酵母培养操作规程

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酵母扩培工作流程

酵母扩培工作流程

酵母扩培工作流程1,菌种选购首先购买具备国家权威机构认可(或注册)的单位提供的菌种,并与提供菌种的科研单位沟通,让其将此菌种制成二十支冻干管(便于常温下长期保存不会变异),以后每年拿出一支冻干管进行转移、保藏(使用至当年年底)、扩培。

这种方式培养菌种可以确保生产上使用的酵母不会变异、退变。

2,菌种移植将菌种移植在斜面培养基上(4-7支斜面管),25°培养2-3天,挑选出边缘整齐、呈乳白色无污染长势良好的菌株两只管,放入4°冰箱内保存(注明移种日期、操作人、菌株特性等信息,同时做好笔记)。

另选出一支长势良好的菌株移至斜面培养基上(活化)培养2-3天,此次最好移植3-5支斜面培养基。

最后从此斜面上挑选出1支长势最好的菌种(待用),用于下一步扩培。

3,实验室扩培取上述一支活化过的待用菌种,挑一菌耳接种至含有10ml液体培养基试管内,最好接种3-5管以防失败),25°培养1—2天,培养期间每隔半小时用手震荡一次充氧(或放在恒温振荡器内培养)。

选出发酵旺盛的液体试管(掌握好移种时间非常重要),分别全量移至装有100ml麦汁的300ml三角烧瓶内(4个300ml的三角烧瓶),22°培养1-2天,培养期间每隔半小时摇动一次(或放在恒温振荡器内培养)。

然后全量分别移至装有1500ml麦汁的3000ml烧瓶内(三个3000烧瓶),19°培养1-2天,培养期间每隔半小时摇动一次(或在恒温振荡器内培养)。

将已培养好的(掌握移种时间非常重要)3000ml烧瓶内的麦汁分别全量移入15L麦汁的卡氏罐内(卡氏罐内的麦汁事先杀好菌,冷却至接种温度后再接种),16°培养1-2天,培养期间应定期充氧(每隔3小时用无菌压缩空气充氧5分钟)。

4,生产车间扩培卡氏罐内培养1-2天(酵母数达到:5-8x107个/ml,将卡氏罐内的麦汁最大按1:10的比列全量移至培养罐(培养罐内的麦汁要二次杀菌冷却后才能接种),14°C下培养1-2天(酵母数达到:5-8x107个/ml)后,按1:5的比列转接至下一扩大罐(可直接取沉淀槽冷却的麦汁),培养期间每隔2小时充氧10分钟,转接之前镜检酵母数、死亡率、杂菌。

酵母菌的培养方法

酵母菌的培养方法

酵母菌的培养方法酵母菌的培养方法可以分为传统培养法和现代培养法两种。

传统培养法主要包括自然培养法和选择性培养法,而现代培养法主要包括液体培养法和固体培养法。

自然培养法是最简单直接的培养方法。

首先,从酵母培养基中取少量酵母菌涂布在含有培养基的琼脂平板上,然后在28-30C下培养。

培养过程中酵母菌会形成单个可见的菌落,菌落中的酵母菌数量逐渐增加。

最后,可以将单个菌落转移到液体培养基中进行大规模培养。

选择性培养法是为了筛选出某种特定的酵母菌。

这种方法通常使用高糖液体培养基,如YE培养基,以及添加有特定抗生素或药物的固体培养基。

只有特定的酵母菌能够在这些特殊条件下生存下来。

现代培养法主要用于大规模酵母菌的生产。

液体培养法最适用于此类培养。

首先,将酵母菌悬浮液接种在含有营养物质的液体培养基中,然后在适当的温度和搅拌条件下培养。

液体培养法能够提供较高的菌落密度,并且可以根据需要进行连续培养。

固体培养法是在固体的培养基上进行培养。

首先,将酵母菌悬浮液均匀涂布在含有琼脂的培养基上,然后在适当的温度下培养。

固体培养基可以提供菌落,并且可以用于进行营养状况和形态特征的观察。

无论是传统培养法还是现代培养法,都需要注意以下几点:首先,选择正确的培养基和培养条件,以适应不同酵母菌的生长要求;其次,保持培养条件的稳定性,确保菌落的健康生长;最后,定期检测和鉴定培养中的酵母菌,确保培养纯度。

虽然酵母菌的培养方法有所不同,但需要保持一定的基本原则。

首先,遵循无菌技术和操作规范,以减少外界微生物的污染。

其次,控制培养基的pH值和温度,以促进酵母菌的生长。

最后,定期检测培养过程中的营养物质和代谢产物,以便及时调整培养条件。

总之,酵母菌的培养方法是多样的,可以根据实际需要选择适合的方法。

通过合理的培养条件和操作规范,可以获得高质量和高产量的酵母菌。

酵母菌表面展示的酵母细胞的培养与表达步骤

酵母菌表面展示的酵母细胞的培养与表达步骤

酵母菌表面展示的酵母细胞的培养与表达步骤酵母菌表面展示技术是一种重要的生物工程技术,可以通过将目标蛋白质或多肽序列表面展示在酵母菌细胞表面,从而实现蛋白质的高效表达和展示。

