枯草杆菌生物兴趣小组描述

枯草杆菌
——对消化有重要作用的细菌
高一（10）班
李阳、李佩烨、项洁莹、郑铭琳
目录
❖ 1、认识枯草杆菌 ❖ 2、革兰氏染色法 ❖ 3、枯草杆菌的培养 ❖ 4、枯草杆菌的培养
认识枯草杆菌
枯草芽孢杆菌
（枯草杆菌一般指枯草芽孢杆菌）
❖ 枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种。单个细胞 0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭 毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～ 1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢 形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色 或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。 需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨 酸形成吲哚。在遗传学研究中应用广泛，对此菌的 嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。 广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁 中繁殖，故名。
用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄 而均匀。
4、 固定：让菌 膜朝上，通过火 焰2-3次固定 （以不烫手为 宜）。
3、 晾干：让涂片 在空气中自然干燥。
6、 水洗：用水 缓慢冲洗涂片上 的染色液，用吸 水纸吸干。简单 染色结束可观察 细胞形态。
8、 脱色：吸去残留水，连续滴加 95%乙醇脱色20-30s至流出液无紫 色，立即水洗。
❖ 细菌的革兰氏染色受菌龄、培养基pH值和染色技术等因 素的影响，并非固定不变。
三、器具材料
1.器材：显微镜、擦镜纸、二甲苯、香柏油、接种环、酒 精灯、火柴、吸水纸、载破片、盖玻片。
2.染色液及试剂: 结晶紫染色液、路戈氏碘液、 95%的酒 精、番红染 色液、蒸馏水。
碱性复红染色液、5%孔雀绿染色液。 3.菌种；培养18小时至20小时的枯草芽孢杆菌、苏云金杆
1.2.1培养方法
先用接种环接种1环试 管菌种到牛肉膏蛋白胨 液体培养基中， 200r/min，37℃培养 24h，进行扩大培养和 活化，然后再取1mL液 体种接种到发酵培养基 中，37℃培养48h。
1.2.2检测方法
活菌的检测方法：称量大概5g 发酵48h后的培养基溶解在 50mL无菌水中,200r/min， 20min摇散得10，再用5mL无菌 吸管吸取5mL到45mL无菌水中， 摇匀得10，依次这样稀释到一 个适当的稀释度，取0.1mL稀释 液到无菌牛肉膏蛋白胨固体培 养基中并涂匀，37℃培养24h， 然后数培养皿上的菌落数[7]。
为了更好地探究枯 草杆菌繁殖的适宜 条件，对培养基进 行优化：
1.2培养基的优化 1.2.1培养方法 1.2.2检测方法 1.2.3含水量对枯草芽孢杆菌生长的影响 1.2.4稻草粗细程度对枯草芽孢杆菌生长的影响 1.2.5氮源对枯草芽孢杆菌生长的影响 1.2.6碳源对枯草芽孢杆菌生长的影响 1.2.7碳氮比对枯草芽孢杆菌生长的影响 1.2.8pH对枯草芽孢杆菌生长的影响
水上形态
在枯草杆菌丰富的水体里，水的表面张 力比较大，可以在吹出来的泡泡的小圈 上形成一层膜。
枯草杆菌Leabharlann Baidu养基
形态特征
电镜图片
革兰氏染色法
细菌介绍
芽孢具有厚而致密的壁，透性差，含水量低，折光性强，不易着色。在加 热条件下加入着色力强的染料，让芽孢、菌体与染料作用较长时间，使 芽孢染上颜色，再使菌体的颜色脱去；然后再用另一种与前者颜色不同 的对比度强的染料对菌体复染，使芽孢和菌体分别呈现出不同的颜色， 因而能更明显地衬托出芽孢，以便观察。 荚膜是一层覆盖在某些细菌细胞壁表面的粘性物质，主要成分是多糖 类。荚膜与染料的亲合力较差，不易着色。荚膜的通透性好，某些染 料可透过荚膜而使菌体着色。因此，常采用负染色法将菌体和背景着 色而荚膜不着色，因而荚膜在菌体周围呈一透明无色圈。
5、 染色：将固定过的涂 片放报纸上，滴加草酸铵 结晶紫液，染1min。
2、 涂片： 液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰 附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰 中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环， 在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜， 最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。
固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再
1号培养基： 3g木屑, 0.4 g葡萄糖, 0.2g蛋白胨, 0.2g酵母膏, 0.2g CaCO3 ,0.1g KH2PO4 ,16mL水。 2号培养基： 3g稻草, 0.4g葡萄糖, 0.2g蛋白胨, 0.2g酵母膏, 0.2g CaCO3 ,0.1g KH2PO4 ,16mL水。 3号培养基： 3g玉米芯, 0.4g葡萄糖, 0.2g蛋白胨, 0.2g酵母膏, 0.2g CaCO3 ,0.1g KH2PO4 ,16mL水。 4号培养基： 3g糠壳, 0.4g葡萄糖, 0.2g蛋白胨, 0.2g酵母膏, 0.2g CaCO3 ,0.1g KH2PO4 ,16mL水。
细菌鞭毛非常纤细，直径10-20nm，只能在电子显微镜下才能观察到。但采 用特殊的染色法在光学显微镜下也能见到。其原理是：在染色前先用媒染剂 处理，使媒染剂沉积在鞭毛上，将鞭毛加粗，然后再进行染色，便能在油镜 下看见鞭毛的形状和着生方式。
原理
❖ 基本原理
❖ 革兰氏染色法是一种鉴别性的染色方法。结果细胞保留 初染剂篮紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞为复染剂的 颜色（红色），则为革兰氏阴性菌。其机理是由于细菌细胞 壁的化学组成及结构不同和通透性不同的缘故。
菌、大肠杆菌的新鲜斜面菌种。 培养24小时至36小时的枯草杆菌或苏云金杆菌、 巨大芽孢杆菌。
细菌先经碱性染料结晶染 色，而经碘液媒染,在媒染 处理时，媒染剂与染料形 成不溶性化合物，可增加 染料和细菌的亲和力。
实验过程
1、 取载玻片用纱布擦干， 载玻片的一面用marker笔 画一个小圈（用来大致确 定菌液滴的位置）。涂菌 的部位在火焰上烤一下， 除去油脂。
9、 复染：滴加蕃红复染35min，水洗。
至此，革兰氏染色结束。
观察荚膜和鞭毛标本片
周生 一端生一束
荚膜
1.1培养基
❖ 牛肉膏蛋白胨液体培养基：5g牛肉膏，10g蛋白胨，5gNaCl，1000mL 蒸馏水，pH 7.2—7.5 。
❖ 牛肉膏蛋白胨固体培养基：5g牛肉膏，10g蛋白胨，5g NaCl，20g琼脂, 1000mL蒸馏水，pH 7.2—7.5 。