检验科PCR室作业指导书
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此文档收集于网络，如有侵权，请联系网站删除PCR室作业指导书文件编号：ABCD-3-PR-01~31第A版编制：审核：批准：生效日期：20XX年X月X日ABCD人民医院检验科编制说明本分册文件可以作为单独申请卫生部PCR实验室认可的全套作业文件，因此作为ISO15189质量管理体系的PCR室作业文件，要对其重复部分进行删减，各检验科根据各自用途要求与特点进行选用，特此说明。
2006年8月8日目录此文档收集于网络，如有侵权，请联系网站删除修订页PCR实验室的设置及管理1．目的：建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染，保证检测结果的可靠性。
2．适用范围：本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。
3．负责人：4．细则：4．1 分子诊断室为检验科下设的专业实验室，从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工作。
4．2 本实验室采用实时荧光定量PCR技术作为临床基因诊断的主要手段，实验室分为三个区：试剂准备区（第一区）、标本处理区（第二区）、扩增分析区（第三区）。
每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识。
各区标签颜色：红色（第一区）、白色或绿色（第二区）、蓝色（第三区）；专用工作服：粉红色（第一区）、白色（第二区）、蓝色（第三区）。
标本的接收则在检验科标本接收处进行。
4．3 各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等，不可混用。
4．4 各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP文件。
4．5 严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增分析区”的单一流向制度，不得逆向进入前一工作区。
4．6 非本实验室工作人员，未经许可不得入内；进修、实习或其他科室人员因科研活动需要，进入实验区域（试剂准备区、标本处理区、扩增分析区）需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行，在本实验室人员监督指导下进行。
4．7 实验完毕后做好清洁消毒工作。
5. 本文涉及以下图表：1.实验室设计平面图PCR实验室工作制度1．目的：保持良好的工作环境，以确保检测结果的可靠性，防止交叉污染，防止差错、事故及纠纷的发生。
CBJY-PCR-MP-008 室间质评管理作业指导书
1 目的室间质量评价（EQA）也被称作能力验证，它既能考察本实验室结果的准确性，检查实验室室内质控的质量，同时还能了解自己实验室与其他实验室之间的差异。
通过实验室之间的比对来判定实验室的检测能力。
2 范围卫生部临检中心室间质评、陕西省临检中心室间质评等。
3 职责实验室负责人负责与陕西省、卫生部临检中心联系，申请参加项目，科室负责人负责安排室间质评活动，及时对质控物进行测定、上报；结果回报后及时总结分析。
4 室间质评程序4.1 质控品的接收和验收：收到质控品后由科室负责人在《室间质评标本接收记录表》上登记、签字，根据其相关说明对质控品的数量、批号、包装进行验收，如有不符样本（遗漏或破损的情况）及时与陕西省、临检中心联系。
4.2 保存:按照室间质评说明书妥善保存，并记录温度。
4.3 检测4.3.1 按照室间质评样本说明书上的建议测定日期，安排具体测定日期和检测人员。
4.3.2 由本实验室独立完成。
4.3.3 应与常规样本同时检测，不能单独操作。
4.4 上报：及时填写《室间质评标本处理记录》，科室负责人审核签字，按照室间质评样本说明书上的建议上报日期，及时上报质评结果。
上报结果方式（陕西省临检中心、卫生部临检中心）：在检验医学信息网/报室间质评结果。
4.5 质控结果分析：每次室间质评结果回报后要认真分析，填写《室间质评分析总结表》，提交科室负责人签字确认后存档。
结果未通过或不合格时，结合本室室内质控情况，分析原因，及时采取纠正预防措施。
并在科室内讨论学习，不断提高人员技术水平和工作质量。
4.6 室间质评结果不合格的处理措施：4.6.1 原因分析：4.6.1.1 检查质评结果原始数据，核对上报表，分析是否由于书写误差导致结果未通过。
4.6.1.2 检查是否存在方法学问题，包括以下情况：未按要求对仪器进行性能评价；未按要求进行仪器的定期维护和保养；不正确的仪器校准；标准品复溶或保存不当；试剂保存不当或过期使用；仪器数据处理功能出现问题；携带污染；移液器未校准到可接受的精密度和准确度；仪器问题质控未能检出；质评结果不在试剂的线性范围内；温浴时间不正确。
PCR室作业指导书_检验SOP文件word资料65页
PCR室作业指导书文件编号：ABCD-3-PR-01~31第A版编制：审核：批准：生效日期：2019年8月8日ABCD人民医院检验科编制说明本分册文件可以作为单独申请卫生部PCR实验室认可的全套作业文件，因此作为ISO15189质量管理体系的PCR室作业文件，要对其重复部分进行删减，各检验科根据各自用途要求与特点进行选用，特此说明。
2006年8月8日目录修订页PCR实验室的设置及管理1．目的：建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染，保证检测结果的可靠性。
2．适用范围：本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。
3．负责人：4．细则：4．1 分子诊断室为检验科下设的专业实验室，从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工作。
