主管中药师 相关专业知识 中药药理学第二十单元 中药新药(医院制剂)药效学和毒理学研究基本知识

中药药理学——第二十单元中药新药（医院制剂）药效学和毒理学研究基本知识细目一中药新药主要药效学研究基本知识要点一受试药与实验动物的要求（1）含义：受试药物是药效学研究的对象和物质基础。

（2）对受试药的要求为：处方固定制备工艺、药品质量标准应基本稳定剂型和质量标准应与临床用药基本相同可选用不含赋形剂的中药提取物。

（3）动物的选择：要注意动物的种类、品系及质量、健康状态等。

考虑对药效学检测指标的敏感性，注意与临床病人反应的一致性。

尽量选择功能、结构与人类相似的实验动物，使其对药物的反应接近人类。

选用符合等级要求的健康动物，并附有供应单位的合格证书。

目前我国的药理学研究大多采用清洁级动物或SPF级动物。

（4）药理学研究广泛采用的动物种系有：昆明种小鼠、Wistar大鼠、SD大鼠、青紫蓝兔、新西兰白兔、豚鼠等。

（5）研究工作一般优选雄性动物或雌雄各半做实验，雌者应未孕。

（6）选用雌性动物的目的：为观察药物的——避孕作用、保胎作用、对生殖期和围产期的毒性等要点二实验设计的基本要求各类新药主要药效试验至少应设3个剂量组。

大动物（犬与猴等）可设2个剂量组。

小动物如小鼠和大鼠每组动物数至少10～14只大动物每组动物数不少于6只。

1.给药剂量合理的剂量设计在药效设计中占有重要的地位（1）按动物体重估算临床等效剂量：已知其临床人日用量可推算出动物每公斤体重用量。

在药效学试验的3个剂量组中，其中1个剂量应相当于临床的等效剂量[指根据体表面积折算法换算的在同等体表面积（m2）单位时的剂量]。

实验时常常以等效剂量作为中剂量，大、中、小剂量差为2～3的等比级数为宜。

（2）根据预试验：一般不论用何种方法选择有效剂量均应通过预试验找出最小有效量，再做正式试验。

（3）根据急毒试验结果：凡能测出LD50。

可用其1/20～1/10作为有效剂量的参考。

（4）考虑长毒剂量设计：药效试验高剂量组应明显低于长期毒性试验的中剂量组，为此药效试验的高剂量组，不宜超过人用量的20倍（指大鼠试验）。

2.给药途径对于1、5类中药新药——采用两种给药途径（其中主要途径应与临床相同）6类中药复方新药——可仅用一种与临床一致的给药途径。

溶解性好——可注射给药，注射给药能保证药物的吸收。

口服给药——吸收不规则，生物利用度较低，量效关系常常不明显。

特殊情况，给药途径难以保持与临床一致，如静脉注射剂，在进行大鼠长期毒性试验时，可采用腹腔注射或皮下注射方法给药，但如制剂有刺激性，则不宜使用。

要点三实验结果的处理与资料的整理（1）对实验结果进行数据处理和分析的目的：主要是证实结果是否符合实验设计的假说，判断结果的可靠性及准确性等；并且经过归纳、综合找出内在规律。

（2）实验数据处理大多求助于统计，中医药实验研究中所观察或测量的数据：计数资料或定性资料的显著性检验一般采用X2检验；计量资料或定量资料，两组间实验结果比较常用t检验，多组间的实验结果用方差分析；等级资料用等比差值法、等级序值法、秩和法及Ridit法等非参数统计分析。

（3）实验研究中，对实验数据应保持真实性，不能轻易废弃。

超过3个标准差——可考虑废弃不用。

细目二中药新药一般药理研究基本知识一般药理学研究是指主要药效学作用以外广泛的药理学研究。

通过一般药理学研究，确定受试物可能关系到人的安全性的非期望出现的药物效应；评价受试物在毒理学和/或临床研究中观察到的药物不良反应和/或病理生理作用；研究所观察到的和/或推测的药物不良反应机制，可为临床研究和安全用药提供信息，也可为长期毒性试验设计和开发新的适应证提供参考。

