实验三 组织分离法

一、实验目的
学习物理（机械）分离制片方法；
学习化学分离制片方法。
二、实验材料及用品
实验材料：叶片（固定和新鲜）、南瓜茎。
实验用具：载、盖玻片；显微镜；镊子；离心 机等。 实验药品：蒸馏水、梯度酒精、 ½ 二甲苯+ ½ 纯酒精，Naocl， ½ 10%铬酸+ ½ 10%硝 酸离析液，二甲苯，I-KI，1%番红水溶液， 1%番红酒精溶液、加拿大树胶。
气孔器
气 孔 器 类 型
无规则型
不等型
平列型
横列型
离析法
杨茎的木纤维和导管分子
五、作业
实验完毕，每人交制好的玻片标本2片（包
括1片表皮制片和1片离析制片），在标签
纸写上玻片名称及自己的姓名和日期；
实验报告（姓名和日期）
水洗
水洗数次，在离 心管中进行
染色（1%番红的50%酒精溶液 4-24h或更长）
水洗（7%AL，1-2次） 脱水 （50%， 70%， 85%， 95% AL 各5min，100%AL，两次，每次5min） 透明 （½ 二甲苯+ ½ 100%酒精，二甲苯 各5min） 封藏 镜检
四、实验结果
表皮制片：表皮细胞的形态？气孔器的类型？ 离析制片：南瓜茎的导管及木纤维形态？
粘片、烘片
脱水（50%，70%，80%，95%，100%， ½ 二甲苯+ ½ 100%酒精，各2min） 透明（二甲苯） 封固
三、实验步骤（二）——离析制片步骤
取材
将茎切成1cm长， 撕成细丝状
加热
离析（10%铬酸：10%硝酸=1:1 离析液）
离析液为材料的20倍，30-40℃的温箱中24-48h
三、实验步骤（一）——表皮制片步骤
选材
靠近中脉部分
固定（FAA固定液，24h）
清洗
Naocl
撕取下表皮
染色（1%番红水溶液 30min-1.5h）
染色期间观察如染色液干涸，再滴加
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水洗（洗去浮色）
载玻片上滴一滴蛋白黏贴剂，期间加入一滴 水，移入叶表皮，水分吸干后放入烘箱烘干
分色（用盐酸水）
水洗（洗去酸液）
实验三 组织分离法
组织分离法（离析法）
组织分离法：是利用物理（机械）的方法或化学的方 法（如药品或者酶的作用）把生物细胞间的胞间层溶 解，使生物组织间的细胞分离开来，从而得到单个完 整细胞，以便在显微镜下观察细胞的立体形态结构。
缺点：由于组织的细胞间彼此分离，细胞间的关系无 法显示，也就不可能了解整个组织的结构。