4．2 本实验室采用实时荧光定量PCR技术作为临床基因诊断的主要手段，实验室分为三个区：试剂准备区（第一区）、标本处理区（第二区）、扩增分析区（第三区）。
每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识。
各区标签颜色：红色（第一区）、白色或绿色（第二区）、蓝色（第三区）；专用工作服：粉红色（第一区）、白色（第二区）、蓝色（第三区）。
标本的接收则在检验科标本接收处进行。
4．3 各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等，不可混用。
4．4 各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP文件。
4．5 严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增分析区”的单一流向制度，不得逆向进入前一工作区。
4．6 非本实验室工作人员，未经许可不得入内；进修、实习或其他科室人员因科研活动需要，进入实验区域（试剂准备区、标本处理区、扩增分析区）需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行，在本实验室人员监督指导下进行。
4．7 实验完毕后做好清洁消毒工作。
5. 本文涉及以下图表：1.实验室设计平面图PCR实验室工作制度1．目的：保持良好的工作环境，以确保检测结果的可靠性，防止交叉污染，防止差错、事故及纠纷的发生。
PCR实验室标本保存和销毁作业指导书
第 1 页/ 共 4页文件类型：□质量手册□程序文件■作业指导书审批纪录/Review history：修订记录/Revision history：1 目的规范原始样本保存，保证原始样本中待测成分不受影响。
2 适用范围分子组检验样本。
3 职责3.1 由分子组操作人员依照该作业指导书进行操作；3.2 实验室部门负责人负责监督实施。
4 样本的保存4.1 检测前、后样本保存位置和保存温度4.2 检测后样本保存4.2.1 分泌物样本在报告发出后,分好阴阳性，在LIS系统的样本存储中按阴性、阳性放入储存架，低温冰箱冷冻保存。
阴性保存一个月，阳性保存三个月。
4.2.2 所有血清样本在报告发出后，各管分离血清，在LIS系统的样本存储中按阴性、阳性放入储存架，低温冰箱冷冻保存。
阴性一个月，阳性三个月。
4.3 检验后的核酸提取物保存在2-8℃，HCV-RNA的核酸提取物低温冰箱冷冻保存，。
在报告发出后，按照医疗废弃物来处理。
4.4 核酸扩增产物保存：定量检测项目扩增完后，在报告发出后，按照医疗废弃物来处理。
定性检测项目扩增结束后放置在产物分析区2-8℃冰箱内待测。
4.5 超长期保存的样本：使用前应再次评估样本的完整性。
超过接收时间样本应拒收。
实验室内保存的样本外观评估：是否有管子破裂和漏液情况。
性能评估：检测结果和原始结果的偏移＜±7.5%。
5 样本销毁每月最后一天销毁过保存期的样本，处置方法见程序文件LW-SH-PF-28《检验申请和样品管理程序》4.9.2。
6 相关文件和记录表单6.1 CNAS-CL02 医学实验室质量和能力认可准则（ISO15189：2012,IDT）.6.2 LW-SH-PF-25 《检验申请和样品管理程序》。
CBJY-PCR-SOP-019 分析性能验证作业指导书
1 目的确保基因室检验方法和检验程序能满足临床和患者的需求，确认其符合相应的用途。
2 适用范围基因室开展的所有检测项目。
3 职责3.1 科室负责人负责方法的验证确认。
3.2 实验室主任批准验证结论。
4 定义与术语4.1 标准检测方法简称标准方法，是指卫生标准、技术标准或检测工作规范中明确规定必须采用的检测方法，并具有检测方法名称和标准文号。
4.2 非标准检测方法指卫生标准、技术标准和检测工作规范中未明确规定而可以由检测机构自行选择的检测方法。
非标准方法可以是权威机构发布的方法，或有关科技文献、杂志、教科书上发表的方法。
4.3 检测系统分析性能的评价对实验室自行开发或研究的新检测系统或检验方法（包括自建检测系统）的分析性能进行确定，包括不精密度、不准确度、可报告范围、分析灵敏度、分析特异性和生物参考区间等基本性能的实验评价，使其检验结果符合临床要求，以说明检测系统检测结果的可靠性。
4.4 检测系统分析性能确认对实验室新购置的已被政府有关部门认可了其分析性能的检测系统，实验室在投入进行常规病人标本的检测前，需对厂家提供的性能资料中的几个分析性能进行试验以确认该系统是否具有预期的水平，对检测系统分析性能的确认包括精密度、正确度、可报告范围、干扰物质、线性区间、最低检出限等性能的评估，对于低值在临床上特别有意义的项目需要增加分析灵敏度性能的评估。
4.5 检测系统分析性能的核实对实验室新购置的已被许多实验室广泛应用的检测系统，实验室期望核实该系统已被认可的性能而进行的评估实验为核实，评估时以最少的必要的实验去核实，说明可以得到与厂商报告一致的精密度和准确度，也可以和其他用户的性能一致，对检测系统分析性能的核实包括精密度和正确度。
5 工作程序5.1 检测方法的选择5.1.1 实验室应采用满足客户需要并适用于所进行的检测工作的方法。
当客户所指定的检测方法不合适或已过期时，应通知客户并说明理由。
5.1.2 当客户未指定所采用的方法时，实验室应优先选择标准检测方法。
PCR实验室的设置及管理作业指导书
PCR实验室的设置及管理作业指导书1.目的：建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染,保证检测结果的可靠性。
2.适用范围：有关实验室的管理、设置、设备、工作流程及维护等应遵守规程。
核心是防止分析前、分析中和分析后的实验污染、实际工作中主要是扩增片段（扩增产物）、天然核酸、标本间、试剂和耗材及不当的操作方法所造成的污染，尤其是要避免实验室已扩增的PCR产物污染新检测标本中PCR体系。
3.职责：临床PCR检验实验室工作人员共同遵守、相互督促。
4.程序：4.1 实验室分区设置a.本实验室布局见附图01。
