医学检验·检查项目：细胞膜表面免疫球蛋白测定_课件模板

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医学免疫学-第4讲--免疫球蛋白PPT课件

， 4占.唯血一清能免通过疫胎球盘蛋的白抗总体量。的75%～80%。
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一、免疫球蛋白的基本结构抗体由两条完全相同的轻链（L链）和两条两条完全相同的重链（H链）由链间二硫键连接而成
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（一）重链和轻链
1.重链（Heavy chain, H链）
450-550aa,50-75kD,4~5个链内二硫键。因H链恒定区氨基酸组成和排列顺序不同，其抗原性也不同，将重链分为α、 δ、 γ、 ε 、 μ链5类。
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③互补性决定区：VH和VL的3个高变区共同组成Ig 的抗原结合部位，该部位形成一个与抗原决定基互补的表面，分别用CDR1、CDR2、CDR3表示。 CDR决定抗体对抗原结合的特异性。 ④骨架区：高变区以外的可变区区域，其氨基酸组成和排列顺序相对不易变化，FR1-FR4。
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2.恒定区：位置：L链C端1/2，H链C端3/4或4/ 特组异成性：：CH同1一~C种H属3或不C同H个4。体，针对不同抗原刺激产生同一类抗体，V区特异性不同， C区特性相同。
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（三）铰链区
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功能：能改变两个Y 位形置臂：之C间H1的-C距H离2之，间更脯有氨利酸于丰两富臂，同易时弯结曲合变两形个，不也同易的被抗酶原水表解位。。
IgD、IgG、IgA有绞
链区，IgM和IgE无。
（四）结构域
抗原 H链可分为：VH、CH1、CH2、CH3、
（其中IgM、IgE还有CH4）
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第一节免疫球蛋白概述
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1.免疫球蛋白的发现
白喉外毒素（抗原）
刺激机体
抗毒素（抗体）
德国细菌学家 von. Behring
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中和毒性作用 1890年von Behring 和kitasato 1901年，von. Behring由于血清治疗方面的突出贡献获得了历史上首个诺贝尔生理或医学奖。

免疫球蛋白检测及应用课件21页PPT

39、没有不老的誓言，没有不变的承诺，踏上旅途，义无反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识的人，决不会坚韧勤勉。
免疫球蛋白测定及应用
一、免疫球蛋白定量检测方法
（一）单向琼脂扩散法 1.原理 2.操作方法 3.影响因素抗血清，温度，标准曲
线，异常沉淀线
（二）免疫比浊法透射比浊法散射比浊法 1.原理 2.操作方法 3.影响因素抗血清，缓冲液，
（二）免疫球蛋白定量某一类免疫球蛋白的显著增高
（三）轻链片段定量测定单向免疫扩散法或ELISA
（四）免疫电泳或免疫固定电泳（五）本周蛋白测定
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
①中枢神经系统内源性合成增加 ②血中IgG增高
③血脑屏障通透性增高。
四、M蛋白的检测
M蛋白是B淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖所产生的一种在氨基酸组成及顺序上十分均一的异常单克隆免疫球蛋白（monoclonal Ig），多见于多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症和恶性淋巴瘤。
（一）血清蛋白区带电泳 M区带的出现
三、免疫球蛋白定量临床意义
（一）血清Ig定量临床意义 1.低Ig血症（1）先天性低Ig血症（2）获得性低Ig血症
2.高Ig血症（1）非特异型多克隆免疫球蛋白增高症
（2）特异型单克隆免疫球蛋白增殖症
3.IgD 在疾病中的意义尚不明确。妊娠末期及吸烟者IgD含量升高。IgD 型骨髓瘤患者血清中IgD水平比正常人高10000倍，是惟一明确可作为疫法（五）免疫电泳及免疫固定电泳

