浅谈高糖高脂环境下肾小球内皮细胞与系膜细胞间相互作用对细胞外基质产生的影响
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糖尿病肾病 （ ｉ ｅ ｃ ｅｈｏａ ｙＤ 是糖尿病患者最主 糖 ） 高脂组 （０ ｅ Ｌ Ｃ） 高糖高脂组 （ ０ ｍ ｌ Ｄ ｄａ ｔ ｐ ｒｐｔ ， Ｎ） ｂ ｉｎ ｈ ；Ｄ ２ｍｄ Ｐ ；Ｅ Ｌ ３ｍ ｏＬ ． ／ 要 的微血管并 发症之一，是终末期肾病 的主要病 因【。糖脂代 葡萄糖＋ ０ ／ Ｐ ；Ｆ氯沙坦组 ，加入氯沙坦 （ ｌ １ ２ｍｇ Ｌ Ｃ） Ｌ 工作浓度 ： 谢紊乱在 Ｄ Ｎ的发生发展 中起非常重要的作用 ，相互促进导致 １．ｍｏ Ｌ）预处理 １ ０５ ｌ ／ ｈ后，加入 Ｄ 葡萄糖 、Ｌ Ｃ ． Ｐ ，工作浓度同 肾小球 系膜 区 Ｅ Ｍ 进行性聚积和肾小球硬化 。为更好 的模拟 Ｅ组。各组分别培养 １ ，２ ，４ ｈ Ｃ ２ ４ ８ 。每组均重复 ３次。 Ｄ Ｎ时肾小球病变过程 ，本实验通过建立 内皮 细胞与系膜细胞 １ ． 细胞上清液各种蛋 白测定 收集上清液置于．Ｏ ．３ ２ ７ ℃保存 ， 的共培养模型 ，以单独培养的系膜细胞做对照 ，研究 内皮细胞 与系膜 细胞间的相互作用对 Ｅ Ｍ 产生的影响 ，以期从 细胞 间 Ｃ 相互作用的角度探讨 Ｄ 的发病机制。 Ｎ
【 摘要 】 目的：探讨高糖高脂条件下肾小球内 皮细胞与系膜细胞问相互作用对细 胞外基质 （ Ｃ 产生的影响。方法：建 Ｅ Ｍ） 立内皮细胞 与系膜细胞共培养模型，实验分为正常对照组、甘露醇组、高糖组、高脂组、高糖高脂组及 阻断剂干预组 ， 分别培养
ｌ ，２ ，４ ｈ ，Ｅ ＩＡ法测定细胞上清液 Ｉ ２ ４ ８后 ＬＳ ｖ型胶原 （ ｏ Ｉ 、纤维连接蛋 白 （ ｎ） Ｃ ｌＶ） Ｆ 含量。结果 ：（ ）高糖高脂培养条件下 ，共 １
培养组细胞上清液 Ｃ ｌ 、Ｆ ｏＩ Ｖ ｎ的含量较单培养组 明显增高 （ ＜ ． ） ２ Ｐ０ ５ ；（ ０ ）氯沙坦可抑制高糖高脂引起的 Ｆ 和 ＣｌＶ升高 （ ｎ ｏＩ Ｐ ＜ ．５ ；结论 ：（ ）高糖高脂环境下，内皮细胞和系膜细胞 问存在相互作用，这种作用能促进 Ｅ Ｍ－ｏ Ｉ ０Ｏ ） １ Ｃ Ｃｌ Ｖ、Ｆ ｎ的产生；（ ）氯沙 ２ 坦能通过抑制 Ｅ Ｍ 的产生影响细胞间的相互作用。 Ｃ 【 关键词 】 高糖 ；溶血卵磷脂； 细胞间相互作用；细胞外基质 【 中图分类号】 ５７ Ｒ ８． １ Hale Waihona Puke Baidu 文献标识码 】 Ａ 【 文章编号】 ６２ ５３ ２ １） ６ ０４０ １ ． ２ （ ０１ ０． ２． ７２ ０ ２
