色谱柱的日常维护

液相色谱柱的保养
1．柱易被极细的颗粒堵塞，因此必须将流动相 仔细地蒸馏、过滤。在流动相贮槽与柱之间， 使用0.5μm孔径的过滤器。水往往是一个重要 的污染源。在水溶液流动相(如缓冲液)中，细 菌容易生长，可能堵塞筛板。防止细菌生长的 办法是加入抑制剂，如0.01%NaNO3。显然， 抑制剂不能干扰分离和测定。
色谱柱的日常维护
液相色谱柱的保养
柱的稳定性与固定相类型及使用情况有关。如流动 相中盐类的存在会使键合相柱的性能衰退；以 SiO2为基质的固定相，过程随温度和pH(>8)增加 而加速。一根柱子使用是否得当，直接影响它的 柱效和寿命。对于填装了粒度为10μm以下的固 定相的柱子，尤其如此。为了保持柱效、柱容量 及渗透性，必须进行仔细地保养。是否会由于柱 外效应，使分析柱的柱效明显下降？
气相色谱柱的故障诊断与排除
无峰或峰很小
色谱柱是否与进样口和检测器正确地连接 进样口是否漏
更换进样垫 检查进样衬管是否损坏 柱是否与进样口连接？? 是否使用自动进样器 检查进样针 更换进样针推杆 样品瓶中是否有足够的样品，以便进样针能吸到样 品？ 若使用冷柱头进样，检查TEFLON垫是否有漏 点火了吗？ (FID) 柱中是否有载气
基线偏离或漂移
基线偏离
不规律地升高或降低
在整个色谱过程中基线不规 律地升高或降低
偏离或漂移是由于下列原 因产生的
温度 流速
偏离
确保在两次进样之间有足 够的平衡时间 检查体系是否有漏
主要检查进样口部分 柱前
前次色谱过程中的残余的 低挥发性流出物
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基线漂移
漂移
正确地使用高纯度的载气 色谱柱老化 色谱柱的最高使用温度不能超过该柱所规定的最高温度极 限 进样口温度与检测器温度要高于色谱柱的最高使用温度
• 综合
已点火
(多数的情况是有漏或堵塞 )
柱出口有流量
检测器喷嘴可能被堵塞
• 检查FID组件 （注意—请记录零件的安装顺序） 检查喷嘴本身 --
• 被石墨碎屑堵塞（拆下柱子时，石墨垫的外型有变 化）
• 用旧的进样针清除堵塞物
• 重新安装FID组件 • 再次进样
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基线不好的问题
(检查气源的质量)
使用气体过滤器
液相色谱柱的保养
2．在恒定压力下，发现流量减少，柱子可能部分 堵塞。堵塞最容易发生在极窄的入口接头处以及 入口、出口筛板处。堵塞后需要仔细拆洗，清除 堵塞物，但必须防止较强的机械震动，防止用热 手接触柱子，以扰动柱内的固定相层，使柱效发 生变化。
液相色谱柱的保养
3．柱子的实际操作压力应低于填装时的最高压力， 最好在最高压力的一半以下。实际操作压力过高， 易使入口的固定相层下沉，形成一个空穴。若空 穴形成，应重新装柱。在空穴中加入新的匀浆或 玻璃微珠，也无法恢复到原来的柱效。
7．一定要防止柱子干涸，特别是硬胶柱。
液相色谱柱的保养
8．使用卫柱(Guard Column,亦称预柱)。连续注射 含有强滞留(不被洗脱)组分的样品，将使柱效下 降，保留值改变，选择性变坏，柱寿命缩短。为 了延长柱寿命，在进样阀和分析柱之间加上卫柱。
卫柱较短(5~10cm)，固定相与分析柱类似。其作用 是吸着强滞留的组分，防止对分析柱的污染，保 持分析柱性能稳定。实验表明，只要卫柱与高效、 小粒度分析柱联用，除了使k’为零的组分的塔板 数大大减少外，对k’值较大的组分，其柱效下降 很少。
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基线噪音
噪音
色谱图的基线噪音太高
□ 进样垫流失
密封垫的类型不对或使用时间过常，需要更换 □ 衬管被污染
新的密封垫在柱温箱中老化过夜，以除去易挥发性化合物
vespel 密封垫不能超过使用温度 (350 ℃)
□ 衬管被污染
较脏的样品每进样15—20次后，更换新的衬管 □ 气源可能被污染
选择正确的在线气体净化器 (traps)
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寻找色谱峰的方法
(多数的情况是有漏或堵塞 )
火点着了吗? 用一个玻璃片放在 FID 出口----
• 有水蒸汽冷凝 检测仪器的输出值-- 数值是否大于 0.0？ • 应大约为 16.2 pico amps
• 柱中是否有载气? 拆开柱到检测器一端 用流量计（或皂沫流量计）测量
• 有流量
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寻找色谱峰的方法
4．应该用进样阀，而不用注射器进样，以防止注 射隔膜碎屑集聚在柱入口。
液相色谱柱的保养
5．要防止反冲(流动相逆向流动)，否则使固定相层 位移，柱效下降。
6．柱子两端用金属螺帽封闭，保存在纯净的有机 溶剂中。应该将柱子保存在以下pH范围内的水溶 液流动相中：2<pH<8.5。为了长期保存，最好用 纯有机溶剂(如甲醇)清洗柱子。
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色谱柱故障的诊断与排除
峰型不好（拖尾）
柱过载
减少进样量或将样品稀释10倍 • 稀释样品可以得到较好的结果
试一下较厚液膜的其他色谱柱
前面介绍的所有内容均适用 • 前伸峰和拖尾峰均说明是非线形的分配——即色谱柱与样品不匹配 • 使用不同选择性的色谱柱可以解决这个问题
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分析过程中基线位置突然变化
峰高大约相当于 5 ppb of PAH (真正的杂质)
4.00
6.00
8.00
10.00
12.00
14.00
16.00
18.00
20.00
50000 00000 50000 00000 50000 00000 50000 0ห้องสมุดไป่ตู้000 50000 00000
n ce
HP 绿色的高级进样垫
6 .0 0
8 .0 0
1 0 .0 0
1 2 .0 0
P/N 5183-4594 ( 11 mm)
1 4 .0 0
1 6 .0 0
1 8 .0 0
2 0 .0 0
325 ℃
320 ℃
T IC : P C 2 4 1 N G 1 .D
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进样垫
隔垫类型
性能
流失及温度优化的进 高温进样垫适合与进样口温度在400℃以 样垫(BTO) 橙/红色 上使用（批检）
□实验室是否有异常的气体
每使用四瓶气体，至少要更换一次气体净化器
检测器可能已被污染——清洗检测器
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流失 (MSD)
由柱外产生的杂峰
色谱柱： HP 5 MS 30mx0.25mmx0.25um 柱温： 80℃ 25 ℃/min 160 ℃，160℃ 3 ℃/min(4) 320 ℃， 320℃ 20℃/min(4) 325 ℃ 进样： 分流比 100:1; 1ul of 100ng/ul 检测器： MSD (HP-5973)