短期、亚慢性和慢性毒性

表示方法： （1）体重绝对增长量 （2）体重增长百分率（10％） （3）剂量-反应关系
47
3）饲料消耗量： 食物利用率：动物每摄入100g饲料所增长的体重
克数（g体重/100g饲料） 评价：食物利用率有助于了解化合物毒性效应 观察内容：影响食欲 影响食物的吸收、代谢
食物利用率＝体重增长/进食量
48
亚慢性原则：

* 理论上，选取对化学毒物代谢过程、生理反应和生化特性基
本上与人接近，且在急性试验中证明是对化学毒物敏感的物种和品
系
实际上，常用大鼠 犬 豚鼠
32
（2）性别、年龄和数量 雌雄各半； 刚断乳的动物：大鼠6－8周龄（80-100g），同
组动物体重不超过10%、组间平均体重不超过5% 大鼠、小鼠每组不少于20只，犬、猴不少于6只，
11
K值越小：表示化学物的蓄积性越大
K<1
实验动物对化学毒物发生过敏
K=1
化合物在体内完全蓄积或每次
染毒后毒效应叠加
K>=5 化合物蓄积性弱
12
蓄积系数分级标准
蓄积系数（K） <1 1～ 3～ 5～
蓄积毒级分级 高度蓄积 明显蓄积 中等蓄积 轻度蓄积
13
1.2 蓄积系数法常用试验方案
A 固定剂量法 B 剂量递增法 C 剂量固定的20天蓄积法
根据专业特殊性和管理部门有所区别
43
亚慢性毒性的剂量选择
阴性对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组
急性毒性的阈剂量
1/20~1/5 LD50
组距：3~10倍，最低不小 于2倍
慢性毒性的剂量选择
阴性对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组
亚慢性阈剂量或其1/5~1/2
注： 一种毒物引起的组织病理学损伤，其再生能力在很大程度上决定于毒性效应
的可逆和不可逆性 有些毒物所造成的损害是不可逆的，如损伤中枢神经系统多数是不可逆的，
因为已分化的中枢神经细胞不能再分裂
28
3. 研究重复接触受试物毒性作用的剂量-反应 （效应）关系，从初步了解到确定未观察到有害作用 的剂量（NOAEL）和观察到有害作用的最小剂量 （LOAEL），为制定人类接触的安全限量提供参考值
体常见的储存库有血浆蛋白、脂肪组织、肝脏、肾脏、 骨骼等。
如骨骼为铅的储存库。
蓄积形式:
原形 代谢产物 结合形式
5
3.蓄积的分类：
物质蓄积 功能蓄积
6
3.1 物质蓄积（material accumulation）： 化学毒物反复多次染毒实验动物后，用化
学分析方法能测得机体内或某些器官组织内存 在该化合物的原型或其代谢产物。
脏器系数减小： 脏器发育不良、萎缩
52
尸解对象： 实验过程中死亡的或者试验结束后未死亡的 观察的主要脏器：
心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、卵巢（睾丸）、脑 等
53
2）病理学检查 目的：确定化合物对毒作用的靶部位，损伤的性
10
1 蓄积系数法
1.1 蓄积系数法：以生物效应为指标，用经验系 数（K）评价蓄积作用的方法，即将多次染毒与一次 染毒所产生的毒性效应（或死亡）进行比较
K是指多次接触达到预期效应的累计剂量与一次 接触能出现相同效应剂量的比值。
K=ED50（n）/ED50(1) 如果以动物死亡一半为效应指标，则 K=LD50（n）/LD50(1)
实验期限最短为25天（1/5LD50），最长100天（1/20LD50）
15