免疫球蛋白检测及应用PPT课件

（三）注意事项 1. 部分单克隆冷球蛋白可在低于 10 ℃时发生沉淀，故取标本时要保温 2. 部分冷球蛋白在冷的条件下可迅速沉淀，但有的需要数天，故此应放置一周 3. 正常人血清也可含有冷球蛋白，但属多克隆冷球蛋白的性质，且含量低 4. 冷纤维蛋白原、 C 反应蛋白 - 蛋白复合物和肝素沉淀蛋白等也具有冷沉淀特性，实验时应加以区别
思考题： 1．IgG、IgA、IgM的测定技术 2．体液中IgG、IgA、IgM测定的临床应用 3．IgE、IgD、的测定技术 4．异常免疫球蛋白的检测技术来自THANKYOU
SUCCESS
2019/4/14
（一）定性分析分离血清作二支分装，一支置 4℃，一支置37℃，直立，一般于24～72小时， 4℃一管可出现沉淀（二）定量分析将沉淀用冷 pH7.0 ， 0.05mol/L 磷酸盐缓冲液洗涤，然后将沉淀再溶解于 10 倍体积的 pH8.6 的 0.05mol 巴比妥 / 巴比妥钠缓冲液中，置 37 ℃ 30min，进行免疫电泳或免疫固定电泳进行型别鉴定
THANK
YOU
SUCCESS
2019/4/14
第四节异常免疫球蛋白的检测
一、 M 蛋白的检测与鉴定 M 蛋白是一种异常单克隆免疫球蛋白，多见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤。
（一）血清蛋白区带电泳 IgG 型多位于 α 区与慢 γ 区 IgA 型多位于慢 γ 区与 β 区 IgM 型多位于 β 2 区或 γ 区 IgD 型多位于 β 区或 γ 区但最终鉴定需用特异性抗体，在轻链病时 M 蛋白呈淡染区带常在 β 或 γ 区，需与尿中本周蛋白检测或尿蛋白电泳同时观察。
第三节 IgE 和 IgD 的测定
一、 IgE 的测定方法 1 、放射免疫法：固相抗 -IgE+IgE+ 125 I 标记抗人 IgE 2 、化学发光免疫分析法：固相抗 IgE+IgE+ 酶标抗 IgE+ 底物 3 、乳胶颗粒免疫浊度法 4 、酶免疫试验

免疫球蛋白PPT课件

• 分泌型IgA具有免疫排除功能，即分泌型IgA结合饮食中大量的可溶性抗原以及肠道正常菌群或病原微生物所释放的热原物质，防止它们进入血液。
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IgD
• <1% 血清Ig • IgD是成熟B细胞的重要表面标志， B细胞的膜受体 • B细胞的分化过程中首先出现mIgM，mIgD的出现标
志着B细胞成熟 • 对防止免疫耐受有一定作用 • 半衰期短2.8天.
化道和泌尿生殖道黏膜表面的分泌液中。
• 新生儿出生4～6个月后，血中可出现IgA，以后逐渐升高，到青少年期达到高峰。
• 例：与脊髓灰质炎病毒结合，阻抑其吸附到易感细胞上，分泌
型IgA还可中和毒素如霍乱弧菌毒素和大肠杆毒素。
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IgA的特点
• 参与皮肤粘膜的局部抗感染作用 • 初乳中含有高浓度的sIgA----母乳喂养； • 通过替代途径激活补体； • 参与Ⅲ型超敏反应；
天然抗原机体
（多个抗原表位）
诱发多个B 细胞克隆活化
产生多种针对不同表位的相应抗体（多克隆抗体）
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二、单克隆抗体 (monoclonal antibody, McAb)
由一个始祖细胞分化、增殖所产生的遗传性状完全相同的细胞群称为克隆（clone）。
由一个克隆B细胞产生的、只作用于单一抗原表位的高度特异性抗体称为单克隆抗体。又称第二代人工抗体。
• 参与II、III型超敏反应。
例：应用对麻疹、甲型肝炎等有免疫力的产妇或正常人丙种或胎
盘球蛋白可进行人工被动免疫，能有效地预防相应的传染性疾
病。不少自身抗体如抗甲状腺球蛋白抗体、SLE的LE因子（抗核
抗体）以及引起Ⅲ型变态反应免疫复合物中的抗体大都也属于
IgG。

免疫球蛋白的检测与临床应用PPT课件

（二）临床意义
1.I型变态反应性疾病，如特发性哮喘、特发性皮炎、过敏性鼻炎等IgE常升高。 2.非变态反应性疾病，如IgE骨髓瘤、寄生虫感染等IgE升高。 3.急性或慢性肝炎、SLE、类风湿关节炎等疾病IgE可升高。 4. IgE降低见于原发性无丙种球蛋白血症、肿瘤及化疗药物应用后。

（一）测定方法
1.总IgE的测定方法
有化学发光免疫分析法、放射免疫分析法、乳胶颗粒免疫比浊法及酶联免疫吸附试验等。在临床上用化学发光免疫分析法和酶联免疫吸附试验测定总IgE较为常见。 2.特异性IgE的检测方法

