多糖分离纯化15页PPT
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香菇多糖提取工艺 ppt课件
超声波提取法 向香菇处理物中加入蒸馏水，进行超声波处理浸提。
8000r/min离心五分钟，取上清液，用旋转蒸发仪浓缩至10~20ml，加入两倍 体积的无水乙醇，进行醇沉。放置过夜后再次离心，留取沉淀物，干燥至恒重。
复合酶浸提法 向香菇处理物的中加 0.1g纤维素酶和0.5g果胶酶,目的是为了酶解细
胞表面结构及细胞间连接物,使其部分糖类物质的溶出。往酶解后的香菇处理物中加入 20 倍体积的蒸馏水,并在40水浴恒温下浸泡80min 。迅速升温沸腾90min ,后过滤得滤液。离 心沉淀,上清液浓缩,乙醇沉淀。
香菇多糖提取工艺
精品资料
• 你怎么称呼老师？
• 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你 是否会认为老师的教学方法需要改进？
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭
• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
香菇多糖提取工艺
thanks for watching
香菇多糖提取工艺
复合酶解,酸与热水相结合浸提法 向香菇处理物中加 0.1g纤维素酶和 0.5g果
胶酶,目的是为了酶解细胞表面结构及细胞间连接物, 使其部分糖类物质的溶出。加 20倍体 积的水在 40 水浴恒温下浸泡 80min。后再迅速升温煮沸 60min,用 4层纱布过滤后收集滤 液, 再调节 pH分别为 4.5、5.0、5.5 ,进行酸浸提, 然后再用 4层纱布过滤后收集滤液。合 并两次滤液。浓缩。
热水浸提法 向香菇处理物中加入 20倍体积的蒸馏水,并在 40℃ 水浴恒温下浸泡 4h。
放置冰箱冷冻柜中冷冻过夜。将香菇浸泡液从冰箱中取出, 解冻后在恒温水浴箱内分别抽 提 30min、 60min、90min ,用4层纱布过滤后收集滤液。向滤渣中加入20倍体积的蒸馏 水再抽提一次, 沸煮时间同上用 4层纱布过滤后收集滤液,合并两次滤液。
8000r/min离心五分钟，取上清液，用旋转蒸发仪浓缩至10~20ml，加入两倍 体积的无水乙醇，进行醇沉。放置过夜后再次离心，留取沉淀物，干燥至恒重。
复合酶浸提法 向香菇处理物的中加 0.1g纤维素酶和0.5g果胶酶,目的是为了酶解细
胞表面结构及细胞间连接物,使其部分糖类物质的溶出。往酶解后的香菇处理物中加入 20 倍体积的蒸馏水,并在40水浴恒温下浸泡80min 。迅速升温沸腾90min ,后过滤得滤液。离 心沉淀,上清液浓缩,乙醇沉淀。
香菇多糖提取工艺
精品资料
• 你怎么称呼老师？
• 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你 是否会认为老师的教学方法需要改进？
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭
• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
香菇多糖提取工艺
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香菇多糖提取工艺
复合酶解,酸与热水相结合浸提法 向香菇处理物中加 0.1g纤维素酶和 0.5g果
胶酶,目的是为了酶解细胞表面结构及细胞间连接物, 使其部分糖类物质的溶出。加 20倍体 积的水在 40 水浴恒温下浸泡 80min。后再迅速升温煮沸 60min,用 4层纱布过滤后收集滤 液, 再调节 pH分别为 4.5、5.0、5.5 ,进行酸浸提, 然后再用 4层纱布过滤后收集滤液。合 并两次滤液。浓缩。
热水浸提法 向香菇处理物中加入 20倍体积的蒸馏水,并在 40℃ 水浴恒温下浸泡 4h。
放置冰箱冷冻柜中冷冻过夜。将香菇浸泡液从冰箱中取出, 解冻后在恒温水浴箱内分别抽 提 30min、 60min、90min ,用4层纱布过滤后收集滤液。向滤渣中加入20倍体积的蒸馏 水再抽提一次, 沸煮时间同上用 4层纱布过滤后收集滤液,合并两次滤液。
