4×非变性蛋白上样缓冲液使用说明
蛋白相关试剂、缓冲液的配制方法
蛋白相关试剂、缓冲液的配制方法20% （W/V） Glucose配制量100ml配制方法:1. 称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml 的去离子水后，搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
0.5 M EDTA （pH8.0）配制量1 L配制方法:1. 称取186.1 g Na2EDTA•2H2O，置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。
3. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH）。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L。
5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。
6. 室温保存。
注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。
1 M DTT配制量50ml配制方法:1. 称取7.71g DTT，加入到100ml烧杯中。
2. 加50 ml的0.01 M NaAc（pH5.2），溶解后根据使用情况0.22um滤膜过滤除菌。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。
30%丙烯酰胺（29：1）配制量1 L配制方法:1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
Acrylamide 290gBisacrylamide 10g2. 向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至1 L，用0.45um滤膜滤去杂质。
4. 于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。
聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液组份浓度 0.125 M Tris, 1.25 M Glycine,0.5%（W/V）SDS配制量 1 L配制方法：1．称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2．取下列溶液，加入烧杯中。
Tris 15.1gGlycine 94gSDS 5g3. 加入约800 ml的去离子水，搅拌溶解。
蛋白相关试剂、缓冲液的配制方法
精品文档蛋白相关试剂、缓冲液的配制方法20% （W/V） Glucose配制量 100ml配制方法 :1.称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml 的去离子水后，搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至 100 ml 。
3.高温高压灭菌后， 4℃保存。
0.5 M EDTA （pH8.0）配制量 1L配制方法 :1.称取 186.1 g Na2EDTA?2H2O，置于 1 L 烧杯中。
2.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌。
3.用 NaOH调节 pH值至 8.0 （约 20 g NaOH）。
4.加去离子水将溶液定容至 1 L 。
5.适量分成小份后，高温高压灭菌。
6.室温保存。
注意： pH值至 8.0 时， EDTA才能完全溶解。
1MDTT配制量 50ml配制方法 :1.称取7.71g DTT，加入到100ml烧杯中。
2.加50 ml的0.01 M NaAc（pH5.2），溶解后根据使用情况0.22um 滤膜过滤除菌。
3.适量分成小份后， -20 ℃保存。
30%丙烯酰胺（ 29：1）配制量 1L配制方法 :1.量取下列溶液，置于 1 L 烧杯中。
Acrylamide 290gBisacrylamide 10g2.向烧杯中加入约 600 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至 1 L ，用 0.45um 滤膜滤去杂质。
4.于棕色瓶中 4℃保存。
注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。
聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。
5×Tris- 甘氨酸电泳缓冲液组份浓度 0.125 M Tris, 1.25 M Glycine,0.5%（ W/V）SDS配制量 1L配制方法：1．称量下列试剂，置于 1 L 烧杯中。
2．取下列溶液，加入烧杯中。
Tris 15.1gGlycine 94gSDS 5g3.加入约 800 ml 的去离子水，搅拌溶解。
蛋白上样缓冲液详解
蛋白上样缓冲液详解
关于《蛋白上样缓冲液详解》，是我们特意为大家整理的，希望对大家有所帮助。
蛋白质上样缓冲溶液这类东西针对绝大多数的人而言全是较为生疏的东西，由于这一东西在我们的日常生活基本上是看不到的，沒有机遇去掌握这类东西的用途和作法，实际上蛋白质上样缓冲溶液是一种十分有效的实验试剂，在科学研究的层面而言是较为有打用途的，这类有机化学药物针对我们而言需要一个专业知识普及化，下边就看看详细介绍吧。
蛋白电泳上样缓冲溶液带有溴酚蓝，功效是标示上样蛋白质的跑胶时标识的，凡士林是提升上样净重的，以防飘浮，烧开是使蛋白质转性的。
