总结总、直接胆红素的检测方法
总结总、直接胆红素的检测方法
血清总胆红素和直接（结合）胆红素测定目前测定血清胆红素的方法主要有重氮试剂法（包括改良J-G法、二甲亚砜法、二氯苯重氮盐法和2，5二氯苯重氮四氟硼酸盐法等）、胆红素氧化酶法、钒酸盐氧化法、高效液相色谱法、导数分光光度法、经皮胆红素测定法以及直接分光光度法等。
改良咖啡因（J-G）法：一、实验原理血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，生成紫色的偶氮胆红素；在同样条件下，未结合胆红素须有加速剂破坏胆红素氢键后才能与重氮试剂反应。
咖啡因、苯甲酸钠作为加速剂，醋酸钠缓冲液可维持反应的PH值同时兼有加速作用。
叠氮钠破坏剩余重氮试剂，终止结合胆红素测定管的偶氮反应。
最后加入碱性酒石酸钠，在碱性条件下，紫色偶氮胆红素转变为蓝色偶氮胆红素，使最大吸光度由530nm转移到598nm，此时，非胆红素的黄色色素及其它红色与棕色色素产生的吸光度可忽略不计，使测定的灵敏度和特异性增加。
最后形成的绿色是由蓝色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。
二、实验方法（一）器材试管，刻度吸管，分光光度计，37℃水浴箱。
（二）试剂1．咖啡因-苯甲酸钠试剂无水醋酸钠41g，苯甲酸钠37.5g，乙二胺四乙酸二钠EDTANa2 0.5g，溶于约500mL 的蒸馏水中，再加入咖啡因25g，搅拌至完全溶解(不可加热)，然后加蒸馏水稀释至1000mL，混匀，过滤后放置棕色试剂瓶中，室温保存可稳定6个月。
2. 5g/L 亚硝酸钠溶液：亚硝酸钠5.0g，加蒸馏水溶解并稀释至100mL，若发现溶液呈淡黄色时，应丢弃重配。
3. 5g/L 对氨基苯磺酸溶液：对氨基苯磺酸（NH2C6H4SO3H·H20）5.0g，加于约800mL 蒸馏水中，加浓盐酸15mL，待完全溶解后，加蒸馏水至1000mL。
4. 重氮试剂临用前，取5g/L 亚硝酸钠溶液（试剂2）0.5mL 与5g/L 对氨基苯磺酸溶液（试剂3）20mL 混合。
5. 5g/L 叠氮钠溶液：叠氮钠0.5g，用蒸馏水溶解并稀释至100mL。
体检报告总结胆红素
体检报告总结胆红素胆红素的概述胆红素是一种由红细胞分解而产生的黄色物质，它是血红蛋白代谢的产物。
正常情况下，胆红素会被肝脏捕获并转化为胆汁，通过肠道排出体外。
然而，当红细胞分解过快或者肝脏功能受损时，胆红素的水平可能会升高。
胆红素的测量方法胆红素通常通过血液检查来测量。
常见的胆红素检测方法包括总胆红素、直接胆红素和间接胆红素的测量。
总胆红素是直接胆红素和间接胆红素的总和。
胆红素水平的正常范围正常成年人的总胆红素水平通常在0.2-1.2毫克/分升之间。
直接胆红素的正常范围为0-0.3毫克/分升，间接胆红素的正常范围为0.1-1.2毫克/分升。
胆红素升高的可能原因1.肝脏疾病：肝炎、肝硬化和胆道梗阻等肝脏疾病可以导致胆红素水平升高。
2.贫血：慢性贫血和溶血性贫血等可导致红细胞分解加快，进而增加胆红素的产生。
3.药物：某些药物，如保泰松和抗生素等，可能会引起胆红素水平的升高。
4.遗传疾病：一些遗传性疾病，例如先天性胆红素转运障碍症和Gilbert综合征，也可以导致胆红素水平升高。
胆红素升高的临床表现胆红素水平升高可能导致黄疸的出现。
黄疸是由于胆红素在皮肤和黏膜组织中沉积所致，患者的皮肤和眼睛白眼球呈现黄色。
胆红素升高的处理方法如果发现胆红素水平升高，应及时寻求医生的帮助。
医生会根据患者的具体情况，进行进一步的检查和诊断。
针对不同原因导致的胆红素升高，治疗方法也有所不同。
例如，对于肝脏疾病引起的胆红素升高，可能需要进行药物治疗或手术治疗。
结论胆红素是血红蛋白代谢的产物，通过血液检查可以测量其水平。
胆红素水平升高可能是肝脏疾病、贫血、药物使用或遗传疾病等因素导致的。
胆红素水平的升高可能会出现黄疸的症状。
对于胆红素升高的处理，需要根据具体原因进行个体化的治疗。
重要的是及时咨询医生，并按照医生的建议进行治疗。
*注意：以上信息仅供参考，请在医生的指导下进行治疗。
直接胆红素测定SOP_DBIL临床意义_检验科生化项目SOP
直接胆红素测定SOP_DBIL临床意义_检验科生化项目SOP一、直接胆红素测定的临床意义直接胆红素(Direct Bilirubin, DBIL)是从红细胞和其他组织中释放的胆红素的成分之一、正常情况下，直接胆红素的浓度较低，只占总胆红素(Total Bilirubin, TBIL)的一小部分。
然而，当胆红素代谢障碍时，直接胆红素的水平会升高，显示出一些特定的临床意义：1.肝功能评估：直接胆红素测定是评估肝功能的重要指标之一、肝脏是胆红素的代谢和排泄主要器官，当肝脏受损或胆道阻塞时，直接胆红素的水平会升高。
2.胆道疾病诊断：直接胆红素水平的升高可能是由于胆道梗阻、胆管炎、胆上皮细胞损伤或其他胆道疾病引起的。