实验室采用实时荧光定量PCR技术作为临床基因诊断的主要手段，实验室分为试剂准备区、标本制备区和扩增及产物分析区三个独立实验室，连接部位设置一个缓冲区，用于更换工作服、鞋套等；每一工作区各配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识。
进入各个工作区域进行基因工作扩增时,必须严格遵守单一方向顺序,即从第一区试剂贮存及准备区→第二区的标本制备区→第三区的扩增区。
b. 各工作区有专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等，不可混用。
c.各区配有不同颜色工作服，一区为蓝色，二区为粉红色，三区为白色。
进入实验室，必须更换本室有颜色标识的工作服，穿上一次性鞋套。
4.2 标本接收区工作制度a.因我室每周一，三，五才开展项目，为避免频繁进入标本制备间，标本的接收在标本收集间进行，收集后暂放于储存标本的专用冰箱。
b.每天下班前收齐标本，验收登记后，将标本送入标本制备区。
出去后当天不得再进入实验室。
c.每天的标本登记记录，应书写工整详细，使用本室专用的、带有本室标识的记录本、纸和笔。
4.3 试剂准备区工作制度a．实验人员进入该区须穿本区专用蓝色工作服。
实验中须戴手套、一次性鞋套。
b.在缓冲区开启该区的通风系统c．记录温、湿度计读数。
d.记录冰箱的温度计读数，绘制冰箱的质控图（附图02）。
PCR实验室内务管理制度作业指导书
第 1 页/ 共 3页文件类型：□质量手册□程序文件■作业指导书
审批纪录/Review history：
修订记录/Revision history：
1 目的
保证实验室日常内务管理工作顺利进行。
2 适用范围
分子实验室检验人员
3 职责
3.1 分子组操作人员依照该制度进行实施。
3.2 实验室部门负责人负责监督实施。
4 内务管理制度
4.1 进入实验室人员必须严格执行相关工作制度，按时上岗，不迟到﹑早退，有事暂离需说明去向。
4.2 进入实验室的人员必须遵守实验室的单一流向的规定，禁止逆向走动。
4.3 进入每一区的人员必须更换每区专用的不同颜色的实验服。
4.4 非本室人员未经允许不得进入实验室。
4.5 实验人员必须熟悉仪器性能方允许操作，严格遵守操作规程。
4.6 注意保持实验室工作区域的整洁，明确有用的还是无用的物品，及时清理掉无用的物品，将有用的物品进行归类，摆放整齐。
4.7 实验室人员有责任和义务遵守制度并养成良好习惯，物品用后放在指定的位置，实验室反复使用的物品用完后应及时归位。
4.8 保持仪器清洁，安全操作，工作结束后关闭电源﹑水龙头。
4.9 严禁在室内抽烟﹑吃零食以及一切与实验无关的活动。
4.10 处理有潜在感染性或传染性物品时应戴手套。
5 相关性文件和记录表单
无。
PCR实验室人员培训作业指导书
第 1 页/ 共 3页文件类型：□质量手册□程序文件■作业指导书审批纪录/Review history：修订记录/Revision history：1 目的根据分子实验室的发展制定人员培训计划。
2 适用范围分子实验室人员。
3 职责3.1 分子主管制定年度培训计划，所有人员按培训计划培训并考核。
3.2 实验室部门负责人负责监督实施。
4 内容4.1 每年年底评估新老员工的工作能力，填写《实验室员工能力考核确认表》。
4.2 对新进员工在最初6个月内进行2次能力评估，考核方式采取现场观察、提问、笔试等形式，并保存评估记录。
如评估未通过，应进行再培训，培训后再次评估，如未通过，做辞退处理或调动到其能胜任的岗位。
4.3 当职责变更时，或离岗6个月以上再上岗时，或政策、程序、技术有变更时，应视为新员工进行再培训和再评估，合格后方可继续上岗。
如评估未通过，应进行再培训，培训后再次评估，如未通过，做辞退处理或调动到其能胜任的岗位。
4.4 培训方式4.4.1 外部培训包括上海临检中心组织的专题会议和PCR上岗证的培训等。
4.4.2 内部培训包括新员工（转岗员工）入职培训以及老员工的继续教育培训。
4.5 培训计划4.5.1 分子检验人员要学习分子管理、质量控制、仪器操作类SOP。
4.5.2 每位员工要参加公司内部组织的质量手册、程序文件的培训等。
4.5.3 按照要求参加公司内部的专业培训，和外部的质量认证的培训等。
4.5.4 培训时填写LW-SH-PF-20-09 《培训签到记录表》，培训结束后评估培训结果并形成记录。
5 相关文件和记录表单5.1 《培训签到记录表》5.2 《实验室员工能力考核确认表》5.3 《PCR新员工或转岗员工培训计划》。
检验科PCR实验室作业指导
6.5 数据分析：
程序运行结束（仪器提示：“正常运行结束”）后，所有的数据仪器会自动给出。
点击“实验结果”按钮，进入分析界面，即可显示所有反应管的样品名及浓度值。结合实验结果版面下的“模板模式”、“扩增曲线”、“标准曲线”、“报告模式”下数据，综合分析实验结果，发出实验报告
3.2 RNA扩增检测标本：
3.2.1 HCV-RNA检测标本：标本经验收合格后，立即放入37℃水浴箱温育10分钟，然后3000转/分钟离心5分钟，取血清500ul，加入1.5ml灭菌离心管内，于－20℃±5℃保存（不超过3个月，如超过3个月，需－70℃保存）；
3.2.2 EV-71 RNA检测标本：本检测标本类型为咽拭子。咽拭子标本经扫码核收后，加入1ml生理盐水，充分振荡（振荡仪振荡1分钟），取500ul溶液标本，加入1.5ml灭菌离心管内，于－20℃±5℃保存（不超过3个月，如超过3个月，需－70℃保存）
3.3上述离心标本如在2小时内检测，则不需冷冻保存；冷冻标本检测前需解冻复溶，可于37℃水浴箱温育5分钟复溶，避免反复冻溶。
四、SOP文件的更改
该标准操作程序的更改，可由任一使用本程序的操作人员提出并报请专业主管进行修改，科主任审核签字后生效。
临床基因扩增实验室实验耗材消毒标准操作程序
一、目的：规范临床扩增实验室扩增实验耗材消毒工作。
六、标准操作：
6.1 开机前检查：整理扩增仪台面，保持实验室环境稳定、仪器表面清洁，电源稳定