本文将介绍酵母菌表面展示的酵母细胞的培养和表达步骤。

1.准备培养基首先,准备含有所需营养物质的培养基。

常用的培养基包括YPD培养基(酵母粉蛋白质培养基)、SD培养基(合成蛋白质培养基)和SC培养基(选择性培养基)。

根据实验需要选择合适的培养基,并按照相关文献或方法指南进行配置。

2.酵母细胞传代培养将酵母细胞的初始培养物接种到含有适当培养基的无菌试管或烧瓶中。

根据实验需要,可以选择不同规模的培养容器,如试管、烧瓶或发酵罐。

在适当的温度下,用摇床或震荡培养器进行培养,保持适当的培养条件(如温度、pH值和氧气供应),直至菌液达到合适的菌密度。

3.感应表达载体将要表达的目标蛋白质或多肽序列插入相应的表达载体中,并将这些载体转化到酵母细胞中。

常用的表达载体包括pYD1和pYD2。

将重组载体和酵母细胞一同处理,使其进行感应表达。

4.酵母菌表达培养接种已感应表达的转化菌落到含有选择性培养基的培养容器中。

根据实验需要,可以选择添加相应的抗生素进行筛选。

将菌液继续在适当的培养条件下培养,并监测菌液的生长情况。

5.表达蛋白质的定量和纯化通过Western blot、ELISA等技术验证目标蛋白质或多肽序列的表达情况,并定量蛋白质的表达水平。

根据实验需要,可以采用亲和层析、离心和蛋白质纯化技术对表达的蛋白质进行纯化。

6.酵母菌表面展示将纯化的蛋白质重新悬浮于含有适当培养基的培养液中,并与酵母细胞进行共培养。

通过培养时的适当处理(如温度的改变、pH值的调整、特定培养基成分的添加等),使表达的蛋白质或多肽序列能够准确地定位和展示在酵母细胞表面。

7.酵母菌表面展示的验证通过免疫荧光、流式细胞术和酵母菌表面结构的特异性分析等方法,检测和验证酵母菌表面展示的效果。

酵母标本制作流程

酵母标本制作流程

酵母标本制作流程一、准备材料。

咱得先把要用的东西都找齐喽。

需要有酵母,这可是主角呢。

然后是载玻片和盖玻片,这俩就像是舞台和幕布一样,给酵母搭建展示的地方。

还有滴管,它就像个小运输员,负责把酵母送到载玻片上。

再有就是染色剂啦,这能让酵母更好地被我们看到,就像给酵母穿上漂亮的衣服。

也不能少了显微镜,这可是观察酵母标本的神器。

二、酵母培养。

在制作标本之前,咱得先把酵母养得胖胖的。

可以找个小容器,放上一些适合酵母生长的培养基,就像给酵母做了个小食堂。

把酵母放进去,然后给它放在合适的温度下,就像给它找了个舒适的小窝。

酵母就会在这个小窝里欢快地生长啦。

三、标本制作。

1. 取载玻片。

先把载玻片拿出来,用擦镜纸把它擦得干干净净的,就像给它洗个澡一样,这样酵母在上面住着才舒服。

2. 滴酵母液。

用滴管轻轻地吸取一些含有酵母的液体,然后小心地滴在载玻片的中央。

这时候要像对待小宝贝一样,不能滴太多也不能滴太少,太多了会溢出来,太少了又看不到酵母啦。

3. 染色。

如果需要染色的话,这时候就可以把染色剂滴在酵母液上啦。

染色剂会和酵母发生神奇的反应,让酵母变得五颜六色的,可好看了。

4. 盖盖玻片。

拿出盖玻片,从一侧慢慢地盖下去。

这就像给酵母盖被子一样,要轻轻地,要是太用力了,酵母可能就被压坏了,那可就不好了。

四、观察。

标本做好了,就可以放在显微镜下观察啦。

调整好显微镜的焦距,就能看到小小的酵母啦。

它们有的像小椭圆,有的像小香肠,形态各异,可有意思了。

就好像在微观世界里看一群小精灵在跳舞一样。

酵母标本制作其实并不难,只要我们认真细心,就能做出很棒的标本,然后就能在微观世界里探索酵母的奥秘啦。

这个过程就像是一场小小的冒险,每一个步骤都充满了惊喜呢。

酵母扩培工艺

酵母扩培工艺

酵母扩培工艺酵母扩大培养工艺1、目的规范酵母扩培作业程序,有效控制扩培工艺参数,保证培养酵母质量均一、稳定。

2.适用范围适用于实验室、酿造车间现场扩培和锥罐扩培工序。

3.职责由公司技术处负责编制、修改,实验室和酿造车间负责实施。

4.规定内容4.1实验室培养4.1.1培养基制备流程4.1.1.1取12度生产定型(热或冷)麦汁,调整pH至5.3-5.5,进行稀释,稀释比例以最终煮沸浓度控制在12度为准。

4.1.1.2稀释后麦汁冷却(或加热)至40℃按每升2个蛋清搅至起泡后打入。

升温至60℃保温30分钟,保温结束后升温至100℃煮沸30分钟。

4.1.1.3检测调整浓度后过滤、分装入试管、小三角瓶、大三角瓶,0.07Mpa灭菌30分钟。

4.1.1.4灭菌后培养基要贴有制备日期标签,空培(室温放置)3天以上确认无菌后方可使用。

4.1.1.5卡氏罐培养基制备采用过滤后热麦汁装入清洗并经0.10Mpa蒸汽杀菌1小时后的卡氏罐中0.10Mpa灭菌30分钟,提前1-2天完成,确保接种温度稳定。

当天能够迅速冷却的,则取当天麦汁处理,冷却4.1.2无菌室卫生操作流程4.1.2.1每天对室内进行30分钟紫外杀菌。

超净台用前提前打开风机及自带的紫外灯灭菌30分钟。

4.1.2.2无菌操作前对无菌室进行全面彻底清洁。

地面、墙壁、天棚及空间采用甲醛熏蒸或75%酒精擦试。

同时用紫外杀菌30分钟。

4.1.2.3卡氏罐接种,超净台无法操作时,室内空间当天再次进行上述空间杀菌。

4.1.2.4无菌室内应避免其他物品的摆放,尤其操净台面。

以免破坏空气层流。

4.1.2.5每次扩培时应对无菌室内空间及超净台进行两次空气捕捉检测。

斜面接出及卡氏罐接种时各进行一次。

4.1.3实验室阶段扩培工艺流程1.安培管(或斜面菌种)在无菌条件下,接入装10ml麦汁培养液的18×180mm试管中,在25℃培养箱中活化培养24小时(如从安培管转接,需再活化一次).2.将活化后的试管培养液摇均,在无菌条件下,分别接1ml入装10ml麦汁培养液的18×180mm试管中,在25℃培养箱中培养活化24小时.3.将试管中的10ml酵母培养液转接到装50ml麦汁培养液的150ml三角瓶中, 在22℃培养箱中培养24小时.4.将三角瓶中的50ml酵母培养液转接到装500ml麦汁培养液的1000ml三角瓶中, 在19℃培养箱中培养24小时.5.将三角瓶中的500ml酵母培养液转接到装3000ml麦汁培养液三角瓶中, 在19℃培养箱中培养24小时.6.将三角瓶中的3000ml酵母培养液转接到装25L麦汁培养液的卡氏罐, 在13℃培养箱中培养24小时~48小时.7.将卡氏罐中的酵母培养液转接到装300L麦汁培养液的汉生罐(种子罐),在13℃条件下培养24小时~48小时.4.1.3.1斜面菌种挑取应在距离斜面顶部1/3处边缘部位轻挑一菌耳。

