酶工程习题

一、填空题

1常用的菌种纯化方法很多，主要有划线分离法、平板分离和稀释分离法。

2产酶菌种的要求安全可靠、产酶性能要稳定、产酶量高和营养要求低。

3常用菌种保藏方法有斜面低温、液石蜡封、固体曲法、沙土管法、冷冻干燥、液氮法。4控制发酵过程产生泡沫的方法有：选育不易产生泡沫的菌种、调节培养基中营养成分，减少或缓加易起泡的原料、机械消泡或化学消泡

5酶发酵的培养方式与其他发酵大同小异，基本上分为固体曲培养法、液体深层培养法

6按发酵的操作方式可分分批式反应、连续式反应、流加分批式反应。

7酶的比活力是反应速度的量度指标，酶转换数是量度指标。

1. 用阳离子交换树柱分离AA，在pH=2时，碱性氨基酸和酸性氨基酸相比，哪一个优先被洗脱?

2. 细胞破碎的主要方法有机械破碎法、物理破碎法、化学破碎、酶解破碎。

3. 酶的提取方法主要有盐溶液提取、酸溶液提取、碱溶液提取、有机溶剂提取。

4. 酶浓缩的方法主要有蒸发浓缩、超滤浓缩、脱水浓缩、反复冻融浓缩。

5. 酶干燥的方法主要有冷冻干燥、直接干燥、喷雾干燥。

6. 结晶的方法主要有盐析结晶法、有机溶剂结晶法、等电点结晶法、蒸发浓缩。

7. 离心方法主要有差速离心、密度梯度离心、等密度梯度离心。

8. 加压膜分离可以分为微滤、超滤、反渗透。

9酶化学修饰的方法酶的表面修饰、酶分子的内部修饰、与辅因子相关的修饰、金属酶的金属取代等。

10酶化学修饰后的性质都发生了怎样的变化热稳定性、抗原性、对各类失活因子的抵抗力、

修饰酶在体内的半衰期、最适pH、Km 的变化。

11用带负电荷的载体制备的固定化酶，其最适pH比游离酶的最适pH ，用带正电荷的载体制备的固定化酶，其最适pH比游离酶的最适pH ，用不带电荷的载体制备固定化酶，其最适pH比游离酶的最适pH 。

12.酶电极是由半透膜与酶胶层密切结合的传感装置。

13.氨基酸酰化酶可以催化（）。

A.D,L-氨基酸生成D-氨基酸和L-氨基酸。

B.D,L-乙酰氨基酸水解生成D,L-氨基酸。

C.L-乙酰氨基酸水解生成L-氨基酸。

D.D-乙酰氨基酸水解生成D-氨基酸。

14与水介质中相比，酶在有机介质中热稳定性提高，催化活性降低。

15非水介质主要包括有机介质、气相介质、超临界液体介质、离子液介质。

16必需水是指（D）

A. 维持酶催化反应速度所必需的水量

B. 酶催化反应速度达到最大时所必需的水量

C. 与酶分子紧密结合的水量

D. 维持酶分子完整的空间构象所必需的最低水量

17有机介质中酶催化的最适水含量是指（C）

A. 酶溶解度达到最大时的含水量

B. 底物溶解度最大时的含水量

C. 酶催化反应速度达到最大时的含水量

D. 酶活力达到最大时的含水量

18对于有气体参加的酶的反应，通常采用（C）反应器。

A. 填充床式

B. 流化床式

C. 鼓泡式

D. 搅拌罐式

19鼓泡式固定化酶反应器又称为三相流化床式反应器（对）。

20采用膜反应器进行酶催化反应，可以明显降低小分子产物对酶的反馈抑制作用（）。

二、简答题

1何谓酶工程，其主要内容有哪些？

答：酶工程就是将酶、细胞或细胞器等置于一定的生物反应装置中，利用酶所具有的生物催化功能，借助工程手段将其相应的原料转化成有用的物质，并应用于社会的一门科学技术。

研究内容：①用基因工程技术大量生产酶（克隆酶）②用蛋白质工程技术定点改变酶结构基因（突变酶）③设计新的酶结构基因，生产自然界从未有过的性能稳定、活性更高的新酶。

1举例说明何谓基因表达的诱导与阻遏，正调控与负调控？

答：乳糖操纵子负调控，调节基因产生有活性的阻遏蛋白，阻遏蛋白和操纵基因结合，乳糖基因关闭；当有诱导物乳糖存在时，乳糖和阻遏蛋白结合，阻遏蛋白失去活性，不能和操纵基因结合。

2试对乳糖操纵子的正调控和负调控提出较合理的分子解释。（10分）

4酶发酵生产过程中，提高酶产量的措施有哪些？

答：①补充部分被消耗的营养物，延长产酶的周期；②添加酶的诱导物提高酶的产量；③添加表面活性剂，增加细胞的透过性，打破胞内酶合成的反馈平衡；④添加产酶促进剂；⑤控制阻遏物的浓度。

5为什么属于滞后合成型的酶要在细胞生长一段时间甚至进入平衡期以后才开始合成？

6结合酶生物合成模式，浅谈如何提高酶的合成量？

答：一、采取与酶发酵工艺有关的一些措施

①补料

②加诱导物

③阻遏及解除

④添加表面活性剂

⑤产酶促进剂

二、也可以进行遗传控制

诱变育种

基因工程育种

7黑曲霉可由果胶诱导合成聚半乳糖醛酸酶，葡萄糖的大量存在阻遏聚半乳糖醛酸酶的合成。当以纯果胶为诱导物时，该酶的生物合成模式为哪种类型？若以含有葡萄糖的粗果胶为诱导物，该酶又成为哪种合成模式？为什么？

3.何谓分解代谢物阻遏作用？有哪些方法可以解除分解代谢阻遏作用？

4.酶活力测定的方法有哪些？

答：（1）分光光度法（spectrophotometry）（2）荧光法(fluorometry）（3）同位素测定法（4）电化学方法

5.活性中心的研究方法？

答：（1）酶的专一性研究

（2）酶分子侧链基团的化学修饰法

（3）X射线晶体衍射法

（4）定点诱变法

9.试论述如何利用本章所学的各种分析技术对特定的蛋白酶进行酶学性质（如分子量、pI、