌条件下进行，而植物组织培养不需要C．动物细胞培养过程中可发生基因重组，而植物组织培养不能D．动物细胞培养需控制温度，而植物组织培养不需要14．下列关于动物细胞培养的叙述，不正确的是( )A．培养基为液体培养基B．培养结果只能获得大量细胞及生物制品，而不能获得生物体C．需要氧来满足细胞代谢的需要，不需要二氧化碳D．通过细胞培养可以检测有毒物质，判断某物质的毒性8．某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行动物细胞培养。
细胞工程原理与技术复习题
1902年，Haberlandt(哈博兰特)提出植物细胞全能性。
1934年，Gautberet（高特里特）培养三毛柳、黑杨的形成层，成功得到愈伤组织。
1947年，White(怀特)发明了第一个人工合成培养基。
1937年，Nabecourt（诺比考特）是胡萝卜根组织经培养获得愈伤组织并继代培养了几十年。
细胞全能性（Totipotency）：每个完整植物的体细胞或性细胞都拥有该植物形成一个完整植株的全套遗传基因，在一定的培养条件下，细胞都可发育成一个与母体一样的植株，这种能力称之为植物细胞的全能性。
外植体（Explant）：从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。
愈伤组织（Callus）：在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则细胞，多在植物体切面上产生。
特点：多细胞起源的，具有异质性，遗传稳定性差，易发生变异。
分化（Differentiation）：在细胞分裂过程中发生结构和功能上的改变，从而在个体发育中形成各类组织和器官完成整个生活周期。
脱分化（Dedifferentiation）：已分化好的细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力，回复到分生组织状态的过程。
再分化（Redifferentiation）：脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器官的过程。
细胞（原生质体）融合（Protoplast fusion）：两种异源原生质体在诱导剂诱发下相互接触，从而发生膜融合，胞质融合和核融合并形成杂种细胞，进一步发育成杂种植株的过程。
细胞培养(Cell culture)：用能保持较好分散性的植物细胞或很小的细胞团为材料进行离体培养。
器官培养(Organ culture)：对植物的根、茎、叶、花、果实以及各部原基的培养。
胚胎培养(Embryo culture)：以胚珠、幼胚、成熟胚为材料的离体培养。
组织培养(Tissue culture)：植物各部分组织的离体培养，使之形成愈伤组织称之为组织培养。
(整理)植物细胞工程复习题
1．愈伤组织; 2．植物体细胞无性系;3．生物技术;4．植物体细胞胚胎发生间接途径;5．植物细胞悬浮培养;6．看护培养法;7. 拟分生组织；8.人工种子;9. 花粉管通道法;10. 过滤灭菌方法;11. 植物体细胞胚胎发生直接途径;12. 植物细胞突变体正选择法;13. 原生质体液体浅层培养法;14.人工种子无菌条件下的转换15. 再分化;16. 原生质体固体培养法;17. 细胞突变体;18. 植物细胞微室培养法;19. 人工种子转换;20. 外周分化型;21. 过滤灭菌方法;22. 念珠培养法23. 人工诱导单倍体;24. 植物体细胞杂交;25. 负选择法;26. 辐射灭菌法;27.原生质体;28. 愈伤组织分化期;29. 植物细胞平板培养法;30. 花粉胚;31. 人工种子土壤条件下的转换;32. 原生质体固液结合培养;33. 植物细胞双层培养; 34. 加压蒸气灭菌法;35. 愈伤组织诱导期;36. 外植体;37. 脱分化;38. 原生质体液体浅层培养法;39. 干热灭菌法;40.植物离体快速繁殖技术;41. 花粉培养;42. 间歇蒸气灭菌法;43. 叶圆盘法;44. 原生质体固体培养法;45. 器官发生;46.脱分化；47.体细胞无性系；48.体细胞无性系变异；49.早熟萌发；50.继代培养；51.植物细胞工程1．合适的渗透压是保证原生质体完整性的前提。
常用的稳定剂有① 、②、③、④、⑤等，浓度一般为⑥ mol/L，加入⑦、洗液和⑧中。
2.植物离体培养培养基中通常使用最多的碳源是① ，一般浓度为②，③和④也是已知用来维持某些组织良好生长的碳源。