6.2 开机自检：打开电源开关及LIS电脑，等待仪器自检，自检完成后，打开工作软件。
6.3 实验样品上机：点击“热盖”选项，等待扩增仪自动热盖完成后，推开位于仪器上方的盖子，即将盖子按其轨道往后推。将实验样品按次序放入加热模块，关闭仪器盖子。
PCR实验室SOP文件
PCR实验室作业指导书文件编号：第2版编制：审核：批准：生效日期：2012年月日目录序号主题内容代号页号1PCR实验室的设置及管理2PCR实验室工作制度3实验室内务管理及清洁制度4PCR实验室人员的配置及管理5实验人员的培训程序6PCR实验室清洁程序7样品编号的标准操作程序8PCR基因扩增实验室的要求9PCR废弃物的处理程序10试剂准备区工作制度、标准操作、程序文件11标本制备区工作制度、标准操作、程序文件12扩增区工作制度、标准操作、程序文件13产物分析区工作制度、标准操作、程序文件14PCR标本的保存操作程序15PCR标本的采集、运送、接收程序16PCR生物安全防护措施17PCR实验室化学试剂配18PCR实验室记录管理制度19PCR应急处理程序20PCR试剂的质检标准操作程序21PCR消耗品进购质检贮存程序22PCR室内质量控制操作程序23PCR室间质量控制操作程序24PCR温度校准标准操作程序25伯乐PTC-200型核酸扩增仪操作规程26ABI 7300型荧光定量扩增仪操作维护规程27DYY-6C电泳仪操作维护规程28Bio-Rad GelDoc_XR凝胶成像仪使用说明书29恒温水浴箱操作维护规程30旋涡振荡器操作维护规程31普通离心机操作维护规程32高速离心机操作维护规程33低温高速离心机操作维护规程34冰箱操作维护规程35超低温冰箱操作维护规程36生物安全柜操作维护规程37超净工作台操作维护规程38移液器操作维护规程修订页序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期1234567891011121314151617181920PCR实验室的设置及管理1．目的：建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染，保证检测结果的可靠性。
2．适用范围：本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。
3．负责人：4．细则：4．1 分子诊断室为检验科下设的专业实验室，从事基因扩增检测及相关实验工作。
检验科PCR室作业指导书
检验科PCR室作业指导书一、背景介绍PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种基因扩增技术，是在无需使用活性细胞的情况下通过体外扩增DNA序列，使其达到可检测的水平。
PCR技术被广泛应用于医药研究、生物学、遗传学、法医学等领域。
PCR室是PCR技术应用的关键场所，主要用于PCR反应、样品前处理和DNA制备等工作。
PCR反应是由特定的酶催化模板DNA的复制，在PCR实验中必须严格控制PCR反应的条件才能获得可靠的结果。
为了保证PCR反应结果的准确性和可靠性，PCR作业人员必须了解PCR室的操作规程和指导手册，遵守标准实验室操作程序。
二、 PCR反应的基本原理PCR反应是通过体外扩增DNA序列的一种技术。
PCR反应主要涉及两个重要的酶，即DNA聚合酶和引物。
DNA聚合酶是催化DNA聚合反应的核心酶，在PCR反应中必不可少。
引物是一种短的DNA或RNA分子，在PCR反应中用于酶的选择性识别和复制。
PCR反应主要包括三个步骤：变性、退火和延伸。
变性：将目标DNA加热到94℃的高温，使其断裂成两条单链DNA，并使引物和单链DNA互相结合。
退火：将温度降低到50-60℃，使引物与目标DNA结合，这个温度称为退火温度。
延伸：将温度升高至72℃，此时引物与DNA被催化成链延伸，成为双链DNA。
PCR反应重复进行以上步骤几个周期，就可以得到足够多的DNA扩增产物。
三、 PCR室操作规程1. 实验前准备(1)检查PCR实验室设备和试剂，检查是否缺少必要试剂和器具，并确认其备份。
(2)将外部样品进入PCR实验室前进行一定的处理，如冻存、粉碎等。
(3)制作引物工作应该在正式实验之前进行，并对其进行信号静电荷、目标大小、引物配对和特异性等核酸相关参数测试，确保可靠和有效。
制备引物的地点和PCR反应室应分开操作，单独使用平台和器具。
(4)戴上防护手套、口罩、帽子等个人防护设备，穿戴实验室制定的实验服。
PCR实验室标准操作规程
PCR实验室作业指导书文件编号：第1版编制：审核：批准：生效日期：2015年＊月＊日质管部PCR实验室公正性声明1、坚持公正立场认真对待每一例检测，不受任何对检测工作质量有不良影响的、来自实验室内部或外部的不正当的商业、财务和其他方面的压力和影响。
避免卷入任何可能会降低技术能力、公正性、判断或运作诚实性的信任的活动.2、严格遵循实验室认可依据的国际标准,严格按标准的管理要素和技术要素的要求建立自我完善的管理体系和控制检测全过程各环节的机制，所有与检测有关的人员熟悉与之相关的质量文件,并在工作中执行这些政策和程序，真正把标准作为科学管理检测实验室的先进管理模式，尽可能把差错降到最低限度，确保检测数据准确可靠，检测结果和技术判断正确有效.3、坚持以“客户为中心、质量第一”的服务宗旨，严格保护客户的机密和所有权，热忱提供优质服务,努力实现让上级放心、客户满意的服务标准。
4、主动开展实验室的比对实验和其他有效地检测质量监控方案，并通过日常检测的监督机制，持续改进、不断完善管理体系，从而保证其充分性和有效性.修订页序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期1234567891011121314151617181920目录前言 (1)质量方针 (2)质量管理体系组织结构图 (3)一、工作制度 (4)PCR实验室的设置及管理规程 (4)PCR实验室内务管理规程 (5)PCR实验室人员的配置及管理规程 (6)PCR实验室管理规程 (8)PCR实验室生物安全防护措施 (11)PCR实验室废弃物的处理管理规程 (12)PCR实验室清洁消毒管理规程 (13)PCR实验室仪器设备的管理规程 (14)试剂管理规程 (15)清洁剂、消毒剂管理规程 (16)异常情况应急处理管理规程 (17)采购管理规程 (20)仓库管理制度 (22)临床标本的管理规程 (26)PCR实验室记录管理规程 (26)检验报告单发放、保密管理规程 (27)PCR实验室岗位责任制 (28)二、操作指导书 (29)PCR实验室的清洁消毒操作规程 (30)冰箱、冷藏柜的使用操作程序 (30)冰箱、冷藏柜的维护保养操作程序 (31)洁净工作台使用操作规程 (33)洁净工作台维护、清洁操作规程 (34)ABI 7500实时跟踪荧光PCR仪使用操作规程 (36)ABI 7500实时跟踪荧光PCR仪维护保养操作规程 (38)高速冷冻离心机使用标准操作规程 (39)高速冷冻离心机维护保养操作规程 (40)生物安全柜使用操作规程 (41)生物安全柜的维护保养操作规程 (42)加样器的使用操作规程 (43)加样器的维护保养操作规程 (44)干式恒温箱的使用操作规程 (45)干式恒温箱的维护保养操作规程 (46)紫外灯的使用操作规程 (47)紫外灯的维护保养操作规程 (47)温湿度计自行检定操作规程 (48)PCR实验室试剂的质检标准操作规程 (49)PCR实验室标本唯一标识编号编制操作规程 (50)临床标本的采集、运送、接收操作规程 (51)临床标本的保存操作规程 (53)清洁剂、消毒剂配制操作规程 (54)乙肝病毒核酸扩增荧光检测操作规程 (55)室内质量控制标准操作程序 (57)室间质评操作规程 (60)三、引用图表 (61)实验室负责人简历 (61)实验室工作人员一览表 (63)北京市医疗机构临床基因扩增检验实验室自查/审核表 (69)前言1.临床基因扩增实验室质量管理手册由以下部分组成:1。
PCR性能验证作业指导书(1)
第 1 页/ 共 5页文件类型：□质量手册□程序文件■作业指导书审批纪录/Review history：修订记录/Revision history：1 目的根据医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明对实验室开展的定性及定量检测项目进行性能验证。
证明检测结果准确可靠，可以满足临床需求。
2 职责2.1 技术负责人负责性能验证报告的批准，质量负责人负责性能验证有效性的指导及审核。
2.2 组长负责对仪器厂家的验证报告进行确认。
2.3 组长负责组织本组工作人员一起进行项目性能验证的实验。
2.4 组长负责将项目性能验证的原始数据分析整理，形成验证报告。
3 验证内容3.1 仪器性能验证仪器的验证正常情况下每年进行一次，但如有以下（但不限于）的情况发生时：仪器出现故障，扩增仪灯泡更换时、仪器迁移等需要重新进行性能验证。
验证要求详见各仪器作业指导书。
3.2 项目的性能验证3.2.1 定量项目性能验证在新项目初次开展时,检测仪器性能验证通过后，进行精密度、线性、准确度、检测下限的验证。
但如有以下（但不限于）的情况发生时：项目方法学、试剂组分及仪器故障，仪器迁移等，需要重新建立方法学并进行相关性能验证。
3.2.1.1 精密度验证1）实验方案:重复性精密度均采用2个已知浓度阳性和弱阳性临床样本，每天在RocheLightcycler480上重复检测3次；连续检测5天。
并计算SD和CV值。
2）结果判断：按照试剂盒说明书中CV的要求范围来判断。
3.2.1.2 准确度验证1）实验方案：以最近两年参加卫生部临检中心EQA室间质量回报的数据为基础，对回馈的报告进行相应的数据分析。
2）结果判断：PT成绩在80％到100％之间，即认为该项目准确度符合要求。
3.2.1.3 线性范围验证1）实验方案：将高浓度的已知临床标本采用体检健康的人血清进行梯度稀释，对高浓度样本和稀释后的样本（7个浓度点）进行同批次检测，每个样本重复检测2次，计算此范围内一系列不同样本的测量值与其实际浓度(真值)的线性相关系数。
PCR分子实验室人员职责和要求作业指导书
第 1 页/ 共 4页文件类型：□质量手册□程序文件■作业指导书审批纪录/Review history：修订记录/Revision history：1 目的明确人员职责。
2 适用范围分子实验室。
3 人员要求3.1 分子实验室的授权签字人应至少具有中级专业技术职务任职资格，从事申请认可授权签字领域专业技术工作至少3年。
3.2 实验室应至少具有2名检验技术人员。
3.3 分子实验室操作人员应经过有资质的培训机构培训合格取得上岗证后方可上岗。
4 人员职责4.1 分子实验室负责人（或授权签字人）4.1.1 在管理层的领导下，负责完成本室的检验任务，做好行政管理工作。
4.1.2 制定工作计划、组织实施、督促检查、定期总结汇报。
4.1.3 督促本组人员认真执行各项规章制定，按标准操作流程开展技术工作。
4.1.4 经常检查安全措施，防范事故。
4.1.5 抓好质量控制工作，保证本室的工作按质量手册要求进行运作。
4.1.6 负责本部门的财务预算及成本控制。
4.1.7 参加国内外各种培训并转化成对员工的培训。
4.1.8 处理客户培训、要求、意见、建议。
4.1.9 应对客户的各种咨询，及时给予满意的答复。
4.1.10 完成管理层下达的任务。
4.2 分子实验室主管4.2.1 按时完成每年的室内、室间的计划。
4.2.2 督促本组人员认真执行各项规章制定，按标准操作流程开展技术工作。
4.2.3 每月按时完成月度总结的报告。
4.2.4 抓好质量控制工作，保证本室的工作按质量手册要求进行运作。
4.2.5 负责本部门的成本控制。
4.2.6 参加国内外各种培训并转化成对员工的培训。
4.2.7 处理客户培训、要求、意见、建议。
4.2.8 应对客户的各种咨询，及时给予满意的答复。
4.3 分子实验室资深操作人员4.3.1 负责检验结果及原始记录的复核。
4.3.2 负责定期检查质控数据，保证检验结果的准确性。
4.3.3 负责检测安全、卫生、环保工作。
检验科PCR室作业指导书