在其中的SDS是确保试品中的全部蛋白质带正电荷一致，降低正电荷对电泳原理結果的影响。
氧化剂是让二硫键处在断掉情况，确保蛋白质分子结构的线形，降低因蛋白质空间布局影响电泳原理結果。
蛋白电泳上样缓冲溶液带有溴酚蓝，功效是标示上样蛋白质的跑胶时标识的，凡士林是提升上样净重
的，以防飘浮，烧开是以便使蛋白质转性。
蛋白电泳上样缓冲溶液的功效及烧开的功效蛋白电泳上样缓冲溶液包含2%SDS , 0.1%溴酚蓝10%凡士林,SDS 是确保试品中的全部蛋白质带正电荷一致，降低正电荷对电泳原理結果的影响。
氧化剂是让二硫键处在断掉情况，确保蛋白质分子结构的线形.溴酚蓝功效是标示上样蛋白质的跑胶时标识的，凡士林是提升上样净重的，以防飘浮，烧开是使蛋白质转性的保存起来。
日常生活有很多的东西是我们触碰不上的，可是便是这种触碰不上的东西却可以给我们的日常生活产生极大的改变，蛋白质上样缓冲溶液便是一种那样的东西，尽管难以看到，也基本上不容易听闻这类东西，可是在专业人员来看，蛋白质上样缓冲溶液是运用于科学研究生产中不可或缺的东西。
非变性组织、 细胞裂解液使用说明
非变性组织/细胞裂解液使用说明货号：R0030规格：100ml，本产品配有一支PMSF（1.5ml）保存：4℃保存，有效期1年，长期保存可置于-20℃。
产品简介：非变性组织/细胞裂解缓冲液内含非离子型去垢剂，能裂解细胞并在非变性条件下释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。
非变性条件下的裂解蛋白产物最大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗体结合或酶学活性，因此适宜于进行免疫共沉淀。
另外，有些抗体对非变性蛋白具有更高的结合能力或只能识别非变性蛋白的抗原位点，这种情况应该使用非变性裂解。
使用说明：根据使用量，取每1ml裂解液加入10ul PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
混匀备用（PMSF现用现加）。
1、样品前处理：a)对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。
按照6孔板每孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。
用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触，冰上放置裂解5-10分钟。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。
按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液，冰上放置裂解5-10分钟。
期间可以用手指轻弹以充分裂解细胞。
充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。
按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。
(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。
用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：充分裂解后，将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀、免疫共沉淀等操作。
注意事项：1.为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。
可以适当分装后使用。
裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
裂解时间可根据实验要求进行优化处理。
蛋白上样缓冲液详解
蛋白上样缓冲液详解
蛋白上样缓冲液这种东西对于大部分的人来说都是比较陌
生的东西，因为这个东西在我们的生活中几乎是看不见的，没有机会去了解这种东西的用处和做法，其实蛋白上样缓冲液是一种非常有用的试剂，在科学的方面来说是比较有打用处的，这种化学药剂对于我们来说需要一个知识普及，下面就看看介绍吧。
蛋白电泳上样缓冲液含有溴酚蓝，作用是指示上样蛋白的跑胶时标记的，甘油是增加上样重量的，以免漂浮，煮沸是使蛋白变性的。
其中的SDS是保证样品中的所有蛋白带电荷一致，减少电荷对电泳结果的影响。
还原剂是让二硫键处于断开状态，保证蛋白分子的线性，减少因蛋白空间结构影响电泳结果。
蛋白电泳上样缓冲液含有溴酚蓝，作用是指示上样蛋白的跑胶时标记的，甘油是增加上样重量的，以免漂浮，煮沸是为了使蛋白变性。
蛋白电泳上样缓冲液的作用及煮沸的作用蛋白电泳上样缓冲液包括 2%SDS , 0.1%溴酚蓝 10%甘油,SDS 是保证样品中的所有蛋白带电荷一致，减少电荷对电泳结果的影响。
还原剂是让二硫键处于断开状态，保证蛋白分子的线性.溴酚蓝作用是指示上样蛋白的跑胶时标记的，甘油是增加上样重量的，以免漂浮，煮沸是使蛋白变性的永久保存。
生活中有许多的东西是我们接触不到的，但是就是这些接触不到的东西却能够给我们的生活带来巨大的改变，蛋白上样缓冲液就是一种这样的东西，虽然很难看见，也几乎不会听说这种东西，但是在专业人士看来，蛋白上样缓冲液是应用于科学生产中必不可少的东西。
SDS-PAGE蛋白电泳检测标准操作规程（非还原还原）
