分子诊断策略与常用技术
遗传性疾病的分子诊断
MstⅡ酶切位点(GCTNAGG)
5´
3´
1.15kb
正常基因
×
5´
3´
1.35kb
突变基因
镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
﹣
1.35kb 1.15kb
0.2kb
+
正常人 突变携带着 患者
二、ASO探针杂交
主要适用于检测已知点突变 受检者基因组DNA或含 突变位点的PCR扩增产物 与标记的ASO 探针杂交
遗传性疾病诊断策略
1. 点突变的诊断
方法有等位基因特异性寡核苷酸杂交（ASO）、 PCR － ELISA 、 等 位 基 因 特 异 性 扩 增 （ ASA ） 、 PCR－RFLP、基因芯片技术进行诊断；
对于一些基因背景未知的点突变，可以采用单链 构 象 多 态 性 （ SSCP ） 、 变 性 梯 度 凝 胶 电 泳 （DEEG）、异源双链分析（HA）、DNA序列测定 蛋白截短测试等方法。
单核苷酸多态性 （single nucleotid polymorphism，SNP）
定义:主要是指在P与STR不同, 它是直接以序列的变异作为标记,而不是以片段的 长度差异作为标记.
人类基因组图谱的初步分析表明，共有3万 至3.5万个基因。有300多万个单核苷酸多态 性,SNP在人类基因组中广泛存在，平均每500～ 1000个碱基对中就有1个，3-4个相邻的标记构成 的单倍型（haplotype）就可有8-16种。
bA probe bS probe
Homo
Hetero
Normal
2）地中海贫血
珠蛋白基因缺失或基因中某些硷基替代
→ 影响a-或b-珠蛋白链的合成速率 → a-或b-地贫
分子诊断与临床-精品文档
基因（DNA）芯片 RNA芯片 蛋白质芯片 细胞芯片 组织芯片 芯片实验室 (Lab-on-a-chip )
6400点的基因芯片
（面积 12×14 mm)
7、蛋白质组学
蛋白质组：一个细胞或一个组织或一个机体的基
因所表达的全部蛋白质。
蛋白质组学：从整体的角度，分析细胞内动态变
二、分子诊断的主要技术
低通量技术
DNA分析：Southern blot、PCR、RFLP、 ASO、SSCP、DGGE、DHPLC、DNA含量 测定
染色体分析：FISH、CGH RNA分析：ISH、Northern blot、RT-PCR 蛋白质分析：IHC、Western blot
差异 丰富与完善蛋白质信息库
主要的SNP检测方法
凝胶电泳分析技术
SSCP、TTGE、TGGE、DGGE
分子杂交技术
ASO、DASH、PNA杂交、LNA 杂交
荧光共振能量转移
Taqman探针技术、分子信标技术、 蝎状探针技术、替代探针技术
PCR-SSCP
6、生物芯片技术
技术的核心：杂交技术
实质：分子生物间特异性相互作用（互补配对）
大分子体系
基因 细胞 组织
细胞核
DNA
转录 细
胞
mRNA
膜 翻译
蛋白质
分子 诊 断 生化学诊断
临床表现
不同诊断方法的研究对象
血清学诊断 临床学诊断
分子诊断的策略
遵循实验诊断学的基本原则
不同疾病及病因采用不同方法 根据检测目的开展不同层次的检测 注重环境基因组学研究成果 发挥在耐药性方面的潜在作用 在疾病预测、健康检查、个体化治疗中的作用 关注分子诊断中的医学论理和生物安全问题 开发简便、快速、准确、特异、灵敏的方法
单基因遗传性疾病的分子诊断
23
分子诊断原理和技术·单基因遗传性疾病的分子诊断
（一）珠蛋白基因簇的结构
• α珠蛋白基因簇：16Pter -p13.3
24
分子诊断原理和技术·单基因遗传性疾病的分子诊断
• β珠蛋白基因簇：11p15.5
25
分子诊断原理和技术·单基因遗传性疾病的分子诊断
（二）镰状细胞贫血症的分子诊断
• 镰状细胞贫血是一种常染色体显性遗传血 红蛋白(Hb)病。临床表现为慢性溶血性贫血、 易感染和再发性疼痛危象以致慢性局部缺 血导致器官组织损害。也是严重危害母子 健康的疾病,可使胎儿死亡率达5%，孕妇死 亡率达4.62% 。
26
分子诊断原理和技术·单基因遗传性疾病的分子诊断
• 因β-肽链第6位氨基酸谷氨酸被缬氨酸所代 替，构成镰状血红蛋白(HbS)，取代了正常 Hb(HbA)。在氧分压下降时HbS分子间相互 作用，成为溶解度很低的螺旋形多聚体， 使红细胞扭曲成镰状细胞（镰变）。
8
分子诊断原理和技术·单基因遗传性疾病的分子诊断
Y连锁遗传病
• Y连锁遗传病的特点是男性传递给儿子，女 性不发病。
• 因Y染色体上主要有男性决定因子方面的基 因，其他基因很少，故Y连锁遗传病极少见。 目前已经知道的Y伴性遗传的性状或遗传病 比较少，肯定的有H－Y抗原基因、外耳道 多毛基因和睾丸决定因子基因等。
间接诊断策略和方法：