ISO15189质量管理体系范本文件（第六册）PCR室作业指导书文件编号：ABCD-3-PR-01~31第A版编制：审核：批准：生效日期：20XX年X月X日ABCD人民医院检验科编制说明本分册文件可以作为单独申请卫生部PCR实验室认可的全套作业文件，因此作为ISO15189质量管理体系的PCR室作业文件，要对其重复部分进行删减，各检验科根据各自用途要求与特点进行选用，特此说明。
2006年8月8日目录修订页PCR实验室的设置及管理1．目的：建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染，保证检测结果的可靠性。
2．适用范围：本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。
3．负责人：4．细则：4．1 分子诊断室为检验科下设的专业实验室，从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工作。
4．2 本实验室采用实时荧光定量PCR技术作为临床基因诊断的主要手段，实验室分为三个区：试剂准备区（第一区）、标本处理区（第二区）、扩增分析区（第三区）。
每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识。
各区标签颜色：红色（第一区）、白色或绿色（第二区）、蓝色（第三区）；专用工作服：粉红色（第一区）、白色（第二区）、蓝色（第三区）。
标本的接收则在检验科标本接收处进行。
4．3 各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等，不可混用。
4．4 各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP文件。
4．5 严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增分析区”的单一流向制度，不得逆向进入前一工作区。
4．6 非本实验室工作人员，未经许可不得入内；进修、实习或其他科室人员因科研活动需要，进入实验区域（试剂准备区、标本处理区、扩增分析区）需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行，在本实验室人员监督指导下进行。
4．7 实验完毕后做好清洁消毒工作。
5. 本文涉及以下图表：1.实验室设计平面图PCR实验室工作制度1．目的：保持良好的工作环境，以确保检测结果的可靠性，防止交叉污染，防止差错、事故及纠纷的发生。
PCR基因扩增实验室的要求-检验科PCR室作业书
PCR基因扩增实验室的要求1．目的：规定在各区内所进行的工作及其操作。
2．适用范围：所有在本区内进行的工作。
3．负责人：操作人：4．程序：实验室分四区:标本接收区；试剂贮存、准备区；标本制备区；扩增区。
进入各区严格按照单一方向进行，即试剂贮存、准备区——标本接收区——标本制备区——扩增区。
各区及其设备、物品必须有明确的标记，严禁混用。
进入PCR实验室的工作人员（含卫生员），都必须遵守实验室的规则，尤其严格遵守进入PCR实验室的唯一流向。
不可进入PCR扩增后区打扫卫生，再返回扩增前区工作。
防止非本室工作人员串岗，进入本室。
尤其不得为找人，而逆向误入PCR实验室。
总则PCR实验室工作人员应具备医学检验、微生物检验基本知识，大专以上学历，并受过PCR实验的基础知识和技能培训。
PCR实验室分试剂准备，样本准备，PCR扩增和产物检测四个室，各室的实验物品（含加样器，试管架，吸头，记录纸，笔等），不得混用，须贴上标签予以区别。
实验室技术人员必须严格按照PCR实验室操作程序进行，包括实验室擦洗。
台面消毒，离心管，吸头的无菌灭活准备，仪器使用和废弃物处理等。
进入实验室的工作人员必须更换各室不同的工作服（含帽和鞋），勤换洗工作服，以及遵守实验室的唯一流向的规定，严禁反向流动。
进入PCR实验室后区的物品不许带进PCR实验室前区。
每天实验开始前，必须清洁地面和消毒实验室前区。
实验结束应紫外线消毒实验台面，产物分析室紫外灯最好彻夜开启，排风扇应昼夜工作。
每天下班前处理好废物，应关好水、电、煤气和门窗。
定期校准和维修PCR仪、酶标仪及离心机、水浴箱等仪器设备。
实验室内不得饮食、吸烟。
4.1标本接收区4.1.1实验人员进入该区须穿本区白色工作服，接收标本须戴一次性手套。
4.1.2记录实验室干、湿度，绘制冰箱温度图。
使用带有本区标识的记录本、纸和笔，每项记录，书写工整详细。
4.1.3对送检的标本实行双签制度，并仔细检查是否符合检测要求，对有不符合要求的标本及时通知相关科室重新采样，并作记录，每份标本需给出唯一性编号。
PCR室内质量控制标准操作程序-检验科PCR室作业书
PCR室内质量控制标准操作程序1．目的：随时了解并控制实验室检测的精密度变化。
2．适用范围：核酸扩增荧光定量检测实验室。
3．负责人：操作人：4．程序：4．1血清质量控制品制备及操作4．1．1质控品制备：收集本室检测的临床样本，HBVDNA定量为106copies/ml的样本混匀，并分装于0.5ml的离心管中，每支110µl，编号后（如Qb0201-n），-20℃保存。
4．1．2操作：每次检测过程中将此分装的室内质控品与样本同时检测，记录此标本的检测结果；计算前10次检测结果的平均值作为本批质控品的靶值。
4．1．3如果使用商品化的质控品，按4．１．２要求执行。
4．2室内质控图的使用方法4．2．1描点a）图中X线为靶线，X±2s为警告线，X±3s为失控线。
对于同一批号的质控血清不论使用几个月，其空图均不变化。
只要将图纸上方“起止日期”项填入每个月的实际起止日期即可。
b）每天将该批号质控血清按有关规定程序复融随同病人的标本同时检测。
将日期、检测结果和操作者如实记录在图下方的相应位置，并按前面的方法画出图上的对应点，用直线将该点与前一天的点连接。
c）月底计算当月全部质控血清检测结果的X、s和CV，并进行图形分析和小结，将质量控制图存入质控资料档案。