通过测定直接胆红素的水平，可以协助医生确定疾病的类型和程度，并指导治疗方案的选择。
3.血红蛋白病变：一些血红蛋白病变如溶血性贫血、遗传性球形红细胞性贫血等，会导致血红蛋白不正常分解，使得直接胆红素的水平升高。
通过测定直接胆红素的水平可以帮助医生确定贫血的类型和严重程度，并制定相应的治疗方案。
以下是直接胆红素测定的检验科生化项目SOP的详细步骤：1.标本采集：采集患者血清标本，禁食时间要超过8小时，以避免脂质和胆固醇的影响。
2.试剂准备：根据试剂包装上的说明书，将试剂准备好。
一般包括直接胆红素试剂、标准品和质控品。
3.样本处理：将采集到的血清标本放入试剂盒特定的反应池内，加入适量的试剂。
4.反应：将反应池放入试剂盒中的分光光度计中，按照光度计参数设定，启动反应。
5.数据分析：根据反应的结果，使用光度计测量直接胆红素的吸光度，并根据标准曲线将吸光度值转换为直接胆红素的浓度。
6.质控品检测：每天开始工作前，需对质控品进行检测，确认试剂盒的准确性和稳定性。
7.结果判读与报告：根据测量结果和参考范围，判断直接胆红素的浓度是否正常。
将结果报告给医生或病人。
8.仪器维护：定期对光度计进行检查和维护，保证仪器的准确性和稳定性。
胆红素指标的解读
胆红素指标的解读使用干化学法检测胆红素，可以提供总胆红素(TBIL)、结合胆红素(Be)、未结合胆红素(Bu)、6胆红素(DELB)、新生儿胆红素(NBIL)、直接胆红素(DBIL)等指标。
以下是对胆红素指标的解读。
TBIL：血液中总的胆红素，包含胆红素的所有组分，TBTL的升高表明黄疸的存在，但单凭TBTL不能了解黄疸的形成原因。
Bu：可认为是肝前性的胆红素，是尚未被肝细胞摄取进行葡萄糖醛酸化的胆红素，导致Bu的升高原因有肝前性(胆红素生成增多，如溶血等)和肝细胞性(肝细胞摄取Bu障碍或胆红素葡萄糖醛酸化过程受阻等)的原因。
Be：可认为是肝细胞性或肝后性胆红素，是被肝细胞摄取并完成葡萄糖醛酸化的胆红素，生理情况下，Be形成后，即通过肝胆系统排泌。
生理状态下，Be不应出现在血液中，只有在Be排泌受阻的情况下，Be才可能出现在血液中。
所以，通常情况下，Be结果为0, Be升高意味着肝细胞功能受损或胆汁排泌受阻。
6胆红素(DELB)：生理状态下，血液中不存在6胆红素，如果Be排泌受阻，导致血液中Be升高，Be浸泡在白蛋白的环境中发生酶促反应，白蛋白置换Be所结合的葡萄糖醛酸，最终生成6胆红素，其半衰期与白蛋白的半衰期相同。
5胆红素的作用在于指示梗阻的治疗效果，当梗阻排除后，Be迅速下降，TBIL也随之下降，而6胆红素浓度则在一定时间内保持不变，所以DELB与TBIL的比值表现为上升。
如果胆红素的各组分出现上述变化，则表明梗阻治疗成功。
由于DELB=TBIL-(Bu+Bc),因此，要检测DELB,必须要先检测TBIL、Bu和Be。
NBIL：其实就是总胆红素，新生儿Bu比正常人高得多，由于无法避免的光照作用的影响，利用传统的重氮试剂法检测出的总胆红素要比实际浓度低得多，而用干化学法检测，用Bu+Bc的结果代表新生儿胆红素，则可以明显纠正上述误差。
DBIL：直接胆红素，生理情况下，DBIL与Be相当；病理情况下，DBIL为Be与6胆红素之和。
直接胆红素J检测标准操作规程
14.参考文献
14.1《全国临床检验操作规程》
14.2《试剂使用说明书》
14.3《校准品使用说明书》
14.4《临床生物化学检验质量管理与操作规程》
直接胆红素
1.目的
规范直接胆红素（D-BIL)测定的操作程序，确保直接胆红素测定结果准确。
2.检验方法
化学氧化法(终点法）
3.检验原理
直接胆红素在间胆抑制剂硫脲表面活性剂曲拉通X-100存在下，被亚硝酸钠氧化，生成胆绿素，测定450nm吸光度的减小与直接胆红素的浓度成正比。
胆红素=胆绿素
4.临床意义
11.检验结果的解释
仪器加样针、比色杯、管路等未清洗干净时可能对试验结果产生影响。
反应曲线异常时需进行确认，干扰物质超出限度时需进行确认。
高度溶血可导致结果偏高。
12.检验方法的局限
12.1干扰物质：维生素C≦30mg/dl、甘油三酯≦2000mg/dl、血红蛋白<0.2g/l时对测定无影响
12.2直接胆红素测定只是临床医师对患者进行诊断的指标之一，临床医师还要根据患者的体征、病史及其他的诊断项目、诊断手段进行综合判断。
1×5ml
8.4用途
校准品与宁波美康生物科技有限公司生产的直接胆红素检测试剂盒及全自动生化分析仪配套使用，用于上述检测系统进行这些项目的校准。
8.5主要组成成分
校准品组成成分为非人源性。
校准品中的直接胆红素活性成分浓度具有批特异性，准确浓度见随附的数值表或说明书反面。
三羟甲基氨基甲烷0.1mol/L，二硫苏糖醇0.25g/L,防腐剂1g/L
6.检测仪器
日立7180全自动生化分析仪，使用具体要求和校准程序详见《仪器操作规程》。
直接胆红素测定(D-BIL).