此外，已知植物组织中利用的其他形式的碳源包括⑤、⑥、⑦和⑧等。
3. 诱导体细胞融合的方法主要有①和②。
4. ① 是控制愈伤组织形态建成的关键，不同物种外植体诱导的②明显不同。
5.灭菌是用物理或化学的方法完全除去或杀死器物表面和内部微生物的过程。
物理方法有① 、②、③等。
细胞工程期末复习资料
1.生物工程：指人们运用现代生物科学、工程学和其他基础学科的知识，按照预先的设计对生物进行控制和改造或模拟生物及功能，用来发展商业性加工，产品生产和社会服务的技术领域。
2..细胞工程：指主要以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术3.原代培养(primary culture)：以直接取自生物体细胞、组织、或器官的培养。
4.4.传代培养（passage culture）：将原代培养的细胞继续转接培养的过程。
细胞的体外大量增殖是通过传代培养实现的。
5.5.细胞系(cell line)：由原代培养经传代培养纯化，获得的以一种细胞为主，能在体外生存的不均一细胞群体,。
第一次传代培养后的细胞即为细胞系。
6.6.细胞株(cell strain)：从一个经过生物学鉴定的细胞系由单细胞分离培养或通过筛选的方法由单细胞增殖形成的细胞群叫细胞株。
7.7.接触抑制：动物细胞体外培养的方式之一，指由于细胞相互接触而抑制细胞运动性现象。
由于这个特性，正常细胞并不会相互重叠，而是呈单层细胞生长。
8.8.无血清培养基：无血清培养基是不加动物血清，由基础培养基和添加组分组成。
试图全部替代血清成分。
9.9.微载体：是直径60-250微米的微珠。
由天然葡聚糖或各种合成聚合物组成。
10.10.干细胞（stem cell）：是具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体，即这些细胞可通过分裂维持自身细胞的特性和大小，又可进一步分化为各种组织细胞，从而在组织修复等方面发挥积极作用。
11.胚胎干细胞(Embryo Stem)：ES细胞，是一种全能干细胞，它是从着床前胚胎内细胞团经体外分化抑制培养分离的一种全能细胞系，可以分化成任何一种组织类型的细胞。
12.12.成体干细胞（adult stem cell)：成体组织内具有自我更新及分化产生1种或1种以上子代组织细胞的未成熟细胞。
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名词解释：细胞组织培养：细胞（组织）培养是指从生物体内取出细胞（组织），模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存、生长并维持其结构和功能的方法。
二倍体细胞株：具有二倍体染色体数的细胞株。
细胞组织培养选材：根据实验目的、观察指标确定所选组织器官。
培养选材一般来自胚胎组织的培养物；比成体组织更易生存和生长。
这主要是因为胚胎组织有更多的胚胎组织干细胞，它们具有更高的自我更新和多能分化能力。
原代培养：一般指从组织中分离在体外生长至传代之前的细胞培养。
这种培养通常是异质性，生长缓慢，但比较能代表原组织的类型并表达原组织特性。
缺点是在培养过程中会失去许多原组织的细胞。
传代细胞：原代细胞生长物或细胞系生长到一定阶段，分散成单个细胞，按一定比例接种于新的培养容器内称之传代。
传代细胞称之细胞系，可分为两类：有限细胞系和连续细胞系。
传代形成的具有各自生物特性或标志的细胞系称之为细胞株。
世代：指细胞经过一次分裂后完成后至下次分裂的过程。
细胞富集：当细胞分离纯化并不完全彻底，培养物中能达到以某种细胞为主（占绝大多数）的程度。
细胞纯化：是指从原代培养前成分混杂的异质性细胞悬液中或者从培养物中获得单一类型细胞的过程。
通过细胞分离和纯化得到细胞株或系。
传代：也称为再培养，把一瓶培养细胞全部或分成几份再培养的过程。
组织工程：组织工程是应用生命科学和工程学的原则及方法，在正确认识哺乳动物的正常及病理两种状态下的组织结构与功能关系的基础上，研究、开发用于修复、维护、促进人体各种组织或器官损伤后的功能和形态的生物替代物的一门新兴学科。
Density inhibition:密度抑制，由于细胞密度过大，培养液营养耗尽、代谢产物过多和生存空间消失所引起细胞增殖的抑制现象。
消化液：在原代细胞培养和细胞传代时，都要用消化液，最常用的是胰蛋白酶和二乙烯四乙酸二钠（EDTA），其次是一些特殊的组织细胞培养用的各型胶原酶。
在原代细胞培养中，使用消化液从组织块中分离（散）出单个的细胞；在进行细胞传代时，消化液使细胞脱离生长表面并离散成单个细胞。
