192超敏反应性疾病的免疫学检验

某些过敏体质者高于正常1000～10000倍
0.1～0.9mg/L 参考值
特应症、支气管肺曲菌病、 药物性间质性肺炎、麻风、 寄生虫病及IgE型骨髓瘤等
血清IgE高
二、特异性IgE的测定
用纯化的过敏原去检测相应的IgE抗体的一类试验。 ①酶联免疫吸附试验：常用间接法测特异性IgE。 ②免疫印迹技术：操作简单，能一次性测定多种变。 应原的特异性IgE，故临床已普遍采用IBT法。
2.技术要点 生物化学检验。
3.注意事项
①2%PEG沉淀大分子CIC； ②4%PEG沉淀较小分子CIC； ③超过5%PEG选择性沉淀CIC的特性消失； ④温度影响极大，需进行温差校正； ⑤低密度脂蛋白使浊度增加，空腹采血； ⑥高γ球蛋白血症和标本反复冻融浊度增加。
（二）ELISA法
1.基本原理 ELISA法测定的CIC，是能够结合C1q的 IgG类抗体与其特异性抗原形成的CIC。
192超敏反应性疾病的免疫学检验
目录
1 激发试验 2 IgE的检测 3 免疫复合物检测 4 抗球蛋白试验 5 药物过敏筛选实验
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超敏反应
超敏反应（hypersensitivity）又称变态反应，是 指机体再次接受相同抗原刺激后，发生的以组织细胞 损伤或生理功能紊乱为主的特异性免疫应答。
IgG，操作繁琐; ③Raii细胞培养较困难，不易长期稳定保持
其特性，培养条件受限。
（四）抗球蛋白技术—mRF凝胶扩散试验
1.基本原理 IgG或IgM类自身抗体与IC中IgG的Fc 段结合而不与游离IgG结合的特性，mRF与CIC亲和 力较强。
特异性抗原 条带显色
+
底物
NC膜—变应原—特异性IgE—抗-IgE·HRP
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抗-IgE·HRP
第三节 免疫复合物检测
免疫复合物（immune complex, IC）:指由抗原与相应 的抗体结合而成的复合物。
局部免疫复合物：沉积在机体的某一局部。 循环IC（circulating IC, CIC）：血液中存在的IC。 Ⅲ型超敏反应：在传染病或性病时，IC沉淀于局部后
结核菌ห้องสมุดไป่ตู้试验
是用结核菌素进行皮肤试验，通过观察局部是否出 现迟发型超敏反应，判断机体有无结核分枝杆菌感 染和对该菌的免疫力。
阳性：机体已感染过结核杆菌或BCG接种成功； 强阳性：可能有活动性结核病； 阴性：机体未感染过结核分枝杆菌，
但应考虑： ①感染初期； ②老年人； ③重度结核病患者，机体处于免疫反应低下状态； ④患有其他疾病。
（三）细胞法—Raji细胞法
1.基本原理
Raji细胞是从Burkitt淋巴瘤分离建株似 B细胞系，在体外繁殖传代，细胞表面有高密度的 C1q、C3b、C3d等补体受体，而且不易脱落。
2.技术要点
将定量待检血清、HAHG和Raji细胞混合，使补 体、CIC或HAHG与Raji细胞形成复合物，加入 抗人IgG·FIC，形成Raji细胞—补体—CIC(或 HAHG)—抗人IgG·FIC复合物，检测荧光强度。
变应原（allergen）：引起超敏反应的抗原称 之为变应原。
第一节 激发试验
激发试验（provocation test） 是模拟自然发病 条件，用少量超敏原引起一次较轻的超敏反应发 作，达到确定超敏原的一种体内试验。
非特异性激发：是用组胺等刺激物做雾化吸入， 以观察患者对Ⅰ型超敏反应的敏感性，进而分 析病因或判定疗效。
（二）测定指标及结果判断
定性判断
2
②阴性：气道反应性正常 FEV1、PEF或sGaw＜上述标准，正常值为阴性。 无论激发试验阳性或阴性，均应排除气道反应性的影 响因素。可疑者，间隔2～3周后复检或2个月后再测。
（三）注意事项及禁忌证
禁忌证
1
受试者在心肺功能不全、高血压、甲亢、妊娠、严 重咽喉炎、呼吸道感染或肺炎等情况下一般不适宜 作激发试验；
技术要点
口吸入 测基础肺功能
激发物稀释液：
低浓度/小剂量→双倍浓度/剂量递增
1～1分半钟
阳性伴明显气促、喘息 吸入
测定肺功能 直至
支气管 舒张剂
激发物达到最高浓度 阴性反应
阳性标准/ 明显不适/ 临床症状
（二）测定指标及结果判断
支气管反应有三种类型：速发、迟发和双重反应。 每次观察不能小于24小时。
作为参考标准品，绘制标准曲线进行CIC定量或测定 A值代表CIC相当于HAHG的含量。
CIC的检测方法：按抗体分子在结合抗原后发生的 物理学和生物学特性的改变而设计。 ①PEG比浊法; ②ELISA法; ③胞法——Raji细胞法; ④抗球蛋白技术—mRF凝胶扩散试验。
（一）PEG比浊法