主要有免疫斑点法和酶联免疫吸附试验。商品化的试剂盒提
供了多种特异性的变应原，包括食物、吸入物以及药物过敏原，利用这些特异性变应原就可以检测血清中特异性IgE。

（一）测定方法 IgD的测定方法有放射免疫分析法，乳胶颗粒免疫比浊分析法、酶联免疫吸附试验。在临床用得最多的是酶联免疫吸附试验测定IgD。（二）临床意义目前IgD的生物功能尚未完全阐明，血清中IgD升高主要见于妊娠末期，IgD型骨髓瘤，甲状腺炎和大量吸烟。IgD降低见于原发性无丙种球蛋白血症、肺硅沉着病（矽肺）、细胞毒药物治疗后。

本周氏蛋白血清蛋白电泳免疫固定电泳免疫比浊法检测游离轻链

高敏感性：可达到5-10mg/L 高特于性高检测速率定量检测：可同时检测κ型和λ型轻链的水平以及两者的比值，有利于鉴别诊断和监测病情的变化

Κ型游离轻链或λ型游离轻链中某一个指标浓度异常增高和比值异常，常提示有单克隆类疾病，如多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症，原发性淀粉样变性，轻链沉积病等。 Κ型或λ型游离轻链同时增高，可能原因有感染，肾功能受损或结缔组织类疾病。

免疫球蛋白精品课件

存在形式
• 膜型 (membrane immunoglobulin, mIg) — B细胞膜上的抗原受体BCR；
• 分泌型 (secreted immunoglobulin, sIg) — 分泌进入体液, 介导体液免疫应答。
第一节免疫球蛋白的结构
一、基本结构
H2L2
• V区 • 3个超变区（HVR） • 互补决定区（CDR1 CDR2 CDR3） • 抗原结合部位（ABS）
概念
1. 抗体（antibody, Ab）功能性概念是介导体液免疫的重要效应分子，是B细
胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞所产生的糖蛋白，主要存在于血清等体液中，通过与相应抗原特异性结合，发挥体液免疫功能。
2. 免疫球蛋白（immunoglobulin, Ig）结构性概念具有抗体活性或化学结构与抗体分子相似的球蛋白。(Ab, BCR,其他分子)
(2)四个亚类； IgG1, IgG2 and IgG4
IgG3
(3)血清中含量最高(75%Ig)；
(4)半衰期最长(21～23天)；
(5)3～5岁达成人水平(8.0～17mg/ml)；
(6)可与SPA结合。
2.生物学活性 (1)通过胎盘（新生儿抗感染）； (2)激活补体（裂解细胞）； (3)调理作用（促进吞噬）； (4)介导ADCC（细胞毒作用）。 3.实际意义 (1)抗感染； (2)自身抗体 → 自身免疫病； (3)介导变态反应(Ⅱ、Ⅲ型)； (4)封闭抗体 → 肿瘤细胞逃逸； (5)亲合层析法 — IgG纯化； (6)免疫学检测。
三、抗体多样性的遗传学基础
（1）胚系中众多的V、D、J基因片段；（2）V-D-J和V-J重排时，基因片段进行随机组合；（3）VDJ连接过程中的核苷酸缺失和N区的核苷酸插

免疫球蛋白PPT课件

3）骨架区 VH和VL各有4个FR。
2. 恒定区（constant region,C区)： Ig 分子的C端，在轻链1/2和重
链3/4处，氨基酸的组成和排列比较恒定。
Ig的类别
1）类：根据CH氨基酸组成排列不同分为五大类
γμαδ
ε
IgG IgM IgA IgD IgE
亚类：IgG1~4；IgM1~2; IgA1~2
2）型：根据CL氨基酸组成排列不同分为两型
κ型和λ型
2、铰链区（Hinge region）
特点：位于CH1和CH2之间，富含脯氨酸，极富弹性。
功能： 1.有利于Ab与Ag的结合； 2.有利于Ig补体功能区的暴露。
3、连接链（J链）和分泌片段
J链：由浆细胞合成的富含半胱氨酸的多肽链。起连接及稳定多聚体结构的作用。
分泌片（SP）：由黏膜上皮细胞合成和分泌的含糖肽链。起保护sIgA及介导其主动运输的作用。
二、免疫球蛋白的结构
（一）基本结构（以IgG为例）（二）功能区（三）水解片段
（二）免疫球蛋白的功能区
1、定义：Ig的多肽链分子可折叠成若干个链
内由二硫键连接的球形结构。每个球形结构约由 110个氨基酸组成，具有一定的功能，故称功能区。
IgA的特征和功能
1、特征产生—部位：MALT；时间：出生后3-6月始合成；存在—形式：单体血清型和二聚体分泌型；部位：唾液、泪液、乳汁及呼吸道、
消化道、泌尿道的分泌液中和粘膜表面；时间：半衰期，6天左右；浓度：血清中Ig含量 10%-20%
2、功能
1）血清型：同IgG，但不重要
2）分泌型：粘膜局部抗感染免疫的重要因素（又称局部免疫抗体）。
(一) 识别并特异性结合抗原（二）激活补体（三）通过Fc段结合具有FcR的细胞