• 采用多态性连锁分析的方法，寻找具有基 因缺陷的染色体、相关基因的等位基因型 和单倍体型等，并判定被检者是否有这条 存在基因缺陷的染色体、相关基因的等位 基因型和单倍体型等。
15
分子诊断原理和技术·单基因遗传性疾病的分子诊断
《医疗机构临床检验项目目录（2013年版）》
肝癌的分子诊断和治疗策略
肝癌的分子诊断和治疗策略肝癌作为一种常见的恶性肿瘤，危害极大。
肝癌的发生和发展与多个因素有关，其中包括遗传、环境和生活方式等。
分子诊断技术的发展，为肝癌的早期诊断和治疗提供了新的思路和方法。
本文将重点探讨肝癌的分子诊断和治疗策略。
一、肝癌的分子诊断肝癌的分子诊断技术主要包括了基因诊断、蛋白质诊断和代谢组学诊断等方面。
其中，基因诊断的主要方法是检测肝癌相关的基因表达水平和突变情况。
在这方面，PCR技术、基因芯片和NGS技术等都有着广泛的应用。
蛋白质诊断则是通过检测肝癌相关的蛋白质水平及其变化来了解肝癌的诊断情况。
现如今，有许多蛋白质检测技术被用于肝癌的诊断，如蛋白质芯片技术、质谱分析技术等。
代谢组学诊断则是通过检测肝癌患者的生物体代谢产物来了解肝癌的代谢情况。
大部分的代谢物质是由微量物质的新陈代谢过程产生并排泄出体外，其组成元素主要是A、C、E、K等多种维生素和矿物质。
二、肝癌的治疗策略肝癌的治疗方法主要包括化疗、靶向治疗、免疫治疗、手术治疗等多种方式。
其中，针对肝癌的分子机制进行的靶向治疗被认为是非常具有前途的治疗方法。
靶向治疗的主要作用是抑制肿瘤细胞的生长和分裂，可以直接定位针对肿瘤细胞的关键因子进行治疗。
而在免疫治疗中，免疫细胞可以识别和杀死癌细胞，这种治疗方法逐渐受到越来越多的关注。
此外，手术治疗也是目前治疗肝癌的常用方法。
对于早期的肝癌患者，手术治疗的治愈率非常高，但是对于晚期肝癌患者，手术治疗的疗效较差，且术后复发率较高。
三、肝癌的未来治疗趋势近年来，随着分子生物学的发展以及肝癌关键基因和信号通路的深入研究，肝癌治疗的策略也在不断更新和完善。
未来，肝癌治疗的发展趋势将主要包括精准化治疗、免疫治疗和靶向治疗等方面。
在精准化治疗方面，肝癌患者的个体化特征将得到更加精准的呈现和诊断，以便指导相关治疗的选择。
在免疫治疗方面，免疫抑制剂、生物制剂等新型药物也将被进一步研究和开发。
在靶向治疗方面，针对肝癌的分子机制和靶标位点的治疗将成为趋势。
分子诊断知识科普
分子诊断知识科普分子诊断是一种基于分子生物学和遗传学原理的诊断方法，通过分析个体的基因、蛋白质或其他分子水平的信息，来判断其是否患有某种疾病或具有某种特定的遗传变异。
分子诊断可以通过检测基因突变、基因表达水平、蛋白质标记物等来识别疾病的存在或发展状态。
与传统的疾病诊断方法相比，分子诊断具有更高的准确性和灵敏度。
传统的诊断方法主要依靠临床症状、体征和影像学检查等，但这些方法往往无法提供足够的信息来进行准确的诊断。
而分子诊断则可以直接检测疾病相关的分子标记物，从而提供更为准确的诊断结果。
一、分子诊断的基本原理分子诊断的基本原理是通过检测和分析个体的基因组、转录组和蛋白质组等分子信息，来确定是否存在某种疾病或病理状态。
这种方法通常需要从患者的血液、体液或组织样本中提取并分析分子，并与正常个体或已知疾病个体的分子信息进行比对。
分子诊断的核心技术包括基因测序、PCR(聚合酶链式反应)、核酸杂交等。
其中，基因测序是一种通过测定DNA序列来获取个体基因信息的方法。
PCR是一种通过扩增DNA片段来增加检测灵敏度的方法。
核酸杂交则是一种通过将目标序列与一段互补的DNA或RNA序列结合来检测目标序列的方法。
通过这些技术，分子诊断可以检测到包括遗传疾病、感染病、肿瘤等在内的多种疾病。
例如，通过检测BRCA1和BRCA2基因的突变可以判断一个人是否患有乳腺癌或卵巢癌的遗传风险。
通过检测某种病原体的DNA或RNA可以确定感染者的感染状态。
通过检测肿瘤细胞中的特定基因突变可以确定肿瘤的类型和治疗策略。
二、分子诊断的应用领域分子诊断在医学领域有着广泛的应用。
下面将介绍一些常见的应用领域。
1. 遗传疾病诊断：分子诊断可以通过检测个体的基因突变来确定遗传疾病的存在和风险。
例如，通过检测孩子的基因突变可以确定其是否患有遗传性疾病，如先天性心脏病、遗传性失聪等。
2. 传染病诊断：分子诊断可以通过检测病原体的DNA或RNA来确定感染病的存在和类型。
极速疾病的分子诊断与治疗手段
极速疾病的分子诊断与治疗手段近年来，科技的迅猛发展为医学领域带来了很多新的突破。
其中，极速疾病的分子诊断与治疗手段成为了当前医学界的一个重要焦点。
这一领域涉及到分子生物学、生物工程、纳米科技等多个学科，以其高效、精准和个体化的治疗方式受到广泛关注。
一、分子诊断技术在极速疾病中的应用1. DNA检测：DNA是构成细胞基本遗传信息和调控蛋白合成的遗传物质。
通过对DNA进行检测可以快速确定某些遗传性疾病或患者易感基因，为早期预防和干预提供依据。