要点一实验动物的选择实验动物常用小鼠、大鼠、犬等。

常用清醒动物进行试验。

使用麻醉动物——应注意麻醉药物的选择和麻醉深度的控制。

要点二观察指标1.中枢神经系统动物的一般行为表现、姿势、步态、有无流涎、肌颤及瞳孔变化等；定性和定量评价给药后动物的自发活动、机体协调能力及与镇静药物的协同/拮抗作用。

如出现明显的中枢兴奋、抑制或其他中枢系统反应时，应进行相应的体内或体外试验进一步研究。

2.心血管系统给药前后血压（包括收缩压、舒张压和平均动脉压）、心电图（包括QT间期、PR间期、ST段和QRS 波等）和心率等的变化。

治疗剂量出现明显血压或心电图改变时，应进行——（体内或体外试验）进一步研究。

3.呼吸系统给药前后的呼吸频率、节律和呼吸深度等。

治疗剂量出现明显的呼吸兴奋或抑制时，应进行——相应的体内或体外试验的进一步研究。

细目三中药新药毒理学研究基本知识（1）中药毒理学研究：是预测中药安全性的重要手段，通过毒理试验了解中药的毒性反应、毒性程度、毒性发展过程及毒性作用是否可逆，这是新药审批不可缺少的环节。

（2）根据给药时间长短和目的，中药毒理研究通常分为：急性毒性试验、长期毒性试验、特殊毒性试验，以前两种为常用。

要点一毒理实验基本要求1.受试药物受试药物在剂型、制备工艺和药品质量方面，除可以不含赋形剂外，应与推荐临床实验的药物完全一致。

2.实验动物（1）对实验动物的种类、品系年龄、性别、体重、健康状况、饲养条件应有详细报告。

写明供应单位，有生产合格证者，应写明其合格证号。

（2）对急性毒性实验常规首选小鼠，长期毒性实验常采用大鼠和犬。

（3）毒性实验的动物应为同一来源、同一品系的同一群体。

（4）一般宜雌雄各半。

受试动物年龄一般宜用刚达到性成熟的动物。

3.动物饲养条件应在GLP实验室进行。

要点二毒性实验研究内容1.急性毒性试验A.含义：急性毒性试验是指受试动物在一次大剂量给药后所产生的毒性反应和死亡情况。

B.表示方法：药物的急性毒性常用半数致死量（LD50）表示。

LD50愈小，药物毒性愈大。

应注意观察和报告毒性反应的症状C.许多中药的毒性很小，不能求出LD50，可改用最大给药量（MTD）来表示。

（1）半数致死量（LD50）（50%of Lethal dose）实验：LD50是指引起半数动物死亡所需的药物一次给药剂量，是定量地反应药物毒性大小的基本参数，且对于设计长期毒性试验，或药效学试验的剂量都有重要的参考价值。

①动物选择：一般用小鼠，小鼠年龄一般以6～8周龄，18～22g为宜。

性别以雌雄各半为宜。

雌雄分笼饲养。

给药途径和受试药物容积应一致给药途径与推荐临床研究的给药途径一致。

试验给药前要求禁食12小时，以控制条件一致。

②实验分组和观察时间：A.分组：实验时，将动物按体重随机分为4～5组，每组至少10只动物（雌雄各半）。

最大剂量组应达到或接近100%动物死亡最小剂量组死亡率为0或接近0各剂量组和死亡率之间应呈较好的线性关系，不能偏离过远，组间剂量比以0.65～0.85为宜。

B.时间：给受试药后立即观察动物反应情况，一般观察14天。

③环境条件：室温——20℃左右，一般——10℃～28℃之间。

④计算方法：LD50的计算方法很多，目前被推荐使用的为加权回归几率单位法（Bliss氏法）。

详细记录：实验日期、动物品种、性别、数量、受试物来源、实验方法、给药途径、观察时间及计算方法等。

（2）最大给药量（MTD）实验：最大给药量：是指动物能够耐受的最大给药体积和浓度而不引起死亡的受试药物用量。

方法：a.选用体重18～22g的小白鼠20只，雌雄各半；b.以动物能给药的最大浓度、最大容积的药量一次或一日内连续2～3次给予动物；c.给药后连续观察14天，动物不产生死亡；d.并详细记录动物反应情况；e.计算出总给药量（g/kg，系折合生药量计算）；f.此时的用药量即为小白鼠对该药的最大给药量；g.然后计算出最大给药量为用量的倍数。