多糖的分离纯化及分析
多糖的分离纯化及分析(总3页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法（一）溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5h，多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.（二）生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
（三）超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。
（四）微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。
糖的化学提取分离纯化课件
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• 2.脂多糖革兰阴性菌的细胞壁较复杂含-脂多糖
糖的化学提取分离纯化
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三.多糖提取分离和纯化的原理
• (一)多糖提取分离
• 第一类难溶于水的提取、第二类易溶于水的提取、
• 第三类粘多糖的提取
• (1)碱液抽提法 (2) 蛋白水解酶消化法
• (二)多糖的纯化 1.分级沉淀法 2.季铵盐络合法
• 5.人工合成多糖。
• 二多糖按其在生物体内的生糖按其组成分类：
• 1.均一多糖 2.不均一多糖 3.粘多糖 4.结合糖
• (1)糖蛋白 1)和含羟基氨基酸以糖苷键以 O 连接
•
2)糖和天冬酰胺的酰胺基以 N 连接 (3) 糖脂
• (2)蛋白聚糖 1)鞘糖脂 2)甘油糖脂
• 3.离子交换层析法 4.制备性区带电泳
• 四多糖理化性质测定。
• (一)多糖的含量测定蒽酮试剂法 620 nm
• (二)多糖的纯度分析紫外扫描法 200 nm
• (三)多糖的分子量测定
• 1.凝胶柱层析法
• 2.特性粘度法
糖的化学提取分离纯化
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五.多糖结构分析的基本原理
物理方法: 红外光谱磁共振光谱质谱 X-射线衍射化学方法化学降解法酶降解法 免疫化学法放射化学法 （一）多糖组成成分分析 1. 酸水解 2. 乙酰解 3.甲醇解。 （二）多糖结构的甲基化分析
•
3)磷酸多糖的萜化学提醇取分糖离纯脂化 4)类固醇糖脂
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二，自然界存在的重要多糖的化学结构与生理功能
• (一)淀粉 (stach)
糖的化学提取分离纯化
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（二）糖原（肝糖）
（四） 和纤维素
（五）琼 胶（agar）
糖的化学提取分离纯化
茶多糖的提取分离PPT课件
利用多糖类物质与其他杂质的分子量差异 ，通过超滤、凝胶色谱等方法将多糖类物 质与杂质分离。
电荷差异
吸附性能差异
利用多糖类物质与其他杂质的电荷差异， 通过离子交换法将多糖类物质与杂质分离 。
利用多糖类物质与其他杂质的吸附性能差 异，通过吸附剂吸附将多糖类物质与杂质 分离。
分离纯化过程
1. 原料准备
选择优质的茶叶原料，进行破碎、 研磨等处理，以便于后续的提取和 分离。
提取原理
热水提取
茶多糖是水溶性化合物，热水可以将 其从茶叶中溶解出来。
酸碱提取
茶多糖在不同的酸碱条件下溶解度不 同，通过调整酸碱度可以促进茶多糖 的溶解和提取。
提取过程
01
02
03
04
茶叶粉碎
将茶叶粉碎成适当大小的颗粒 ，增加茶叶与溶剂的接触面积
，有利于提取。
溶剂浸泡
将茶叶颗粒与溶剂混合，浸泡 一定时间，使茶多糖充分溶解
疾病。
茶多糖具有抗氧化活性， 能够清除自由基，延缓
衰老。
茶多糖能够增强机体免 疫力，提高抗病能力。
02 茶多糖的提取