胆红素 ＋氯化重氮苯磺酸 物
紫红色的偶氮化合
加速剂为二甲基亚砜，使游离的胆红素分子内的次级键断 裂，极性上升，与重氮试剂反应。 λ=接胆红素的测定 实验参考值： 2~18μmol/l 临床意义： 当血清胆红素浓度超过34.2μmol/L时，会 导致皮肤、巩膜黄染的现象，这称为黄疸。 根据黄疸的发病机制可分为三类：
注意事项
样品的活性超出可测线性范围上限时，需 进行生理盐水稀释，测定结果乘以稀释倍 数。 叠氮钠能破坏偶氮试剂，终止偶氮反应， 凡用叠氮钠作为防腐剂的质控血清，可引 起重氮反应不完全，甚至不呈色。
总胆红素测定（T -BIL）
实验原理
对氨基苯磺酸 ＋ 亚硝酸钠 氯化重氮苯磺酸 ＋ NaCl ＋ 2H2O
使上端胆管内压力不断升高，最后使小胆
管和毛细胆管扩张，通透性增加，甚至破
裂，使胆汁返流入血，血中结合胆红素增 加。
3. 肝细胞性黄疸（肝源性黄疸） 由于 肝细胞病变，肝功能减退，使肝脏对胆红 素的摄取、转化和排泄作用发生障碍。一 方面肝脏不能将未结合胆红素转化成结合 胆红素，使血中未结合胆红素增加；另一 方面，病变区压迫毛细胆管，使结合胆红 素返流入血，血中结合胆红素也增加。
1. 溶血性黄疸（肝前性黄疸） 由于各种
原因使红细胞大量破坏，以致未结合胆红素
明显增加，超过肝脏的转化能力，但结合胆
红素正常。新生儿血脑屏障发育不全，游离
胆红素易进入脑组织，与脑部基底核的脂类
结合，将神经核染成黄色，称为核黄疸（胆
红素脑病）。
2. 阻塞性黄疸（肝后性黄疸） 由于
胆道阻塞，胆汁不能排出而淤积在胆管内，
胆红素 ＋氯化重氮苯磺酸 偶氮化合物
胆红素的测定方法操作流程
胆红素的测定方法操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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胆红素分类检测办法及直接胆红素与结合胆红素区别和应用
胆红素分类、检测办法及直接胆红素与结合
胆红素区别和应用
胆红素包括直接胆红素、间接胆红素、结合胆红素、非结合胆红素、3胆红素等等。
检测胆红素方法包括湿化学法，干化学法、其他。
比较常用是重氮反应法和干化学法。
直接胆红素：在检测中可以与重氮磺胺酸直接反应的胆红素。
间接胆红素：需要加入加速剂(苯丙酸钠、甲醇、安息香酸钠)等破坏其氢键再与重氮磺胺酸反应的胆红素。
结合胆红素：是指胆红素经肝脏极性转化后与葡萄糖醛酸结合的水溶性胆红素(Be)oBC又分为单葡萄糖醛酸结合胆红素(mBc)和双葡萄糖醛酸结合胆红素(dBc)o
非结合胆红素(Bu)：是以白蛋白为载体的脂溶性游离胆红素。
6胆红素(DE1B)：8胆红素是一种与白蛋白以酰胺键共价结合不可分解的胆红素，具有良好稳定性，半衰期在17-23天。
直接胆红素可以溶于水的胆红素，但少量游离胆红素也可以参加直接反应，少量游离胆红素的氢键被破坏也会参加重氮反应。
重氮反应中：直接胆红素=结合胆红素(Bc)+大部分8胆红素
(DE1B)+少量非结合胆红素(Bu)
结合胆红素(Be)=mBc+dBc
间接胆红素=非结合胆红素。
胆红素怎么检查
胆红素怎么检查你知道胆红素怎么检查吗？胆红素是判断肝病的指标之一，胆红素对肝脏具有一定的保护作用，一旦胆红素过高，就意味着疾病，那么你知道胆红素怎么检查吗？我们一起来看看。
文章目录胆红素怎么检查1、胆红素怎么检查1.1、湿化学法:反应均在液体试剂中进行,重氮法、氧化酶法、化学氧化(如钒酸盐氧化法)法等。
1.2、重氮法:在强酸(pH1-2)条件下,胆红素和重氮离子偶联,形成有颜色的偶氮化合物,重氮胆红素显色的强度与胆红素浓度呈比例,光电比色测定。
优点:可直接比色,手续简单、易于自动化。
缺点:重氮试剂不稳定,须由亚硝酸钠和氨基苯磺酸临时生成;易受溶血、脂血等因素干扰,胆红素浓度过高时影响准确度。
1.3、氧化酶法:胆红素氧化酶催化样品中的胆红素氧化,生成胆绿素引起450nm处吸光值下降。
1.4、化学氧化法:胆红素的四吡咯结构具有还原性,因此各种低分子的武技氧化剂和在一定条件下具有氧化性的各种镀金属元素都可以氧化胆红素。
1.5、钒酸法:在pH=3的条件下,血清胆红素可经钒酸氧化成胆绿素,从而使胆红素特有的黄色减少,可根据加入钒酸前后450nm处吸光度的下降与血清胆红素呈正比。
2、胆红素正常参考值直接胆红素的正常参考值范围为:0～0.4mg/dl。
总胆红素(直接胆红素与间接胆红素之和)正常值参考范围:约胆红素0.2～1.2mg/dl(一些实验室数值参考范围高达1.9mg/dl)。
3、胆红素的间接胆红素:说明可能是溶血性黄疸造成的,直接胆红素升高也可能会有输血时血型不合,贫血等原因分类3.1、总胆红素:间接胆红素偏高,直接胆红素偏高,说明肝细胞性黄疸,肝细胞受到损害,肝功能减退,肝脏不能完全将间接胆红素转化为直接胆红素,同时肝内胆管受压引起了排泄障碍,直接胆红也不能完全排到胆道,同时有可能伴有急性黄疸型肝炎,慢性活动性肝炎,肝硬化,肝癌等疾病。