1.基本原理 聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）为 不带电荷、直链大分子结构的多糖，有强脱水作用， 利用2%～4%浓度的PEG可选择性沉淀大分子CIC。
3.影响因素
①培养条件能改变Raji细胞其表面受体的数 量及亲和性，影响检测敏感性; ②待检血清中如有抗淋巴细胞的抗体，能和 Raji细胞反应; ③SLE血清中的抗DNA也能和Raji细胞反应， 使测定结果偏高。
4.方法评价
①敏感性高(6mg/L HAHG)，实用性强； ②缺点需培养Raji细胞和同位素标记抗人
二、支气管激发试验
bronchial provocative test,BPT 测定支气管吸入某种刺激性物质后产生收缩反应程
度的方法，亦称气道反应性测定； 吸入一定量的激发物； 比较吸入前后肺通气功能指标； 判断气道高反应性程度。
手捏式雾化器
雾化抗原颗粒≤5微米
射流雾化器
测定肺功能指标： 用力肺活量(FVC) 1秒用力呼气容积(FEV1) 最大呼气流速(PEF) 比气道传导率(sGaw)
迟发型皮肤试验结果判定 阳性结果以红肿和硬结为主。
皮内试验
方法
结果
相同超敏原不同稀释度
4mm/针
0.01～0.03ml/针
迟发型 48～72h内观察
速发型 15～30min内观察
点刺试验
将试验抗原与对照液分别 滴于试验部位的皮肤上
用针尖透过液滴轻挑一下 以刺破皮肤而不出血为度
1min后拭（吸）去试验抗原液
（三）结果分析及注意事项
假阳性出现的常见原因： ①皮试液含有非特异性刺激物； ②患者患有皮肤划痕征； ③操作手法较重； ④注入量较大或浓度过高； ⑤注入少量空气等。
如何避免假性结果的出现： 询问病史 必备抢救药品和设施
阳性对照
阴性对照
皮试液浓度 适应证
（四）应用与评价
预防药物或疫苗等过敏 防治Ⅰ型超敏反应性疾病 结核菌素试验 评估机体细胞免疫功能 预防皮肤接触过敏
注意事项
2
基础FEV1占预计值70%以上才能进行试验。 受试者应为哮喘患者病情稳定时或缓解期。 吸入激发物的浓度应从小到大，逐渐递增。 应备有急救器械、药品和有经验的临床医生在场。
（四）应用与评价
①
有一定的危险性，但较皮肤试验的特异性高
②
与受试者的病史、症状和体征相关性较强
③
确定支气管哮喘的过敏原，尤其皮试结果不肯定时
（一）试验类型及方法
特异性BPT 将一定浓度的抗原刺激物装入雾化器中 使受试者经口或鼻吸入雾化颗粒，其携带激发物在 支气管树及肺泡沉积而起作用。
非特异性BPT 将一定浓度的激发物装入雾化器中， 进行同特异性BPT的操作。
吸气流速、雾化颗粒直径的大小以及气道通畅与否 均可影响雾化颗粒在气道的沉积，从而影响气道的 反应性。
阳性。
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第二节 IgE的检测
一、IgE的测定
ELISA 双抗体夹心法，操作简便，敏感性很 高，是测定血清IgE最常用的方法
测定方法 CLIA敏感度更高，特异性高，定量
固相RIA是较传统的IgE检测方法
临床意义 正常人群血清IgE水平受地域环境、种 族、遗传、年龄、性别、寄生虫感染、测定法及取 样等影响，结果有一定差异。
2.技术要点 将聚苯乙烯包被上C1q，加入受检血清， CIC中IgG的Fc段与C1q结合，再加抗人IgG·HRP， 形成C1q-CIC-抗人IgG·HRP复合物，加底物显色。
3.方法评价
①灵敏度高于PEG比浊法，检测到0.1mg/L，重 复性好等优点； ②C1q制品不易精制, 纯品不稳定，只能检出与补 体结合的CIC。
激活补体，最终导致组织损伤，形成IC病。
抗原特异性IC
检测已知抗原 与相应抗体形 成的IC
抗原非特异性IC
不考虑形成IC 抗原的性质， 检测未知抗原 与相应抗体形 成的IC总量
一、抗原非特异性CIC检测技术
CIC：分子量600kDa以上，沉降系数＞19S； 热聚合人IgG(heat agglutination human IgG, HAHG)：
有过敏性休克，严重的血管性水肿及严重的喉头水 肿病史者；
一周之内预防接种、职业性过敏因素的接触等。
（三）注意事项及禁忌证
注意事项
2
受试者在检查前：
48小时：停！抗组胺药、色甘酸钠及皮质激素类药; 12小时：停！支气管扩张剂;
15分钟：实验室休息,病史、体检排除BPT的禁忌证。
（三）注意事项及禁忌证
测定指标
1
FEV1：重复性好，结果稳定； PEF：峰流速仪价格低廉、方便、不受场地限制，
与FEV1有较好的相关性，适合流行病学调查； sGaw：敏感性好，但重复性稍差。
（二）测定指标及结果判断
定性判断
2
变应原的确定常以定性试验判断结果。 ①阳性：气道反应性增高
FEV1、PEF较基础下降≥20％或sGaw下降≥35%， 有时伴有明显自觉症状或肺部闻及哮鸣音。
食物所致过敏