酵母菌的培养流程

酵母菌的培养流程

酵母菌的培养流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成,希望大家下载以后,能够帮助大家解决实际的问题。

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酵母培养流程

酵母培养流程

酵母培养流程
1、4度保存原始种子液
2、配制生理盐水(0.9g/100ml),灭菌备用,按原种:生理盐水=1:9 稀释原种。

3、配制PDA培养基,灭菌,无菌条件下倒入平板,制作平板培养基,无菌条件下倒入试管,制作斜面培养基,无菌条件下,将稀释的种子液用玻璃棒蘸取0.2ml 在平板上涂布,然后放恒温培养箱培养24小时。

4、24小时后,观察平板培养基,可看到类白色菌落长出。

无菌条件下挑取长势良好菌落使用接种环挖取菌落,接种至斜面培养基,恒温培养箱培养24小时。

5、24小时后,可见斜面培养基长满类白色菌落,该斜面培养基可长期4度保存。

建议多做几只斜面培养基。

6、配制摇瓶培养液,按盐、酱油、葡萄糖比例分别为8.51%、10%、5%配制,酱油需要AN1.0以上,配制好后灭菌,然后无菌条件下分装至250ml小摇瓶中、1000ml大摇瓶中,无菌条件下保存备用。

7、冰箱中取出做好斜面菌种,无菌条件下用接种环将菌种挑至小摇瓶中,放置摇床中30度培养24小时。

8、24小时后,小药瓶菌种生长,已可闻到一定的酒香脂香,说明菌种生长良好,无菌条件下可以倒入大摇瓶中,放置在摇床,30度培养24小时。

9、大摇瓶培养24小时后,可闻到明显的酒香脂香,可接种到酵母扩培罐中培养。

10、按盐、酱油、葡萄糖比例分别为8.51%、10%、5%配制酵母培养液,121度,灭菌30十分钟,气压接种,培养24小时,检测酵母数,5亿以上合格,可接入大罐。

大罐环境30度,ph5.0左右。

酵母菌培养的一般流程

酵母菌培养的一般流程

酵母菌培养的一般流程酵母菌培养听起来就很有趣呢!一、准备工作。

要培养酵母菌,咱得先把要用的东西都准备好。

你得有个合适的容器,就像小瓶子或者小罐子之类的。

这个容器得是干净的哦,要是脏兮兮的,酵母菌可就不乐意在里面生长啦。

然后呢,还需要培养基,这就像是酵母菌的食物一样。

培养基有很多种,咱们可以自己配,也可以买现成的。

自己配的话,要小心各种成分的比例,就像做饭放调料一样,多一点少一点都可能影响最后的结果。

还有很重要的一点,就是要有酵母菌种,这就像是酵母菌的小种子,没有它可没法开始培养呢。

二、接种。

有了前面那些东西,就可以开始接种啦。

把酵母菌种放到培养基里,这个过程要小心一点哦。

就好像是把小种子种到土里一样,要轻轻地放。

要是太粗鲁了,可能会把菌种弄伤,那它就长不好啦。

接种的时候呢,要保证环境相对干净,最好是在比较安静、没有太多灰尘和杂质的地方进行。

三、培养环境。

酵母菌对环境还是有点小挑剔的呢。

温度很重要,不同种类的酵母菌适合生长的温度不太一样。

一般来说,大多数酵母菌在比较温暖的环境里长得比较好,大概就是20到30摄氏度之间。

要是太冷了,酵母菌就会像人在冬天不想动一样,生长得很慢很慢;要是太热了,那它们可就受不了啦,可能就直接罢工了。

除了温度,湿度也有点影响。

不过在小瓶子或者小罐子里培养的时候,湿度一般不用特别去调整。

还有哦,要给它们一点空气,酵母菌虽然不是像我们人类一样大口呼吸,但是也需要一点氧气来进行它们的小活动呢。

四、观察。

在酵母菌培养的过程中,要时不时地去看看它们。

就像照顾小宠物一样,看看它们有没有好好长大。

刚开始的时候,可能看不到什么明显的变化,但是过几天,你就会发现培养基里有点不一样了。

可能会变得有点浑浊,这可能就是酵母菌在里面繁殖的迹象呢。

你还可以用个小显微镜看看,要是有显微镜的话,就能看到酵母菌一个个小小的、圆圆的样子,超级可爱。

五、收获或者保存。

如果酵母菌培养得很好,就可以收获啦。

要是你想继续用这些酵母菌做别的事情,比如做面包或者酿酒,那就可以把它们取出来用啦。

酵母分批培养实验操作方法

酵母分批培养实验操作方法

酵母分批培养实验操作方法一、目的1. 掌握微生物分批培养的生物反应器操作;2. 掌握的菌体浓度、总糖等参数测定方法;3. 掌握分批培养的生长动力学及生长曲线的测定方法。

4. 了解酵母的生长特性。

二、原理分批反应操作是指基质灭菌、接种以后,除了好氧反应需要在反应过程中通入无菌空气、消除泡沫所用的消泡剂以及维持一定pH值所用酸碱之外,反应过程中不再加入反应基质。

基质浓度、产物浓度以及细胞浓度均随反应进行的时间而变化,尤其是菌体本身将经历不同的生长阶段(在培养的过程中,微生物的生长可分为迟缓期、对数生长期、减速期、静止期),显示出不同的催化活力。

基本特征是:反应物料一次加入一次卸出;反应器物系的组成仅随时间而变化,即随着培养的进行,基质的浓度下降,菌体量增加,产物增加。

因此它属于一非稳态过程。

三、主要试剂与设备酵母、培养基、菲林试剂、0.05N NaOH 1mg/ml葡萄糖标准溶液等100L机械搅拌式反应器、pH计、离心机、分光光度计等四、步骤(一)准备工作1. 发酵罐的组装工作(1) 连接好冷却水管。

若采用自来水冷却,要考虑到白天与夜间水压的变化,尽可能采用耐压管,连接部要充分牢固,并且注意连接管管径与自来水管管径应一致。

(2)由于通人的空气有一定压力,应注意连接压缩空气的管子应能承受一定压力。

(3)安装pH及溶解氧等检测装置,注意各接线口不要出现差错。

由于操作过程要和水打交道,故线路连接一定要注意安全,要特别注意防止漏电。

2. 种子培养(1) 液体试管培养:自斜面菌种挑取一环酵母菌体,接入装有10ml 10-12oBx无菌麦芽汁的液体试管中。

摇匀,置于30℃培养箱24h.(2) 三角瓶装培养:将上述培养好的液体试管种子接入250m1三角瓶的灭过菌的100 10-12oBx的麦芽汁,接种量10%,30℃培养箱15-20h.3. 培养基的配置:按配方配置发酵罐。

培养基的体积通常为罐容积的50-60%。

酵母菌培养操作

酵母菌培养操作

酵母菌培养操作一、引言酵母菌是一类单细胞真菌,广泛存在于自然界中,是生物学研究中常用的模式生物。

酵母菌在许多领域都有重要的应用,如发酵工业、食品工业和生物医学研究等。

为了研究酵母菌的生物学特性和开发应用,科学家们需要进行酵母菌的培养操作。

本文将介绍酵母菌培养操作的步骤和注意事项。

二、酵母菌培养操作步骤1. 选择培养基:选择适合酵母菌生长的培养基,常用的培养基包括YPAD培养基、YPD培养基和SD培养基等。

培养基的选择应根据具体实验目的和需求进行。

2. 预处理培养基:按照配方将培养基加入蒸馏水中,加热煮沸,然后冷却至室温。

在培养基中加入抗生素可以抑制杂菌的生长。

3. 接种酵母菌:将酵母菌从冰冻保存的培养物中取出,用一次性接种环或一次性吸管接种酵母菌到培养基中。

注意避免杂菌的污染。

4. 培养酵母菌:将接种好的培养基置于恒温摇床中,设置适当的温度和摇动速度,促进酵母菌的生长。

培养时间根据实验需求而定,通常为24小时。

5. 酵母菌的分离和传代:将培养好的酵母菌涂布在含有琼脂的培养基上,通过酵母菌的单个菌落分离得到纯化的酵母菌株。

然后,将纯化的酵母菌株传代至新的培养基中,以维持酵母菌的生长。

6. 储存酵母菌:将酵母菌株保存在低温下,通常为-80℃的冰箱或液氮罐中,以便长期保存和使用。

三、酵母菌培养操作注意事项1. 严格遵守无菌操作:在培养酵母菌过程中,必须保持无菌操作,避免杂菌的污染。

使用消毒柜、酒精灯和一次性试验用具等设备进行消毒和无菌操作。

2. 注意培养条件:酵母菌对培养条件较为敏感,温度、pH值和氧气含量等因素都会影响酵母菌的生长。

因此,在培养酵母菌时,应根据不同酵母菌株的生长特性进行优化培养条件。

3. 避免过度培养:过度培养会导致酵母菌的老化和死亡,影响实验结果。

因此,在培养酵母菌时,应根据实验需要确定合适的培养时间。

4. 酵母菌的纯化:为了获得纯化的酵母菌株,必须进行酵母菌的分离和传代。

在分离过程中,要注意避免不同菌株之间的杂交和杂交菌株的产生。

酵母菌的培养方法

酵母菌的培养方法

酵母菌的培养方法
酵母菌是一类常见的微生物,在实验室中进行酵母菌的培养是非常常见的实验操作。

下面是一种常用的酵母菌培养方法:
1. 准备培养基:常用的酵母菌培养基是酵母提取物蛋白胨培养基(YPD)。

将YPD培养基粉末按照制造商的说明配制成液体培养基,然后用自来水冲洗并加热灭菌。

将培养基倒入无菌培养皿或试管中。

2. 接种酵母菌:从已有的酵母菌培养物中取出一小部分,用无菌的酒精灯火或巴氏培养皿进行灭菌。

然后,用无菌的医用铁环或无菌吸管将酵母菌接种到培养基上。

3. 培养酵母菌:将接种好的培养皿密封,并放置在适当的温度下,通常是28-30摄氏度。

酵母菌会在培养基上生长,并形成可见的菌落。

4. 保持培养:为了保持酵母菌培养物的活性,可以定期将一部分菌落转移到新的液体或固体培养基中。

这可以通过从菌落中挑取一小部分酵母菌并进行接种来完成。

需要注意的是,酵母菌的培养实验需要严格无菌操作,并且要注意合理的培养条件和保存方式,以确保酵母菌的健康生长和活性。

此外,不同的酵母菌株可能对培养条件的要求不同,因此建议根据具体的实验目的和研究对象选择适当的培养方法。

霉菌和酵母菌总数标准操作规程

霉菌和酵母菌总数标准操作规程

霉菌和酵母菌总数检查标准操作规程1目的建立规范的霉菌和酵母菌总数检查标准操作规程,确保检查操作正确。

2范围本规范适用于本公司的霉菌和酵母菌总数检查操作。

3职责4术语及定义无5 内容5.1实验资源5.1.1仪器设备:恒温霉菌培养箱28℃、振荡器、三角瓶、酒精灯、高压灭菌器、恒温水浴锅。

5.1.2试剂:生理盐水、虎红培养基。

5.1.3耗材:90mm培养皿,10ml移液管、离心管。

5.2实验前准备5.2.1检查样本是否保持原有的包装状态。

容器不应有破裂,在检验前不得打开,防止样品被污染。

5.2.2接到样品后,应立即登记,编写检验序号,并按检验要求尽快检验。

5.2.3若只有一个样品而同时需做多种分析,如微生物、毒理、化学等,则宜先取出部分样品做微生物检验,再将剩余样品做其他分析。

5.2.4在检验过程中,从打开包装到全部检验操作结束,均须防止微生物的再污染和扩散,所用器皿及材料均应事先灭菌,全部操作应在符合生物安全要求的实验室中进行。

5.3样品制备5.3.1液体样品5.3.1.1水溶性的液体样品,可量取10mL加到90mL生理盐水中,如样品少于10mL,仍按10倍稀释法进行。

如为5mL则加到45mL生理盐水中,混匀后制成1:10检液。

5.3.1.2油性液体样品,取样品10mL,先加5mL灭菌液体石蜡混匀,再加10mL灭菌的吐温80,在40℃~44℃水浴油性液体样品,中充分混合,制成1:10检液。

5.3.2固体样品5.3.2.1称取10g,加到90mL灭菌生理盐水中,充分振荡混匀,使其分散混悬,静置后,取上清液作为1:10的检液。

5.3.2.2如有均质器,上述水溶性膏、霜、粉剂等,可称10g样品加入90mL生理盐水,均质1min~2min;疏水性膏,霜及眉笔、口红等,称10g样品,加入10mL灭菌液体石蜡,10mL 吐温80,70mL生理盐水,均质3min~5min。

5.4检验方法5.4.1取1:10 、1:100 、1:1000的检液各1ml,分别注入培养皿内,每个稀释度各用两个培养皿,注入融化并冷至45℃±1℃左右的虎红培养基,充分摇匀,凝固后,翻转平板,置28℃±2℃培养5d,观察并记录。

酵母菌培养

酵母菌培养

酵母菌培养
酵母菌培养是指将酵母菌种植在适宜的培养基中,提供适宜的营养
物质和生长条件,使酵母菌能够快速生长繁殖。

以下是一般的酵母菌培养步骤:
1. 准备培养基:选择适合酵母菌生长的培养基,可以是固体培养基(加入琼脂等凝固剂)或液体培养基。

培养基需要含有碳源、氮源、矿物质等必需的营养物质。

2. 准备酵母菌接种物:从酵母菌保存贮存的培养基中选取一株纯菌落,用无菌的勺子将其划取到少量无菌水中。

3. 接种:取一定量的酵母菌接种物加入到培养基中。

如果是固体培
养基,可以用接种枪或铁丝环将接种物平铺在培养基表面;如果是
液体培养基,可以直接将接种物倒入培养基中。

4. 培养:将培养基培养在适当的温度下(一般为25-30摄氏度),并提供适当的氧气、湿度等条件。

可选择静态培养或摇床培养等方式。

5. 观察生长:酵母菌培养一般需要一定的时间(几天到几周),观察培养基上是否有酵母菌生长。

生长过程中可以观察菌落形态、颜色等特征。

6. 存储:如果需要保留酵母菌株,可以将生长良好的菌落移至新的培养基上,并进行保存。

以上是酵母菌培养的一般步骤,具体培养条件和步骤可能因不同的酵母菌种类而有所不同。

在培养过程中要注意无菌操作,避免外界细菌、霉菌的污染。

酵母培养的流加工艺

酵母培养的流加工艺

酵母培养的流加工艺
酵母培养的流加工艺包括以下步骤:
1. 选择合适的培养基:根据所要培养的酵母种类,选择合适的培养基,包括碳源、氮源、微量元素等。

2. 预处理培养基:将培养基加热至适当温度(通常为121摄氏度)杀死潜在的污染微生物,然后冷却至适宜的温度。

3. 接种酵母:将所选的酵母菌株接种到预处理过的培养基中,使其开始生长。

4. 培养:将接种后的培养基置于适宜的温度(通常为30摄氏度)下培养一定时间,促使酵母菌生长繁殖。

5. 收获:当酵母菌生长到合适的密度和状态时,进行收获。

收获方法可以包括离心、过滤等步骤。

6. 后续处理:对收获的酵母进行后续处理,可以包括洗涤、干燥、冻干等步骤,以便储存和运输。

以上就是酵母培养的流加工艺的基本步骤,不同的酵母菌种可能会有一些特殊的加工要求,具体操作还需根据实际情况进行调整。

发酵过程各环节操作规程

发酵过程各环节操作规程

发酵过程各环节操作规程发酵是指利用微生物(如酵母菌、乳酸菌等)对物质进行代谢,产生有益的化学变化的过程。

在发酵过程中,各个环节的操作规程十分重要,下面将逐一介绍。

一、原料准备1.确定发酵原料的种类和质量,遵循配方要求。

2.对原料进行清洗消毒,以防止细菌和杂质的污染。

3.对原料进行切割或研磨,以增加微生物对原料的接触和附着。

4.按照发酵原料种类和要求进行配料混合,注意配料的均匀性。

二、培养液制备1.根据发酵菌株需求和培养液配方,准备发酵基础培养液,包括碳源、氮源、无机盐等。

2.准确称量和称取各种发酵培养介质成分,保证配方的准确性。

3.根据不同的发酵菌株要求,进行高压灭菌或高温灭菌,以确保无细菌污染。

三、接种和预培养1.根据发酵菌株特性和发酵目的选择合适的种属。

2.将培养基中的菌株转移到预培养基质中,进行初级培养。

3.对预培养基质进行一定的搅拌和通气等操作,以保证菌株的充分生长。

四、发酵罐和设备消毒1.在接种前进行发酵罐的彻底清洗和消毒,以保证其内部的无菌环境。

2.对发酵罐和发酵设备进行高压灭菌或高温灭菌,以杀死可能存在的细菌和病原体。

3.消毒后的设备要进行彻底的冲洗和干燥,以防止消毒剂残留。

五、培养液接种1.将预培养中培养好的菌株接种到发酵罐中的培养液中。

2.控制好接种量和比例,避免过多或过少的影响发酵过程。

3.搅拌培养液,使接种菌株均匀分布在培养液中。

六、发酵过程控制1.通过调节发酵罐中的温度、pH值、搅拌速度等参数,确保最适合微生物生长和代谢的环境。

2.在发酵过程中,随时监测和调整营养物质的添加量和氧气的供应。

3.定期取样,进行各项指标的检测,确定微生物代谢过程是否正常进行。

七、发酵结束和产物收获1.根据发酵菌株的繁殖和代谢特性,判断发酵是否结束。

2.停止供气和搅拌,将发酵液进行分离和收获产物。

3.进行产物的后处理,如过滤、浓缩、干燥等。

八、发酵设备清洗和消毒1.在发酵结束后,对发酵罐和发酵设备进行彻底的清洗和消毒。

酵母菌培养的一般流程

酵母菌培养的一般流程

酵母菌培养的一般流程酵母菌培养可有意思啦!一、准备工作。

咱得先把要用的东西都找齐咯。

培养酵母菌得有合适的容器,像那种干净的试管或者小烧瓶就很不错。

还有培养基,这就像是酵母菌的小食堂,要给它们准备好吃的呀。

培养基的种类有好多呢,不过常见的就包含了碳源,像葡萄糖啦,这就相当于我们吃的米饭馒头,是提供能量的;氮源也不能少,酵母提取物或者蛋白胨就挺好,这就像是给酵母菌补充蛋白质呢。

另外,还得有一些矿物质和维生素,虽然量不多,但就像我们吃菜时的微量元素一样重要。

当然啦,别忘了把这些东西按照一定的比例配好,就像做饭得掌握好调料的量一样。

二、接种。

东西都准备好了,就可以把酵母菌接到培养基里啦。

这就像是把小种子种到土里一样。

接种的时候要小心点哦,要保证酵母菌是活蹦乱跳地进入到培养基这个“新家”里的。

可以用接种环,在酒精灯火焰附近操作,这样能减少杂菌的干扰。

就像给酵母菌走一个特殊的“安全通道”,把它们平安地送到培养基里。

如果是从之前培养好的酵母菌里取出来接种,那可得看准了,取那些长得茁壮的酵母菌。

三、培养环境。

酵母菌也是很挑剔环境的呢。

温度得控制好,一般来说,不同种类的酵母菌适合生长的温度有点小差别,但大多数都在20℃ - 30℃之间。

这个温度区间就像是酵母菌的“舒适区”,在这个温度下,它们就会欢快地生长繁殖。

湿度也不能太干燥,要是太干燥了,酵母菌就像我们在大沙漠里一样难受。

另外,氧气也很重要。

有些酵母菌是好氧的,那就得给它们足够的空气,就像我们人要呼吸新鲜空气一样。

而有些酵母菌是兼性厌氧的,这就比较神奇啦,有没有氧气它们都能生存,不过氧气的多少也会影响它们的生长状态呢。

四、观察与维护。

在酵母菌生长的过程中,咱们得时不时去看看它们。

就像照顾小宠物一样,看看它们有没有好好长大。

可以用显微镜观察酵母菌的形态,看看它们是不是圆圆的、胖胖的,有没有出芽生殖之类的。

要是发现培养基里有奇怪的颜色或者味道,那可能是有杂菌污染了,这时候就得想办法解决。

酵母培养操作规程

酵母培养操作规程

本文主要介绍酵母的选育、保种、培养的操作工艺等。

目录第一章酵母扩培 (2)§1-1 实验室扩培 (2)1培养基制备 (2)2接种操作 (3)§1-2 生产现场扩培 (5)1准备工作 (5)2汉生罐接种操作 (5)3扩大罐扩培 (5)4二次(车间)扩大罐扩培 (6)第二章菌种保藏 (7)1实验室菌种保藏与活化 (7)2汉生罐菌种保藏与活化 (7)第三章酵母检测 (8)§3-1 取样 (8)1扩培液、发酵液及待滤酒等的取样 (8)2酵母泥的取样 (8)§3-2 检测 (10)1酵母细胞形态检测 (10)2酵母细胞大小测定 (10)3酵母泥外观检测 (11)4酵母细胞数和出芽率的测定(血球计数板法) (11)5酵母死亡率的测定(血球计数板法) (12)6酵母肝糖染色法 (13)7酵母凝聚性的测定 (14)8酵母死灭温度的测定 (15)9酵母发酵失重实验 (16)10酵母的呼吸缺陷型检测 (16)第一章酵母扩培§1-1 实验室扩培1培养基制备【试剂】:冷麦汁、蒸馏水、新鲜鸡蛋。

【器具】:试管(15×150)及(18×180)、小巴氏瓶(三角瓶)、大巴氏瓶(大三角瓶)、卡氏罐、中速滤纸、电炉、量筒、不锈钢锅、糖度计等。

【仪器】:杀菌锅、天平(精度0.1g)。

【方法】〖试管、三角瓶及巴氏瓶培养基的制备〗①取样:取糖化冷却麦汁,视麦汁浊度情况判定是否进行过滤。

2℃,按每0.5~1L使用一个鸡蛋的比例,加入打成泡沫的蛋清,在不断地搅拌下保温30min;然后升温煮沸30min;将煮沸后的麦汁用水浴冷至80~90℃,用双层中速滤纸过滤。

±②澄清:将麦汁加热至450.2°P。

±③调糖:将过滤后的麦汁用蒸馏水调整糖度为11④分装:试管(15×150)5mL,试管(18×180)10mL,分装小巴氏瓶(三角瓶)、大巴氏瓶(大三角瓶)。

酵母菌表面展示操作步骤中的培养和处理步骤

酵母菌表面展示操作步骤中的培养和处理步骤

酵母菌表面展示操作步骤中的培养和处理步骤酵母菌表面展示是一种常用于生物学实验室中的技术,它可以使研究者能够更好地了解酵母菌的结构和功能,以及它们在生物学过程中的作用。

在进行酵母菌表面展示实验时,培养和处理步骤是非常关键的。

下面我将详细介绍酵母菌表面展示操作步骤中的培养和处理步骤。

1. 酵母菌培养基的制备首先,我们需要准备适合酵母菌生长的培养基。

一般来说,酵母菌培养基包括碳源、氮源、无机盐和其他必要的营养成分。

在制备培养基时,我们可以根据实验需求添加适当的选择性标记物,以区分不同的酵母菌株。

2. 酵母菌的培养接下来,将制备好的培养基均匀地倒入培养皿或试管中,然后将酵母菌株接种进培养基中。

接种时,可以选择聚苯乙烯培养皿或试管,并在接种后用无菌棉塞或无菌膜封口,以避免外界的污染。

培养器的选择可以根据实验要求,通常使用培养箱或恒温摇床进行培养。

3. 酵母菌的培养条件为了获得最佳的酵母菌生长和表面展示效果,我们需要控制好培养条件。

一般来说,适宜的培养温度是30°C左右,pH值在5.0-7.0之间。

此外,酵母菌在培养过程中需要适量的氧气供应,因此我们需要摇床进行培养以提供足够的气体交换。

4. 酵母菌的处理步骤在酵母菌表面展示实验中,我们通常需要对酵母菌进行一系列的处理步骤,以使其表面展示出我们感兴趣的蛋白质或其他分子。

这些处理步骤可能包括以下几个方面:a. 酵母菌的诱导表达在培养一段时间后,根据实验需求可以添加适当的诱导剂来促使酵母菌表达目标蛋白质。

常用的诱导剂包括温度的改变、化学诱导剂的添加等。

b.酵母菌的采收和洗涤诱导表达一段时间后,我们需要将酵母菌收集起来,并用适当的缓冲液对其进行洗涤,以去除培养基中的残留物。

c.酵母菌的裂解与提取接下来,我们需要对酵母菌进行裂解,以释放表面展示的蛋白质。

常用的裂解方法有声波破碎、酸碱裂解等。

裂解后,可以通过离心等方法将裂解液与细胞碎片分离。

d.酵母菌表面展示的检测与分析酵母菌表面展示的蛋白质可以通过一系列的检测方法来鉴定和分析。

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酵母培养操作规程本文主要介绍酵母的选育、保种、培养的操作工艺等。

目录第一章酵母扩培 (2)§1-1 实验室扩培 (2)1培养基制备 (2)2接种操作 (3)§1-2 生产现场扩培 (5)1准备工作 (5)2汉生罐接种操作 (5)3扩大罐扩培 (5)4二次(车间)扩大罐扩培 (6)第二章菌种保藏 (7)1实验室菌种保藏与活化 (7)2汉生罐菌种保藏与活化 (7)第三章酵母检测 (8)§3-1 取样 (8)1扩培液、发酵液及待滤酒等的取样 (8)2酵母泥的取样 (8)§3-2 检测 (10)1酵母细胞形态检测 (10)2酵母细胞大小测定 (10)3酵母泥外观检测 (11)4酵母细胞数和出芽率的测定(血球计数板法) (11)5酵母死亡率的测定(血球计数板法) (12)6酵母肝糖染色法 (13)7酵母凝聚性的测定 (14)8酵母死灭温度的测定 (15)9酵母发酵失重实验 (16)10酵母的呼吸缺陷型检测 (16)第一章酵母扩培§1-1 实验室扩培1培养基制备【试剂】:冷麦汁、蒸馏水、新鲜鸡蛋。

【器具】:试管(15×150)及(18×180)、小巴氏瓶(三角瓶)、大巴氏瓶(大三角瓶)、卡氏罐、中速滤纸、电炉、量筒、不锈钢锅、糖度计等。

【仪器】:杀菌锅、天平(精度0.1g)。

【方法】〖试管、三角瓶及巴氏瓶培养基的制备〗①取样:取糖化冷却麦汁,视麦汁浊度情况判定是否进行过滤。

2℃,按每0.5~1L使用一个鸡蛋的比例,加入打成泡沫的蛋清,在不断地搅拌下保温30min;然后升温煮沸30min;将煮沸后的麦汁用水浴冷至80~90℃,用双层中速滤纸过滤。

±②澄清:将麦汁加热至450.2°P。

±③调糖:将过滤后的麦汁用蒸馏水调整糖度为11④分装:试管(15×150)5mL,试管(18×180)10mL,分装小巴氏瓶(三角瓶)、大巴氏瓶(大三角瓶)。

⑤灭菌:分装后包扎好,115℃杀菌20min;杀菌后培养基放置2~3天,确定无菌后备用。

〖卡氏罐培养基的制备〗取糖化冷却麦汁(有条件的可取薄板前热麦汁)加入卡氏罐,然后封闭卡氏罐取样口,各呼吸阀等接口处均应以棉塞或呼吸阀进行封闭后包扎结实,115℃杀菌30~40min,于室温冷却至17~18℃;接种前以3L/min的速率充纯氧2~3min(卡氏罐有效容积20L)。

2接种操作【器具】:酒精灯、酒精棉、剪刀、接种针、镊子、定量移液器或吸管等。

【仪器】:超净工作台等。

【方法】无菌室使用前,使用紫外线灯照射20~30分钟进行杀菌;进入无菌室换无菌工作服;所有操作采用无菌操作。

〖活化〗①操作前将冷冻管菌种置于室温下,使之内部培养基达到室温后,振荡均匀;无菌操作,将冷冻管内的培养液全部转入盛有5mL培养基的试管中,于25±1℃培养72±2小时。

②将试管中的培养液轻轻振荡均匀,用接种环接取三环加入另一支盛有5mL培养基的试管中,于25±1℃培养24~36小时。

③将培养结束的试管培养液轻轻振荡均匀,用无菌吸管接0.1mL加入盛有10mL培养基的试管,振荡均匀后于25±1℃培养24~36小时。

〖扩大〗①将培养结束的试管培养液轻轻振荡均匀后,全部接入小巴氏瓶(三角瓶),每个小巴氏瓶(三角瓶)接入一支试管的培养液;然后于23±1℃培养24~36小时。

②将培养结束的小巴氏瓶(三角瓶)轻轻振荡均匀后,全部接入大巴氏瓶(大三角瓶),每个大巴氏瓶(大三角瓶)接入一只小巴氏瓶(三角瓶)的培养液;然后于21±1℃培养24~36小时。

③将培养结束的大巴氏瓶(大三角瓶)轻轻振荡均匀后,全部接入卡氏罐,每个卡氏罐接入两只大巴氏瓶(大三角瓶)的培养液;然后于18±1℃培养24~36小时。

〖注〗:除卡氏罐外,其它液体培养基在接种后每12小时应振摇一次,以去除二氧化碳,保证酵母耗氧需求。

【实验室扩培工艺】容器扩大倍数培养温度℃培养时间hr冷冻管→液体试管活化 25±1 72±2液体试管活化 25±1 24~36液体大试管活化 25±1 24~36小巴氏瓶(三角瓶) 10 23±1 24~36大巴氏瓶(大三角瓶) 10 21±1 24~36卡氏罐 10 18±1 24~36注:1.试管至三角瓶阶段,至少多做1-2个(支)备用,防止出现意外情况,影响扩培。