参 考文献
［］ Ｘ ｅ ， ｈｎＸ Ｅ ｉ ｍ ｏ ｇ， ｊｒ ｕ ｏ ｓ ｒｋｆ ｔｒ １ ｉ Ｙ Ｃ ｅ ． ｐｄ ｉｌ ｙｍａ ｔ ｍｅ，ｉ ｃ ｓ ｅ ｏ ｏｏ ｃ ｓ ａｏ ，
ｐ ｅ ｅ ｔ ｎ ａ ｄ ｍａ ａ ｅ ｎ ｆ ｃ ｒ ｎ ｃ ｋ ｄ ｅ ｉｅ ｓ ｎ Ｃ ｉ ａ ｒｖ ｎ ｉ ｎ ｎ ｇ ｍｅ ｔ ｏ ｈ ｏ ｉ ｉｎ ｙ ｄ ｓ ａ ｅ ｉ ｈ ｎ ． ｏ
理 ，均以 ±ｓ 表示 ，两组间差异 比较采用 ｔ 检验 ；多组间差异
比较采用方差分析，Ｐ ０ ５ ＜ ． 表示差异有统计学意义。 ０ ２１ 高糖高脂对 Ｆ 、Ｃ ｌＶ的影响 在共培养及单培养条件 ． ｎ ｏ Ｉ 下，与对照组相 比，随作用时间的延长 ，高糖、高脂对细胞上 清液 中 Ｃ ｌ 、Ｆ ｏＩ Ｖ ｎ的分泌有促进作用 （ ＜ ． ，其中作用 Ｐ ００ ５）
１ ＿ ２ 方 法
１ ． 细胞培养 取在 １％ｔ 牛血清的低糖 ＤＭＥ 培养液中 ．１ ２ ０ Ｊ ， Ｍ 贴壁生 长良好的处于对数生长期的细胞进入实验组。单培养 系 膜细胞 以 ２×１５个／Ｌ ０ 孑 直接接种于普通 ６ Ｌ 孑 培养板 中；共培养
先将内皮细胞以 １ ０ 个／ ×１５ 孔接种于 ６孔培养板中，待细胞贴
常对照组及甘露醇组中，共培养时 Ｆ 、Ｃ ｌＶ与单培养相比均 ｎ ｏＩ 无差别 （ ＞ ． ） Ｐ ００ ；高糖 、高脂及高糖高脂组共培养时 Ｆ 、Ｃ ｌ ５ ｎ ｏ
Ｉ Ｖ含量均较单培养明显增高 ， 共培养 １， ４ ４ｈ ２ ２ ， ８ 与单培养 比
较 ，Ｐ均 ＜ ． 。（ ｌ ０ ５ 表 ，２） ０ 。
▲ Ｐ０ ５ ＜ ． ；与高脂组比较 ※ Ｐ Ｏ ５ ０ ＜． ： ０
注：与正常对照组 比较 Ｐ ０ ５ ； ＜． ０ 与单培养比较
与高糖高脂组 比较 撑Ｐ ０ ５ ＜． 。 ０
３ 讨 论
△ Ｐ０ ５ ＜ ． ；与高糖组 比 ０ 较
▲ Ｐ０５ ＜． ；与高脂组 比 ※ Ｐ０ ５ ０ 较 ＜． ： ０
抗 ，使内皮细胞和系膜 细胞之间的异常相互作用得到有效控 制，从而产生明显的肾脏保护作用。
在糖尿病肾病 的发生发展过程 中，糖代谢紊乱一直备受重 中提出脂代谢障碍为糖尿病及其并发症的原发病理生理改变以