SDS-PAGE蛋白电泳检测标准操作规程（非还原还原）GOOD RESEARCH & DEVELOPMENT PRACTICESDS-PAGE蛋白电泳检测标准操作规程（还原&非还原）编号：SDS-PAGE蛋白电泳检测起草人：部门审核：QA审核：替代：□新订：□日期：日期：日期：修订号：0批准：年月日生效日期：年月日文件分发部门：GOOD RESEARCH & DEVELOPMENT PRACTICESDS-PAGE蛋白电泳检测编号：SDS-PAGE蛋白电泳检测一目的保证产品电泳电泳分子量和纯度检测按规范进行和检定结果的准确可靠。
二范围用于规范电泳电泳分子量和纯度的测定。
三责任质量控制部人员。
四内容1试剂与水：所有试剂为分析纯（AR）；水为蒸馏水或超纯水。
2 溶液的配制2.1A液：1.5MTris·HCl pH8.8称取90.75gTris碱(分析纯)加适量的超纯水（约400ml）溶解,用6M盐酸调pH值至8.8,加超纯水定容至500 ml。
贴上标贴，室温储存。
此溶液有效使用期限为三个月。
6M盐酸（调pH用）：浓盐酸50ml，加50ml纯化水，混匀。
2.2、B液: 0.5MTris·HCl pH6.8称取60.5gTris碱(分析纯)加适量的超纯水（约400ml）溶解,用6M盐酸调pH值至6.8,加超纯水定容至1000 ml。
贴上标贴，室温储存。
2.3C液: 30%丙烯酰胺-0.8%N,N-亚甲基双丙烯酰胺溶液称取300g丙烯酰胺(分析纯),8gN,N’-甲叉双丙烯酰胺(分析纯), 加适量的超纯水溶解(一般500ml，因为丙烯酰胺具有溶胀性的特点),再定容至1000 ml,用滤纸过滤。
贴上标贴，避光4℃保存。
2.4D液:1%SDS称取2gSDS(分析纯),用超纯水溶解至200 ml.贴上标贴，4℃保存。
2.5E液:10%过硫酸铵GOOD RESEARCH & DEVELOPMENT PRACTICESDS-PAGE蛋白电泳检测编号：称取10g过硫酸铵(分析纯)，用超纯水溶解至100 ml，以1ml/支分装，贴上标贴，－20℃保存。
Westernblot基本操作步骤
W e s t e r n b l o t基本操作步骤一、细胞蛋白的提取弃去培养基，加入预冷的PBS洗一遍，加入的RIPA裂解液（含1mM PMSF(100×)，每10ml加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂各一片，六孔板每孔150-250μl，60mm×15mm培养皿300-400μl，），于冰上裂解约5分钟，裂解总液12000rpm离心10 min。
取上清，用BCA法测定蛋白浓度。
用于western blot的蛋白样品取一定量加4×loading buffer，10×reducing，再用裂解液补齐到所需上样体积。
离心，使蛋白沉底。
将EP管于沸水中煮5min，变性，之后再离心后准备上样。
二、BCA法测蛋白浓度操作步骤将蛋白标准配制溶液溶解蛋白标准（BSA），配制成5mg/ml的蛋白标准溶液，10μl 分l。
；水②将预制胶固定到电泳装置中，并在装置中加满Runnig Buffer(1×)，内槽加入0.5mL抗氧化剂，小心拔下梳子；③向上样孔中加入一定体积的蛋白样品（总蛋白量20μg以上）。
向marker孔中加入2.5μl marker（按照实验要求设定marker量），向空白孔中加入一定体积的加样缓冲液(loading buffer)。
注意采用相同（或相近）的上样体积，以保证蛋白的各带宽度相同。
防止体积较大的上样孔中的蛋白质将向相邻的泳道扩散。
3、电泳将电泳装置与电源连接。
调节电压为100-200V，电泳50min，直至溴酚兰接近分离胶的底部，然后关闭电源并撤去连接的导线。
拆除电泳装置：先倒掉电泳缓冲液，连同槽一起将凝胶夹层取出，小心的撬起凝胶外层塑料板，使凝胶暴露出来，切去浓缩胶以及无蛋白样品的凝胶部分（将胶留在短的一面塑料板上）。
4、转膜（湿转）①将转膜液（1× Transfer Buffer）放于大饭盒内，泡4片海绵，剪4片滤纸、1片PVDF膜，PVDF膜于甲醇中活化30s，取出置于转膜液中；②按照2层海绵+2层滤纸+胶+膜+2层滤纸+5层海绵（填满）的顺序组装转膜装置，注意组装此装置时一定要保证滤纸、膜、凝胶精确对齐并不留气泡；③将组装好的装置放入电转槽，合上盖子，电转槽置于冰浴，接通电源，调节电压为15V，时间为16~18h（或恒流300mA, 3h）。
磷酸盐-SDS电泳缓冲液(4×)
北京雷根生物技术有限公司
磷酸盐-SDS 电泳缓冲液(4×)
简介：
磷酸盐-SDS 电泳缓冲液(4×)由磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、SDS 等组成，用于SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳，使用时需用蒸馏水或去离子水稀释4倍后使用。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、用蒸馏水或去离子水稀释到1×后使用。
注意事项：
1、如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：编号
名称PE0165
Storage 磷酸盐-SDS 电泳缓冲液(4×)
500ml RT 使用说明书1份编号
名称DC0032
Masson 三色染色液NA0034
Tris-硼酸电泳缓冲液(5×TBE)PE0025
SDS-PAGE 蛋白加样缓冲液(5×)PT0001
BCA 蛋白定量试剂盒PT0013
考马斯亮蓝快速染色液PW0053
Western 抗体洗脱液(碱性)TO1013丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 比色法)。
SDS-PAGE蛋白电泳手册
