4%多聚甲醛的配制

4%多聚甲醛的配制:

0.1M PBS配制

80g NaCl

2g KCl

14.4g Na2HPO4

2.7g KH2PO4

溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。

在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱中，在放置磁力搅拌棒的容器中,将4克多聚甲醛(EM级)溶解于100ml PBS,加入数滴NaOH,在通风厨中60℃加热(打开瓶盖)使溶解,冷却至室温, 用HCl调节溶液的pH值至7.4,使用前新鲜配制.

4%多聚甲醛固定液：

用途：进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。动物灌注固定及后固定（动物器官经该液灌注后，然后取材，再用该液浸泡2-24小时）也常选该固定液固定。

试剂：

多聚甲醛40g

PBS0.1 mol/L PH 7.4 500 ml

混合后加热至60℃，搅拌并滴加1N NaOH 至清亮为止，冷却后加PBS 至总量1000 ml。

注固定时间24小时。

我们实验室一直沿用的4％多聚甲醛固定液（用于固定鼠或者兔的脑组织标本）的配方是：

多聚甲醛（粉末状）：40g

磷酸二氢钠：2.965g

磷酸氢二钠：29g

蒸馏水：1000ml

然后一块放到三角烧瓶中，在磁力搅拌器上加热（60℃）振荡24小时。

原来一直用的挺好，配出来也很清亮。

但是这几次也是用同样的方法配出来后，在加热时是清亮的，但是瓶底有不少不溶的杂质。等不再加热，室温后，溶液就混浊了。再加热到60度又清亮了。再冷却到室温后又混浊了。不知道为啥？请高手指点一二，不胜感激

4％多聚甲醛固定液里头的陪法有点小技巧:多聚甲醛是教易溶于碱性条件下的,先加多聚甲醛和氢二钠,直接在通风情况下加热溶解,一般15到20分钟就可以,大概放置20分钟后再加二氢钠,溶解后,调PH直到7.2左右即可,最后别忘记放DEPC.

其实武汉博士德就有4％多聚甲醛固定液卖的,我们以前都是自己配,一是麻烦,二是要用到DEPC,有毒而且易挥发,还带香味,闻到后喉龙就不舒服.后来就直接找他们买了,方便便宜,省事,最主要的,他们专业点,东西好用!

你要考虑以下几过因素:

1.蒸馏水洁净.

2.三角烧瓶洁净.

3.试剂没问题.

多聚甲醛就是很难溶解，你把它放在37度温箱里若干天再去看它会有惊喜。以前用过磁力搅拌棒转一上午都不行，放在一边过几天再看就溶解了。

如果要求中性多聚甲醛就用pbs或者用磷酸氢二钠+二氢钠，如果不要求中性用水就可以啦

我要做免疫组化实验。用ABC法，DAB显色。

组织的固定液，查外文资料用的都是4％多聚甲醛／0.1M PBS。但是实验室的老师说，是用0.01M 的PBS配制，不知道是不是一样的？

还有就是冲洗液，我查的英文资料都是用0.1M PBS。但是实验室老师说是0.01M PBS。

不知道大家对这个又没有经验。

固定用0.1M PBS，冲洗用0.01M PBS

pbs 0.1M的PBS

Nacl 8.5克

Na2HPO4.12H2O 30.8克

NaH2PO4.2H2O 2.8 克

双蒸水定容至1000ml

0.1M PBS缓冲液的配制：

Nacl: 4g

Kcl: 0.1g

Na2HPO4.12H2O: 1.445g

KH2PO4l: 0.1g

用500ml 去离子水溶解，5.6%NaCO3调PH至7.2左右

如果只单纯看看HE的话时间倒无所谓，但如果实验还要做免疫组化、原位杂交等，那么最好不要超过24小时，否则就等着吧，哈哈。