气相色谱仪原理和使用

实验七气相色谱仪原理和使用

一、目的要求

1、掌握气相色谱仪结构、工作原理和内标法应用。

2、熟悉气相色谱仪的操作

3、了解气相色谱法在中药分析中的应用。

二、基本原理

仪器工作原理图

样品测定原理

牛黄解毒片由牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰片、甘草组成。其中冰片为龙脑和异龙脑的混合物，具挥发性。因此本实验采用GC法，对牛黄解毒片中所含冰片进行测定，并用内标法计算含量。

三、仪器与试药

1、气相色谱仪GC9800F（上海科创色谱仪器有限公司）、微量进样器。

2、水杨酸甲酯、乙醚、醋酸乙酯（AR）。

3、冰片对照品（中国药品生物制品检定所）。

4、牛黄解毒片（市售品）。

四、操作步骤

1、讲述仪器结构：N2钢瓶、空气钢瓶、氢气发生器，气体净化器；进样器、橡

胶垫片、衬管；柱温箱、毛细管柱、分流管、尾吹管；FID检测器

2、讲述仪器操作（详见附录）：

（1）顺时针打开氮气和空气钢瓶、接通氢气发生器电源。

（2）接通仪器电源。

（3）设置气化、柱箱、检测器温度，并运行。

（4）确定各气体流量。

（5）打开FID电源，设置灵敏度和衰减。

（6）打开电脑，打开N2000在线，选择通道1，设置方法、信息等。

（7）查看基线。

（8）点火。

（9）待基线稳定后进样。

（10）进入N2000离线，查看色谱图和数据。

（11）记录所需色谱峰保留时间、峰面积、分离度、塔板数、对称因子等。（12）利用内标法进行样品溶液浓度的计算。

（13）柱的老化。

（14）关机

3、样品分析

色谱条件以二甲基聚硅氧烷（SE-30）为固定相；柱温为130℃，气化室为200℃，；

载气为N

2；柱前压0.06MPa；H

2

0.03MPa（20ml/min）；空气0.03MPa；尾吹0.03MPa；

FID检测器，控制温度200℃。

校正因子测定

内标溶液配制取水杨酸甲酯0.5g，精密称定，置250ml量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，作为内标溶液(2mg/ml)。（已备）

对照品溶液配制取冰片对照品20mg，精密称定，置10ml量瓶中，加内标溶液至刻度，摇匀，作为对照品溶液(2mg/ml)。（已备）

测定校正因子取冰片对照品溶液1μl注入气相色谱仪，测定3次，计算校正因子。

测定法取本品6片，去薄膜衣，研细，取0.5g，精密称定，置15ml带塞试管中，加入乙醚10ml，密塞，冰水浴超声提取10min。提取液分两次转移至8ml 离心管中，离心（3000rpm，10min），倾出上清液，沉淀用5ml乙醚洗涤1次，离心，合并上清液，挥干，残渣用内标溶液溶解，移置10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。精密吸取1μl，注入气相色谱仪，测定，按内标法计算含量。（已备）

附GC9800F气相色谱仪的操作步骤

1、打开载气（N2）、空气气瓶，减压至0.3-0.4MPa，开启氢气发生器，确认整个

气路系统不漏气。

2、打开仪器电源，从温度控制器面板输入柱箱（130℃）、气化室（200℃）、检

测器温度（200℃），然后按“启动”键。

3、打开气阀（位于温度控制器右上方），调整载气（N2）、空气，氢气的压力和

流速，（实验前均调好，因仪器调钮严重滞后，老师学生一般实验时不要轻易动调钮）。

4、打开FID电源，选择FID灵敏度（109Ω→2档）和信号衰减（1）

5、打开微机开关，调用N2000气相色谱在线分析程序，输入相关的信息（选择

通道1、实验信息、方法等），进入数据采集窗口。

6、按下“查看基线”按钮(数据采集窗口靠右侧第一个按钮)，考察基线是否平

稳。

7、基线平稳后，检测器温度高于100℃后，即可点火（点火口位于温度控制器

顶部）。点火后，基流变小，即基线降低。关闭点火开关。

8、待基线再次平稳后，按“斜率测试”按钮（数据采集窗口靠右侧第五个按钮），

进行斜率检查，进样分析，进样口位于温度控制器顶部。进样的同时，按下“数据采集”按钮（数据采集窗口靠右侧第二个按钮）。

9、进入N2000离线，查看色谱图和数据。

10、记录所需色谱峰保留时间、峰面积、分离度、塔板数、对称因子等。

11、利用内标法进行样品溶液浓度的计算。

12、柱的老化：设置柱温200℃，恒温20分钟。

13、关机顺序：

a)关闭氢气阀（熄火）、氢气发生器、空气，重新打开氢气阀（排除剩余氢

气）。

b)设置柱温50℃，待恒温后关机。

c)关闭载气。