3.2、直接胆红素:说明是由阻塞性黄疸造成的。
3.3、间接胆红素:说明可能是溶血性黄疸造成的,直接胆红素升高也可能会有输血时血型不合,贫血等原因。
胆红素测定
临床意义
（1）黄疸及鉴别 DBi/TB 比值<20% 溶血性黄疸 比值40%~60% 肝细胞性黄疸 比值> 60% 阻塞性黄疸
（2）肝细胞损害程度和预后的判断。 （3）新生儿黄疸病情掌握。 （4）再障等疾病，TB减少。
思考 题
TB与DBi测定中试剂有何区别，为什麽？
胆红素的分类
（2）结合胆红素(Bc) ：与葡萄糖醛酸基结合， 具亲水性，与重氮试剂直接反应，又称直接 胆红素。占总胆红素的1/5。
黄疸分类
根据总胆红素的浓度 隐性黄疸:总胆红素17.1~34.2µmol/L。 显性黄疸:总胆红素大于34.2µmol/L。
注：TB 17.1µmol/L(2mg/dL)
DBil测定原理(改良J-G法)
血清中的DBi在强酸环境中，与重氮对氨基苯磺 酸反应,生成有色偶氮胆红素, 通过测定550nm处吸 光度值的变化，即可计算出样本中DBi的浓度。
TB测定原理(改良J-G法)
血清中的结合胆红素在强酸环境中与重氮 对氨基苯磺酸反应,生成有色偶氮胆红素,非 结合胆红素在表面活性剂的作用下,也能进行 这样的反应,通过550nm比色,计算其含量。
解。 （2）约10%~20%来自于组织中非Hb的血红素，如肝中
释放的的血红素等。 （3）极少部分是由于骨髓造血过程中，生成的Hb或血红
素，以及少量未成熟RBC的分解（无效造血）产生的 血红素。
胆红素的分类
（1）未结合胆红素(Bu)：未与葡萄糖醛酸基结 合，具亲脂性，须加入加速剂破坏分子内部的 氢键后才能与重氮试剂反应，又称间接胆红素。 占总胆红素的4/5。
黄疸分类
根据造成黄疸的原因 (1)溶血性黄疸 (2)肝细胞性黄疸 (3)阻塞性黄疸
三种黄疸的比较
总胆红素和直接胆红素间接胆红素标准值
总胆红素和直接胆红素间接胆红素标准值总胆红素和直接胆红素是体内代谢产物，通过血液检查可以了解肝功能和胆道系统的健康情况。
在临床中，总胆红素和直接胆红素的标准值对于诊断和治疗胆道疾病具有重要意义。
本文将从总胆红素和直接胆红素的定义、功能、正常值范围以及异常水平等方面进行全面评估，以便您能够深刻理解它们的意义。
1. 总胆红素和直接胆红素的定义和功能总胆红素（Total Bilirubin）是红细胞分解产物，在脾脏被巨噬细胞摄取并分解，生成黄疸胆红素。
黄疸胆红素经过肝脏的代谢和转运过程，一部分转化为直接胆红素（Conjugated Bilirubin），与胆汁一起经过胆管排泄到肠道，从而完成体内胆红素的代谢循环。
总胆红素和直接胆红素的检测可以评估肝脏功能、胆道系统状况和溶血等方面的问题。
肝脏是体内胆红素的主要代谢器官，正常的肝功能可以使总胆红素在体内正常代谢、转运和排泄。
而胆道系统的阻塞、疾病或损伤会导致直接胆红素增加。
2. 总胆红素和直接胆红素的正常值范围在正常情况下，总胆红素的正常值范围是3.4~20.5μmol/L，而直接胆红素的正常值范围是0~4.3μmol/L。
这些数值可能会因不同的实验室和测量方法而有所不同，因此请参考您所在实验室提供的标准值范围。
3. 总胆红素和直接胆红素异常水平的意义当总胆红素或直接胆红素的水平超出正常范围时，可能存在一些健康问题。
以下是一些常见的异常情况及其可能的原因：- 高总胆红素和高直接胆红素：这可能是肝炎、肝硬化、胆道结石、胆管梗阻或胆道癌等疾病的征兆。
溶血性贫血和药物性肝损伤等情况也可能导致总胆红素和直接胆红素的升高。
- 高总胆红素和正常直接胆红素：这可能是非胆汁淤积性黄疸的表现，如Gilbert综合征，一种常见的遗传性疾病。
- 高总胆红素和低直接胆红素：这可能是溶血性贫血或药物性肝损伤等原因导致的结果。
- 正常总胆红素和高直接胆红素：这可能是胆囊炎、胆管炎或其他胆道系统问题的征兆。
硝酸氧化法测定血清总胆红素和直接胆红素
６１ ８
Ｍ０ ｅＴ Ｐ ａ ｔ ａ ｄ ｃ ｎ 。Ｎｏ ｅ ｅ ０ ２，Ｖｏ ． ４，Ｎｏ １ ｄ １ｌ ｒ ｃ ｉ ｌＭｅ ｉｉ ｅ ｃ ｖ ｍｂ ｒ２ ０ １１ ． １
・
检验技术 ・
硝 酸 氧化 法 测 定 血清 总胆 红 素 和 直 接 胆 红素
的试 剂 的稳 定 性 不够 ， 红 素氧 化 胆
２ ２ 测定方 法 ．
． ． 试 法的酶试 剂 成 本 昂 贵 ， 钒 酸氧 化 法 ２ ２ １ 测 定 总 胆 红素 的生 化 分析 仪 之 间的 ６种 浓度 ， 剂其 它浓 度 不变 。 而 中的钒酸 （ 强氧化剂 ） 对仪 器存在潜 在 程序参数 终 点法 ， 波长 为 ４ ５ 主） 在测定 直接 胆红素 时 ， Ｅ Ｔ － ａ ４（ ／ 当 Ｄ Ａ Ｎ ｚ低