蛋白电泳手册SDS—PAGE及Western blot蛋白电泳蛋白质的电泳分离是重要的生物化学分离纯化技术之一，电泳是指带电粒子在电场作用下,向着与其电荷相反的电极移动的现象.根据所采用的支持物不同,有琼脂糖凝胶电泳,淀粉凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳等。
其中，聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)由于无电渗作用，样品用量少(1—100μg)，分辨率高，凝胶机械强度大，重复性好以及可以通过调节单体浓度或单体与交联剂的比例而得到孔径不同的凝胶等优点而受到广泛的应用.PAGE原理聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺 (简称Acr）和交联剂N，N'—亚甲基双丙烯酰胺（简称Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳. 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带。
SDS—PAGE原理SDS是一种阴离子表面活性剂，能打断蛋白质的氢键和疏水键,并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异.因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。
这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS —PAGE)。
实验使用过程中，还加入DTT或者＊＊＊,以打开蛋白间的二硫键，破坏蛋白质的四级结构。
SDS—PAGE最常采用垂直板不连续系统（分离胶与浓缩胶)。
索引蛋白电泳（SDS—PAGE)……………………电泳试剂总表……………………………………………………制胶………………………………上样及电泳……………………染色蛋白提取蛋白定量Bradford蛋白浓度测定试剂盒使用说明BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明Lowry蛋白浓度测定试剂盒使用说明蛋白分子量标准（图）考马斯蛋白胶快速染色液Western blotWestern blotting DAB检测试剂盒Western blotting ECL化学发光检测试剂盒Western blotting 试剂盒使用说明蛋白电泳试剂（部分试剂可以相互替换）系号货号名称1T8060TRIS 三羟甲基氨基甲烷2G8200Glycine 甘氨酸3S8010SDS 十二烷基硫酸钠4A8080Acrylamide 丙烯酰胺5M8200N,N-Methylene Bisacrylamide甲叉双丙烯酰胺6A8090Ammonium Persulfate 过硫酸胺7D8220DTT 二硫苏糖醇8M8210β-Mercaptoethanol β—*＊＊9T8090TEMED 四甲基*＊*10A101030％丙烯酰胺（29:1）11S10514XSDS—PAGE分离胶缓冲液（PH=8.8）12S10524XSDS—PAGE浓缩胶缓冲液（PH=6.8）13P10164×蛋白上样缓冲液(含β-**＊）14P10154×蛋白上样缓冲液(含DTT)15D10701M DTT16A103010%过硫酸氨17T10201M Tris-HCL (PH6。
蛋白示踪上样缓冲液
•蛋白示踪上样缓冲液（还原，4x）•
保存：-20℃• •
组分说明•
SDS-PAGE loading buffer5•ml•
产品简介
蛋白上样缓冲液(SDS-PAGE loading buffer)是一种经过改良的以溴酚蓝为染料，4倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液,用于常规的 SDS-PAGE蛋白电泳样品上样。
本产品含有两种示踪染料，分别是蓝色的溴酚蓝和红色的派洛宁γ,可实时监控蛋白样品电泳进程。
同时，在凝胶上显现的红色条带可伴随蛋白样品转移至印迹膜上，因此本产品具有检测Western•Blotting 转膜效率的作用。
使用本产品操作简单，用法与普通上样缓冲液相同。
测试效果
操作步骤•
1. 将蛋白示踪上样缓冲液（还原，4x）与蛋白样品按照1：3 的比例混匀。
•
2. 将蛋白样品置于沸水浴中加热3-5 分钟。
•
3. 待蛋白样品充分变性后冷却至室温，离心30 秒。
•
4. 离心后，以微量进样器取适量上清，直接加入SDS-PAGE 凝胶加样孔内。
•
5. 进行常规电泳，当染料到达距离凝胶底端0.5•cm-1•cm 处即可停止电泳。
注意事项•
1.本产品分为还原型和非还原型两种，还原型上样缓冲液中含一定量的巯基乙醇，有
轻微刺激性气味，较易区分。
2.本产品在不同的胶浓度中，红色染料与溴酚蓝泳动的前后顺序会略有不同。
3.本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。
4.含巯基的试剂有一定的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
DNA非变性加样缓冲液(2×)
DNA 非变性加样缓冲液(2×) 使用说明书4℃Leabharlann 1份操作步骤(仅供参考)：
1、 DNA 样品与 DNA 非变性加样缓冲液(2×)等量混合。 2、 直接加到 DNA 胶内，电泳。
注意事项：
1、 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。 2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
北京雷根生物技术有限公司