4．2．2图形分析a）如果在X±3s线以外，则为失控，应立即报告有关负责人，迅速查找原因。
必要时复测标本，然后方可发出报告，并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。
b）如果在X±2s线以外，或出现连续6点以上在一侧等规律变化，均应即使向有关负责人反映，并积极查找原因。
但当天的检验结果一般可以发出。
4．2．3通过观察图形的规律性变化进行误差分析，消除误差来源a）曲线漂移：提示有系统误差，准确度发生了一次性的向上或向下改变。
这种变化往往是由于一个新的情况引起的。
如更换不同批号试剂，启用新批号的质控血清、操作人员的变换等。
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检验科PCR室作业指导书ISO15189质量管理体系范本文件（第六册）PCR室作业指导书文件编号：ABCD-3-PR-01~31第A版编制：审核：批准：生效日期：20XX年X月X日ABCD人民医院检验科编制说明本分册文件可以作为单独申请卫生部PCR实验室认可的全套作业文件，因此作为ISO15189质量管理体系的PCR室作业文件，要对其重复部分进行删减，各检验科根据各自用途要求与特点进行选用，特此说明。
2006年8月8日目录修订页PCR实验室的设置及管理1．目的：建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染，保证检测结果的可靠性。
2．适用范围：本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。
3．负责人：4．细则：4．1 分子诊断室为检验科下设的专业实验室，从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工作。
4．2 本实验室采用实时荧光定量PCR技术作为临床基因诊断的主要手段，实验室分为三个区：试剂准备区（第一区）、标本处理区（第二区）、扩增分析区（第三区）。
每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识。
各区标签颜色：红色（第一区）、白色或绿色（第二区）、蓝色（第三区）；专用工作服：粉红色（第一区）、白色（第二区）、蓝色（第三区）。
标本的接收则在检验科标本接收处进行。
4．3 各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等，不可混用。
4．4 各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP文件。
4．5 严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增分析区”的单一流向制度，不得逆向进入前一工作区。
4．6 非本实验室工作人员，未经许可不得入内；进修、实习或其他科室人员因科研活动需要，进入实验区域（试剂准备区、标本处理区、扩增分析区）需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行，在本实验室人员监督指导下进行。
4．7 实验完毕后做好清洁消毒工作。
5. 本文涉及以下图表：1.实验室设计平面图PCR实验室工作制度1．目的：保持良好的工作环境，以确保检测结果的可靠性，防止交叉污染，防止差错、事故及纠纷的发生。
2．适用范围：所有本实验室人员。
3．负责人：4．细则：4．1 本实验室进行临床基因扩增检测及相关实验工作，不得进行其它实验操作。
4．2各区的用品不得混用。
4．3在各区的实验操作过程中，操作者必须戴手套和帽子，严格按照操作规程。
4．4试剂准备区只能进行试剂的贮存及配制等相关操作（见相关SOP文件）。
4．5标本处理区只能进行临床标本的保存，核酸提取、保存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成（见相关SOP文件）。
4．6扩增分析区只能进行DNA或cDNA的扩增、实时荧光PCR扩增产物的分析（见相关SOP文件）。
4．7进行实验时严格执行本实验室的各项操作规程，及时做好各种操作记录，力求准确、可靠。
实验完毕，做好清洁、整理及分析统计等工作。
4．8室内仪器由专人负责，未经许可，不得随意使用或挪用；爱护使用仪器，定期进行保养与维修。
4．9 爱护医院财产，注意安全；离开实验室前应关好门窗，检查水、电等。
PCR实验室内务管理制度1．目的：保证实验室日常内务管理及清洁工作顺利进行。
2．适用范围：实验室相关人员及医院相关清洁工人。
3．负责人：4．细则：4．1非本室工作人员未经允许不得进入实验室。
4．2各区的用品不得混用。
4．3实验人员要有强烈的时间观念，按时上下班，不迟到、早退。
4．4进入实验室的工作人员必须遵守实验室的单一流向的规定，禁止逆向走动。
4．5所有仪器（如PCR扩增仪）须有专人负责，并有使用维护记录；实验人员必须熟悉仪器性能后方允许操作，并严格遵守操作规程。
4．6所有试剂进购、配制、质检、使用均要有记录，未经允许不得随意带出本实验室。
4．7每天了解仪器运转情况及试剂使用情况，确保仪器整洁安全，试剂合格使用。
4．8各区的各种清洁消毒均应有记录，工作衣消毒时注意各区应分开进行处理。
4．9注意保持实验室卫生整洁，严禁在室内抽烟、吃零食，非实验操作人员应尽量少入。
4. 10下班前检查门、窗、水、电，节假日应指定人员负责检查实验室的仪器、设备。
PCR实验室人员的配置及管理1．目的：保证实验室有足够数量的合格的具备开展该类实验能力的实验人员。
2．适用范围：适用于实验室人员配置、管理、培训及考核。
3．负责人：4．细则：4．1 人员要求4．1．1 本实验室工作人员应为医学检验专业或相关专业毕业，具有中级以上技术职称或专科以上学历。
4．1．2 实验室工作人员应参加卫生部或省临检中心举办的PCR技术培训，并取得合格证。