平衡盐溶液（BSS）：集缓冲能力、生理盐水的等渗性以及培养液的营养供应特点于一体，兼具维持渗透压、缓冲和调节溶液的酸碱度，同时供给细胞生存所需的能量和无机离子成分的作用，常用的BSS有PBS、Hanks等。
清洁液：是一种不含磨蚀性物质，能迅速清除物品上污垢,分解脏污，令物品透明亮如的清洁用品。
去分化：指已分化成熟的细胞和组织倒退分化，返回原始幼稚的状态。
但去分化并不意味着完全返回胚胎时期的原始细胞状态，可重新表现出分化特点。
接触抑制：指细胞相互接触后失去运动（移动）的现象。
细胞融合：细胞融合是指两个或更多个相同或不同细胞通过膜融合形成单个细胞的过程。
可在自发或人工诱导下发生。
它可使两个不同来源的细胞核在同一细胞中表达相应的功能，这样的细胞称异核体，若异核体出现有丝分裂时，则可使两个不同来源的细胞核的染色体汇聚，形成合并有亲本的大核，这样的细胞称为杂种细胞或杂交细胞。
转化细胞系：通过某个转化过程形成的，常由于染色体断裂变成异倍体，失去正常细胞特点，而获得无限增殖能力。
转化细胞系具有长期培养，倍增时间短，对培养条件和生长因子等要求较低的特点，适于大规模工业化生产。
Stem cell:干细胞，是指一类具有自我更新能力和分化潜能的细胞。
杂交瘤技术：又称单克隆抗体制备技术。
是指建立杂交瘤细胞系的技术，通常指B淋巴细胞杂交瘤技术，即将骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，以建立可以分泌单一性抗体的杂交瘤细胞系的技术。
杂交瘤细胞：指肿瘤细胞与体细胞融合形成的杂交细胞，它既保留了肿瘤细胞无限繁殖的能力，有具有参与融合的体细胞的一些特征。
克隆：指通过一定方法获得由单个细胞无性繁殖形成的细胞集落。
单克隆抗体（McAb）：B淋巴细胞在抗原刺激下能增殖分化，转变成产生抗体的浆细胞，若将单个产生特质性抗体的B淋巴细胞分离出来，使之在体外分化增殖，产生一大群即一个克隆的细胞，这样便可得到大量的、结构相同的、均一的、针对抗原某一决定簇的抗体，这样由一个克隆B淋巴细胞产生的抗体又称为单克隆抗体。
干细胞：干细胞是人体内最原始的细胞，它具有较强的再生能力，在干细胞因子和多种白细胞介素的联合作用下可扩增出各类的细胞。
其生物学特性有：1.多能性2.自我更新能力3、高度增殖能力群体倍增时间：细胞指数增长期时，细胞群倍增所需的时间密度抑制（density inhibition）：由于细胞密度过大，培养液营养耗尽、代谢产物过多和生存空间消失所引起细胞增殖的抑制现象生长基质：培养皿表面包被的这层能改善生长表面的特性，促进细胞粘附和贴壁的物质。
即生长基质问答：1．简述体外培养细胞的主要生物学特点。
答：体外培养细胞的生物学特点：（1）去分化：体外培养,分化特征逐渐减弱，使细胞结构与功能上的“可塑性”增大（2）贴壁铺展：粘附于固相表面是锚定依赖性细胞生命活动的基本要求。
细胞被接种到培养器皿内以后首先要发生粘附，是细胞培养以后能否成功的第一步.提供什么样的生长表面是细胞能否成功粘附的主要因素。
铺展是进行生命活动的一种基本的生长特点或生长行为铺展状况制约细胞的分裂增殖活动过程，细胞先由圆形变为圆饼形(放射状铺展细胞)逐渐铺开伸展成为扁平的极性细胞。
极性细胞就是各种有机体细胞是在体外的特征性细胞形态（3）接触抑制和密度依赖性生长抑制：细胞生长有密度抑制，血清可降低密度抑制，转化细胞可降低密度抑制2．简述成体干细胞的定义与特点。
答：成体干细胞是指存在于一种已经分化组织中的未分化细胞，这种细胞能够自我更新并且能够特化形成组成该类型组织的细胞。
成体干细胞存在于机体的各种组织器官中。
成年个体组织中的成体干细胞在正常情况下大多处于休眠状态，在病理状态或在外因诱导下可以表现出不同程度的再生和更新能力。
包括造血干细胞、骨髓间质干细胞及神经干细胞。
成体干细胞有以下几个特点：（1）成体干细胞体积小，细胞器稀少，RNA含量较低，在增殖过程中处于相对静止状态，在组织结构中位置相对固定。
（2）成体干细胞数量很少，其基本功能是参与组织更新，创伤修复及维持机体内环境稳定。
（3）成体干细胞常处于一个有干细胞细胞基质、对干细胞的增殖和分化起调控作用的各种信号分子的特定微环境或称生物位中，取决于所在的微环境和自身的功能状态。
（4）成干细胞没有确定的来源。
3．试比较天然和合成培养基的各自优缺点。
答：1、天然培养基：最初的体外细胞培养，均采用天然培养基。
其主要取自动物体液或从动物组织中分离提取。