例如，在乳腺癌患者中常常出现BRCA1和BRCA2两种基因突变，通过检测这两种突变可以判断患者的肿瘤发生风险，从而提前做出治疗决策。
2. 基因编辑技术：CRISPR-Cas9是一种广泛应用于基因编辑的技术，可以通过改变细胞DNA序列来修复或删除存在问题的基因。
在一些遗传性疾病中，CRISPR-Cas9技术可以帮助修复有缺陷的基因，从而治愈患者。
例如，免疫缺陷病毒（HIV）感染一直是全球面临的重大挑战，在这种情况下，通过CRISPR-Cas9技术可将HIV感染的细胞改造为对HIV抵抗力更强的细胞，从而防止病毒扩散。
3. 微流控芯片技术：微流控芯片是一种集成了微型通道和微型反应器件等结构的芯片式分析系统。
它能够在极短时间内进行多项检测，并能检测到非常少量的生物标志物。
利用该技术可以快速检测出血液、尿液、唾液等生物体内的相关指标，如蛋白质、核酸和细菌等，从而诊断出许多疾病。
例如，在癌症早期筛查中，通过使用微流控芯片技术可以早期发现癌细胞特异性标志物，以便及早进行治疗。
二、分子治疗技术在极速疾病中的应用1. RNA干扰技术: RNA干扰是一种通过选择性降低特定基因表达水平来抑制蛋白质合成的方法。
这个技术可以通过直接注入或给予患者合适的剂量从而对特定基因进行靶向调控。
例如，在癌症治疗中使用RNA干扰技术，可以选择性地抑制肿瘤相关基因的表达，从而抑制癌细胞增殖并改善患者生存率。
空心病的分子诊断和个体化治疗
空心病的分子诊断和个体化治疗空心病，也被称为心肌病，是一类心脏疾病，主要特征是心肌的功能异常，导致心脏无法正常泵血。
传统的心血管疾病治疗是基于临床表现和心功能评估，但随着科学技术的进步，分子诊断和个体化治疗方式逐渐成为空心病研究的热点。
本文将介绍空心病的分子诊断方法和个体化治疗策略。
一、空心病的分子诊断空心病作为一类遗传性心脏病，其发病机制与基因异常密切相关。
因此，分子诊断方法的发展为早期诊断和预防空心病提供了新的途径。
以下是一些常用的分子诊断方法：1. 遗传学检测：通过对空心病相关基因的检测，可帮助确定遗传性空心病的类型和患者的患病风险。
例如，利用基因测序技术可以检测包括肌球蛋白重链基因、肌球蛋白结合蛋白基因等在内的空心病相关基因的突变。
2. 分子生物学指标检测：通过检测血液或组织样本中的分子生物学指标，如血清肌钙蛋白和BNP（脑钠肽前体），可以评估空心病的程度和预后。
这些生物标志物的水平通常与心肌损伤程度和心功能密切相关。
3. 分子影像学诊断：核磁共振成像（MRI）和正电子发射断层显像（PET）等分子影像学技术可用于非侵入性地评估心脏结构和功能，以及观察空心病患者的病变程度。
这些技术不仅能提供高分辨率的图像，还可以提供一些功能性信息。
二、空心病的个体化治疗传统的心血管疾病治疗往往是根据对整体患者的病情评估来进行的，而个体化治疗则是根据每个患者的遗传背景和分子异常，制定更具针对性的治疗方案。
以下是一些常用的个体化治疗策略：1. 基因疗法：针对特定基因的突变，可以采取基因疗法来修复异常基因或提供缺失的基因。
例如，通过基因编辑技术CRISPR-Cas9，可以精确编辑患者体内的异常基因，实现个体化的基因治疗。
2. 靶向药物治疗：根据空心病患者的分子异常情况，选择相应的靶向药物进行治疗。
例如，针对某些基因突变引起的肌松弛心肌病，可以应用已经批准的针对该基因变异的特定靶向药物进行治疗。
3. 干细胞移植：干细胞治疗作为一种新兴的治疗策略，可以通过移植患者自身或合适的供体干细胞来修复患者心肌的损伤和功能不全。
分子诊断策略与常用技术PPT(共23页)
•
29、人生就像一道漫长的阶梯，任何人 也无法 逆向而 行，只 能在急 促而繁 忙的进 程中， 偶尔转 过头来 ，回望 自己留 下的蹒 跚脚印 。
•
30、时间，带不走真正的朋友；岁月， 留不住 虚幻的 拥有。 时光转 换，体 会到缘 分善变 ；平淡 无语， 感受了 人情冷 暖。有 心的人 ，不管 你在与 不在， 都会惦 念；无 心的情 ，无论 你好与 不好， 只是漠 然。走 过一段 路，总 能有一 次领悟 ；经历 一些事 ，才能 看清一 些人。
等位基因特异寡核苷酸探针（ASO）
引物1 5’
点突变（C to T）
探针1 3’
G
3’
引物2 5’
探针2 3’
5’
A
限制性片段长度多态性分析（RFLP） ➢ 原理
指DNA序列上发生一个变异后获得或丢失了一 限制性识别位点，使DNA限制性片段长度发生 变化，在人群中形成两种或两种以上的限制性 类型 利用特定限制性识别位点进行基因分析
•
25、你不能拼爹的时候，你就只能 去拼命 ！
•
26、如果人生的旅程上没有障碍，人还 有什么 可做的 呢。
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27、我们无法选择自己的出身，可是我 们的未 来是自 己去改 变的。 励志名 言：比 别人多 一点执 着，你 就会创 造奇迹
