192超敏反应性疾病的免疫学检验

3.影响因素
①培养条件能改变Raji细胞其表面受体的数 量及亲和性，影响检测敏感性; ②待检血清中如有抗淋巴细胞的抗体，能和 Raji细胞反应; ③SLE血清中的抗DNA也能和Raji细胞反应， 使测定结果偏高。
4.方法评价
①敏感性高(6mg/L HAHG)，实用性强； ②缺点需培养Raji细胞和同位素标记抗人
注意事项
2
基础FEV1占预计值70%以上才能进行试验。 受试者应为哮喘患者病情稳定时或缓解期。 吸入激发物的浓度应从小到大，逐渐递增。 应备有急救器械、药品和有经验的临床医生在场。
（四）应用与评价
①
有一定的危险性，但较皮肤试验的特异性高
②
与受试者的病史、症状和体征相关性较强
③
确定支气管哮喘的过敏原，尤其皮试结果不肯定时
2.技术要点 生物化学检验。
3.注意事项
①2%PEG沉淀大分子CIC； ②4%PEG沉淀较小分子CIC； ③超过5%PEG选择性沉淀CIC的特性消失； ④温度影响极大，需进行温差校正； ⑤低密度脂蛋白使浊度增加，空腹采血； ⑥高γ球蛋白血症和标本反复冻融浊度增加。
（二）ELISA法
1.基本原理 ELISA法测定的CIC，是能够结合C1q的 IgG类抗体与其特异性抗原形成的CIC。
二、支气管激发试验
bronchial provocative test,BPT 测定支气管吸入某种刺激性物质后产生收缩反应程
度的方法，亦称气道反应性测定； 吸入一定量的激发物； 比较吸入前后肺通气功能指标； 判断气道高反应性程度。
手捏式雾化器
雾化抗原颗粒≤5微米
射流雾化器
测定肺功能指标： 用力肺活量(FVC) 1秒用力呼气容积(FEV1) 最大呼气流速(PEF) 比气道传导率(sGaw)
192超敏反应性疾病的免疫学检验
目录
1 激发试验 2 IgE的检测 3 免疫复合物检测 4 抗球蛋白试验 5 药物过敏筛选实验
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超敏反应
超敏反应（hypersensitivity）又称变态反应，是 指机体再次接受相同抗原刺激后，发生的以组织细胞 损伤或生理功能紊乱为主的特异性免疫应答。
特异性激发：是用抗原如尘螨等做试验，对明确 超敏原有一定价值。
用于Ⅰ型和Ⅳ型超敏反应性疾病的检查。
一、皮肤试验
是在皮肤进行的体内免疫学试验，简称皮试。机制：
Ⅰ型超敏反应
Ⅳ型超敏反应
（一）试验类型及方法
皮内试验 点刺试验（挑刺或刺痕试验） 斑贴试验
（二）结果判定及分级标准
速发型皮肤试验结果判定 阳性反应以风团为主； 点刺试验的阳性反应以红晕为主。
食物所致过敏
某食物为过敏原
四、其他方法
将超敏原直接与口腔黏膜接触，当口腔 口腔激发试验 黏膜出现肿胀和充血时，可判断为阳性
反应。
将超敏原滴于一眼，阳性反应为结膜充 结膜激发试验 血、水肿、分泌增加、搔痒，甚至眼睑
红肿。注意假阳性对结果的干扰。
将抗原吸入/滴入受试者鼻腔，出现鼻 鼻黏膜激发试验 黏膜水肿、苍白、鼻痒、流涕、喷嚏为
++++ 风团＞15mm伴红晕和伪足 风团伴红晕和伪足
迟发型皮试结果判定标准
反应程度
结果判定
-
无反应或小于阴性对照
+
仅有红肿
++
红肿伴硬结
+++
红肿、硬结、小疱
++++
大疱或/和溃疡
斑贴试验
第一次读：48小时打开斑试器,间隔30min待斑试器 压痕消失后判定结果。
第二次读：第3天或第4天。 如怀疑光过敏，在斑贴试验的基础上给予紫外线照
激活补体，最终导致组织损伤，形成IC病。
抗原特异性IC
检测已知抗原 与相应抗体形 成的IC
抗原非特异性IC
不考虑形成IC 抗原的性质， 检测未知抗原 与相应抗体形 成的IC总量
一、抗原非特异性CIC检测技术
CIC：分子量600kDa以上，沉降系数＞19S； 热聚合人IgG(heat agglutination human IgG, HAHG)：
结核菌素试验
是用结核菌素进行皮肤试验，通过观察局部是否出 现迟发型超敏反应，判断机体有无结核分枝杆菌感 染和对该菌的免疫力。
阳性：机体已感染过结核杆菌或BCG接种成功； 强阳性：可能有活动性结核病； 阴性：机体未感染过结核分枝杆菌，
