HPV分子诊断试剂项目调研(201405)

HPV分子诊断试剂 市场/技术/产品/防治2014-04-24 XXXX生物科技有限公司目 录‹ 宫颈癌与HPV ‹ HPV检测试剂市场潜力 ‹ HPV检测技术 ‹ 现有HPV分子诊断产品 ‹ 宫颈癌的防治与筛查宫颈癌 —— 女性第二大癌症这些英年早逝的女艺人，她 这些英年早逝的女艺人 她 们都因罹患宫颈癌而香消玉 殒……z全球每年新增病例56.5 万，新发病例逐年增加， ， ， 且日渐呈年轻化发展趋 势。

发展中国家宫颈癌发生 率为发达国家6倍，有 50%的病例发生在中国 和印度。

中国每年新增病例 18.15万。

每年有3万多 妇女死于宫颈癌。

妇女死于宫颈癌zz梅艳芳，终年40岁李媛媛，终年41岁宫颈癌生物学病因的研究史宫颈癌与HPV关 系的研究进程1974 1989Zur Hausen提出 HPV与宫颈癌发病可能有 关的假设 国际癌症研究所（IARC）认 为 HPV感染是宫颈癌的主要 病因19951977Keerti Shah证实宫颈癌与 HPV感染有直接关系Laverty在电镜中观察到 宫颈癌活检组织中存在 HPV颗粒„ 德国科学家豪森（Zur Hausen） 因发现HPV和宫颈癌的关系而获得 2008年诺贝尔生理学或医学奖。

„ 豪森的这一研究成果也使得宫 颈癌成为目前唯一的病因明确的 癌 恶性肿瘤，从而为早期的诊断及 预防提供了理论基础与技术方向。

预防提供了理论基础与技术方向人类乳头瘤病毒 (Human Papillomavirus Papillomavirus, HPV)HPV病毒电镜图种属于乳多空病毒科的乳 „一种属于乳多空病毒科的乳 头瘤空泡病毒A属 „ 双链DNA无包膜病毒 „ 环状DNA，约 约8Kb „ 病毒颗粒直径为50～55 55nm „ 依靠宿主细胞进行复制、转 录和翻译 „ 宿主和组织特异性HPV病毒结构模式图HPV基因 基因结构及基因分型 结构及基因分型长控制区（ LCR） LCRE6早期转录基因区: E6、E7基因 E6、E7蛋白E7L1L1E1 E1„以L1、E6和E7基因间的核 苷酸的同源性作为标准，同 源性<90%，属于不同的型 属于不同的型 别。

„目前约有170种基因型HPV 被判别出来.晚期转录基因区:  病毒壳粒的蛋白质L2E2 E2 E5 E4HPV基因型分类根据2005年IARC专题讨论会： 9 低危型：6、11、42、43、44、53、81 低危型：6 11 42 43 44 53 81 9 高危型：16、18、26、31、33、35、39、45、 高危型 16 18 26 31 33 35 39 45 51、52、53、56、58、59、66、68、73、82HPV不同亚型感染与许多疾病具有相关性HPV亚型（高危型） 16 18 31、35、45、52、56、58、 66、68 33 39 51、59 HPV亚型（低危型） 6、11 临床病变 肛门生殖器疣、女阴上皮内瘤变、 上皮内瘤变、CIN、宫颈癌 生殖器疣、CIN、宫颈癌 肛门生殖器疣、CIN、宫颈癌 CIN、女阴上皮内瘤变、宫颈癌 肛门生殖器疣、CIN、宫颈癌、 肛门生殖器疣 宫颈癌 鲍 温样丘疹病 肛门生殖器疣 临床病变 尖锐湿疣HPV的致癌机理p53蛋白p53z 细胞中的肿瘤 z HPV表达两 抑制蛋白 种蛋白 — E6 – p53蛋白 — E7 – pRb蛋白E6蛋白抑制p53活性 E7蛋白抑制pRb活性DNA导致两种抑癌蛋白失活，使宫颈细胞 失去抑制癌变的功能 导致细胞恶性 失去抑制癌变的功能，导致细胞恶性 转化，无限增殖，引起宫颈癌 。

HPV致癌机制‹HPV基因与宿主染色体整合，促进端粒酶活性HPV DNA ，整合通常导致E2 基因中断从而使E6、E7 表达增强。

表达增强 ‹HPV DNA 可能整合在基因不稳定区和转录活跃区，如FRA3B 3p14.2 和 13q14t，而13q14 恰好是pRB 抑癌基因所在位点，整合可使pRB 基因功能失活 而致癌。

而致癌 ‹HPV E2 通过整合到宿主细胞，可调节hTERT 的转录，激活端粒酶。

高危型 高危型HPV的持续感染导致宫颈癌发生 持 导致宫颈癌发 基基 因 检检 测 早早 于 细细 胞 ！„子宫颈的癌前病变是个相对较长时间的过程，可以进行干预治疗的阶段，是 预防癌的发生、发展和治疗的时期。

„因此，宫颈病变的诊治是防癌的重要内容.目 录‹ 宫颈癌与HPV ‹ HPV检测试剂市场潜力 ‹ HPV检测技术 ‹ 现有HPV分子诊断产品 ‹ 宫颈癌的防治与筛查世界范围内HPV 流行状况及基因型分布Lancet Infect Dis. 2007 Jul;7(7):453‐9全球各地宫颈癌发生率分布图z发展中国家的发病率远高于 发达国家。