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28、伟人之所以伟大，是因为他与别人 共处逆 境时， 别人失 去了信 心，他 却下决 心实现 自己的 目标。
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31、我们无法选择自己的出身，可是我 们的未 来是自 己去改 变的。
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32、命好不如习惯好。养成好习惯，一 辈子受 用不尽 。
•
33、比别人多一点执着，你就会创造奇 迹。
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50、想像力比知识更重要。不是无知 ，而是 对无知 的无知 ，才是 知的死 亡。
医学诊断中的分子诊断技术
医学诊断中的分子诊断技术随着科技的进步，医学诊断中的分子诊断技术也在不断发展。
分子诊断技术是指通过分析人体内分子水平的变化来判断疾病的发生、发展和治疗效果的一种诊断技术。
分子诊断技术具有高灵敏度、高准确性和高特异性等特点，越来越受到医学界的重视和广泛应用。
一、分子诊断技术的分类分子诊断技术按照检测的分子类型可分类为核酸分子和蛋白质分子检测。
其中，核酸检测主要采用聚合酶链式反应（PCR）技术，可以用于检测细菌、病毒和遗传性病等；蛋白质检测主要采用质谱分析技术，可以用于检测肿瘤标记物和蛋白质组学等。
二、分子诊断技术的应用1. 基因诊断分子诊断技术可以用于遗传病的预测和诊断。
例如，PCR技术可以用于检测常染色体遗传病和X染色体遗传病等。
另外，单核苷酸多态性（SNP）分析技术也可以用于遗传性疾病的预测和诊断。
2. 肿瘤诊断分子诊断技术可以通过检测肿瘤标记物来判断是否患有肿瘤、肿瘤的类型和分期等。
例如，前列腺特异抗原（PSA）是前列腺癌的特异标志物，可以通过他免疫测定（ELISA）技术来检测。
3. 药物代谢特异性分子诊断技术可以通过检测某些基因的突变来判断患者对某种药物的代谢特异性。
例如，对于治疗结直肠癌的靶向药物铂类药物，患者中如果存在铂类药物代谢酶基因突变，则该种药物的治疗效果会有显著差异。
4. 病毒检测分子诊断技术可以用于检测传染性疾病的病原体，尤其是病毒。
例如，PCR技术可以检测乙肝病毒、丙肝病毒和艾滋病病毒等。
三、分子诊断技术的优势和局限性优势：1. 高灵敏度：分子诊断技术可以检测非常微小的分子浓度，达到很高的灵敏度，诊断效果更为准确。
2. 高特异性：由于分子诊断技术可以检测非常特异的分子，所以特异性非常高，误诊率低。
3. 操作简便：与传统诊断技术相比，分子诊断技术操作简便，不需要复杂的仪器和技术，可以快速得到检测结果。
局限性：1. 检测成本高：目前分子诊断技术仍然需要昂贵的仪器和耗材，检测成本相对较高。
分子诊断技术临床应用
分子诊断技术临床应用分子诊断技术是一种通过分析个体生物体内分子水平信息来诊断疾病、评估疾病风险和预后的先进技术手段。
近年来，随着科学技术的不断发展和完善，分子诊断技术在临床诊断中的应用越来越广泛，为临床医疗工作带来了巨大的便利和益处。
一、分子诊断技术的原理及方法分子诊断技术主要是通过检测个体体液或组织中的 DNA、RNA、蛋白质等生物分子，根据其在疾病发生和发展过程中的特定变化来进行疾病诊断和治疗监测。
常见的分子诊断技术包括 PCR 技术、基因测序、PCR-RT 技术等。
这些技术能够检测出微量的生物分子，具有高灵敏度、高特异性和高准确性的特点。
二、分子诊断技术在临床中的应用1. 早期疾病诊断分子诊断技术能够帮助医生在疾病早期阶段进行准确诊断，为患者提供更早的治疗和干预机会。
例如，早期肿瘤的分子标志物检测可以帮助医生及时发现癌症，提高治疗效果和生存率。
2. 疾病风险评估通过分子诊断技术可以评估个体患病的风险，帮助医生制定更为个性化的预防和治疗方案。
比如，基因检测可以帮助患者了解自身的遗传风险，采取积极的预防措施。
3. 患者预后监测分子诊断技术还可以通过监测患者治疗后的生物标志物变化，评估治疗效果和预后情况。
这有助于医生调整治疗方案，提高治疗效果，避免不必要的药物毒副作用。
4. 个体化治疗分子诊断技术可以为个体化治疗提供依据，帮助医生选择最适合患者的治疗方案，提高治疗效果。
例如，靶向药物治疗需要根据患者的分子表型特点来选择合适的药物。
三、分子诊断技术的发展前景随着生物技术的快速发展和分子诊断技术的不断完善，未来分子诊断技术将在临床应用中发挥更为重要的作用。
随着新一代测序技术的不断推广和运用，基因组学、转录组学、蛋白质组学等领域的研究将进一步深入，为个性化医学提供更为可靠的依据。