４（ 反应 温 度为 ３ ￣ 标本 ８ ， 浓度 时一 部 分 游 离胆 红 素 也 被 氧化 ， ７Ｃ， 的携带 污 染 。我 们 发 展 的硝 酸 氧 化 ５ ８ 次）， ４ 试 ０ 第 ． ｍｏ ／ 法 ， 优 点 是 硝 酸钠 终浓 度 仅 为 ｌ － 试剂 Ｉ２０ ， 剂 Ⅱ ６ ， 一 试 剂 在 ０ ５～２ｍ ｌＬ反应的灵敏度一致 ， 其 ｍ ０ｓ第 ｍｏ ／ ￣ ｍ ｌＬ， ｏ ／ 对仪 器 的携 带 污染 甚 微 ， 剂 反应时 间 为 ３ ０ ， 二试 剂 反 应 时 间 ＞２ｍ ｌＬ浓 度时试 剂在 ４Ｃ保存 时 试 ０ ｓ单 ｐｎ ｌＬ 双 Ｄ Ａ Ｎ ２析 因此选 择应 用试 剂 中 稳定性 好 ， 合 各 种类 型 的 自动 分 析 的 ３ ０ ， 位 ： ａｏ／ ， 试剂 容 量 校 Ｅ Ｔ － ａ 出 ， 适 仪 。现报 告如下 。
３ 实 验 结 果
直接胆红素操作程序
直接胆红素操作程序1.目的规范直接胆红素（DBIL）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2．范围本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。
3.术语4．测定原理4．1测定方法：重氮法4．2 测定原理：对氨基苯磺酸+HCl+NaNO2→氯化重氮苯磺酸+NaCl直接胆红素+氯化重氮苯磺酸→偶氮胆红素（红紫色）其在546nm处的吸光度与血清直接胆红素的生成量成正比。
5．标本5．1标本种类：新鲜无溶血血清。
5．2标本采集：见生化标本采集程序。
6．试剂6．1试剂来源：和光试剂。
6．1．1组成包装规格：R1 540ml×4 R2 135ml×46．1．2试剂准备试剂为液体双试剂，无需配制,开瓶即可使用，用后及时置于2～8℃避光保存。
6．1．3试剂稳定性新打开原装试剂在2～8℃避光保存，稳定期12 个月。
试剂开瓶载机2～8℃稳定30天。
7.仪器参数设定AU2700参数设定：和光试剂仪器参数设定参见试剂厂家提供的试剂参数说明书。
8．校准8．校准：具体参见临床生化校准程序8.1 校准条件：8.1.1仪器光路系统经过光路保养或更换光源等重要部件后。
8.1.2仪器经过大保养后。
8.1.3挪动仪器的安装地点。
8.1.4更换试剂批号。
8.1.5室内质控失控。
8．2 AU2700和光试剂系统的校准：8.2.1 准备：和光配套胆红素校准物.8.2.2 保存和稳定性：原校准品在2～8℃保存至有效期，1ml蒸馏水复溶，复溶后在2～8℃可保存7天。
8.2.3保存位置：低温冰箱-20℃。
8.2.4操作步骤：蓝色样本架的1号位置放蒸馏水；黄色样本架的9号位置放和光配套胆红素定标液→仪器主画面[USER] →[Calibration] →[选择校准项目]→[START]→[YES]。
9．室内质控及失控纠正：见临床生化室内质控程序9．1质控物来源：柏乐液体质控（批号:45612/45613）。
9．2质控物储存条件及准备：-15～-20℃保存至有效期，从低温冰箱取出后室温平衡30分钟。
胆红素测定方法
胆红素测定方法胆红素是人体内一种重要的生化物质，它是红细胞分解代谢产物，对于人体健康具有重要的生理功能。
因此，准确测定胆红素水平对于临床诊断和治疗具有重要意义。
下面将介绍几种常见的胆红素测定方法。
一、直接胆红素测定法。
直接胆红素测定法是通过直接测定血清中的胆红素水平来判断胆红素代谢情况的一种方法。
该方法操作简单，结果准确可靠，是临床常用的一种测定方法。
二、间接胆红素测定法。
间接胆红素测定法是通过间接测定血清中的胆红素水平来判断胆红素代谢情况的一种方法。
该方法操作简单，结果准确可靠，是临床常用的一种测定方法。
三、总胆红素测定法。
总胆红素测定法是通过测定血清中的总胆红素水平来判断胆红素代谢情况的一种方法。
该方法操作简单，结果准确可靠，是临床常用的一种测定方法。
四、高效液相色谱法。
高效液相色谱法是通过高效液相色谱仪来测定血清中的胆红素水平的一种方法。
该方法操作简单，结果准确可靠，是临床常用的一种测定方法。
五、光度法。
光度法是通过光度计来测定血清中的胆红素水平的一种方法。
该方法操作简单，结果准确可靠，是临床常用的一种测定方法。
六、比色法。
比色法是通过比色计来测定血清中的胆红素水平的一种方法。
该方法操作简单，结果准确可靠，是临床常用的一种测定方法。
七、电化学法。
电化学法是通过电化学分析仪来测定血清中的胆红素水平的一种方法。
该方法操作简单，结果准确可靠，是临床常用的一种测定方法。
总结。
以上所述即为胆红素测定的几种常见方法，每种方法都有其特点和适用范围，临床医生可根据具体情况选择合适的方法进行胆红素测定。
希望本文所述内容能对相关工作者有所帮助。
直接胆红素测定的标准操作程序
直接胆红素（DBIL）测定的标准操作程序【应用范围】体外检测血清、血浆DBIL浓度测定。
【适用仪器】Olympus AU-27全自动生化分析仪。
【程序改变】严格遵循仪器、试剂说明书及校准品使用说明。
【方法学原理】在PH2.9环境中，表面活性剂和偏钒酸盐与直接胆红素作用形成胆绿素，胆红素的减少引起在波长450nm处吸光度的下降，吸光度的变化与直接胆红素的含量成正比。