天然培养基（液）的种类很多，包括生物性体液（如血清、血浆）、组织浸液（胚胎浸液）、水解乳蛋白等。
优点：营养丰富，培养效果良好；缺点：成分复杂，来源受限，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析，易发生支原体污染。
2、合成培养基：研究者模拟、借鉴细胞在体内生存生长所需物质的种类和数量，设计出类似体内环境而适宜细胞在体外生存的各种培养基。
优点：（1）标准化生产，组成成分及含量明确便于精密地测定培养的细胞与培养液内物质变化的情况。
（2）便于控制和调整实验设计并使培养条件标准化。
（3）合成培养液中没有不透明物质，使得培养的细胞形态清晰透明，便于观察记录。
缺点：缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。
4．简述细胞培养污染的种类及污染的预防措施。
答：细胞污染可分为以下三类：物理性、化学性和生物性，物理污染：主要指温度、放射线、振动和辐射等。
化学污染：主要指血清、培养液及试剂、水、培养用器皿和孵箱等。
生物污染：主要指细菌、霉菌和酵母、支原体、病毒、细胞系交叉污染。
预防的方法：1。
从物品、用品消毒灭菌着手2。
从操作者做起：（1）操作者责任心要强，要细心稳重，操作技术要熟练。
进无菌室前要用肥皂洗手或用5%新洁尔灭浸泡5分钟，按规定穿隔离衣。
（2）操作者动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，要常更换吸管，切勿一根吸管做到底。
一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。
实验完毕及时收拾，保持是钥匙清洁整齐，最后用消毒水浸泡的纱布擦台面。
3。
早期留有充足的冻存储备，可以复苏早期冻存细胞使用。
5．试比较治疗性克隆与体细胞重新编程。
答：项目治疗性克隆体细胞重新编程干细胞名称ES细胞iPS细胞细胞来源供者卵母细胞和患者体细胞患者体细胞技术路径将体细胞核移植到去核卵母细胞利用体外基因转染技术，将转录导入中，形成克隆囊胚后，分离并建到体细胞核，筛选并建立iPS细胞系立ES细胞系优势ES细胞技术有较丰富的经验积累，取材容易，操作方案相对简单，技无外源性基因污染术体系较稳定主要问题卵母细胞去核技术待改进；克隆胚细胞核重编程的具体过程和导入的胎形成效率过低；建立hES细胞系转录因子的作用机制不明；制备iPS的效率低，且不稳定；hES细胞不细胞的效率低；iPS细胞体外诱导分化状态和多潜能性的条件待优化；定向分化的研究经验较少；逆转录诱导hES细胞体外定向分化成熟的病毒和慢病毒载体导致肿瘤发生的方案尚不完善；移植治疗存在成瘤性潜在风险；转染基因可能给机体带风险来不利影响伦理问题存在激烈的伦理学争议不存在伦理学争议细胞替代治疗理论上是最有希望的途径具有潜在的应用前景其他可能用途制备疾病的新模型以研究发病机制、药物筛选和鉴定药物治疗反应等6．对新建细胞系或株的细胞确认试验可采用哪些方法？列举一种或以上方法并说明其原理。
答：新建细胞系或株、细胞库（MCB和WCB）和生产终末细胞应进行鉴别试验，以确认为本细胞，无其他细胞的交叉污染。
细胞鉴别试验的方法有多种，包括细胞形态、生物化学法（如同工酶试验）、免疫学检测（如HLA、种特异性抗血清）、细胞遗传学检测（如染色体核型、标记染色体检测）、遗传标志检测（如DNA指纹图谱、STR图谱、基因组二核苷重复序列）等。
7．简述杂交瘤技术产生的三个技术关键。
答：（1）. B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的特性：B淋巴细胞：接受抗原刺激后，能分泌针对该抗原的特异性抗体，在体液免疫中具有重要功能。
B淋巴细胞本身是一种终末分化细胞，通常不再进行细胞分裂，存活一段时间后便会死亡——短命细胞骨髓瘤细胞：恶性增殖的转化细胞，只要营养条件适合可永远分裂和存活——长命细胞。
经筛选与驯化，现已建立多种骨髓瘤细胞株——没有抗体分泌物。
（2）. 细胞融合技术：两个不同基因型的细胞可形成一个杂种细胞。
基本过程包括细胞融合形成异核体、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的细胞称为杂种细胞或杂交细胞。
常用方法有生物方法：如仙台病毒化学方法：如聚乙二醇（PEG）物理方法：如电融合。
（3）. 杂交瘤细胞的筛选：人工诱导细胞融合是一个随机的过程，可能产生多种类型的细胞，筛选的目的是获得优良的杂种细胞。