视，但随着 Ｍｃ ａｒ ２０ 年美国糖尿病学会 （ Ｄ Ｇｒ ｙ在 ０ １ Ａ Ａ）年会 护作用是独立于降压作用之外的 ，它不仅能改善血流动力学紊
ｅｏｏｙｏ ｔ ｅ ｉ ｅ ｓＤ ａｅ ｓ ０ １ ０Ｓｐ ｌ ） ． ｔ ｌ ｆｙ ｄａ ｔ ． ｉ ｔ ， ０ ， （ｕ ｐ２： ｉ ｇ ｐ２ ｂｅ ｂｅ２ ５ ６ ［］ Ｌ ｅＨＳ Ｓ ｎ Ｙ Ｏ ｉｉ ｄＬ ｗ Ｄ ｎｉ ｉｏｒｔｎ ａｄ ３ ｅ ， ｏｇ Ｃ ． ｘｄ ｅ ｏ － ｅｓｙＬｐ ｐｏｅ ｎ ｚ ｔ ｉ
《 求医问药》下半月刊
Ｓｅ ｅ ｉａ ｎ ｓ ｈ ｅｉｉｅ ０ １ ｅｋＭ ｄｃ ｌＡｄＡ ｋＴｅＭｄｃｎ ２ １ 年第 ９ 卷 第６ 期
２ ５
注： 与正常对照组比较 ＜ ． ；与单培养 比 Ｐ０ ５ Ｏ 较 △ ＰＯ ５ ＜． ；与高糖组 比 ０ 较 与高糖高脂组比较 ｊ ＜ ． 。 ｆ ０５ ｝ ０ Ｐ 表 ２ 共培养及单培养各组 Ｆ 含量 ｎ
（ 上接第 ２ ６页 ）［】 张素 良，张少波． ７ 思密达 治疗迟发型母乳
［Ｏ 魏雪莲 ，关晓洁． １】 妈咪爱散剂联合思密达治疗新生儿母乳
性黄疸 １ 例报告． 医药实践． １． （ ） ６． ５ ７ 临床 ２ ０ ９ Ａ：４ ６ ０ １６ ４ ４ ［ 施文洁， ． ０ ８ ］ 钱琪 １ 例母乳 性黄疸 的临床 分析． １ 中国实用 医
Ａ Ｊ ｅｈｏ．０ ８２（） －． ｐｂ２０ ｅ ． ｍ Ｎ ｐ １ ０ ； １ １ Ｅ ｕ ０７Ｓｐ ０ ｒ ２ ８ ：７ ２ ［］ Ｍｃ ａｒ Ｄ Ｄ ｓ ｇｌ ｉ ｆ ａｙａｉ ｅ ｂ ｌｍ ｅ ２ Ｇ ｒ Ｊ ． ｙｒ ｕａｏ ｏ ｔ ｃ ｍ ｔ ｏｉ ｉ ｔ ｙ ｅ ｔｎ ｆｒ ｄ ａ ｓ ｎ ｈ
２ ４
《 求医 问药 ＞下半月刊
Ｓｅ ｅｉａ ｎ ｓ ｈ ｅ ｉｉｅ ０１ ｅｋＭ ｄｃｌＡｄＡｋＴｅＭｄｃｎ ２ １ 年第 ９ 卷 第６ 期
浅谈高糖高脂环境下 肾小球内皮细胞与系膜细胞间相互作用
对细胞外基质产生的影响
赵晋 晋 １ 雷 闽湘 ２
（ 湖南省长沙市第一医院内分泌科 湖南 长沙 ４ ００ ：２中南大学湘雅医院内分泌科 湖南 长沙 ４ ０ ０ ） １ １０ ８ １０ ８
ｌ 材料和方法 １１ 材料 ． 人脐静脉内皮细胞株购于北京大学医学院肿瘤研究 备测 。Ｆ ｎ及 Ｃ ｌＶ测定依照 Ｅ ＩＡ试剂盒说明检测 。Ｅ － 蛋 ｏＩ ＬＳ Ｔ１ 白测定按照 Ｅ － 放免试剂盒说明检测。 Ｔ１