在未来，分子诊断技术还将与人工智能、大数据等技术结合，实现更加精准、高效的诊断和治疗。
同时，分子诊断技术在肿瘤、遗传疾病、感染病等多个领域的应用也将得到进一步拓展，为医疗健康事业带来更多的创新和发展机遇。
分子诊断策略与常用技术PPT课件( 23页)
三、分子诊断常用技术
核酸分子杂交技术 等位基因特异寡核苷酸探针(allele specific
oligonucleotide, ASO) DNA限制性长度多态性(restriction
fragment length polymorphism, RLFP)分析 PCR-SSCP DNA测序 DNA芯片技术
RLFP分析法
RFLP分析
优点 • 分辩率高，无需标记,重复性好，简便快速直观 • 主要用于核酸变异分析比较, 微生物的分群分型， 癌基因分析，遗传病的诊断等。 局限
只能应用突变引起限制性酶切位点改变筛选，检测 效率低。
PCR/单链构象多态性分析（SSCP）
原理
将经扩增的DNA片段变性形成单链，由于序列不同，单 链构象就有差异，在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳的迁移率 不同，通过与标准物的对比，即可检测出有无变异。
等位基因特异寡核苷酸探针（ASO）
引物1 5’
点突变（C to T）
探针1 3’
G
3’
引物2 5’
探针2 3’
5’
A
限制性片段长度多态性分析（RFLP） 原理
指DNA序列上发生一个变异后获得或丢失了一 限制性识别位点，使DNA限制性片段长度发生 变化，在人群中形成两种或两种以上的限制性 类型 利用特定限制性识别位点进行基因分析
镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
MstⅡ酶切位点(CCTNAGG)
GAG → GTG ↓
谷Aa→缬Aa 5´
3´
1.15kb
×
正常基因
5´
3´
1.35kb
突变基因
镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
分子诊断的方法
分子诊断的方法分子诊断是一种基于分子生物学技术的诊断方法，通过分析患者体内的分子水平的变化来诊断疾病。
以下是常见的分子诊断方法：1. PCR（聚合酶链式反应）：PCR是一种体外扩增DNA的方法，可以在少量DNA样本中扩增目标序列，用于检测细菌、病毒、染色体异常等。
2. 实时荧光定量PCR：是PCR的一种改进方法，可以实时监测扩增反应过程中的荧光信号强度，精确定量目标序列。
3. 基因测序：通过测定DNA或RNA的序列，可以检测患者体内的基因突变或染色体异常，用于遗传性疾病、癌症等的诊断。
4. 基因芯片技术：将大量的DNA、RNA、蛋白质等生物分子固定在芯片上，通过与标记的待测样品反应，可以高通量地检测大量基因的表达水平或突变情况。
5. 蛋白质芯片技术：将大量的蛋白质固定在芯片上，通过与标记的待测样品反应，可以检测患者体内蛋白质的表达水平或特定蛋白质的变化。
6. 确定性诊断技术：利用特定的抗体或核酸探针，通过与待测样品中的抗原或核酸靶点相结合，确定疾病的存在或特定病原体的感染。
7. 肿瘤标志物检测：通过检测血液或组织中特定的分子标志物，如癌胚抗原（CEA）、前列腺特异抗原（PSA）等，来辅助癌症的早期诊断和疾病进展的监测。
需要注意的是，分子诊断方法的选择应根据具体的疾病类型、临床需求和实验条件进行综合考虑。
8. 荧光原位杂交（FISH）：通过使用荧光标记的DNA探针与目标序列特异性结合，可在组织或细胞水平上检测染色体异常、基因重排或缺失等。
9. 脱落细胞检测：通过采集体液样本（如尿液、唾液、血液等），分离出潜在的恶性细胞，并通过分子方法（如PCR、基因测序等）检测特定癌症相关的突变、融合基因或表达异常等，用于早期癌症筛查和监测。
10. 微阵列技术（Microarray）：通过将大量的DNA、RNA或蛋白质探针固定在芯片上，可以快速、高通量检测大量基因或蛋白质的表达水平，用于研究疾病的发生机制、诊断和治疗策略等。
医学领域中的分子诊断技术
医学领域中的分子诊断技术随着科技的不断发展，医学领域的诊断技术也在不断的创新。
分子诊断技术就是其中的一种，它能够通过分析DNA、RNA、蛋白质等分子的信息，快速和准确地诊断疾病。
本文将介绍分子诊断技术及其在医学领域中的应用。
一、分子诊断技术概述分子诊断技术是近年来崛起的一种新型医疗诊断技术，它可以利用DNA、RNA、蛋白质等分子信息，对疾病进行特异性诊断和治疗。
分子诊断技术具有灵敏、快速、准确的特点，已被广泛应用于各种临床诊断，包括癌症、遗传病、感染病等多种疾病的早期诊断和治疗等。
二、分子诊断技术的种类目前，分子诊断技术主要分为以下几种：1. PCR 诊断技术PCR 是分子诊断技术中最常用的技术之一，它可以对 DNA 片段进行扩增，以便于在样本中检测到更高的含量。