【试剂】溶液A（R1）：酒石酸缓冲液PH 2. 90.1 mmol/L表面活性剂稳定剂70mmol/L溶液B（R2）:偏钒酸盐4mmol/L磷酸盐缓冲液PH7.010mmol/L稳定剂2.校准品：DiaSys TruCal U。
3.质控品：Randox Assayed Multiseral Level 1 and Level 2.【标本收集与准备】1.血清或血浆标本根据实验室标准采集程序采集标本，适用标本为血清或肝素抗凝血浆（肝素钠抗凝结果高0.5mmol/l）,不可从正在静脉滴注手臂上采血，上机标本不能有凝块，样品采集后2天内离心标本，分离血清，血清或血浆标本室温保存4天，冷藏7天，冷冻保存6个月。
【操作步骤】1. 仪器测定参数设置2. 试剂准备：将准备好的试剂置仪器试剂盘中（8C ）。
3. 校准校准物的准备：将校准物从冰箱取出，冻干校准物按说明书加入蒸馏水复溶，轻轻颠倒混匀3次，不可用力震摇，室温放置30分钟至完全溶解；液体校准物从冰箱取出，室温放置15分钟以平衡至室温。
校准物的选择尽可能选择配套仪器厂家校准品。
亦可将校准液复溶后分装保存于-20C 冰箱中，每周校准一次或更换试剂批次后进行校准。
上机校准程序：[1] 选择用户菜单USERCalibrationStart Entry 进入输入界面。
[2] 用光标键选欲校准项目，。
确认后按叵互。
⑶将校准品按屏幕显示放入绿色校准架相应位置，将校准架置入进样轨道，按▲开始。
【参考范围】血清/血浆DBIL ： 1.7-6.8 mol/L 【临床意义】D.Bil 临床上多用于黄疸的诊断和黄疸性质的鉴别。
钒酸盐氧化法测定血清总胆红素、直接胆红素的方法评价
钒酸盐氧化法测定血清总胆红素、直接胆红素的方法评价马荣红;王晖;秦锦屏【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2002(020)002【摘要】目的对钒酸盐氧化法测定血清总、直接胆红素进行方法学评价.方法采用钒酸盐氧化法测定血清总、直接胆红素,与重氮法测定血清总、直接胆红素进行了比较.结果钒酸盐氧化法(Y)与重氮法(X)相关性良好,相关方程:YTBIL=1.184XTBIL-1.29(r=0.9954),YDBIL=0.982XDBIL+1.43(r=0.9947);总胆红素批内、批间平均变异系数分别为1.67%、3.02%,平均回收率达98.3%,在0～628μmol/L范围内线性良好.直接胆红素批内、批间平均变异系数分别为1.72%、3.28%,平均回收率达97.6%,在0～229μmol/L范围内线性良好.标本中甘油三酯含量≤5mmol/L、维生素C含量≤0.5g/L时,对钒酸盐氧化法测定总、直接胆红素均无干扰,但对重氮法有明显干扰;血红蛋白对钒酸盐氧化法和重氮法测定总、直接胆红素均产生正干扰.结论钒酸盐氧化法是一种准确、灵敏、特异性较重氮法高的方法,适用于常规自动化测定血清总、直接胆红素,但在抗血红蛋白干扰方面有待改进.【总页数】3页(P93-94,127)【作者】马荣红;王晖;秦锦屏【作者单位】430022,华中科技大学同济医学院附属协和医院,检验科;430022,华中科技大学同济医学院附属协和医院,检验科;430022,华中科技大学同济医学院附属协和医院,检验科【正文语种】中文【中图分类】R446.11+2【相关文献】1.改良化学氧化法测定血清总胆红素、直接胆红素的评价2.生理盐水与人血清做稀释剂对钒酸盐氧化法测定直接胆红素的影响3.钒酸盐氧化法测定总胆红素及直接胆红素的实验评价4.血清总胆红素、直接胆红素的钒酸氧化法测定5.钒酸盐氧化法和亚硝酸钠氧化法测定血清总胆红素的方法比较因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
06血清总胆红素和直接胆红素测定
一、目的胆红素是血红蛋白的代谢产物，来源有三：（1）人体内胆红素的3/4源于循环血液中衰老红细胞崩解后所释放出的血红蛋白辅基血红素降解而产生；（2）骨髓中的红细胞原位溶血所释放的血红蛋白；（3）含卟啉的血色蛋白如肌红蛋白和其他非血红蛋白性的正铁血红素分解后产生极少量胆红素。
血红蛋白被单核-巨噬细胞系统破坏后分解成胆绿素，再还原成胆红素进入血与血浆白蛋白结合而被运转，称为非结合胆红素或间接胆红素；间接胆红素难溶于水，不能由肾脏排出而进入肝脏，受肝内葡萄糖醛酸基转移酶的作用与葡萄糖醛酸结合，形成葡萄糖醛酸酯，称为结合胆红素或直接胆红素。
结合胆红素由肝随胆汁排至肠道，被还原成粪胆原（尿胆原）再经氧化变成粪胆素（尿胆素），大部分随粪便排出体外；小部分经门脉吸收回肝，复经肝肠循环，其中一小部分进入血循环，经肾排出，称尿胆原。
当肝细胞损伤，胆管阻塞，红细胞破坏增加或寿命缩短时，胆红素代谢发生异常，临床上即出现黄疸。
二、测定方法改良J-G法三、原理血清与醋酸钠-咖啡因-苯甲酸钠试剂混合后，加入偶氮苯磺酸，生成紫色的偶氮胆红素。