4．1．3 对于新进入本室的人员，如尚未取得PCR技术培训合格证，应在实验室有培训合格证的上级技术人员的指导下进行实验工作，实验报告由有资格人员出具，并应在最短的时间内取得上岗培训合格证。
4．2 人员配置4．2．1 实验室应根据工作需要配备足够的工作人员，目前实验室有主管技师2人、技师1人，3人都已获得培训合格证，视工作量的增加和业务发展需要，会适当增加工作人员。
4．2．2 各级技术人员履行相应的工作职责。
4．3 人员培训及考核4．3．1 实验室负责人或负责人指定人员参加每年卫生部PCR室间质评总结会。
4．3．2 实验室工作人员每1～2年至少参加1次PCR技术的省级或国家级继续教育项目，参加相关学术交流会议。
4．3．3 安排未取得上岗培训合格证的工作人员在合适的时间内参加技术培训。
4．3．4 科室不定期组织实验室内部实验人员学习、更新核酸扩增方面的相关知识，提升自身的理论学习水平。
特别是在标本接收区采血、接收标本的人员，需定期对其进行有关核酸扩增技术，标本采集、保存、运输等知识的培训。
一些科室的送检标本由该科室的人员送到标本接收区，对这些临床医护人员也要定期进行有关核酸扩增技术，标本采集、保存、运输等知识的培训。
4．3．5 本实验室工作人员每年进行考核一次,考核内容:a)日常工作质量b)室内质控测评c)室间质控测评d)在抱怨处理中的表现4．3．6 本实验室工作人员实行严格奖惩制度,有下列表现者可受奖:a)工作质量高, 质控测评成绩优秀者b)有科研能力,并有一定数量和质量的论文发表c)有独创性工作成果,经鉴定认可者d)受到有关部门或群众嘉奖者有下列情况者将受到惩处:a)工作质量问题较多，质控测评成绩不合格；b)不遵守规章制度并造成一定影响；c)不求上进。
4．3．7 本实验室工作人员奖惩方法分精神及物质两类,经实验室上报医院及有关部门批准后执行。
4．3．8 本实验室工作人员均建立业绩档案,实行能进能出制度,不断吸收高质量人员,加强培训和提高,对于不适合本室工作的人员要及时调离。
4．4 人员管理4．4．1 实验室建立所有工作人员的技术档案，包括：学历、任职资格、发表论文、研究成果、培训等相关材料复印件。
4．4．2 技术档案分文本档案和电子档案，文本档案每年更新1次，电子档案随时更新。
5. 本文涉及以下表格实验室主要负责人简历表PCR实验室工作人员一览表培训申请表年度培训计划表培训记录表员工培训履历表人员档案卡PCR实验室清洁程序1．目的：保证实验室环境的整洁，防止污染。
2．适用范围：适于实验室工作环境、实验台面、工作服、移液器等的清洁消毒工作。
3．负责人：操作人：4．细则：4．1 实验室地面必须平整、干净，通道要利于通行，没有无用的物品阻碍。
4．2 合理规划实验室内物品，做到摆放整齐、有序，无用的或使用效率低的物品放置到储存处，常用的物品要容易寻找到。
4．3抽屉、柜子、文件类物品要作好标记，以方便识别。
4．4 实验结束后用2%戊二醛对台面进行清洁，并用移动紫外灯进行消毒。
4．5每天对使用过的移液器用75%酒精进行擦拭。
每周1次对移液器咀进行75%酒精浸泡15分钟左右，若使用过程中发生污染应随时浸泡处理。
4．6实验过程中如发生标本或试剂外溅，应立即用2%戊二醛滴上，滤纸盖上半小时，然后用酒精擦洗，并用移动紫外灯消毒。
4．7 每天实验前开启各区的通风系统，各区实验结束后，分别打开传递窗紫外灯、移动紫外灯（对实验台面消毒）、天花板紫外灯消毒实验室，每次开启30～60分钟。
4．8 待紫外灯消毒时间足够后，依次关闭各区紫外灯并记录。
4．9 依次清洁三个区的实验台面和地面，各区清洁消毒工具均专用，不可混用，注意按照单一方向流程的原则来进行清洁。
4．10 处理好各区废弃物，交医院集中处理。
4．11 每周将工作服交院洗衣房洗涤消毒，不同实验区的工作服隔开洗涤。
5. 本文涉及以下表格实验室清洁消毒记录表垃圾处理记录表PCR标本唯一标识编号规则1．目的：保证标本编号的唯一性，也是准确发放报告的基础。
2．适用范围：使用核酸扩增荧光检测实验室所开展的四种检测项目：乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、结核杆菌、沙眼衣原体。
3．负责人：操作人：4．程序：4．1 按检测日期分类标记根据标本送检的日期，每天的标本对应标记一种唯一的代号。
如当天为2005年3月1日，则编为050301。
4．2 按检测类型分类标记根据检测项目的不同，每种检测项目对应标记一种唯一的代号。
如乙型肝炎病毒标记为B，丙型肝炎病毒标记为HC，结核杆菌标记为T，沙眼衣原体为C。
4．3 按验单接收顺序编号在同种检测类型的验单中，按验单顺序编号。
如第一个检测乙型肝炎病毒的验单编为B01，第二个检测乙型肝炎病毒的验单编为B02，第三个检测结核的验单编为B03等。
4．4 特殊标本的编号如有特殊情况，应在标记前面增加特异字母区别开，如住院的单和门诊的单、其它医院送来的单和本医院的单要区分开等。
4．5 编号步骤a）对当天送来的标本，根据编号的基本原则编号，每个样本的每个检测项目对应一个唯一的编号（如050301T04）。
b）用笔在每张检验申请单和对应的样品管上作好相同的标记。
c）做好标本的接收记录，每个样本的记录都应包括以下信息：接收时间、医院、科室、送检医生、患者姓名、性别、年龄、标本类别、标本状态、送标本者、接收人、检验单号、标本唯一统编号等。
d）处理好样品、点样后，将反应管放入扩增仪上开始扩增。
f）扩增得到结果后，先在统计簿上填入结果，作好记录，再一一把实验结果填入相应申请单。
g）发放检验报告单。
5. 本文涉及以下图表：PCR扩增接收标本记录表PCR基因扩增实验室的要求1．目的：规定在各区内所进行的工作及其操作。
2．适用范围：所有在本区内进行的工作。
3．负责人：操作人：4．程序：实验室分四区:标本接收区；试剂贮存、准备区；标本制备区；扩增区。
进入各区严格按照单一方向进行，即试剂贮存、准备区——标本接收区——标本制备区——扩增区。
各区及其设备、物品必须有明确的标记，严禁混用。
进入PCR实验室的工作人员（含卫生员），都必须遵守实验室的规则，尤其严格遵守进入PCR 实验室的唯一流向。