薯蓣皂苷元的提取分离和鉴别

薯蓣皂苷元的提取分离和鉴别

一、实验目的

1．掌握甾体皂苷元（亲脂性和中性成分）的提取方法。

2．熟悉薯蓣皂苷元的性质及鉴定法。

二、仪器与试药

（一）仪器

SHB-循环水式多用真空泵 HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器

ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱烧杯（1000mL、100mL）乳钵

电炉子空气回流管移液管（10mL、5mL）锥形瓶（100mL）沙式提取器（二）试药

薯蓣粗粉硫酸铵碳酸钠中性滤纸石油醚（30-60℃）无水乙醇活性炭

浓硫酸AI2O3软板（中性100～200目，活性Ⅲ级）苯甲醇

硅胶H-CMC硬板石油醚乙酸乙酯磷钼酸

三、药材中主要成分介绍

薯蓣皂苷元（Diosgenin）是一种甾体皂苷元，分子式（C27H42O31）,分子量414.61，为白色结晶，mp 204～207℃，溶于一般有机溶剂和醋酸，不溶于水。目前，是制造多种甾体药物如口服避孕药（I号，II号避孕药片）和甾体激素（如可的松）等的重要原料。在植物界主要分布在薯蓣科薯蓣属（Dioscorea）植物中，我国的薯蓣属植物有80余种，其中只有薯蓣根茎组（Stenophora）的17种、I亚种及一变种才含有甾体皂苷元，其它则含有多量淀粉，无皂苷元。已用于生产的主要有盾叶薯蓣（D.Zingiberensis C. H. Wright），穿龙薯蓣（D.nipponica Makino），黄山药（D.panthaica prain et Burkil），紫黄姜(D.nipponica Makinovar rosthani prain et Burk)等。在植物体内薯蓣皂苷元是与葡萄糖、鼠李糖结合成薯蓣皂苷（Dioscin）而存在。提取分离时，一般是先用稀酸将薯蓣皂苷水解成薯蓣皂苷元与单糖（葡萄糖、鼠李糖）。因薯蓣皂苷元不溶于水，混存于植物残渣中，故可用有机溶剂（如石油醚）直接从植物残渣中提取出薯蓣皂苷元。

四、实验内容

1．皂苷预试

（1）泡沫试验

（2）李伯曼—布哈德（Liebermann-Burchard）反应

glu

(rha)2

3

2．薯蓣皂苷元的提取

注一：检查薯蓣皂苷元是否提尽，可用李伯曼反应，参考实验二“注三”项下。 注二：回收石油醚的方法见实验一“注四”项下。

注三：所得薯蓣皂苷元（粗品）用石油醚抽洗后，即可测定熔点，若熔点不合格时，才进行重结晶。

五、薯蓣皂苷元的鉴定 1．熔点测定：204～209℃ 2．薄层层析鉴定：

样品：白色结晶的无水乙醇液 标准品：薯蓣皂苷元无水乙醇液

方法一：吸附剂：Al 2O 3软板（中性100～200目，活性Ⅲ级）

展开剂：苯-甲醇（9：1）

方法二：吸附剂：硅胶H-CMC 硬板

粉碎

碎块（3-5mm 左右的小颗粒）50g

置于100ml 锥形瓶中，再加入2NH 2SO 4500ml ，安上空气回流管，在电炉上直火加热（隔石棉网）回流4小时（从回流开始计时）。水解物

放冷，水洗两次后，用Na 2CO 3粉中和，在布氏漏斗上水洗至中性，尽量抽干。

+植物组织等）

滤渣置盘中，在60℃干燥（干燥过程中要注意压散团块并翻动）

干燥的中性滤渣

置沙氏提取器中，以石油醚（bp30-60℃）在水浴上回流提尽皂苷元[注一]回收石油醚[注二]至约10-15ml 时停止，倾入小锥形瓶，密塞，冷却析晶，抽滤，用少量石油醚快速抽洗[注三]用无水乙醇重结晶（必要时用少许活性碳脱色），干燥（105℃）白色晶体

（薯蓣皂苷元）

展开剂：石油醚-乙酸乙酯（7：3）

显色剂：10%磷钼酸乙醇溶液。喷雾后加热10～20分钟

3．化学反应：

（1）Liebermann-Burchard反应

（2）CHCl3 - 浓H2SO4反应

（3）五氯化锑反应（Kahlenberg反应）：与五氯化锑的氯仿溶液呈紫蓝色。

4．制备衍生物：

乙酰化物的制法：取样品100mg溶于3mL吡啶中，加入20mL醋酐，煮沸半小时至一小时后，将反应物倒入冰水中（冬季操作使用冷水即可）。待析出白色晶体后，抽滤，析出物丙酮重结晶即得。mp196～193℃。

5．紫外吸收光谱的测定：

取样品5mg，加入浓H2SO4 10mL，在40℃水浴上加热1小时，放冷，测定。薯蓣皂苷元应有以下最大吸收峰：

λmax271nm 415nm 514nm

lg 3.99 4.06 3.64

六、实验结果

1．详细记录定性反应结果

2．绘制色谱图，并计算R f值。

3．总结实验过程中遇到的问题和解决方法。