病例高发区主要集中在非洲、 拉丁美洲及亚洲等地区摘自Human H  Papillomavirus P ill i and d Related R l d  C Cancers  (WHO, 2009)zHPVHPV 感染率 我国各地 感染率中国癌基金会—— 2008年，《中国妇女HPV感染和宫颈癌流行学调查》 ¾中国城市妇女高危型HPV的感染率为15.2% 15 2%，低危型 低危型HPV 感染率为4.4%；农村妇女高危型HPV的感染率为14.6%，低 危型HPV感染率为2.0%； ¾中国妇女HPV感染率的年龄组分布曲线呈现出两个高峰， 分别是20-24 20 24岁和40-44 40 44岁； 岁 ¾我国妇女83%的子宫颈浸润癌由HPV16/18型引起，而84%的 子宫颈鳞癌由HPV16/18型引起。

且未发现子宫颈癌中优势 HPV型别有地区差异。

我国各地宫颈癌发病率„ 国内宫颈癌高发地区：内蒙 国内宫颈癌高发 内蒙 古、山西、陕西、湖北、湖南、 江西 „ 中国目前每年新发宫颈癌病 例有10万人，占全球病例的1/5。

我国宫颈癌高发区主要集中在 中西部地区，农村略高于城市。

宫颈癌发病高低与生活水平、 卫生和受教育程度相关。

摘自全国肿瘤登记中心 ——《2012中国肿瘤登 记年报》我国各地宫颈癌死亡率我国每年约有 每年 有3万妇女 妇 死于宫颈癌，尤其是 中西部部分地区农村 发病率与死亡率居高 不下，如甘肃武都、 山西阳城等县，宫颈 癌死亡率 36/10万， 万 远高于世界平均水平 （8/10万）。

数据源于中国肿瘤防治数据库HPV筛查的必要性‹子宫颈癌前病变多无症 状，妇科检查亦难发现。

——有症状的患者80% 以上就诊时已发展为浸润 癌；‹ 从HPV感染到宫颈癌前 颈 病变长达5‐20年 ——此阶段有足够时间 筛查 早期发现 治愈 筛查、早期发现、治愈S hiff Schiffman M  C M, Castle l  P P. 新英格兰医学杂志 2005; 2005  353:2101 353 2101‐2104诺贝尔奖获得者豪森博 ： 诺贝尔奖获得者豪森博士：女性应从30岁起定期检测HPV‹宫颈癌的发生主要是由于 长期持续的HPV感染而累积 的病变，因此定期检测HPV， 对于开展提前预防与治疗措 施具有重要的意义； ‹ 随着宫颈癌的发病率的持 续提高和出现的低龄化现象， 人们对宫颈癌的关注也必将 日益增强，HPV检测将成为 成年女性常规检测项目， HPV诊断试剂产业蕴含着巨 大的市场潜力。

目 录‹ 宫颈癌与HPV ‹ HPV检测试剂市场潜力 ‹ HPV检测技术 ‹ 现有HPV分子诊断产品 ‹ 宫颈癌的防治与筛查现有的代表性HPV分子检测方法„ 基因芯片法 „ 荧光PCR法 „ 杂交捕获法其中基因芯片法因其具有高通量和分型检测优势而 被广泛使用 与杂交捕获 荧光PCR等不分型方法相 被广泛使用，与杂交捕获、荧光 比更有临床评估意义。

基因芯片法¾设计HPV基因组中的特异性引物 ¾对待测样品中可能存在的HPV基因型进行PCR扩增 ¾扩增产物进行生物素标记 ¾将PCR扩增产物与固定在芯片上的多个亚型HPV特异性探 针进行分子杂交 ¾通过化学显色方式判读结果HPV基因芯片法检测结果判读阴性样本HPV 16 感染HPV 6，52复合感染 PC：positive control,阳性对照荧光PCR法• 荧光PCR法包括：实时荧光定量 法包括 实时荧光定量PCR法和荧 光PCR探针法。

第二代杂交捕获法 （HYBRID CAPTURE 2，HC2）• 利用基因杂交、化学发光、信号放大的原 理，在分子水平同时检测被WHO确认的多 种高危型HPV 病毒DNA。

Qiagen公司产高危 型HPV DNA 检测试 检 试 剂盒（HC2法）杂交捕获法技术流程与原理Step 1:变性 溶解细胞，裂 解和变性核酸， 释放HPV DNA 单链 Step 2:杂交 全长病毒 长病毒RNA探 针与HPV病毒靶 DNA结合，形成 RNA:DNA复合物 Step 3:捕获 RNA:DNA复合物被 包被在微孔板上的 抗体捕获，一抗特 异性结合RNA:DNA 复合物Step 5:产生发光 信号 加入碱性磷酸酶 的底物，产生化 学发光信号 仪 学发光信号，仪 器判读发光信号Step 4:杂交检测 用二抗结合捕获 后的复合物，二 抗偶联有碱性磷 酸酶常用HPV检测方法的比较HPV检测相关专利情况检索关键词：“HPV/包含酶或微生物的测定或检验方法” 检索时间：2014年4月24日 检索专利数据库：国家知识产权局发明专利 检索结果：130项目 录‹ 宫颈癌与HPV ‹ HPV检测试剂市场潜力 ‹ HPV检测技术 ‹ 现有HPV分子诊断产品 ‹ 宫颈癌的防治与筛查国内获批的HPV诊断试剂产品z 目前国内已获得CFDA注册证的国产HPV分子诊断试 剂共计有46项，分属21家公司；进口产品12项，分属5 家公司。

z 生产公司分布：广东（8家）、上海（5家）、北京 （3家）、浙江（1家）、福建（1家）、陕西（1家）、 湖南（1家）、湖北（1家）。

z 获批日期 获批日期：2008-2013年间 年间。

z 涉及的检测方法：PCR荧光法、PCR-荧光探针法、 PCR-反向点杂交法、基因芯片法、PCR PCR PCR-荧光偏振法、 杂交捕获-化学发光法、流式荧光杂交法、表面等离子 谐振法。