2.长期毒性实验长期毒性实验的目的：是观察连续给予受试药物后，由于蓄积而对机体产生的毒性反应及其严重程度，找出毒性反应的靶器官及其损害的可逆性，确定无毒反应剂量，为拟定人用安全剂量提供参考。

（1）动物选择：a.应写明动物品系如wistar、SD或其他品系动物。

b.试验周期在3个月之内的，宜用6～8周龄大鼠。

c.试验周期在3个月以上的，宜用5～6周龄大鼠。

d.试验开始时，体重差异应在20%范围内。

e.雌雄各半，按性别、体重随机分组。

f.每组动物数量不少于20～40只。

（2）剂量组的设置：a.长期毒性试验应设三个或三个以上的剂量组。

b.高剂量组应有少部分动物出现明显毒性反应。

c.低剂量组应略高于药效学试验的有效剂量，此剂量下动物应不出现毒性反应。

d.在高低两个剂量组之间再设一个中剂量组。

e.高、中、低三个剂量宜以等比关系安排。

（3）对照组：不含赋形剂的制剂（如中药浸膏）作为受试药物——对照组可用水或其溶媒，受试药物采用临床试验所用的制剂——则对照组应给等溶剂的赋形剂。

（4）给药途径和方法：a.应与临床试验的途径一致。

b.口服药类应采用灌胃法，每天1次，每周7天连续给予。

c.试验周期超过90天，可考虑每周给药6天，每天给药时间应相同。

d.给药剂量应根据动物体重不断调整。

e.给药容积大鼠灌胃量一般是每100g体重1～2ml。

（5）观测指标：①一般状况观察：应观察动物外观体征、行为活动、腺体分泌、呼吸、粪便、摄食量、体重、给药局部反应，非啮齿类动物还应进行眼科检查、尿检、心电图检查等。

②血液学指标：一般应观察红细胞计数、血红蛋白、血细胞比容、平均血细胞比容、平均红细胞血红蛋白、平均红细胞血红蛋白浓度、网织红细胞计数、白细胞计数及其分类、血小板计数、凝血时间等。

当发现对造血系统有影响时，应进一步进行骨髓涂片的检查。

③血液生化学指标：天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、γ-谷氨酰转移酶、尿素氮（BUN）、肌酐（Crea）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血糖（GLu）、总胆红素（T-BIL）、总胆固醇（TC）、甘油三酯、钠离子浓度、钾离子浓度、氯离子浓度，以上指标均采用国际法定单位表示。

（6）系统尸解和病理组织学检查：①系统尸解：啮齿类动物需进行病理组织学检查的组织：脑（大脑、小脑、脑干）、脊髓（颈、胸、腰段）、垂体、甲状腺、食管、胃、肝脏、肾脏、脾脏、小肠和大肠、胰腺、肾上腺、心脏、肺、膀胱、骨髓、气管、主动脉、雄性动物睾丸、附睾、前列腺、雌性动物子宫、卵巢、坐骨神经、给药局部、淋巴结（包括给药局部淋巴结、肠系膜淋巴结）、胸腺、甲状旁腺、唾液腺。

非啮齿类动物需进行病理组织学检查的组织：脑（大脑、小脑、脑干）、脊髓（颈、胸、腰段）、垂体、胸腺、甲状腺、甲状旁腺、食管、唾液腺、胃、小肠和大肠、肝脏、胆囊、胰腺、肾脏、肾上腺、脾脏、心脏、气管、肺、主动脉、雄性动物睾丸、附睾、前列腺，雌性动物子宫、卵巢、乳腺，膀胱、坐骨神经、视神经、骨髓、给药局部、淋巴结（包括给药局部淋巴结、肠系膜淋巴结）。

②脏器系数：应对脏器和组织进行称重，并计算脏器系数具体脏器组织：脑、心脏、肝脏、肾脏、肾上腺、胸腺、脾脏、雄性动物睾丸、附睾、雌性动物卵巢、子宫。