DNA 非变性加样缓冲液(2×)
简介：
DNA 非变性加样缓冲液(2×)是一种非变性的 DNA 上样缓冲液。该试剂主要由 Tris、 EDTA、甘油等组成，不含溴酚蓝，加样后易下沉，使用时需稀释至 1×使用。
组成：
编号 名称 NA0003 5ml Storage
蛋白上样缓冲液非还原型
蛋白上样缓冲液非还原型蛋白上样缓冲液是在蛋白质电泳实验中常用的一种缓冲液。
在进行蛋白质电泳实验时，为了保持蛋白质的天然形态和功能，需要使用非还原型的蛋白上样缓冲液。
蛋白质电泳是一种常用的蛋白质分离和分析技术。
在这个过程中，蛋白质样品需要被加入到蛋白上样缓冲液中，以便将其加载到凝胶中进行分离。
非还原型的蛋白上样缓冲液是一种不含还原剂的缓冲液，在样品加载过程中，不会破坏蛋白质的天然二级和三级结构。
非还原型的蛋白上样缓冲液通常由一些基本成分组成，比如缓冲盐、pH调节剂和一些辅助剂。
其中，缓冲盐的主要作用是维持缓冲液的稳定性和pH值的恒定。
常用的缓冲盐有Tris（三羟甲基氨基甲烷）、Phosphate（磷酸盐）和HEPES（2-（4-（2-羟乙基）-1-哌啶基）乙烷磺酸）等。
pH调节剂用于调节缓冲液的酸碱度，通常使用HCl （盐酸）或NaOH（氢氧化钠）进行调节。
辅助剂可以增强蛋白质的稳定性和加载效果，常用的辅助剂有甘油、SDS（十二烷基硫酸钠）和甲醇等。
非还原型的蛋白上样缓冲液的主要特点是不含还原剂。
还原剂（如β-巯基乙醇）在蛋白质电泳实验中常用于还原蛋白质的二硫键，使其失去天然的构象。
但在某些实验中，需要保持蛋白质的天然形态和功能，如蛋白质的活性研究或酶活性分析。
此时，非还原型的蛋白上样缓冲液就非常适用。
在实际操作中，使用非还原型的蛋白上样缓冲液需要注意一些细节。
首先，要根据实验的需要选择合适的缓冲盐和pH值。
不同的蛋白质可能对缓冲液的条件有不同的要求，因此需要根据具体的实验设计进行选择。
其次，要严格控制缓冲液的制备和保存条件，避免污染或降解。
最后，在样品加载过程中，要确保样品与缓冲液充分混合，并且避免气泡的产生。
非还原型的蛋白上样缓冲液在蛋白质电泳实验中起到了重要的作用。
通过使用非还原型的缓冲液，可以保持蛋白质的天然形态和功能，为后续的分析和研究提供可靠的基础。
在实验中，我们需要根据具体的实验设计选择合适的缓冲盐和pH值，并严格控制制备和保存条件，以确保实验结果的准确性和可靠性。
蛋白非变性胶详解[最新]
![蛋白非变性胶详解[最新]](https://img.taocdn.com/s3/m/b55dbc6700f69e3143323968011ca300a6c3f621.png)
Native-PAGE原理非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)是在不加入SDS 疏基乙醇等变性剂的条件下，对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于同工酶的鉴定和提纯。
未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳可以使生物大分子在电泳过程中保持其天然的形状和电荷，它们的分离是依据其电泳迁移率的不同和凝胶的分子筛作用，因而可以得到较高的分辨率，尤其是在电泳分离后仍能保持蛋白质和酶等生物大分子的生物活性，对于生物大分子的鉴定有重要意义，其方法是在凝胶上进行两份相同样品的电泳，电泳后将凝胶切成两半，一半用于活性染色，对某个特定的生物大分子进行鉴定，另一半用于所有样品的染色，以分析样品中各种生物大分子的种类和含量。
实验方法非变性聚丙烯酰胺凝胶和变性sds-page电泳在操作上基本上是相同的，只是非变性聚丙烯酰胺凝胶的配制和电泳缓冲液中不能含有变性剂如SDS等。
一般蛋白进行非变性凝胶电泳要先分清是碱性还是酸性蛋白。
分离碱性蛋白时候，要利用低pH凝胶系统，分离酸性蛋白时候，要利用高pH凝胶系统。
酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统，蛋白会带负电荷，蛋白会相阳极移动；而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境下进行，蛋白带正电荷，这时候需要将阴极和阳极倒置才可以电泳分离酸性蛋白。
工作液配制1.40%胶贮液(Acr:Bis=29：1）；2.4×分离胶Buf(1.5 M Tris-HCl，pH 8.8)：18.2 g Trisbase 溶于ml 水，用浓HCl调pH 8.8，加水定容到100ml，4℃贮存；3. 4×堆积胶Buf(0.5 M Tris-HCl，pH 6.8)：6g Trisbase 溶于80ml 水，用浓HCl调pH 6.8，加水定容到100ml，4℃贮存；4.10×电泳Buf（pH8.8 Tris-Gly）:30.3 g Trisbase，144g 甘氨酸，加水定容到L，4℃贮存；5.2×溴酚蓝上样Buf:1.25ml pH6.8, 0.5M Tris-Cl，3.0ml甘油，.2ml 0.5% 溴酚蓝，5.5ml dH2O；-20℃贮存；6. 10％APS；7. 0.25％考马斯亮蓝染色液:Coomassie blue R-250 2.5g，甲醇ml，HAc 100ml, dH2O 450ml；8.考马斯亮蓝脱色液:100ml甲醇，100冰醋酸，800ml dH2O电泳胶的配制及电泳条件（上槽电极为负，下槽电极为正）1. 碱性非变性胶17%分离胶(10 ml) 4%堆积胶(5 ml)2. 40%胶贮液(40%T,3.3%C）4.25ml 0.5ml3. 4×分离胶Buf(1.5 M Tris-HCl，pH 8.8)2.5ml4. 4×堆积胶Buf(0.5 M Tris-HCl，pH 6.8) 1.25ml5. 水3.2ml6. 10％APS 35ul7. TEMED 15 ul8. 10×电泳Buf（pH8.8 Tris-Gly）:100ml稀释到L电泳条件:100V恒压约20min，指示剂进入浓缩胶；改换160V恒压，当指示剂移动到胶板底部时，停止电泳，整个过程约80min。