提取方法
水提法
利用热水从茶叶中提取茶 多糖，是最常用的方法。
酸提法
利用酸性溶液提取茶多糖， 但需要注意控制pH值，避 免影响茶多糖的结构和活 性。
碱提法
利用碱性溶液提取茶多糖， 同样需要注意控制pH值， 避免破坏茶多糖的结构。
农业领域
茶多糖可应用于农业领域，如提高作物抗逆性、增加产量等 。
05 茶多糖的未来展望
茶多糖的深入研究
深入研究茶多糖的结构与功能关系
通过深入研究茶多糖的精细结构，进一步揭示其生物活性与药理作用，为新药研 发提供理论支持。
植物多糖分离纯化方案 ppt课件
粗多糖提取
将所用的植物制品粉碎、过筛、烘干
加20倍体积蒸馏水，60~80℃水浴回流提取4~6 h 离心(5 000×g，10 min)
【取两滴上清液，稀释后加入4 ml 0．1％蒽酮．硫酸溶液，沸水浴7 min，呈 现绿色，说明其中含有糖。再取上清液滴于滤纸上喷0．25％茚三酮试液 ， 加热后立即呈紫红色，说明其中含有蛋白质，需要除蛋白。】
取上清，70°C减压浓缩 加3倍体积95％ 乙醇沉淀，至醇含量在80％以上，不断搅拌
离心收集沉淀，将沉淀置于布氏漏斗中，分别用无水甲醇、丙醇和乙 醚洗涤，以除去水分和杂质
冷冻干燥，得粗多糖
植物多糖的提取
多糖不同的植物中，有着不同的含量和 贮存位置，因此针对不同的植物有着不 同的分离方法。
溶剂提取法
植物多糖分离纯化方案
溶于最小体积水中，用Sevage法，5：1氯仿、正丁醇溶液以3OOO r／min 离心20min脱蛋白
考马斯亮蓝G-250法，重复五次，直至紫外分析无280mm 、260mm 杂蛋白 和核酸吸收峰为止检测至无蛋白质被测出
对流水透析3 d，真空冷冻干燥溶于一定量蒸馏水中，离心(8 000 X g， 5 min)，取上清
在阴离子交换纤维素DE．52柱(4．0 cm x25 cm)上层析。先以多于一个 柱体积的蒸馏水洗脱，再用0～4 mol/L NaCI(250 mL／250mL)线性梯 度洗脱，流速为24 mL/h
• 提取液中加入中性醋酸铅可沉淀去除大部分酸性、酚性的 杂质（如有机酸、氨基酸、蛋白质、树脂酸、黄酮、蒽醌 、鞣质等），包括酸性多糖。而用碱式醋酸铅对多糖的沉 淀就更为完全。除去杂质后的母液用H2S脱盐后，单糖、 低聚糖和水溶性较大的中性苷类仍保留在滤液中。铅盐沉 淀法除去杂质比较完全，母液脱铅后可用于单糖和低聚糖 的定量，也可用铜盐沉淀法提取多糖。
多糖的分离纯化及性质表征PPT课件
一级结构：糖基的组成、糖基的排列顺序、相邻糖基 的连接方式，异头碳构型一级糖链有无分支，分支的位 置和长短等。
高级结构
二级结构：多糖主链间以氢键为主要次级键而形成的 有规则的构象
三级结构：以二级结构为基础，由于糖单位羟基、羧 基、氨基以及硫酸基之间之间的非共价相互作用，导致 二级结构在有序的空间里产生的有规则的构象
2.5脱蛋白
脱蛋白效果的检测方法
1.除去蛋白质的样品用紫外分光光度计检验，观察在 280mm处是否有吸收，如果无吸收则表明蛋白质已经 除尽。
2.茚三酮反应检测，结果呈阴性表明蛋白基本除去。
2.6脱色
活性炭脱色
活性炭属于非极性吸附剂，有着较强的吸附能力，特 别适合于水溶性物质的分离。
活性炭脱色效果同活性炭类型、活性炭用量、脱色温 度及pH值等相关。
多糖的纯度鉴定
电泳法（Electrophoresis）
多糖在电场作用下，按其分子大小、形状和所带电荷 的不同而移动不同的距离。若为纯品，电泳后会得单 一斑点。
较常用，目前主要有醋酸纤维薄膜电泳、高压电泳法、 聚丙烯凝胶电泳、琼脂糖凝胶电泳、玻璃纤维纸电泳 等
多糖的纯度鉴定
比旋光度测定法
不同的多糖具有不同的比旋度，同时在不同的低级醇 中有不同的溶解度。在一定浓度的低级醇中，分子量 大的较分子量小的溶解度小。因此，不同浓度的低级 醇中得到的多糖沉淀的比旋度相同，则证明该多糖为 均一组分。
吸附法 干葡聚糖凝胶加入提取液中，两者比例为1:5.由于凝 胶吸水，提取液的体积可缩小三倍左右，多糖回收率 达80%。
2.3多糖提取液浓缩
超滤法
在一定压力下，小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的薄 膜，而使大分子溶质不能透过，留在膜的一边，从而 使大分子物质得到部分的纯化。