其中醋酸缓冲液用以保持偶氮反应的PH，咖啡因、苯甲酸钠加速偶氮苯磺酸的偶联反应。
抗坏血酸破坏剩余偶氮试剂，终止偶氮反应。
最后加入强碱性酒石酸溶液使紫色偶氮胆红素变成蓝色偶氮胆红素，在600nm波长下比色,测定蓝色偶氮胆红素的生成量。
四、标本1、静脉抽取病人空腹血，置于洁净干燥试管或含促凝剂的真空管内。
2、采血后应立即送到检验科生化室。
3、样品收到后立即分离血清，不能及时测定的血清应于2—8℃保存。
4、溶血或脂血的标本不能测定。
五、设备及试剂1、希迈全自动生化仪。
2、上海复星长征公司胆红素试剂。
3、胆红素试剂应于2—8℃冰箱保存。
六、操作步骤1、样本的准备：将编好号的样品离心，取血清加入样品杯放到样品盘的规定位置，再把样品盘放到仪器中相应位置。
2、试剂的检查：每天测定前先检查各种试剂的数量、效期、定标等情况，确认无误后方可进行测定。
直接胆红素检测原理
直接胆红素检测原理
嘿呀，宝子们！咱们来唠唠直接胆红素检测原理这事儿。
直接胆红素呢，它可是在咱们身体的胆红素代谢里占着重要的一席之地哦。
胆红素这个东西呀，主要是从衰老的红细胞里分解出来的。
直接胆红素它比较特别，它在肝细胞内经过一系列复杂的反应形成后，就有了自己独特的性质。
在检测的时候呢，有一些化学的方法会用到哦。
比如说重氮试剂法，这个方法就像是一场巧妙的化学反应魔术。
重氮试剂就像一个特别的钥匙，它能和直接胆红素发生反应，然后产生一种有颜色的化合物。
这个颜色的深浅呀，就和直接胆红素的含量有关啦。
就像你在调色盘里调色一样，颜色越深，那就说明直接胆红素的量越多。
还有一种方法呢，是氧化酶法。
这个就像是利用了一群小小的生物战士——氧化酶。
这些氧化酶会和直接胆红素发生反应，然后通过一些仪器设备，检测这个反应的程度，从而知道直接胆红素的量。
这些检测原理的背后，其实都是科学家们经过无数次的实验和研究得出来的。
这就像探险家在未知的领域里探索，一点一点地发现宝藏一样。
了解这些检测原理，对于医生诊断疾病可是非常重要的呢。
比如说，如果直接胆红素的含量不正常，那可能就暗示着肝脏或者胆管方面有问题。
像是肝炎、胆管堵塞之类的疾病，都可能会让直接胆红素的数值变得怪怪的。
而且呀，这些检测原理也在不断地发展和改进。
就像科技在不断进步一样，检测的方法也会越来越精准，越来越方便快捷。
这样就能更好地帮助医生们给患者做出准确的诊断，让患者能早日恢复
健康啦。
胆红素的测定方法操作流程
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试剂准备：1. 胆红素试剂。
2. 标准胆红素溶液。
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血清总胆红素和直接（结合）胆红素测定
目前测定血清胆红素的方法主要有重氮试剂法（包括改良J-G法、二甲亚砜法、二氯苯重氮盐法和2，5二氯苯重氮四氟硼酸盐法等）、胆红素氧化酶法、钒酸盐氧化法、高效液相色谱法、导数分光光度法、经皮胆红素测定法以及直接分光光度法等。
改良咖啡因（J-G）法：
一、实验原理
血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，生成紫色的偶氮胆红素；在同样条件下，未结合胆红素须有加速剂破坏胆红素氢键后才能与重氮试剂反应。
咖啡因、苯甲酸钠作为加速剂，醋酸钠缓冲液可维持反应的PH值同时兼有加速作用。
叠氮钠破坏剩余重氮试剂，终止结合胆红素测定管的偶氮反应。
最后加入碱性酒石酸钠，在碱性条件下，紫色偶氮胆红素转变为蓝色偶氮胆红素，使最大吸光度由530nm转移到598nm，此时，非胆红素的黄色色素及其它红色与棕色色素产生的吸光度可忽略不计，使测定的灵敏度和特异性增加。
最后形成的绿色是由蓝色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。
二、实验方法
（一）器材
试管，刻度吸管，分光光度计，37℃水浴箱。
（二）试剂
1．咖啡因-苯甲酸钠试剂无水醋酸钠41g，苯甲酸钠37.5g，乙二胺四乙酸二钠EDTANa2 0.5g，溶于约500mL 的蒸馏水中，再加入咖啡因25g，搅拌至完全溶解(不可加热)，然后加蒸馏水稀释至1000mL，混匀，过滤后放置棕色试剂瓶中，室温保存可稳定6个月。
2. 5g/L 亚硝酸钠溶液：亚硝酸钠5.0g，加蒸馏水溶解并稀释至100mL，若发现溶液呈淡黄色时，应丢弃重配。
3. 5g/L 对氨基苯磺酸溶液：对氨基苯磺酸（NH2C6H4SO3H·H20）5.0g，加于约800mL 蒸馏水中，加浓盐酸15mL，待完全溶解后，加蒸馏水至1000mL。
4. 重氮试剂临用前，取5g/L 亚硝酸钠溶液（试剂2）0.5mL 与5g/L 对氨基苯磺酸溶液（试剂3）20mL 混合。
5. 5g/L 叠氮钠溶液：叠氮钠0.5g，用蒸馏水溶解并稀释至100mL。