蛋白上样缓冲液安全操作及保养规程
蛋白上样缓冲液安全操作及保养规程蛋白上样缓冲液是生物制药领域中常用的一种化学试剂。
在使用过程中，需要注意安全操作及缓冲液的保养，以确保实验结果的准确性和人员的安全。
一、蛋白上样缓冲液的安全操作1. 穿戴个人防护装备在使用蛋白上样缓冲液前，应穿戴个人防护装备，包括实验手套、防护眼镜等。
使用过程中，要避免将缓冲液接触皮肤、口腔和眼睛。
2. 避免混淆和误用蛋白上样缓冲液应存放在标有化学试剂名称和危险等级的专用柜中。
在操作过程中，应避免把缓冲液放错位置和和混淆使用，避免不必要的事故发生。
3. 缓冲液浓度的准确控制缓冲液的浓度对实验结果有很大的影响，因此在使用蛋白上样缓冲液时，要注意缓冲液浓度的准确控制，不能太浓或太淡，要根据实验需要调整浓度。
4. 遵守操作步骤蛋白上样缓冲液的操作步骤应根据实验文献和厂家说明书进行，不能随意操作。
在操作时，要认真阅读说明书，并按照相应的工作流程和实验条件进行实验操作。
5. 实验废弃物的处理蛋白上样缓冲液在实验中可能产生一些废弃物，如玻璃管、过滤器等。
这些废弃物应妥善处理，避免影响实验室环境和人员健康。
二、蛋白上样缓冲液的保养规程1. 储存条件蛋白上样缓冲液应保存在干燥、阴凉、通风的条件下，避免阳光直射。
在储存过程中，应避免与其他化学试剂混合，以免影响缓冲液的质量。
2. 检查期限蛋白上样缓冲液应具有有效期，并在使用前仔细检查缓冲液的保质期和是否发生变质。
如有任何异常情况，应立即停止使用，并及时向供应商询问处理方法。
3. 注意缓冲液的pH值蛋白上样缓冲液的pH值对实验结果有很大的影响，因此在储存和使用缓冲液时，要注意其pH值的变化。
如发现pH值发生变化，要及时调整pH值，以保证实验结果的准确性。
4. 严格控制使用量和储存量蛋白上样缓冲液的使用量和储存量应根据实验需要和缓冲液的有效期进行严格控制。
避免使用过量或储存过多的缓冲液导致浪费，也要避免缓冲液过期后使用，以免影响实验结果。
SDS-PAGE分离胶缓冲液（4×）说明书
SDS-PAGE 分离胶缓冲液（4×）SDS-PAGE Separating Gel Buffer(4×)保存条件：2-8℃产品内容网站订购： 微信订购：扫一扫右侧二维码服务热线：4006-222-360版本号：12/2015目录号：CW0026S （500 ml ）ComponentCW0026S 500 ml SDS-PAGE Separating Gel Buffer （4×）500 ml产品简介 本产品为配制SDS-PAGE分离胶缓冲液，可用于配制各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶，方便、快捷。
产品中已加入10%SDS,使用时不用另外加入。
操作步骤根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1。
I 灌制分离胶（各试剂使用量请参考附表2）1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
2．将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Separating Gel Buffer（4×）分离胶缓冲液和纯水在小烧杯或试管中混合。
3．加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
5．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。
II 灌制浓缩胶（各试剂使用量请参考附表3）1．去除覆盖在分离胶上的水层。
2．将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
3．加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
6．静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。
4×非变性蛋白上样缓冲液
北京索莱宝科技有限公司
4×非变性蛋白上样缓冲液
货号：P1017
规格：10ml
保存：-20℃保存，有效期1年。
产品简介：
4×非变性蛋白上样缓冲液中不含SDS及DTT或者β-巯基乙醇，适合于常规的非变性PAGE蛋白样品的电泳。
使用说明：
1.请按每30微升蛋白样品加入10微升蛋白上样缓冲液的比例(4倍稀释)来使用。
如果蛋白浓度过高，可用双蒸水稀释。
混匀后直接上样到PAGE胶加样孔内即可。
2.通常电泳时蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。
注意事项：
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂，PH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。
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Westernblot试剂配制及操作流程
Western-Blot操作流程试剂配制1.RIPA裂解液：50mM Tris（MW121.14，PH7.5）3.02g150mM NaCl 4.38g1%TritonX-100 5ml1%脱氧胆酸钠5g0.1%SDS 0.5g蒸馏水至500ml。