１ ． 统 计学处理 采用 Ｓ Ｓ １． ．４ ２ Ｐ Ｓ１ ０统计 软件包进 行数据处
２ｈ ４ 达高峰 （ ＜ ． ） 高糖对 Ｃ ｌ Ｐ０ ５ ； ０ ｏＩ Ｖ、Ｆ 的促进作用与渗透 ｎ 压无关 ，相同渗透压的甘露醇对 Ｃ ｌＶ、Ｆ ｏ Ｉ ｎ的分泌无明显影响 （＞ ． ） ＰＯ ５ 。高糖高脂组细胞上清液中 Ｃ ｌ Ｆ 的增加更为 ０ ｏＩ Ｖ、 ｎ 明显 （ ＜ ． ） 表 １ ｏ Ｐ ００ （ ，２） ５
这一机制被认为与 Ｐ Ｃ系统和 Ｔ Ｆ Ｂｌ Ｋ Ｇ ． 激活相关 。
综上所述 ，高糖高脂环境下内皮细胞与系膜细胞间可能存 在异常的相互 作用 ，这一相互作用可以促进细胞外基质的产
生。而氯沙坦可以通过抑制细胞外基质的产生，干预这一异常
的相互作用 ，这可能也是氯沙坦治疗糖尿病’ 肾病的重要机制之
＿ ３ 培养 ，系膜细胞单培养两种 。每种培养方式分别按照培养条件 ２ 氯沙坦对内皮细胞和系膜细胞相互作用的干预 细胞上清 随机分为六组：Ａ正常对照组（． ｍ １ ． ５ ｍ ｏＬ 葡萄糖） Ｂ 甘露 液中 Ｃ ｌ 、Ｆ 含量在培养 ｌ，２，４ｈ ５ ／Ｄ ； ｏＩ ｎ Ｖ ２ ４ ８ 时氯沙坦干预组与高 醇组 （ ４ ｍ ｌ 甘 露醇 ） ２．ｍ ｏＬ ５ ／ ；Ｃ 高糖组 （ ０ ｍ ｌ ． 萄 ３ｍ ｏＬＤ 葡 糖高脂组 比 ， 均＜． 表 １ ２。 ／ 较 Ｐ ０ ５（ ， ） Ｏ 表 １ 共培养及单培养各组 Ｃ ｌ ｏＩ Ｖ含量（ ／） ｕＬ ｇ
２ 内皮 细胞 与 系膜 细 胞相 互作 用对 Ｆ 、Ｃ ｌＶ 的影 响 ． ２ ｎ ｏＩ 正
壁后再将系膜细胞 以 ２ １５ 孔接种于微孑底膜套皿内。待 × ０ 个／ Ｌ 细胞生长至 ８％ ０ 融合时换用无血清的 Ｄ Ｍ 同步化 １ 后 ， ＭＥ ２ ｈ 加入条件培养液进行干预。 １ ． 实验分组 按培养方式不 同分为 内皮细胞与系膜细胞共 ．２ ２
抗剂（ｒ 目前已广泛应用于糖尿病肾病的临床治疗 中。氯沙 Ａ Ｂ） 坦作为一种重要的 ＡＲ Ｂ类药物 ，许多研究证实其对 肾脏的保 乱 ，更重要 的是能够抑制糖尿病状态下多种损伤介质的表达 。 本文 的研究结果显示加入氯沙坦干预能明显减少高糖高脂所致 的 Ｃｌ ｏ１ Ｖ、Ｆ 增加 ，提示氯沙坦可以通过对 Ｅ Ｍ 的分泌的拮 ｎ Ｃ
来， 脂代谢紊乱也越来越受到人们的关注 ， 前脂代谢紊乱也被 目
证实是 Ｄ Ｎ的一种独立损伤因素［。糖尿病 肾病特征性的病理 ２ ］