6. 碱性酒石酸钠溶液：氢氧化钠75g，酒石酸钠(Na2C4H4O6·2H2O)263g，加蒸馏水溶解并稀释至1000mL，混匀，置塑料瓶中，室温保存可稳定6个月。
7.胆红素标准液可购买，也可按以下方法配制：
（1）稀释血清：收集不溶血、无黄疽、清晰的血清过滤作为混合血清稀释剂。
取过滤血清1.0ml，加生理盐水24ml，混匀。
在分光光度计中，以比色杯光径1cm，波长414nm，用生理盐水调零，读取的吸光度应小于0.100，波长460nm 处读取的吸光度应小于0.040。
（2）171umol/L胆红素标准液：称取符合标准的胆红素（MW:584.68）10mg，加入二甲基亚砜1ml，玻棒搅匀，加入0.05mol/LNa2CO3溶液2ml，使胆红素完全溶解。
移入100ml 容量瓶，用稀释血清洗涤数次并移入容量瓶中，缓慢加入0.1mol/LHCl溶液2ml（边加边缓慢摇动，切勿产生气泡），最后用稀释血清稀释至100ml。
避光，4℃保存，三天内有效，最好当天绘制标准曲线。
（三）步骤
1. 取试管3支，标明总胆红素管、结合胆红素管和空白管，然后按下表操作：
试剂(ml) 总胆红素管结合胆红素管空白管
血清0.2 0.2 0.2
咖啡因-苯甲酸钠试剂 1.6 - 1.6
氨基苯磺酸溶液- - 0.4
重氮试剂0.4 0.4 -
混匀，总胆红素管置室温10min，结合胆红素管置37℃水浴准确放置1min，按下表继续操作：
叠氮钠溶液- 0.05 -
咖啡因-苯甲酸钠试剂- 1.55 -
碱性酒石酸钠溶液 1.2 1.2 1.2
充分混匀后，用空白管调零，于波长600nm，读取总胆红素管和结合胆红素管吸光度，在标准曲线上查出相应的胆红素浓度。
胆红素氧化酶法
一、实验原理
胆红素呈黄色，在450nm附近有最大吸收峰。
胆红素氧化酶(BOD)催化胆红素氧化，随着胆红素被氧化，A450nm下降，下降程度与胆红素被氧化的量相关。
在pH8.0条件下，未结合胆红素及结合胆红素均被氧化，因而检测450nm吸光度的下降值可反映总胆红素含量；加入SDS及胆酸钠等阴离子表面活性剂可促进其氧化。
在pH3.7～4.5缓冲液中，BOD催化单葡萄糖醛酸胆红素(mBc)、双葡萄糖醛酸胆红素(dBc)及大部分δ胆红素氧化，非结合胆红素(Bu)在此pH条件下不被氧化。
用配制于人血清中的二牛磺酸胆红素(ditaurobilirubin，DTB)作标准品，检测此条件下450nm吸光度的下降值可反映结合胆红素的含量。
二、实验方法
1．0.1mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.2) 称取三羟甲基氨基甲烷(Tris)1.211g，胆酸钠172.3mg,十二烷基硫酸钠(SDS)432.6mg，溶于去离子水90ml中，在室温(25～30℃)用1mol/L盐酸调节pH至8.2(约用6ml)，再加蒸馏水至100ml，置冰箱保存，此液含4mmol/L胆酸钠、15mmol/L SDS。
2．0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH4.5)。
3．BOD溶液如系冻干品，按说明书要求复溶，但复溶后冰箱保存不宜过长(约可保存1周)，如系液体(可能含有甘油)，置4℃冰箱可保存较长时间，BOD贮存溶液的酶活性一般在数千至1万～2万U/L，BOD工作液酶活性可按反应液中BOD终浓度达0.3～1.0U/ml计算。
4．总胆红素标准液(342μmol/L) 按胆红素测定J-G法中方法配制，或市售合乎要求的标准液。
5．结合胆红素标准液将DTB配于胆红素浓度可忽略不计的人血清中，或用冻干品按说明书要求重建。
配制后分装于聚丙烯管内，－70℃保存，可稳定6个月。
冻干品未重建前置低温中，至少稳定1年。
加入BOD工作液后立即混匀，置37C水浴5min，用分光光度计，在450nm波长，去离子水调零，读取各管吸光度(A)。
用于对照管的比色杯与非对照管的比色杯不得混用。
钒酸盐氧化法(试剂盒)
一、原理
在PH=3左右，有表面活性剂和间接反应胆红素抑制剂的条件下，样品中的直接胆红素被氧化剂钒酸钠氧化为胆绿素。
胆红素的黄色特异性吸光度下降，通过测定钒酸盐氧化前后吸光度的变化，计算样品中直接胆红素的含量。
二、实验方法
试剂：柠檬酸缓冲液100mM
表面活性剂2mmol/L
磷酸缓冲液10mM
偏钒酸钠4mmol/L
适用于半/全自动生化分析仪，两周内用完。
样本/标准/水sample volume μ114
试剂1（R1）Reagent 1 μl280
样本+R1 在37℃保温60秒，记录吸光度值A1
试剂2（R2）Reagent 2 μl70
在加入R2 保温300 秒后，记录吸光度值A2。
主波长main wavelength nm 450
副波长sub wavelength nm 546
反应类型reaction type 两点终点法反应方向reaction direction 降反应(-)。