调pH值至7.5。
混匀后4℃保存，长期保存于-20℃。
使用时，加入蛋白酶抑制剂cooktail。
2. 蛋白酶抑制剂cooktail所需母液成分：（1）100mmol/L PMSFPMSF 17.4mg异丙醇1ml溶解后，分装于1.5ml离心管中，-20℃保存。
（2）10mM 亮肽素leupeptin:-20℃保存（3）2.1mg/ml 抑肽素Aprotinin:4℃保存配制：成分终浓度每ml裂解液所加母液量PMSF 1mmol/L（储存浓度稀释100倍）10ulLeupeptin 0.1mmol/L（储存浓度稀释100倍）10ulAprotinin 1ug/ml （储存浓度稀释2000倍）0.5ul各成分直接加入所用的RIPA裂解液中，之后按照60ul/孔（12孔板）提取蛋白。
1. G250考马斯亮蓝溶液（蛋白定量专用）考马斯亮蓝G250 100mg95％乙醇50ml85％磷酸100ml蒸馏水至1000ml配制时，先用乙醇溶解考马斯亮蓝染料，再加入磷酸和水，混匀后，用滤纸过滤，4℃保存于棕色瓶中。
2．牛血清白蛋白B SA储存液（1mg/ml）：100mg BSA粉末溶于20 ml双蒸水，定容至100 ml，加少量防腐剂，4℃保存。
1．4X上样缓冲液1.0 mol/L Tris·HCl（pH6.8）2mlSDS 0.8g溴酚蓝0.04g甘油4ml去离子水定容至10ml。
混匀后，分装于1.5ml离心管中，4℃保存。
使用时稀释成1X。
2．1.0 mol/L二硫苏糖醇（DTT）（10X）用20 ml 0.01 mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT,分装成1ml小份储存于-20 C。
蛋白电泳预制胶（HEPES Tris-Glycine）说明书
蛋白电泳预制胶（HEPES/Tris-Glycine）说明书【产品名称】蛋白电泳预制胶（HEPES/Tris-Glycine）【产品介绍】四正柏提供HEPES和Tris-Glycine两种凝胶体系的蛋白电泳预制胶，常用于PAGE和Western Blot检测。
采用自动化的灌胶生产技术，确保了产品质量的高稳定性和重复性采用玻璃胶板，有效减少蛋白非特异性吸附，使蛋白条带更为尖锐，清晰胶夹打开极为轻松，只需用刀片在胶夹一侧轻轻一划即可打开凝胶中不含SDS,可用于变性和非变性电泳兼容市场上主流的mini电泳槽，如BIORAD,Invitrogen,天能和君意东方等提供多种浓度的均一胶和梯度胶均一胶可选浓度：6%，7.5%，8%，10%，12%，15%梯度胶可选浓度：4-12%，4-15%，4-20%，8-16%，8-20%【基本信息】预制胶板尺寸：长98mm，宽84mm，厚度4.1mm预制胶尺寸：长81mm，宽74mm，厚度1.5mm浓缩胶：4%，1.5cm丙烯酰胺与甲叉丙烯酰胺的比例：29:1包装规格：10片/盒【储存条件及有效期】1.HEPES体系预制胶2~8℃冷藏，不可冷冻，保质期18个月2.Tris-Glycine体系预制胶2~8℃冷藏，不可冷冻，保质期12个月3.常温运输4.冬季，泡沫盒保温运输【HEPES和Tris-Glycine两种体系蛋白电泳预制胶比较】参数Hepes-Tris体系预制胶Tris-Glycine体系预制胶分辨率高中等电压及电泳时间150V，40-50min180V，60min电泳缓冲液提供变性或非变性蛋白专用电泳缓冲液普通Tris-Glycine缓冲液（需自行配制或另购）【订购信息】1.HEPES体系预制胶产品编号浓度孔数最大上样量电泳缓冲液转膜缓冲液分离范围变性非变性4APA034H-060TS4APA034H-060TN6%1060μl30-300KDa4APA034H-060FS4APA034H-060FN1530μl4APA034H-075TS4APA034H-075TN7.5%1060μl40-200KDa4APA034H-075FS4APA034H-075FN1530μl4APA034H-080TS4APA034H-080TN8%1060μl40-200KDa4APA034H-080FS4APA034H-080FN1530μlHepes-trisTris-glycine4APA034H-100TS 4APA034H-100TN 10%1060μl 20-160KDa 4APA034H-100FS 4APA034H-100FN 1530μl 4APA034H-120TS 4APA034H-120TN 12%1060μl 10-85KDa 4APA034H-120FS 4APA034H-120FN 1530μl 4APA034H-150TS 4APA034H-150TN 15%1060μl 10-50KDa 4APA034H-150FS 4APA034H-150FN 1530μl 4APA034H-412TS 4APA034H-412TN 4-12%1060μl 15-200KDa 4APA034H-412FS 4APA034H-412FN 1530μl 4APA034H-415TS 4APA034H-415TN 4-15%1060μl 10-200KDa 4APA034H-415FS 4APA034H-415FN 1530μl 4APA034H-420TS 4APA034H-420TN 4-20%1060μl 3.5-200KDa 4APA034H-420FS 4APA034H-420FN 1530μl 4APA034H-816TS 4APA034H-816TN 8-16%1060μl 5-5200KDa 4APA034H-816FS 4APA034H-816FN 1530μl 4APA034H-820TS 