免疫球蛋白细胞免疫检测肿瘤标志物ppt课件

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二、B细胞分化抗原检测
参考值： CD19 11.74 ± 3.37％临床意义：
①升高：ALL、CLL ②降低：无丙种球蛋白血症、
使用化疗或免疫抑制剂后。
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第四节肿瘤标记物检测
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概述
肿瘤标志物（tumor marker）是由肿瘤细胞本身合成、释放或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。
如呼吸道、消化道、泌尿生殖道的感染、炎症、肿瘤
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二、免疫球蛋白A检测
参考值：
血清IgA：0.7~3.5g/L SIgA：唾液平均为 0.3 g/L 泪液 30～80 g/L 初乳平均为 5.06 g/L 粪便平均为 1.3 g/L
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二、免疫球蛋白A检测
临床意义：
1、IgA增高：IgA型MM、SLE、肝硬化、肾脏疾病
原，存在卵巢肿瘤的上皮细胞内。
参考值：<3.5万u/L
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二、糖脂肿瘤标志物检测
临床意义： 1、对诊断卵巢癌（阳性率60～90％）
有较大临床意义。 2、宫颈癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、
胃癌、肺癌等。 3、良性卵巢瘤、子宫肌瘤、肝硬化
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三、酶类肿瘤标志物检测
（一）前列腺酸性磷酸酶测定 PAP是一种前列腺外分泌物中能
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51
二、糖脂肿瘤标志物检测
（三）糖链抗原19-9（CA19-9） CA19-9是一种糖蛋白，在成人的
胰、胆部位少量存在。
参考值：健康人血清CA19-9<3.7万u/L
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优选免疫比浊法检测免疫球蛋白Pptppt(共23张PPT)

样品光电计
滤光片光源
透射比浊法的缺陷：
(1)溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大，分
增浊剂浓度和反应时间掌握不当；
— 是测定抗原子抗体太结合小反应则的动阻态过挡程。不了光线的通过。
不足的是灵敏度和精密度均不够理想，所需的抗血清量大，检测的周期较长。
快在速光(源不的(必2光达路)平溶方衡向）（液00）中的抗原－抗体复合物的数量要足够多。如果
100 % 0%
时间
速率散射比浊法
（一）基本原理
— 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。
— 所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成
复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的
速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态的速率比浊分析。 — 当仪器测定到某一时
间内形成速率下降时，
即出现速率峰，该峰
值的高低，即代表所
读数以吸收单位（A）或OD值表示，A值反映了入射光和透射光的比率。增浊剂浓度和反应时间掌握不当；
1.免疫球蛋白试剂A,M,G 免疫比浊法检测免疫球蛋白
光通量是每单位时间到达、离开或通过曲面的光能数量 2、散射比浊的优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。
值复的合高物低的，速即度代。2表.所免疫球蛋白试剂A,M,G校准品，蒸馏水
2、散射比浊的优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。其缺点是需特定的分析仪器，试剂价格高。
免疫浊度法测定中应注意的问题
1、伪浊度的影响伪浊度形成原因很复杂，主要是抗血清含有非特异性
的交叉反应性杂抗体成分；增浊剂浓度和反应时间掌握不当；样品本身的浊度处理不当；试剂的污染和变质；器材尤其是比色杯等不够清洁等因素。 2、非特异性散射光的影响
免疫浊度法经常受内源性光散射的干扰，为避免这些非特异性光散射的影响，应用透射比浊法时需保证抗体组分在3％以下，散射比浊法需保证在％以下。