PCR 技术适用于许多潜在病毒和早期疾病的诊断。
2. 蛋白质芯片技术蛋白质芯片技术是利用微阵列芯片的方法，检测生物体中蛋白质的表达，诊断并发现蛋白质功能异常。
蛋白质芯片技术可广泛应用于失调蛋白质的筛选，如肿瘤标志物的诊断等。
3. DNA芯片技术DNA芯片技术主要针对基因表达读出，它能够在单个平台上检测数以千计的基因。
DNA芯片技术是检测基因多样性的有效方法，能够为影响许多疾病的基因表达提供突出的信息。
三、分子诊断技术在医学领域中的应用1. 癌症的分子诊断癌症是一种严重的疾病，分子诊断技术能够在早期发现肿瘤标志物，从而帮助医生快速诊断乳腺癌、肺癌、肾上腺癌、宫颈癌等多种癌症，提高治愈率。
2. 遗传病的分子诊断遗传病是由基因突变引起的一种疾病，分子诊断技术能够检测出携带突变基因的人群，早期发现遗传病并及时干预，从而将遗传病在家族中的传播控制在最小范围内。
3. 感染病的分子诊断病毒感染和其他感染病的诊断，通常需要进行 PCR 技术或其他分子诊断技术来检测特异的病原体，检测时间短、检测准确性高、能够快速退治病毒等。
四、分子诊断技术的优势最后，分子诊断技术还有许多优势，如：1. 高灵敏度：能够检测到极小的病原体、癌细胞等。
分子诊断技术有哪些分子诊断技术在临床上的应用→MAIGOO知识
分子诊断技术有哪些分子诊断技术在临床上的应用→MAIGOO知识一、分子诊断技术是什么技术分子诊断技术是指以DNA和RNA为诊断材料，用分子生物学技术通过检测基因的存在、缺陷或表达异常，从而对人体状态和疾病作出诊断的技术。
其基本原理是检测DNA或RNA的结构是否变化、量的多少及表达功能是否异常，以确定受检者有无基因水平的异常变化，对疾病的预防、预测、诊断、治疗和预后具有重要意义。
该图片由注册用户'荆湖酒徒'提供，版权声明反馈二、分子诊断技术有哪些分子诊断技术有很多，目前上市的分子诊断技术按照技术原理大致可分为五大类：1、PCR技术即基因扩增技术这一技术将DNA的变性原理以及复性原理加以利用，采用适温延伸、高温变性以及低温复性，让核酸片段实现了体外扩增，可将极微量的目标DNA特异地扩增上百万倍，从而提高对DNA分子的分析和检测，因为PCR有着很高的灵敏度以及特异性，而且简便快速，所以这种技术已经成为目前临床基因扩增实验室接受程度最高的技术。
PCR 技术可分为定量PCR和常规PCR，定量PCR分为实时荧光定量PCR （RT-PCR）和数字PCR。
2、分子杂交技术分子杂交就是指两条有着同源序列的核酸单链，通过碱基互补配对这一原则相结合，进而形成双链的这一过程，它能够通过已知序列的基因探针对目标序列加以捕获和检测。
进行杂交的双方分别是探针以及有待探测的核酸，有待检测的对象可以选择基因组的DNA，也可以选择细胞总DNA，可以对其进行提纯，也可以对其进行细胞之内的杂交，也就是细胞原位杂交。
必须对探针进行标记，这样才可以进行示踪以及检测。
核酸分子杂交因具有高灵敏度和高特异性，在分子生物学领域中已广泛地使用于克隆基因的筛选、基因组中特定基因序列的定性、定量检测等方面因为核酸分子杂交的灵敏度以及特异性都很高，因此这一技术已经在克隆基因筛选以及基因组之中待测的基因序列定性、定量检测之中得到了广泛的应用。
一文了解分子诊断常用技术
一文了解分子诊断常用技术随着分子生物学和分子遗传学的发展，越来越多的分子诊断学技术应用于疾病的诊断，彻底打破常规的诊断方式，不再以疾病的表型为主要依据推测疾病的发生发展及相关机制。
分子诊断学技术，通过检测遗传物质的结构或表达水平，不但发现了疾病与特定基因存在、转录及表达有关，而且个体基因多态性与疾病特定用药密切相关。
下面让我们深入了解一下分子诊断以及常用技术。
一、什么是分子诊断分子诊断（Molecular diagnosis）是指应用分子生物学方法检测生物体内遗传物质（DNA/RNA）的结构或表达水平的变化而做出诊断的技术，也可称为基因诊断（Gene diagnosis)。
狭义上的分子诊断主要是指核酸诊断，即对病人个体DNA或RNA样本的病原性突变的检测，根据这些依据对疾病做出诊断，涉及分子生物学中的多种高尖端技术，如PCR、分子杂交、生物芯片等；广义上的分子诊断则包括基因治疗、生物治疗以及分子靶向治疗。
在临床上，分子诊断最早只应用于器官移植分子配型和传染病诊断领域。
随着技术不断进步，其应用领域持续扩大，分子诊断逐步应用于遗传病和肿瘤的早期筛查、诊断。
以后分子诊断将进一步扩大应用领域，适用于人类基因库的建立和大规模人群疾病筛查。
原理是应用分子生物学方法，检测病人的DNA、RNA或蛋白质的检测，再根据检测结果对疾病做出诊断。
二、分子诊断特点与传统诊断方法相比，分子诊断技术具有以下特点：（1）提高了准确性、精确性、灵敏度和特异性。
（2）与传统方法相比诊断时间早，可以做到早期诊断。