4APA034H-820TN 8-20%1060μl 6.5-200KDa4APA034H-820FS 4APA034H-820FN1530μl产品编号浓度孔数最大上样量电泳缓冲液转膜缓冲液分离范围4APA034G-060T 6%1060μl Tris-Glycine Tris-Glycine60-200KDa4APA034G-060F 1530μl 4APA034G-075T 7.5%1060μl 50-200KDa 4APA034G-075F 1530μl 4APA034G-080T 8%1060μl 40-200KDa 4APA034G-080F 1530μl 4APA034G-100T 10%1060μl 20-160KDa 4APA034G-100F 1530μl 4APA034G-120T 12%1060μl 15-85KDa 4APA034G-120F 1530μl 4APA034G-150T 15%1060μl 10-50KDa4APA034G-150F 1530μl 4APA034G-412T 4-12%1060μl 20-200KDa 4APA034G-412F 1530μl 4APA034G-415T 4-15%1060μl 20-200KDa 4APA034G-415F 1530μl 4APA034G-420T 4-20%1060μl 5-200KDa 4APA034G-420F 1530μl 4APA034G-816T 8-16%1060μl 10-200KDa4APA034G-816F 1530μl 4APA034G-820T 8-20%1060μl 3-200KDa4APA034G-820F1530μl【电泳操作说明】电泳缓冲液：Hepes 凝胶体系预制胶每盒赠送10包变性蛋白或非变性蛋白电泳缓冲液粉末，每包粉末可用500ml ddH 2O（去离子水）进行溶解，得到500ml 1×电泳液。
蛋白上样缓冲液的主要成分和作用
蛋白上样缓冲液的主要成分和作用
蛋白上样缓冲液是在蛋白质分离和纯化过程中必不可少的配方
之一。
它的主要作用是稳定蛋白质的构象，并且为其提供适当的环境以最大程度地保持其生物活性。
蛋白上样缓冲液的主要成分包括缓冲剂、蛋白质稳定剂和还原剂。
缓冲剂可以调节pH值和维持稳定的离
子强度，以保持蛋白质的生物活性。
蛋白质稳定剂在蛋白质分离和纯化过程中保护蛋白质不受脱性、氧化和降解的影响。
还原剂则可以降低蛋白质中的二硫键，使蛋白质能够更容易地在凝胶电泳中进行分离。
综上所述，蛋白上样缓冲液的主要成分和作用对于蛋白质分离和纯化过程具有重要的意义。
- 1 -。
乙酸凝胶缓冲液(4×)
100ml
4℃
1份
操作步骤(仅供参考)：
1、 组装凝胶电泳玻璃板夹层并并固定于支架上。 2、 在 100ml 烧杯中混匀 30%丙烯酰胺/0.8%亚甲基双丙烯酰胺溶液、300mM 亚硫酸钠、
乙酸凝胶缓冲液(4×)等，如需迅速凝固，在使用前加入过硫酸铵和 TEMED。
注意事项：
1、 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。 2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
北京雷根生物技术有限公司
乙酸凝胶缓冲液(4×)
简介：
乙酸凝胶缓冲液(4×)由乙酸、去离子水等组成，调 pH 至 3.7～5.6 之间，用于非变性 条件下的单向凝胶电泳即乙酸非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。
组成：
名称 乙酸凝胶缓冲液(4×) 使用说明书
编号 PE0060 Storage
水
22.58 19.28 15.98 12.48 9.28 5.96 2.68
APS
0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3
TEMED
0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02
有效期： 6 个月有效。
附表：
储存液
丙烯酰胺浓度/%
5
7.5 10 12.5 15 17.5 20
30%Acr/0.8%Bis
6.7 10 13.3 16.8 20 23.32 26.6
300Mm 亚硫酸钠
0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
乙酸凝胶缓冲液(4×) 10 10 10 10 10 10 10
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4×非变性蛋白上样缓冲液使用说明
货号：P1017
规格：10ml
保存：2-8℃保存，复检期12个月。
产品简介：
4×非变性蛋白上样缓冲液中不含SDS及DTT或者β-巯基乙醇，适合于常规的非变性PAGE 蛋白样品的电泳。
使用说明：
1.请按每30微升蛋白样品加入10微升蛋白上样缓冲液的比例(4倍稀释)来使用。
如果蛋白浓度过高，可用双蒸水稀释。
混匀后直接上样到PAGE胶加样孔内即可。
2.通常电泳时蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。
注意事项：
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂，PH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。
相关试剂：
P10154×蛋白上样缓冲液（含DTT）
P10164×蛋白上样缓冲液（含巯基还原剂）
P1300考马斯亮蓝快速染色液
PR1700预染次高分子量蛋白MARKER。