常用大鼠或小鼠

染毒途径多用灌胃或者腹腔注射
16
B 剂量递增法
动物及分组：常用大或小鼠，40（或更多）分染毒组和对 照组，每组至少20只，雌雄各半。
终止时间：试验组累计发生一半动物死亡。在第21天也可结 束，因累计剂量已达5.26 LD50。
1/10 LD50 组距：2~5倍，最低不小于
2倍
44
4 观察指标
45
（1）一般观察
1）进食量、外观体征、行为活动 综合性指标 初步判断作用部位、损害程度
46
2）动物体重：
体重的增长情况是综合反映动物健康状况最基本的 灵敏指标之一，受食欲、消化功能、代谢和能量消化变 化的影响。
如发现实验组动物体重增长减慢，停止或减轻，在 排除由于异味引起食欲不佳的前提下，可说明化学毒物 的毒性效应。
（2）实验室监测项目 血、尿常规和血液生化指标 目的：发现受试物所致器官损伤和器官紊乱 检查重点：肝脏、肾脏、血液
49
1）血液学检查 包括红细胞计数、血红蛋白含量、白细胞计数
及分类、凝血时间等 2）血液生化检查（针对肝脏、肾脏及相关可能靶部 位选择）
注：一般只需在实际结束后处死动物采血检验 如需在实验过程中采集血样，最大采血量不能 超过总血量的10% 3）尿液
17
C 剂量递增20天法：
组动，物每分组组10：只1，/2雌0雄LD各50半、。1/10LD50、1/5 LD50、1/2LD50和对照组5个
每日染毒一次，连续20天
评定标准：
（1）各剂量组均无死亡，蓄积性不明显；
（2）仅1/2 LD50剂量组有死亡，其他组无死亡，则为弱蓄积性； 系（，3则）为若中1/等20蓄L积D5性0剂；量组无死亡，其他各组间死亡数有剂量反应关
7
3.2 功能蓄积（functional accumulation）： 化学毒物反复多次染毒实验动物后，机体内虽不能
检出化学毒物，然而机体可以出现慢性中毒现象。 注：功பைடு நூலகம்蓄积是损害效应累计的结果。也可能是由于存留
的化学毒物或代谢物数量极微，目前技术方法尚不能检出的一种 物质蓄积，或者物质蓄积与功能蓄积兼而有之
50
（3）系统尸解和组织病理学
1）脏器重量和脏器系数： 脏器系数（比）：指某个脏器的湿重与单位体重
的比值，通常是每100g体重中某脏器所占的质量。 在不同的年龄期，实验动物各个脏器与体重比值
有一定规律，若化学毒物使某个脏器受损，其比值会 发生变化，是一项灵敏、有效和经济的指标。
51
脏器系数增大： 增生、充血、水肿
亚慢性毒性试验可依据急性毒性的阈剂量或以1/20～1/5LD50 确定；
慢性毒性试验以亚慢性毒性试验效应的最大耐受量（MTD）为 最高剂量。
剂量选择步骤：
急性
亚急性
亚慢性
慢性
42
②对于人群主动摄入的食品和药品，可采用人 体可能接触的最高剂量为剂量设计依据
大 鼠： 3个剂量组：10 30 100 非啮齿类： 3个剂量组：5 15 50
25
26
试验目的
1. 观察长期接触受试物的毒性效应谱、毒作用 特点和靶器官；了解其毒性机制。
2. 观察受试物亚慢性毒性作用的可逆性
27
可逆毒性:
是指停止接触后可逐渐消失的毒性作用。一般情况下，机体接触 毒物的浓度越低、时间越短、损伤越轻，则脱离接触后其毒性作用消 失的越快。
不可逆毒性
是指停止接触后其毒性作用依然存在甚至对机体造成的损害作用 进一步加深。
内，反复多次给予低剂量化学毒物，观察试验动物有无引起 有害作用的试验过程。
24
3. 慢性毒性（chronic toxicity）：是指人或实 验动物长期（甚至终生）反复接触低剂量的化学毒物所 产生的毒性效应。
一般2年 慢性毒性试验：在受试动物生命的大部分或终生， 连续长期给予低剂量的受试物，观察有无引起有害作用 的试验过程。
14
A 固定剂量法
在事先求出毒物的LD50的前提下，选取相同条件的40只（或更多） 动物，随即分为2组：实验组和对照组。每组至少20只，雌雄各半。
在1/20～1/5LD50 之间选择一个固定剂量，每日固定剂量、定时和 相同途径染毒
试验组累计发生一半动物死亡。如接触剂量已累计达5个LD50，也 可终止。
4. 确定不同动物对受试物的毒效应的差异，为将研 究结果外推到人提供依据。
29
二、研究方法
（一）实验设计
30
1 实验动物选择
（1）物种和品系
31
急性原则：
* 尽量选择急性毒性反应与人近似的动物；
* 易于饲养管理、试验操作方便的动物； * 繁殖生育能力较强，数量较大能够保障供应； * 价格较低，易与获得的动物。
21
（二） 基本概念
22
1. 短期重复剂量毒性 指实验动物或人连续接触外源化学物14-30
天所产生的中毒效应。
23
2.亚慢性毒性（subchronic toxicity ）： 是指人或实验动物连续较长期接触某一外源化学毒物所
出现的中毒效应。 一般在相当于1/10左右生命时间（寿命）内
亚慢性毒性试验： 指在实验动物的1/10左右（如大鼠 3个月）的生命时间
控制昼夜交替 笼具：大小适中、动物能自由活动 饲料：营养合理 饮用水：清洁、充足
35
2 染毒方式与期限 染毒方式原则：
1）尽量选用与人群实际接触相同的途径和方式 食品、药品、环境污染物
2）并与预期进行慢性毒性试验的接触途径一致。 一般以经口、经呼吸道和经皮肤三种途径
染毒，每日一次，连续给予
36
染毒期限
（4）若1/20 性。
LD50剂量组有死亡，且有剂量反应关系，则为强蓄积
18
1.4 局限性
1.对于具有免疫毒性的物质不适用 2.不能判断化学毒物的蓄积是物质蓄积或功能蓄 积 3.蓄积系数法，以死亡为指标，用LD50表示生物 效应，有急性试验的局限性，可能漏检某些指标。
19
2、生物半减期法
是利用毒物动力学原理阐明化学毒物在机体内的 蓄积作用特征。
8
（二）蓄积作用的意义
毒理学中，评价化学毒物有无蓄积作用， 有助于：