但应考虑： ①感染初期； ②老年人； ③重度结核病患者，机体处于免疫反应低下状态； ④患有其他疾病。
特异性抗原 条带显色
+
底物
NC膜—变应原—特异性IgE—抗-IgE·HRP
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抗-IgE·HRP
第三节 免疫复合物检测
免疫复合物（immune complex, IC）:指由抗原与相应 的抗体结合而成的复合物。
局部免疫复合物：沉积在机体的某一局部。 循环IC（circulating IC, CIC）：血液中存在的IC。 Ⅲ型超敏反应：在传染病或性病时，IC沉淀于局部后
阳性。
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第二节 IgE的检测
一、IgE的测定
ELISA 双抗体夹心法，操作简便，敏感性很 高，是测定血清IgE最常用的方法
测定方法 CLIA敏感度更高，特异性高，定量
固相RIA是较传统的IgE检测方法
临床意义 正常人群血清IgE水平受地域环境、种 族、遗传、年龄、性别、寄生虫感染、测定法及取 样等影响，结果有一定差异。
ELISA间接法检测特异性IgE
洗涤
洗涤
EE E
1.已知变应原 2.待检特异性
包被载体
IgE抗体
3.酶标动物 抗人洗涤IgE
结果
（+）
EE E
4.底物显色
多种特异性变应原
-- -
IBT检测特异性IgE
特异性变应原加入待检血清 转印至NC膜
NC膜 -
待检血清 特异性IgE
分离特异性变应原条带
+ ++ + +
某些过敏体质者高于正常1000～10000倍
0.1～0.9mg/L 参考值
特应症、支气管肺曲菌病、 药物性间质性肺炎、麻风、 寄生虫病及IgE型骨髓瘤等
血清IgE高
二、特异性IgE的测定
用纯化的过敏原去检测相应的IgE抗体的一类试验。 ①酶联免疫吸附试验：常用间接法测特异性IgE。 ②免疫印迹技术：操作简单，能一次性测定多种变。 应原的特异性IgE，故临床已普遍采用IBT法。
（三）细胞法—Raji细胞法
1.基本原理
Raji细胞是从Burkitt淋巴瘤分离建株似 B细胞系，在体外繁殖传代，细胞表面有高密度的 C1q、C3b、C3d等补体受体，而且不易脱落。
2.技术要点
将定量待检血清、HAHG和Raji细胞混合，使补 体、CIC或HAHG与Raji细胞形成复合物，加入 抗人IgG·FIC，形成Raji细胞—补体—CIC(或 HAHG)—抗人IgG·FIC复合物，检测荧光强度。
比皮内试验敏感性稍低，但假阳性较少； 皮试液浓度要比皮内试验高10～100倍。
速发型皮肤试验的结果判定标准
分级
皮内试验
点刺试验
-
无风团或小于阴性对照
无风团反应或小于阴性对照
+
风团3～5mm、红晕＜20mm
++ 风团6～9mm伴红晕
+++ 风团10～15mm伴红晕
无风团,阴性对照＜红晕≤20mm 无风团，红晕＞20mm 风团伴红晕
射，操作过程相似。
斑贴试验结果判定标准
反应程度
结果判定
－
无反应或小于阴性对 照
+
轻度红肿、搔痒
++
明显红肿、时有红斑
+++
红肿伴皮疹、水疱
++++
红肿、水疱伴溃疡
（三）结果分析及注意事项
假阴性出现的常见原因： ①皮试液的浓度过低或失效； ②老年患者或过敏性休克或哮喘大发作之后； ③皮试前用过抗组胺药或免疫抑制剂； ④操作不当将皮试液注入皮下或注入量过少等。
（二）测定指标及结果判断
定性判断
2
②阴性：气道反应性正常 FEV1、PEF或sGaw＜上述标准，正常值为阴性。 无论激发试验阳性或阴性，均应排除气道反应性的影 响因素。可疑者，间隔2～3周后复检或2个月后再测。
（三）注意事项及禁忌证
禁忌证
1
受试者在心肺功能不全、高血压、甲亢、妊娠、严 重咽喉炎、呼吸道感染或肺炎等情况下一般不适宜 作激发试验；
2.技术要点 将聚苯乙烯包被上C1q，加入受检血清， CIC中IgG的Fc段与C1q结合，再加抗人IgG·HRP， 形成C1q-CIC-抗人IgG·HRP复合物，加底物显色。
3.方法评价
①灵敏度高于PEG比浊法，检测到0.1mg/L，重 复性好等优点； ②C1q制品不易精制, 纯品不稳定，只能检出与补 体结合的CIC。