变化为系膜细胞增生 、细胞外基质聚积及 肾小球基底膜增厚 。 系膜区细胞外基质过度堆积是导致糖尿病 肾病 肾小球硬化的直 接原 因之一 ，众多研究表 明，Ｆ ｎ和 Ｃ ｌＶ是反应细胞外基质 ｏＩ 胶原代谢的敏感指标。本研究发现 ，不论在共培养还是在单培 养条件下 ，高糖和高脂均可 以促进系膜细胞 Ｆ ｎ和 Ｃ ｌＶ 的产 ｏＩ 生 ，而在高糖高脂联合作用条件下 ，这一促进作用更加明显 ，
Ｏｘｄ ｔ ｅ Ｓｒ ｓ ｎ ｔ ｅＤｅ ｅｏ ｍｅ ｔｏ ｏ ｒ ｌ ｓ ｌ ｏ ｉ． ｉ ａｉ ｔｅ ｓｉ ｖ ｌ ｐ ｎ ｆＧｌ ｍｅ ｕ ｏ ｃｅ ｓｓ Ａ ｖ ｈ ｒ ｍ Ｊ
Ｎｅｈｏ．０ ８ ｕ ； （ ： —０ ｐ ｒ１２０ ｇ８ ９１ ６ ７ ． Ａ ２ ）２
所 。人肾小球系膜细胞株由东南大学附属中大医院内分泌科孙 ２ 结 果 子林教授 惠赠。微孔底膜套皿购于 Ｍｉｉｏｅ ｌｐｒ 公司 ；Ｄ 葡萄糖 、 ｌ ． 溶 血 卵 磷 脂（Ｐ ） Ｌ Ｃ 、甘露 醇 购 自 Ｓｇ ｉ ｍａ公 司 ；Ｃ ｌ 及 Ｆ ｏＩ Ｖ ｎ Ｅ ＩＡ试剂盒购 自长沙嘉美生物公司。 ＬＳ
。
一
Ｏ
本实验发现，与系膜细胞单培养相 比，正常葡萄糖水平 下将内皮细胞与系膜细胞共 同培养 ，上清液 Ｃ ｌＶ及 Ｆ 含量 ｏ Ｉ ｎ 均无 明显变化 ；而 在高糖及高脂 条件下两种细胞共培养时 ， Ｃ ｌＶ及 Ｆ ｏＩ ｎ蛋 白含量 均 明显 高于单培养 时的数值 。结果表 明，内皮细胞与系膜细胞之间可能存在一定的相互作用 ，导致 损伤反应在肾小球局部不断放大 ，加重细胞外基质的积聚。 肾脏局部肾素 。 血管紧张素． 固酮 （ Ａ 醛 Ｒ Ｓ）系统在糖尿病 肾病的发病机制 中的作用 日益受到重视 ，而血管紧张素受体拮
【 摘要 】 目的：探讨高糖高脂条件下肾小球内 皮细胞与系膜细胞问相互作用对细 胞外基质 （ Ｃ 产生的影响。方法：建 Ｅ Ｍ） 立内皮细胞 与系膜细胞共培养模型，实验分为正常对照组、甘露醇组、高糖组、高脂组、高糖高脂组及 阻断剂干预组 ， 分别培养
ｌ ，２ ，４ ｈ ，Ｅ ＩＡ法测定细胞上清液 Ｉ ２ ４ ８后 ＬＳ ｖ型胶原 （ ｏ Ｉ 、纤维连接蛋 白 （ ｎ） Ｃ ｌＶ） Ｆ 含量。结果 ：（ ）高糖高脂培养条件下 ，共 １
