血红蛋白测定
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实验二
血红蛋白测定
一、氰化高铁血红蛋白测定法
【目的】 掌握氰化高铁血红蛋白 (HiCN) 测定方 法的原理及操作。 【原理】 在HiCN转化液中，红细胞被溶血剂破坏， 各种血红蛋白（SHb除外）中的Fe2+被高铁氰化钾 氧化成Fe3+，形成高铁血红蛋白（Hi），Hi与氰 化钾提供的氰根离子（CN-）结合生成稳定的复合 物氰化高铁血红蛋白(HiCN )。棕红色的HiCN在波 长540nm处有吸收峰，用分光光度计测定该处的吸 光度，再换算成每升血液中的血红蛋白浓度，或 用HiCN参考液进行比色法测定制作标准曲线供查 阅。
二、十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法
【目的】 了解十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb） 测定法的原理及操作。 【原理】 十二烷基硫酸钠为一种阴离子表面活性 剂，具有轻度氧化作用；血液中除SHb以外的所有 血红蛋白均可Βιβλιοθήκη Baidu低浓度的SDS作用，亚铁血红素被 氧化成稳定的棕红色高铁血红素样复合物（SDSHb）。由于SDS-Hb的毫摩尔消光系数尚未确认， 故不能根据标本吸光度直接计算结果；需用HiCN 法及本法分别测定多份不同浓度抗凝血或溶血的 血红蛋白浓度和吸光度，以此绘制标准曲线，间 接计算血红蛋白浓度。
【操作】 1．制备标准曲线 2．测定 【注意事项】SDS液可破坏白细胞，因此对 某些血液分析仪不宜使用。
【操作】 1．加转化液 2．采血与转化 3．测定吸光度 4．计算 5．报告方式：XX g／L
【注意事项】 1．分光光度计校正。 2．HiCN转化液应以蒸馏水配制（不能用去 离子水），pH稳定在7.0～7.4；HiCN转化 液中氰化钾是剧毒品，配制转化液时要按 剧毒品管理程序操作；HbCO转化为HiCN的 速度缓慢，可适当延长转化时间或加大试 剂中K3Fe(CN)6的用量。
血红蛋白测定
一、氰化高铁血红蛋白测定法
【目的】 掌握氰化高铁血红蛋白 (HiCN) 测定方 法的原理及操作。 【原理】 在HiCN转化液中，红细胞被溶血剂破坏， 各种血红蛋白（SHb除外）中的Fe2+被高铁氰化钾 氧化成Fe3+，形成高铁血红蛋白（Hi），Hi与氰 化钾提供的氰根离子（CN-）结合生成稳定的复合 物氰化高铁血红蛋白(HiCN )。棕红色的HiCN在波 长540nm处有吸收峰，用分光光度计测定该处的吸 光度，再换算成每升血液中的血红蛋白浓度，或 用HiCN参考液进行比色法测定制作标准曲线供查 阅。
二、十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法
【目的】 了解十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb） 测定法的原理及操作。 【原理】 十二烷基硫酸钠为一种阴离子表面活性 剂，具有轻度氧化作用；血液中除SHb以外的所有 血红蛋白均可Βιβλιοθήκη Baidu低浓度的SDS作用，亚铁血红素被 氧化成稳定的棕红色高铁血红素样复合物（SDSHb）。由于SDS-Hb的毫摩尔消光系数尚未确认， 故不能根据标本吸光度直接计算结果；需用HiCN 法及本法分别测定多份不同浓度抗凝血或溶血的 血红蛋白浓度和吸光度，以此绘制标准曲线，间 接计算血红蛋白浓度。
【操作】 1．制备标准曲线 2．测定 【注意事项】SDS液可破坏白细胞，因此对 某些血液分析仪不宜使用。
【操作】 1．加转化液 2．采血与转化 3．测定吸光度 4．计算 5．报告方式：XX g／L
【注意事项】 1．分光光度计校正。 2．HiCN转化液应以蒸馏水配制（不能用去 离子水），pH稳定在7.0～7.4；HiCN转化 液中氰化钾是剧毒品，配制转化液时要按 剧毒品管理程序操作；HbCO转化为HiCN的 速度缓慢，可适当延长转化时间或加大试 剂中K3Fe(CN)6的用量。