高级结构
二级结构：多糖主链间以氢键为主要次级键而形成的 有规则的构象
三级结构：以二级结构为基础，由于糖单位羟基、羧 基、氨基以及硫酸基之间之间的非共价相互作用，导致 二级结构在有序的空间里产生的有规则的构象
2.5脱蛋白
脱蛋白效果的检测方法
1.除去蛋白质的样品用紫外分光光度计检验，观察在 280mm处是否有吸收，如果无吸收则表明蛋白质已经 除尽。
2.茚三酮反应检测，结果呈阴性表明蛋白基本除去。
2.6脱色
活性炭脱色
活性炭属于非极性吸附剂，有着较强的吸附能力，特 别适合于水溶性物质的分离。
活性炭脱色效果同活性炭类型、活性炭用量、脱色温 度及pH值等相关。
多糖的纯度鉴定
电泳法（Electrophoresis）
多糖在电场作用下，按其分子大小、形状和所带电荷 的不同而移动不同的距离。若为纯品，电泳后会得单 一斑点。
较常用，目前主要有醋酸纤维薄膜电泳、高压电泳法、 聚丙烯凝胶电泳、琼脂糖凝胶电泳、玻璃纤维纸电泳 等
多糖的纯度鉴定
比旋光度测定法
不同的多糖具有不同的比旋度，同时在不同的低级醇 中有不同的溶解度。在一定浓度的低级醇中，分子量 大的较分子量小的溶解度小。因此，不同浓度的低级 醇中得到的多糖沉淀的比旋度相同，则证明该多糖为 均一组分。
吸附法 干葡聚糖凝胶加入提取液中，两者比例为1:5.由于凝 胶吸水，提取液的体积可缩小三倍左右，多糖回收率 达80%。
2.3多糖提取液浓缩
超滤法
在一定压力下，小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的薄 膜，而使大分子溶质不能透过，留在膜的一边，从而 使大分子物质得到部分的纯化。
微生物多糖提取与纯化.ppt
剂等
2 、医药领域 大多数真菌多糖具有抗肿瘤、免疫调节、 抗衰老、抗感染等生物学功能
3 、环境保护(污水处理) 微生物代谢产物处理废水是一 个极具应用前景的废水处理方式，多糖是该代谢产物的主 要成分，因它所带的负电荷基团可以和二价阳离子结合而
在生物絮凝和重金属处理中起着非常重要的作用
微生物多糖的提纯方法
糖又相继被人们发现
黄原胶 是新型多糖类发酵产品， 1961 年首先 由美国Kelco 公司投入工业化生产，目前被广泛应 用于食品、石油、地矿、陶瓷、纺织、印染、医 药、造纸、灭火、涂料、化妆品等 20 多个行业， 用作3 0 -- 4 0 多个品种。
黄原胶被誉为“工业味精”，是目前世界上生
产规模最大且用途极为广泛的微生物多糖。
（2）、菌丝体胞内多糖的提取：
菌丝体
热水80～90℃
上清液 浓缩离心
上清（弃去）
沉淀物（水 溶性多糖）
残渣 0.5M NaOH 25℃
残渣
上清液 沉淀浓缩
上清液
残渣（弃去）
沉淀物（冷碱提 水溶多糖）
透析沉淀
沉淀物（热碱提水溶多 糖）
粗多糖纯化
粗多糖的纯化第一步是去除杂蛋白。灵芝菌深层培养产物菌丝 体和发酵液提取粗多糖，杂蛋白含量少，可采用 Sevage 法除去， 即将粗多糖溶于热水后， 以1:4 的丁醇氯仿混合液振荡至有机层 澄清为止。对于杂蛋白含量高的子实体提取物则应先用蛋白酶处 理再用Sevage 法除去杂蛋白。除蛋白后的多糖还含有较多其他杂 质。可通过柱层析进一步除去。方法如下：将除杂蛋白后的多糖 溶于0.1M Nacl 中，加入 DEAE-Sephadex A-25 层析柱内 ,以0.1M Nacl 洗至无糖检出，再继续进行梯度洗脱，然后透析，无水乙醇 沉淀。最后取样品溶于尽可能少的 0.1M Nacl 中，上Sephadex g200 层析柱，继续用 0.1M Nacl 以10mL/h 的流速洗脱后收集，测 定含糖部分，合并相同峰，经透析，乙醇沉淀，丙酮，乙醚洗涤，
2 、医药领域 大多数真菌多糖具有抗肿瘤、免疫调节、 抗衰老、抗感染等生物学功能
3 、环境保护(污水处理) 微生物代谢产物处理废水是一 个极具应用前景的废水处理方式，多糖是该代谢产物的主 要成分，因它所带的负电荷基团可以和二价阳离子结合而
在生物絮凝和重金属处理中起着非常重要的作用
微生物多糖的提纯方法
糖又相继被人们发现
