关于馏分合并与舍弃的纠结问题
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关于馏分合并与舍弃的纠结问题
关于馏分合并与舍弃的纠结问题
1,留样(做每一步之前要想清楚接下来要做什么,怎么做。最好是有了计划,写下
来再动手做,不然毁了样品就后悔莫急啊。)
2,接馏分(每馏分的体积。大柱用梯度时1/3-1/2柱体积;小柱馏分收集仪1/8-
1/2体积(以收集试管为最终判断,手动收集1-3柱体积不等)
3,回收溶剂。大柱回收溶剂(注意回收过程中物质(甚至晶体)的析出,回收干后
烧瓶内固体的析出,如果有估计析出,用弱极性的溶剂洗涤,易溶溶剂溶解固体)(记录
每一瓶的回收瓶中的样品状态(晶体、固体、胶质)、颜色、量(大致))
4,点板(大柱:每一瓶点。用洗脱体系溶剂(但极性加大,使Rf值在0.2-0.8,如果是难分离的几个化合物最好是压一压Rf值),呈递减状。留样(遵照等体积、等量最
好体积和点样量都相等,或两者折合相等。定量毛细管),可看出化合物洗脱的趋势(总
体和每一个)。晶体和干净固体、洗涤的母液重点观察。多用GF254,显色顺序:日光正
反面(有色成分蒽醌、部分黄酮,叶绿素),紫外(荧光、暗斑,叶绿素排出),碘、硫酸,碘化铋钾(等30分钟,观察颜色的变化),水。{备注:开始确定大致范围时,可以
把1~10号样品点一个点,11~20号点一个点,以此类推……以确定哪些段含有相似的点是,每一次点板时都要点留样的那部分,以确定馏分流出的情况}
5,放置、挥溶剂。每天观察,固体、晶体的析出。
6,晶体或固体析出后,继续放置直至脏的母液变成流浸膏附着在晶体或固体表面
(这时候知道不会再析出晶体或固体了)。用滴管吸出流浸膏至另一瓶中,用微溶溶剂洗
涤晶体或固体,洗涤液吸出),得到量较大的化合物。(原则是能拿到20毫克,就先拿
出来)
7,待处理区段(一般为几十个馏分)的其余馏分全部挥干后,对照3点的薄层观察
每一馏分的量的多少(固体、特别注意胶质、油状物)(用封口毛细管
探)。对有主点又有量的馏分关注。
8,能够洗涤出固体或晶体,就如5的操作。
9,溶解待处理的区段,采用不同于洗脱体系的展开体系展开(一般先用一种其
他体系,若需要时再用第二种体系)。
10,合并时,目标要明确。根据斑点情况,确定(锁定)所要分离的目标。
注意以分离主要化合物母液中其他次要化合物的锁定。(一般量少、斑点多而不特别
明显、无主点、相同斑点在前后馏分没有或少、馏分干后黑色胶质的馏分,分离出化合物
的可能性小)。(一般觉得,溶液10毫升(大半安培瓶),1/5毛细管,斑点非常明显,就有可能分离出10毫克。)大柱下来若分离效果好(即不出意外),合并时每一段所锁
定的待分离成分一般在3、4个以下(贪多不化)。
11,根据3和8的点板,若6中观察到的没有量(注意胶质和油状物)、没有明显斑点的,此时可以丢弃。
12,不敢扔的,放置在一边、挥干(也许可用于合并段分离后,次要成分量的累积)
13,对合并的馏分选择洗脱体系(洗脱体系一般不能与上一次的体系相同)(两个合并段一起选,点在同一张板上,原因极性相差不大)
一、
二、
三、
量的概念。10毫克是多少合并时目标明确无量无明显点弃之