（3）所需样本量少。
（4）产前诊断和个体化治疗。
三、分子诊断技术及应用场景分子诊断领域主要包括PCR(qPCR 和 dPCR)、二代测序技术（NGS)、荧光原位杂交（FISH）和基因芯片等。
（1）PCR：原理：DNA在高温下形成单链，低温下按照碱基互补配对原则生成双链。
优缺点：灵敏度高、特异性强、简便快捷，但检测位点单一，仅能检测已知突变。
【企业诊断】第十三章分子诊断
前言
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灵敏度高
早期诊断性 已明确疾病表型与基因型的关系
适应性强
检测致病基因突变；分析与疾病连锁的遗传标志；建立 多基因疾病表型克隆；定量分析致病基因的表达水平
二、分子诊断策略
直接诊断——直接检测致病基因的突变
基因突变类型—缺失、点突变、重复、插入等
分子诊断临床应用-遗传性疾病的分子诊断精选全文
因此
是否存在BK病毒感染，形态学仅作为筛查 实验。
病毒核酸定量可有效地动态观察病毒核酸 的复制。
BK病毒核酸定量检测
用于检测BK病毒是否复制 为是否需要进行病理学检查提供依据 监测疾病和评价治疗效果 预防间质性肾病，防止移植远期失败
二、遗传性疾病的分子诊断
分子诊断能够检出家系中的致病基因 携带者或高危个体，能够在胎儿出生前判 断其是否为患者，因此分子诊断是降低单 基因遗传病发病率的根本措施。
BK病毒复制的检测 血、尿中BK病毒核酸定量检测 尿液中decoy细胞检查 尿沉渣涂片原位杂交 组织病理学检查（判断肾脏间质性肾病）
肾脏移植术后病人BK病毒检测的研究
对象 瑞金医院肾脏移植术后2个月~3年的患者95例 正常人标本60例 研究方法 尿沉渣细胞形态学检测 血、尿中BK 病毒DNA的定量检测
BK病毒于1971年首次从肾脏移植受体的尿液 中分离出。病毒主要在宿主的细胞核内进行 复制。
在美国，10岁以上的正常人群中60%～80%有BK 病毒感染史。
感染的病毒多潜伏于肾小管上皮细胞和尿道上 皮细胞中。
BK病毒的重新激活大部分是由于免疫机制缺陷 或大量使用免疫抑制剂后。
肾脏移植术后大量使用免疫抑制剂，使BK病毒重 新激活，大量复制。
一、基因检测在感染性疾病中的应用
SARS相关冠状病毒的分子诊断
2003年4月，香港研究者Peiris等报告了50 例严重 型急性呼吸道综合征(serious acute respiratory syndrome, SARS) 病人的临床表现和病毒学研究 结果。
一种新的冠状病毒 (Coronavirus) 是SARS的致病 原因。 (Lancet, 2003, 361: 9365)
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灵敏度高
早期诊断性 已明确疾病表型与基因型的关系
适应性强
检测致病基因突变；分析与疾病连锁的遗传标志；建立 多基因疾病表型克隆；定量分析致病基因的表达水平
二、分子诊断策略
直接诊断——直接检测致病基因的突变
基因突变类型—缺失、点突变、重复、插入等
间接诊断——应用DNA多态性为遗传标记进行连锁分析，
确定待测者是否得到带有致病的染色体，从而间接地作出 诊断
追求至善凭技术开拓市场，凭管理增 创效益 ，凭服 务树立 形象。2021年2月9日 星期二 下午12时30分57秒12: 30:5721.2.9
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DNA多态——RFLP、VNTR、SNP
4
二、分子诊断策略
DNA多态（DNA Polymorphism）
群体中每个个体DNA区域中等位基因（或片段）存在两种 或两种以上的形式，对基因功能没有影响，称DNA多态。
DNA分析中常用的遗传性多态性标记有3类：
1）RFLP：称限制性片段长度多态性，为第一代多态性标记； 2）重复序列多态性（VNTR）：如STR其重复次数在人群中存在 变异，形成多态即 VNTR ，为第二代多态性标记； 3）单碱基多态性（SNP）：发生在基因组中的单个核苷酸的替 代，为第三代多态性标记。
好的事情马上就会到来，一切都是最 好的安 排。下 午12时30分57秒下午12时30分12:30:5721.2.9
专注今天，好好努力，剩下的交给时 间。21.2.921.2.912:3012:30: 5712:30:57Feb-21
牢记安全之责，善谋安全之策，力务 安全之 实。2021年2月 9日星 期二12时30分57秒Tuesday, February 09, 2021
Normal βΑGene Probe——与正常 Probe βΑ杂交稳定 Mutation βS Gene Probe——与异常
βS杂交 稳定
镰状红细胞贫血患者基因组的ASO探针杂交 斑点杂交结果： βΑ/βΑ βΑ/βS βS/βS
