常规实验所用溶液配方大全

常规实验所用溶液配方大全

配制

组分浓度： 0.5mol/l EDTA， PH=8

配制量：500ml

配制方法(1)称取93.06克，置于500 ml烧杯中

(2)加入约400ml dd H2O.用热磁力搅拌器充分搅拌

(3)用NaOH调节PH值到8，约用10克固体NaOH

(4)在溶液冷却后，再用NaOH调节至PH=8

(5)加dd H2O将溶液定容到500 ml

(6)高温高压灭菌后，室温保存

2.NaOH溶液的配制

组分浓度：5 mol/l NaOH

配制量：100 ml

配制方法(1)称取固体NaOH20克于容器中

(2)加入dd H2O定容到100 ml

3.100 mmol/l Tris-HCl的配制

组分浓度： mmol/l Tris-HCl， PH=6.4

配制量：250 ml

配制方法(1)称取3.025克Tris于250 ml烧杯中.

(2)加入约200ml dd H2O充分搅拌溶解.

(3)用浓盐酸调节PH值到6.4.所用浓盐酸约3 ml

(4)将溶液定容至250ml

(5)用棕色瓶分装于4度冰箱中

(6)如使用，用水浴加热溶解.

4.氯仿-异戊醇的配制：

配制方法(1)简单的体积混合，既要求比例为24：1即可

(2)储存于棕色玻璃瓶子中

(3)置于4度冰箱以便日后使用

5.去污剂：

CTAB：可将细胞膜裂解，使DNA释放到提取液中，同时也使组织匀浆中的蛋白质变性.

EDTA：能与DNase的辅助因子Mg2+结合，使DNase失去活性，不能降解从细胞中释放的DNA.

6.还原剂巯基乙醇：它抑制从细胞中释放的多酚氧仿.防止植物组织发黄变褐.

7.氯仿—异戊醇：它可把组织匀浆中变性的蛋白质除去，将DNA与细胞中的蛋白质、碳

水化合物等分开除去.

8.RNase：它可去除核酸中的RNA，只留下DNA.

9.硅珠悬浮液的配制

（1）称取1.2g硅珠粉，溶解于10ml无菌水中.

（2）放入4℃冰箱备用.

（3）使用时先涡旋使其混合均匀

10. 10×TE，500ml配制如下：

将100mM Tris-Hcl（PH=8.0）6.057g与10mM EDTA（PH=8.0）1.8612g溶于400ddH2O 中，调PH=8.0，定容到500ml。

11. 1×TE Buffer

组成浓度：10mM Tris-HCl 1mM EDTA PH=8.0

配制量：500ml

配制方法：量取下列溶液于500ml烧杯中

1M Tris-HCl Buffer PH=8.0 5ml

0.5M EDTA PH=8.0 1ml

向烧杯中加入约400mldd H2O均匀混合；将溶液定容到500ml后，高温高压灭菌；室温保存.

12. 聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE

PAGE操作流程及注意事项：

1、涂胶

1）将有耳玻片（耳朝下）泡于反硅化剂中，新液25分钟，旧液30分钟.

2）涂无耳正面玻片硅化剂.均匀点四滴，轻而匀的沿一个方向涂三次，静10分钟.

3）到时间取出.打开通风橱风干30分钟.

2、封胶

1）将两玻片对贴于橡胶框中，放平，用力拧死，夹住橡胶管.

2）溶废琼脂胶，分两次：第一次50秒，第二次10-20秒，防止沸出.

3）用小细长枪头通透加胶枪头，便于加样通畅，少起气泡.

4）吸2500-3000ul液胶加速沿玻片边缘快速顺下滴，将两面玻片充分封死，防止漏胶.以水平底线面水平高于底为佳，静止凝胶15分钟.（有时可先在封口加一点TBE以润滑玻片，利于胶流下）

3、灌胶

1) 用长细枪头透开加胶枪头

2) 从中间加入，每次不要全部打完，留一点在枪头内.防止断流而导致胶中含有气泡.

3) 插梳子时两端平整，梳子紧贴玻板，梳齿头部不可有气泡.

4) 拔梳子时先加一倍TBE液将梳子泡透，然后平行用力拔出.

5) 在插梳子15分钟内跟踪观察，适当下按，保证孔的深度.

6) 等待2小时，以便胶充分凝固.

4、吹孔

1）向中间槽加入1倍粗制TBE，要淹没过内玻片约1厘米.

2）拔梳子，小心平稳，均匀平衡.

3）调1000p枪到300-600ul，进行吹孔，将小孔内沉淀物吹打干净，加样中再视时吹5、加样

1）用细长专用枪加入DNA 0.5ul.

2）一手托另一臂的肘，以保证加样手不抖.

3）一定垂直加到孔中去，不脱尾，不吸水，不靠壁，干净利落.

4）加完一次.在放于桌旁的吸纸上，将细枪头上余液吸干.

5）首、中、尾各留1到2个孔，两面胶孔的Marker不完全一样，以便区分.

6）加Marker 0.15ul 一般取0.3ul每孔注如一半，可用两个孔.

6、跑胶

1) 向两侧槽中加入粗制TBE，至U管线处.

2) 打开电源，稳压到120V

3) 电泳2h左右

4) 当样品跑到底部2cm处，关闭电源.

7、撬玻片

1）刀片不伸入过深.刀片平行于玻片，稍用力.

2）将没有硅化剂的无耳玻片放于水盘中，还有梳子.

3）清理琼脂胶，放于烧杯中.

4）胶玻片放于盘中，银染.

13. 2、TBE电泳母液（10×）的配制

1）分别称取54克Tris碱，27.5克硼酸，20ml 0.5mol/EDTA（PH=8.0）

2）将各组分别加入1升烧杯中，用ddH2O定容到1升.

3）在电泳时使用1倍工作液，按1：4与水混合.

4） 1倍液是为了增加电泳工作液的电流的电流量.

5）盛于玻璃瓶，在室温保存.

14. AgNO3的配制

量取AgNO3原液2500ul；将250ml dd H2O和2500ul AgNO3加入胶玻片上. （AgNO3原液的配制：50ml 中含AgNO3 7.5g 浓度为0.15g/ml）

15溴化乙锭（10mg/ml）

﹡组分浓度 10mg/ml 溴化乙锭

﹡配制量 100ml

1．称取1.0g溴化乙锭，加入到200ml容器中。

2．加入去离子水100ml，充分搅拌数小时完全溶解溴化乙锭。

3．将溶液转入棕色瓶，室温避光保存。

4．溴化乙锭最终工作浓度为0.5μg/ml。

15. 20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

17.10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA 酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套）

16. 5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。

100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）

2.5％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml