LC日常维护和故障处理
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16
The Good User
下列优良/常规实验操作能够最大限度降低维修费用：
清洁的仪器, 流动相和样品;如果必要, 进行过滤。 保证溶剂的相溶性。 仪器使用完毕，冲洗整个系统，去掉盐份，防止污 染。 对仪器的维护和保养进行记录。
17
混合问题
+ +
静态混合器
问题：
一个有紫外吸收的流动相与一个没有紫外吸收的流动相动 态混合产生噪音，增加静态混合器可以降低这种噪音。 缺点: 增加了死体积
脱气方法
He脱气 回流加热脱气 真空脱气 超声脱气
7
准备流动相
流动相应该： HPLC 级 过滤 (最大0.45 um, 0.2 um最好) 脱气，尤其在低流速时 相溶
8
初始化和平衡
初始化HPLC泵
Flow
移走溶剂与系统中的气泡 使溶剂组成变化更容易
柱平衡
确保分析结果再现性
对于反相柱使用5～10倍 柱体积流动相平衡色谱柱
Guard column to protect the main column
The right tools
12
Column Installation cont.
Practical hints: • Finger tighten • 1/4 turn with wrench
13
色谱柱保护
过滤所有的溶剂和样品 使用保护柱 仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中缓冲液 柱子在不使用时，两端密封保存 在适当的溶剂中保存柱子 注意色谱柱的pH值使用范围 不要高压冲洗柱子 不要高温下过长时间使用硅胶键合相
18
基线噪音
可能的原因： 检测池脏 检测器氘灯能量下降 由泵引起的脉冲 检测器上的温度效应 检测池中有气泡通过
Time (min.)
19
是 检测器?
基线噪音
停泵
噪音是 否依然 存在
否 泵或流动相?
其它要考虑的问题
▲是否改变了流动相的组成？
▲是否改变了检测波长? ▲在你的仪器上使用的最后的流动相是什么? ▲流动相是否相溶? ▲流动相是否干净?
performance.
每根柱子都定义一个流动方向. 这个流动方向用箭头或其他方式显示在柱子上. 不要改变随意改变流动方向,这将降低柱性能.
11
Column Installation
What’s needed:
The right connectors to avoid any future leak.
溶剂的相溶性
Immiscible Miscible
5
溶剂的紫外吸收
Solvent
Acetonitrile Water Cyclohexane Hexane Methanol Ethanol Diethyl Ether Dichloromethane Chloroform Carbon Tetrachloride Tetrahydrofuran Toluene
4
Name Acetic Acid Acetone Acetonitrile Benzene Butyl Alcohol Carbon Tetrachloride Chloroform Cyclohexane Cyclopentane Dichloroethane Dichloromethane Dimethylformamide Dimethyl Sulfoxide Dioxan Ethylacetate Ethyl Alcohol Di-Ethylether Heptane Hexane Methyl Alcohol Methylethyl Ketone I-Octane Pentane I-Propyl Alcohol Di-Propylether Tetrachloroethane Tetrahydrofuran Toluene Trichloroethane Water Xylene
UV Cutoff (nm)
190 190 195 200 210 210 220 220 240 265 280 (210) 280
UV Cutoff is the wavelength at which absorbance equals 1 AU.
6
溶剂脱气
目的 排除溶解在流动相中的氧气和氮气
使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌。 用滤膜过滤溶剂去除微生物。 每两天更换或过滤溶剂。 避免溶剂瓶直接日照。
3
溶剂信息
避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂：
卤化物碱金属溶液和相应的酸溶液。 高浓度的无机酸例如：硝酸和硫酸。 能够形成卤素自由基或酸的氯化试剂及其混合物。 含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂。 在有机溶剂中的有机酸溶液。 含有强络合剂的溶液。 四氯化碳和异丙醇或THF混合液。
14
样品准备
样品完全溶解在流动相中
过滤样品，确保样品中不含固体颗粒 用流动相或比流动相弱的溶剂溶解样品 进样量尽量小
样品没有完全溶解
15
HPLC柱测试
对于一根新柱子，在流动相组成不变的情况下进行 下述实验并记录： 1. 记录理论塔板数N，以及:
柱子长度及内径. 测试样品名称及K’值. 固定相和流动相. 流动相流速. 进样量. 温度. 2. 峰对称性 包括苯酚 胺 3. 记录柱子压力.
9
预柱和保护柱
从泵来的 流动相
预柱
预柱是针对流动相来保护色谱柱 保护柱是针对样品来保护色谱柱
进样口
保护柱
分析柱 至检测器
10
Column Installation柱安装
• Each column has a defined flow direction! • The flow direction is shown by the arrow or direction of writing. • Don’t change the flow direction, this will decrease column
日常维护和常见色谱故障
Page 271
1
溶剂准备：过滤
真空
过滤装置
使用HPLC纯溶剂
防止固体颗粒损伤仪器或柱头 使用小于 0.5 m过滤膜.
有机物 - ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱeflon 水 - Nylon 66
2
溶剂过滤
不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂会阻塞溶剂过滤器，降低泵的操作性能。 遵从下列建议可以提高性能，延长溶剂过滤器的寿命：
The Good User
下列优良/常规实验操作能够最大限度降低维修费用：
清洁的仪器, 流动相和样品;如果必要, 进行过滤。 保证溶剂的相溶性。 仪器使用完毕，冲洗整个系统，去掉盐份，防止污 染。 对仪器的维护和保养进行记录。
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混合问题
+ +
静态混合器
问题：
一个有紫外吸收的流动相与一个没有紫外吸收的流动相动 态混合产生噪音，增加静态混合器可以降低这种噪音。 缺点: 增加了死体积
脱气方法
He脱气 回流加热脱气 真空脱气 超声脱气
7
准备流动相
流动相应该： HPLC 级 过滤 (最大0.45 um, 0.2 um最好) 脱气，尤其在低流速时 相溶
8
初始化和平衡
初始化HPLC泵
Flow
移走溶剂与系统中的气泡 使溶剂组成变化更容易
柱平衡
确保分析结果再现性
对于反相柱使用5～10倍 柱体积流动相平衡色谱柱
Guard column to protect the main column
The right tools
12
Column Installation cont.
Practical hints: • Finger tighten • 1/4 turn with wrench
13
色谱柱保护
过滤所有的溶剂和样品 使用保护柱 仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中缓冲液 柱子在不使用时，两端密封保存 在适当的溶剂中保存柱子 注意色谱柱的pH值使用范围 不要高压冲洗柱子 不要高温下过长时间使用硅胶键合相
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基线噪音
可能的原因： 检测池脏 检测器氘灯能量下降 由泵引起的脉冲 检测器上的温度效应 检测池中有气泡通过
Time (min.)
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是 检测器?
基线噪音
停泵
噪音是 否依然 存在
否 泵或流动相?
其它要考虑的问题
▲是否改变了流动相的组成？
▲是否改变了检测波长? ▲在你的仪器上使用的最后的流动相是什么? ▲流动相是否相溶? ▲流动相是否干净?
performance.
每根柱子都定义一个流动方向. 这个流动方向用箭头或其他方式显示在柱子上. 不要改变随意改变流动方向,这将降低柱性能.
11
Column Installation
What’s needed:
The right connectors to avoid any future leak.
溶剂的相溶性
Immiscible Miscible
5
溶剂的紫外吸收
Solvent
Acetonitrile Water Cyclohexane Hexane Methanol Ethanol Diethyl Ether Dichloromethane Chloroform Carbon Tetrachloride Tetrahydrofuran Toluene
4
Name Acetic Acid Acetone Acetonitrile Benzene Butyl Alcohol Carbon Tetrachloride Chloroform Cyclohexane Cyclopentane Dichloroethane Dichloromethane Dimethylformamide Dimethyl Sulfoxide Dioxan Ethylacetate Ethyl Alcohol Di-Ethylether Heptane Hexane Methyl Alcohol Methylethyl Ketone I-Octane Pentane I-Propyl Alcohol Di-Propylether Tetrachloroethane Tetrahydrofuran Toluene Trichloroethane Water Xylene
UV Cutoff (nm)
190 190 195 200 210 210 220 220 240 265 280 (210) 280
UV Cutoff is the wavelength at which absorbance equals 1 AU.
6
溶剂脱气
目的 排除溶解在流动相中的氧气和氮气
使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌。 用滤膜过滤溶剂去除微生物。 每两天更换或过滤溶剂。 避免溶剂瓶直接日照。
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溶剂信息
避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂：
卤化物碱金属溶液和相应的酸溶液。 高浓度的无机酸例如：硝酸和硫酸。 能够形成卤素自由基或酸的氯化试剂及其混合物。 含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂。 在有机溶剂中的有机酸溶液。 含有强络合剂的溶液。 四氯化碳和异丙醇或THF混合液。
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样品准备
样品完全溶解在流动相中
过滤样品，确保样品中不含固体颗粒 用流动相或比流动相弱的溶剂溶解样品 进样量尽量小
样品没有完全溶解
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HPLC柱测试
对于一根新柱子，在流动相组成不变的情况下进行 下述实验并记录： 1. 记录理论塔板数N，以及:
柱子长度及内径. 测试样品名称及K’值. 固定相和流动相. 流动相流速. 进样量. 温度. 2. 峰对称性 包括苯酚 胺 3. 记录柱子压力.
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预柱和保护柱
从泵来的 流动相
预柱
预柱是针对流动相来保护色谱柱 保护柱是针对样品来保护色谱柱
进样口
保护柱
分析柱 至检测器
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Column Installation柱安装
• Each column has a defined flow direction! • The flow direction is shown by the arrow or direction of writing. • Don’t change the flow direction, this will decrease column
日常维护和常见色谱故障
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溶剂准备：过滤
真空
过滤装置
使用HPLC纯溶剂
防止固体颗粒损伤仪器或柱头 使用小于 0.5 m过滤膜.
有机物 - ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱeflon 水 - Nylon 66
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溶剂过滤
不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂会阻塞溶剂过滤器，降低泵的操作性能。 遵从下列建议可以提高性能，延长溶剂过滤器的寿命：