黄原胶 是新型多糖类发酵产品， 1961 年首先 由美国Kelco 公司投入工业化生产，目前被广泛应 用于食品、石油、地矿、陶瓷、纺织、印染、医 药、造纸、灭火、涂料、化妆品等 20 多个行业， 用作3 0 -- 4 0 多个品种。
黄原胶被誉为“工业味精”，是目前世界上生
产规模最大且用途极为广泛的微生物多糖。
（2）、菌丝体胞内多糖的提取：
菌丝体
热水80～90℃
上清液 浓缩离心
上清（弃去）
沉淀物（水 溶性多糖）
残渣 0.5M NaOH 25℃
残渣
上清液 沉淀浓缩
上清液
残渣（弃去）
沉淀物（冷碱提 水溶多糖）
透析沉淀
沉淀物（热碱提水溶多 糖）
粗多糖纯化
粗多糖的纯化第一步是去除杂蛋白。灵芝菌深层培养产物菌丝 体和发酵液提取粗多糖，杂蛋白含量少，可采用 Sevage 法除去， 即将粗多糖溶于热水后， 以1:4 的丁醇氯仿混合液振荡至有机层 澄清为止。对于杂蛋白含量高的子实体提取物则应先用蛋白酶处 理再用Sevage 法除去杂蛋白。除蛋白后的多糖还含有较多其他杂 质。可通过柱层析进一步除去。方法如下：将除杂蛋白后的多糖 溶于0.1M Nacl 中，加入 DEAE-Sephadex A-25 层析柱内 ,以0.1M Nacl 洗至无糖检出，再继续进行梯度洗脱，然后透析，无水乙醇 沉淀。最后取样品溶于尽可能少的 0.1M Nacl 中，上Sephadex g200 层析柱，继续用 0.1M Nacl 以10mL/h 的流速洗脱后收集，测 定含糖部分，合并相同峰，经透析，乙醇沉淀，丙酮，乙醚洗涤，
灵芝多糖提取PPT课件
2019/11/1
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谢谢观看
2019/11/1
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2019/11/1
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灵芝多糖的提取
2019/11/1
1
灵芝多糖的提取方法
• 1. 溶剂提取法 水提醇沉法、酸提法、碱提法、超临界流体萃取法
• 2. 酶解提取法 单一酶解法、复合酶解法
• 3. 强化提取法 超声波辅助提取法、微波辅助提取法、高压脉冲法
2019/11/1
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水提醇沉法流程
• 赤灵芝
筛 水浴提取
缩 除蛋白
干燥溶剂沉淀得到的粗多糖中 常含有较多的蛋白质, 需要除蛋白。
• 除蛋白的方法传统上有Sevage 法、三氯乙 酸法、三氟三氯乙烷法等。
2019/11/1
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Sevage 法
• 根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性的特 点 ， 用 V( 氯 仿 )∶V( 戊 醇 或 正 丁 醇 ) 为 5∶1 或4∶1，混合物剧烈振摇20～30 min，蛋 白质变性生成凝胶，离心分离，分去水层 和溶剂层交界处的变性蛋白质。
• 此法不能除去脂蛋白，因为脂蛋白溶于氯仿。
2019/11/1
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2019/11/1
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多糖纯化
• 超滤法 • 季胺盐沉淀法 • 柱层析法 • 色谱法 • 其他方法
2019/11/1
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纤维素柱层析
柱中的载体是纤维素。先用乙醇液将柱内 纤维素平衡好, 然后将多糖混合物全部沉淀 于惰性的纤维素上面。用不同浓度乙醇水 溶液(如80%, 60%, 40%, 20% ) 梯度洗脱, 则不同多糖就依次洗脱出来。先洗脱的是 分子量最小的多糖, 最终洗脱的是分子量最 大的多糖。在洗脱过程中, 由于各种多糖在 柱上进行无数次的溶解和沉淀过程, 最终将 各种多糖分离开来。