2.卡氏罐接种前充纯氧,充氧速率3L/min,2-3min。

§1-2 生产现场扩培1准备工作【设备准备】:每次扩培前应将待使用的自糖化至汉生罐、扩大罐的管路及汉生罐、扩大罐、连接管路、空气滤器进行刷洗和灭菌。

【培养基灭菌】:取糖化冷却麦汁(有条件的可取薄板前热麦汁)加入汉生罐或扩大罐,进行升温杀菌。

通常在常压下保持沸腾30~40min即可。

杀菌后用无菌空气备压0.05MPa后降温至14±0.5℃备用。

2汉生罐接种操作【接种】:将杀菌麦汁接入汉生罐后,再将已扩培好的卡氏罐菌种接种至汉生罐,扩培比例为1:10~15。

【通风】:保证酵母生长对氧的需求,具体通风量根据酵母生长情况调整,若酵母细胞内出现空泡较多或细胞拉长现象,应适当增减通风量。

【温度】:接种前控温在14±0.5℃,接种后培养液自然升温至16℃,并保持16±0.5℃进行培养。

【备压】:接种前备压0.05MPa,接种后保持罐内正压。

【培养时间】:接种后培养36~48hr,待细胞浓度达到35~40×106个/mL方可转罐。

【检测】接种前的无菌麦汁及接种后的培养液,应作微生物检测。

3扩大罐扩培【接种】:扩大罐内接入冷麦汁(杀菌或不杀菌,保证麦汁无菌),将汉生罐内的培养液充分搅拌后,全部压入扩大罐(扩大比例1:5~6)。

【通风】:具体通风量根据酵母生长情况调整,若酵母细胞内出现空泡较多或细胞拉长现象,应适当增减通风量。

酵母起发后,应将流量和通风时间适当减少。

【温度】:麦汁温度为12±0.5℃,自然升温至14℃,并于14±0.5℃控温培养。

【备压】:接种前备压0.05MPa,接种后保持罐内正压。

【培养时间】:培养24~36hr,待酵母数达到35~40×106个/mL以上时,即可进行下一步扩培。

4二次(车间)扩大罐扩培将扩大罐的培养液充分搅拌后,全部压入二次(车间)扩大罐(扩大比例1:3~4)。

再向二次(车间)扩大罐进充氧冷麦汁或对培养液进行适度通风(麦汁含氧量8mg/L以上),料温控制11±0.5℃,接种后自然升温至12℃,并于11~12℃保温培养;压力维持罐内正压;培养24±2hr,待酵母数达到35~40×106个/mL以上时,即可进行追加麦汁或移入发酵罐进行繁殖。

【车间扩大培养工艺】容器扩大倍数培养温度℃培养时间hr 充氧状况卡氏罐→汉生罐 10~15 16±1 36~48 根据情况进行调节扩大罐 5~6 14±1 24~36 根据情况进行调节二级扩大罐 3~4 12±1 24±2 充氧麦汁浮选罐或发酵罐 1~2 10±1 24±2 充氧麦汁发酵罐追加满罐约1 工艺控温 24±2 充氧麦汁第二章菌种保藏1实验室菌种保藏与活化【形式】:保种形式分为冷冻保种管和固体斜面保藏两种。

〖冷冻保种管〗:青啤酵母以冷冻保种管的形式提供,-20~-25℃保藏,一次扩培使用一支。

〖固体斜面〗①保藏:其它酵母菌种以固体斜面形式0~4℃冷藏保藏,定期活化;②活化:每三个月活化一次。

接一环斜面菌种于5mL麦汁液体培养基中,于25±1℃培养24~36小时;待酵母起发后,将培养液振荡均匀,用接种环涂划固体斜面,于25±1℃培养60~72小时;然后于0~4℃冷藏保藏。

③固体斜面菌种每年更换一次。

2汉生罐菌种保藏与活化【保种操作】①可将正在扩大培养的培养液由扩培罐压回至汉生罐,或直接将汉生罐的菌种留约1/5扩培液追加杀菌麦汁进行保种。

②培养48~72小时后,至糖度降至7~8°P时,迅速将温度降至2~4℃进行保种,压力为0.05MPa。

每月更换一次麦汁进行活化,汉生罐菌种使用及活化次数总共不超过8次。

【活化操作】①将扩培罐麦汁杀菌降温至12~13℃备用。

②将汉生罐内培养液通风搅拌后,全部转移至扩大罐中(扩大比1:5~6),于14±0.5℃进行培养,保持罐内正压,通风同扩培。

③待酵母数达到30×106个/mL以上时,将待留种的培养液打回汉生罐,按【保种操作】②条操作。

剩余扩培液可打入发酵罐。

第三章酵母检测§3-1 取样1扩培液、发酵液及待滤酒等的取样【器具】取样瓶、便携式喷灯、酒精喷雾器或酒精棉、打火机;【方法】①将取样阀用75%的酒精棉擦拭或酒精喷雾器喷洒酒精,用便携式喷灯或点燃酒精棉灼烧取样口(灼烧适度,避免损伤内部胶垫),进行清洁和灭菌;②然后打开取样阀,放出约1000mL液体,关闭取样阀;③再次用酒精棉擦拭后,先打开取样阀,调整合适的流速,防止液体在取样时迸溅,用取样瓶接取样品约300mL,封闭取样瓶口;④关闭取样阀,用酒精喷雾器喷洒酒精或用酒精棉擦拭,对其进行清洁和灭菌。

2酵母泥的取样【器具】取样瓶、便携式喷灯、酒精喷雾器或酒精棉、打火机;【方法】A回收罐的取样①将取样阀用75%的酒精棉擦拭或酒精喷雾器喷洒酒精,进行清洁和灭菌;②然后打开取样阀,放出约1000mL酵母泥,关闭取样阀;③先打开取样阀,调整合适的流速,防止酵母泥在取样时迸溅,用取样瓶接取样品约200mL后,封闭取样瓶口;④关闭取样阀,用酒精喷雾器喷洒酒精或用酒精棉擦拭,对其进行清洁和灭菌。

B锥形罐的取样①将锥底阀用75%的酒精棉擦拭或酒精喷雾器喷洒酒精,进行清洁和灭菌;②然后打开锥底阀,放出底部掺有凝固物的酵母泥,至流出洁白的酵母泥时关闭锥底阀;③再次用酒精棉擦拭后,先打开锥底阀,调整合适的流速,防止酵母泥在取样时迸溅,用取样瓶接取样品约200mL后,封闭取样瓶口;④关闭锥底阀,用清水将阀内冲洗干净。

§3-2 检测1酵母细胞形态检测【适用】扩培液、发酵液、待滤酒、酵母泥等【原理】在酵母菌的各个生长时期,利用显微镜对酵母细胞的外形及内容物等进行观察。

【器具】显微镜、载玻片、盖玻片等。

【方法】①样品取回后,应立即进行检测;若不能立即检测,应置于冰箱保存,保存时间为0~6℃不超过2小时;②取一滴样品或少量菌体于载玻片上,加数滴蒸馏水,用拇指和食指夹住盖玻片两侧,将其轻轻的盖于样品上面,注意不要产生气泡,用显微镜进行检查;③先使用显微镜低倍物镜(×10),调整载玻片位置,对准样品视野后换用高倍物镜(×40)观察;④优良的酵母菌种呈圆形或卵圆形,细胞较饱满,细胞膜较薄,胞内液泡较小,形态整齐一致;无异状(拉长)细胞。

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