④ 排除皮试时的假阳性反应和假阴性反应
⑤ 检测新制剂的抗原性、平喘药疗效及观察脱敏效果
⑥
缺点是每次仅能用一种抗原，要专门设备和技术， 并需对病人进行训练并与之配合
三、食物激发试验
基础 观察症状 症状好转 1周后 吃可疑的 导致 症状
饮食
或减轻
过敏食物
加重
1周后
疑似
症状未减轻
过敏原，重复3次
排除
确定
技术要点
口吸入 测基础肺功能
激发物稀释液：
低浓度/小剂量→双倍浓度/剂量递增
1～1分半钟
阳性伴明显气促、喘息 吸入
测定肺功能 直至
支气管 舒张剂
激发物达到最高浓度 阴性反应
阳性标准/ 明显不适/ 临床症状
（二）测定指标及结果判断
支气管反应有三种类型：速发、迟发和双重反应。 每次观察不能小于24小时。
有过敏性休克，严重的血管性水肿及严重的喉头水 肿病史者；
一周之内预防接种、职业性过敏因素的接触等。
（三）注意事项及禁忌证
注意事项
2
受试者在检查前：
48小时：停！抗组胺药、色甘酸钠及皮质激素类药; 12小时：停！支气管扩张剂;
15分钟：实验室休息,病史、体检排除BPT的禁忌证。
ห้องสมุดไป่ตู้ （三）注意事项及禁忌证
（三）结果分析及注意事项
假阳性出现的常见原因： ①皮试液含有非特异性刺激物； ②患者患有皮肤划痕征； ③操作手法较重； ④注入量较大或浓度过高； ⑤注入少量空气等。
如何避免假性结果的出现： 询问病史 必备抢救药品和设施
阳性对照
阴性对照
皮试液浓度 适应证
（四）应用与评价
预防药物或疫苗等过敏 防治Ⅰ型超敏反应性疾病 结核菌素试验 评估机体细胞免疫功能 预防皮肤接触过敏
（一）试验类型及方法
特异性BPT 将一定浓度的抗原刺激物装入雾化器中 使受试者经口或鼻吸入雾化颗粒，其携带激发物在 支气管树及肺泡沉积而起作用。
非特异性BPT 将一定浓度的激发物装入雾化器中， 进行同特异性BPT的操作。
吸气流速、雾化颗粒直径的大小以及气道通畅与否 均可影响雾化颗粒在气道的沉积，从而影响气道的 反应性。
IgG，操作繁琐; ③Raii细胞培养较困难，不易长期稳定保持
其特性，培养条件受限。
（四）抗球蛋白技术—mRF凝胶扩散试验
1.基本原理 IgG或IgM类自身抗体与IC中IgG的Fc 段结合而不与游离IgG结合的特性，mRF与CIC亲和 力较强。
作为参考标准品，绘制标准曲线进行CIC定量或测定 A值代表CIC相当于HAHG的含量。
CIC的检测方法：按抗体分子在结合抗原后发生的 物理学和生物学特性的改变而设计。 ①PEG比浊法; ②ELISA法; ③胞法——Raji细胞法; ④抗球蛋白技术—mRF凝胶扩散试验。
（一）PEG比浊法
1.基本原理 聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）为 不带电荷、直链大分子结构的多糖，有强脱水作用， 利用2%～4%浓度的PEG可选择性沉淀大分子CIC。
迟发型皮肤试验结果判定 阳性结果以红肿和硬结为主。
皮内试验
方法
结果
相同超敏原不同稀释度
4mm/针
0.01～0.03ml/针
迟发型 48～72h内观察
速发型 15～30min内观察
点刺试验
将试验抗原与对照液分别 滴于试验部位的皮肤上
用针尖透过液滴轻挑一下 以刺破皮肤而不出血为度
1min后拭（吸）去试验抗原液
变应原（allergen）：引起超敏反应的抗原称 之为变应原。
第一节 激发试验
激发试验（provocation test） 是模拟自然发病 条件，用少量超敏原引起一次较轻的超敏反应发 作，达到确定超敏原的一种体内试验。
非特异性激发：是用组胺等刺激物做雾化吸入， 以观察患者对Ⅰ型超敏反应的敏感性，进而分 析病因或判定疗效。
测定指标
1
FEV1：重复性好，结果稳定； PEF：峰流速仪价格低廉、方便、不受场地限制，
与FEV1有较好的相关性，适合流行病学调查； sGaw：敏感性好，但重复性稍差。
（二）测定指标及结果判断
定性判断
2
变应原的确定常以定性试验判断结果。 ①阳性：气道反应性增高
FEV1、PEF较基础下降≥20％或sGaw下降≥35%， 有时伴有明显自觉症状或肺部闻及哮鸣音。