免疫球蛋白PPT课件

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二、免疫球蛋白的分子结构
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（一）免疫球蛋白的基本结构
四肽链结构，链间二硫键连接两条重链（H）和两条轻链（L）形成在左右对称的四肽链结构,称Ig分子的单体,是构成Ig分子
的基本单位.
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1.重链与轻链
(1)根据重链分类：根据重链靠近羧基末端氨基酸组成及排列顺序不同，将重链分为种：γ、α、μ、δ、ε 根据重链组成不同，将Ig分为五类：IgG、IgA、 IgM、IgD、IgE
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第二节、免疫球蛋白的抗原性与分类
Ig作为免疫原，可在异种动物、同种异体或自身体内诱导产生产生不同程度的免疫反应。
免疫球蛋白的不同结构区其免疫原性不同：同种型（isotype）：种属特异性标志
同种异型（allotype）：个体特异性标志独特型（idiotope）：免疫调节网络
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IgG的特点
IgG1、IgG2和IgG3能通过经典途径激活补体
血清含量最高(75%～85%),也是丙种球蛋白的主要成分
半衰期较长（16～24d）
主要的抗感染抗体(具有抗菌、抗病毒、中和毒素和免疫调理作用)
参与II、III型超敏反应
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（二）IgM
mIgM是B细胞抗原受体（BCR）的主要成分
也可参与II、III型超敏反应
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(三)Ig A
分为血清型和分泌型两种。
血清型IgA主要由肠系膜淋巴组织中的浆细胞产生，为单体。而分泌型IgA（sIgA）是由呼吸道、消化道、泌尿生殖道等处的固有层中浆细胞产生，为双体、三体或多体。

医学检验·检查项目：血清免疫球蛋白测定_课件模板

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相关症状：扁桃体小或缺如、网状青斑。
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相关疾病：
原发性单克隆免疫球蛋白病、继发性单克隆免疫球蛋白病、脊柱裂和有关畸形、冷球蛋白血症、小儿白细胞黏附分子缺陷Ⅰ 型、先天性性联无γ-球蛋白血症、特发性迟发性免疫球蛋白缺乏症、婴儿期短暂性低丙球蛋白血症、异常γ-球蛋白血症、重症联合免疫缺陷。
医学检验·各论血清免疫球蛋白测定
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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简介：免疫球蛋白（Ig）具有抗体活性，能
与相应抗原专一结合，是体内普遍存在的一类蛋白质。
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临床意义：
Ig显著减低 ①见于先天性低丙种球蛋白血症，如 IgG、IgA、IgM三种全缺的 Bruton病（仅限于男性），三种Ig缺某一或二种（减少或无能）的丙种球蛋白异常血症，后者最多见的是IgA缺乏症（隐性遗传）。 ②见于获得性低丙种球蛋白血症（如肾病综合征、蛋白质丢失性肠病、先天性
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临床意义：
风疹病等）以及瑞（Swiss）氏胸腺发育不全伴无丙种球蛋白血症。Ig 明显增高 ①见于免疫性疾病，如系统性红斑狼疮急性期、慢性活动性肝炎、类风湿性关节炎活动期等。 ③见于多发性骨髓瘤，可按其所产生Ig不同而有G型（IgG增多）、A 型（IgA增高）、D型、E型（后两型极少见）等。 ④
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免疫球蛋白ppt课件_6

胃蛋白酶水解产物
F(ab’)2：由二硫键将 2 个 Fab 部分连接在一起，能与二价抗原结合。若将二硫键还原，则分裂为2 个 Fab’ 碎片，也具有结合抗原的活性
pFc’：无生物活性
考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分
人有5类，分别以 IgG、IgA、IgM、IgD和IgE 表示
考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分
考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分
轻链有 2 条链内二硫键，分别组成 VL 和 CL 2 个结构域；重链有 4-5 条链内二硫键，分别组成 4-5 个结构域，即 VH、CH1、CH2、CH3 和 CH4（ IgA、 IgG 和 IgD 有 3 个 CH 结构域； IgM 和 IgE 有四个 CH 结构域）
重链恒区结构域（CH1、CH2、CH3 和 CH4）之间有高度的同源性，它们又与 CL 同源。因此，结构域又称为同源区，反映了 Ig 分子在进化起源上的关联
Ig 分子的四链结构单位
Disulfide bond
Carbohydrate
CL VL
CH1
CH2
CH3
VH
Hinge Region
考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分