正常探针 异常探针
20
Leber 病患者 PCR/SSCP分析
等位基因特异寡核苷酸探针（ASO）
引物1 5’
点突变（C to T）
探针1 3’
G
3’
引物2 5’
探针2 3’
5’
A
限制性片段长度多态性分析（RFLP） ➢ 原理
指DNA序列上发生一个变异后获得或丢失了一 限制性识别位点，使DNA限制性片段长度发生 变化，在人群中形成两种或两种以上的限制性 类型 利用特定限制性识别位点进行基因分析
加强自身建设，增强个人的休养。2021年2月 9日下 午12时30分21.2.921.2.9
精益求精，追求卓越，因为相信而伟 大。2021年2月 9日星 期二下 午12时30分57秒12:30:5721.2.9
让自己更加强大，更加专业，这才能 让自己 更好。2021年2月下午 12时30分21.2.912:30February 9, 2021
第十二章 分子诊断
一、分子诊断的概念和特点
概念：
利用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法， 通过检测基因结构或其表达水平是否正常，从而对人 体健康状态和疾病作出诊断的方法。
传统的诊断：表现型→基因型 基 因 诊 断：基因型→表现型
（ 逆向诊断）
一、分子诊断的概念和特点
特点
特异性强
分子诊断的前提
➢ 优点
• 检测基因变异，具有操作简便、快速特点，不需特殊设 备，适用于大样本筛选。 • 己广泛应用于检测各种病原体基因的点突变及缺失突变， 基因的多态性分析等。
（ PCR-SSCP）示意图
DNA测序
DNA自动测序结果举例
DNA芯片技术
四、分子诊断的应用及举例
遗传疾病 肿瘤 感染性疾病 判断个体疾病易感性 器官移植组织配型 法医学中个体识别、亲子鉴定
三、分子诊断常用技术
核酸分子杂交技术 等位基因特异寡核苷酸探针(allele specific
oligonucleotide, ASO) DNA限制性长度多态性(restriction
fragment length polymorphism, RLFP)分析 PCR-SSCP DNA测序 DNA芯片技术
相信相信得力量。21.2.92021年2月9日 星期二 12时30分57秒 21.2.9
谢谢大家！
生活中的辛苦阻挠不了我对生活的热 爱。21.2.921.2.9Tues day, February 09, 2021
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镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
MstⅡ酶切位点(CCTNAGG)
GAG → GTG ↓
谷Aa→缬Aa 5´
3´
1.15kb
×
正常基因
5´
3´
1.35kb
突变基因
镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
1.35kb
﹣
1.15kb
0.2kb
正常人
+
突变携带着 患者
镰状红细胞贫血患者基因组的ASO探针杂交
加强交通建设管理，确保工程建设质 量。12: 30:5712:30:5712:30T uesday , February 09, 2021
安全在于心细，事故出在麻痹。21.2.921.2.912:30:5712:30: 57Febr uary 9, 2021
踏实肯干，努力奋斗。2021年2月9日 下午12时30分21.2.921.2.9
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安全放在第一位，防微杜渐。21.2.921.2.912: 30:5712:30:57February 9, 2021
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科学，你是国力的灵魂；同时又是社 会发展 的标志 。下午12时30分57秒 下午12时30分12:30:5721.2.9
每天都是美好的一天，新的一天开启 。21.2.921.2.912:3012:30:5712:30:57Feb-21
RLFP分析法
RFLP分析
➢ 优点 • 分辩率高，无需标记,重复性好，简便快速直观 • 主要用于核酸变异分析比较, 微生物的分群分型， 癌基因分析，遗传病的诊断等。 ➢ 局限
只能应用突变引起限制性酶切位点改变筛选，检测 效率低。
PCR/单链构象多态性分析（SSCP）
➢ 原理
将经扩增的DNA片段变性形成单链，由于序列不同，单 链构象就有差异，在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳的迁移率 不同，通过与标准物的对比，即可检测出有无变异。