培养组细胞上清液 Ｃ ｌ 、Ｆ ｏＩ Ｖ ｎ的含量较单培养组 明显增高 （ ＜ ． ） ２ Ｐ０ ５ ；（ ０ ）氯沙坦可抑制高糖高脂引起的 Ｆ 和 ＣｌＶ升高 （ ｎ ｏＩ Ｐ ＜ ．５ ；结论 ：（ ）高糖高脂环境下，内皮细胞和系膜细胞 问存在相互作用，这种作用能促进 Ｅ Ｍ－ｏ Ｉ ０Ｏ ） １ Ｃ Ｃｌ Ｖ、Ｆ ｎ的产生；（ ）氯沙 ２ 坦能通过抑制 Ｅ Ｍ 的产生影响细胞间的相互作用。 Ｃ 【 关键词 】 高糖 ；溶血卵磷脂； 细胞间相互作用；细胞外基质 【 中图分类号】 ５７ Ｒ ８． １ Hale Waihona Puke Baidu 文献标识码 】 Ａ 【 文章编号】 ６２ ５３ ２ １） ６ ０４０ １ ． ２ （ ０１ ０． ２． ７２ ０ ２
参 考文献
［］ Ｘ ｅ ， ｈｎＸ Ｅ ｉ ｍ ｏ ｇ， ｊｒ ｕ ｏ ｓ ｒｋｆ ｔｒ １ ｉ Ｙ Ｃ ｅ ． ｐｄ ｉｌ ｙｍａ ｔ ｍｅ，ｉ ｃ ｓ ｅ ｏ ｏｏ ｃ ｓ ａｏ ，
ｐ ｅ ｅ ｔ ｎ ａ ｄ ｍａ ａ ｅ ｎ ｆ ｃ ｒ ｎ ｃ ｋ ｄ ｅ ｉｅ ｓ ｎ Ｃ ｉ ａ ｒｖ ｎ ｉ ｎ ｎ ｇ ｍｅ ｔ ｏ ｈ ｏ ｉ ｉｎ ｙ ｄ ｓ ａ ｅ ｉ ｈ ｎ ． ｏ
理 ，均以 ±ｓ 表示 ，两组间差异 比较采用 ｔ 检验 ；多组间差异
比较采用方差分析，Ｐ ０ ５ ＜ ． 表示差异有统计学意义。 ０ ２１ 高糖高脂对 Ｆ 、Ｃ ｌＶ的影响 在共培养及单培养条件 ． ｎ ｏ Ｉ 下，与对照组相 比，随作用时间的延长 ，高糖、高脂对细胞上 清液 中 Ｃ ｌ 、Ｆ ｏＩ Ｖ ｎ的分泌有促进作用 （ ＜ ． ，其中作用 Ｐ ００ ５）
１ ＿ ２ 方 法
１ ． 细胞培养 取在 １％ｔ 牛血清的低糖 ＤＭＥ 培养液中 ．１ ２ ０ Ｊ ， Ｍ 贴壁生 长良好的处于对数生长期的细胞进入实验组。单培养 系 膜细胞 以 ２×１５个／Ｌ ０ 孑 直接接种于普通 ６ Ｌ 孑 培养板 中；共培养
先将内皮细胞以 １ ０ 个／ ×１５ 孔接种于 ６孔培养板中，待细胞贴
常对照组及甘露醇组中，共培养时 Ｆ 、Ｃ ｌＶ与单培养相比均 ｎ ｏＩ 无差别 （ ＞ ． ） Ｐ ００ ；高糖 、高脂及高糖高脂组共培养时 Ｆ 、Ｃ ｌ ５ ｎ ｏ
Ｉ Ｖ含量均较单培养明显增高 ， 共培养 １， ４ ４ｈ ２ ２ ， ８ 与单培养 比
较 ，Ｐ均 ＜ ． 。（ ｌ ０ ５ 表 ，２） ０ 。
▲ Ｐ０ ５ ＜ ． ；与高脂组比较 ※ Ｐ Ｏ ５ ０ ＜． ： ０
注：与正常对照组 比较 Ｐ ０ ５ ； ＜． ０ 与单培养比较
与高糖高脂组 比较 撑Ｐ ０ ５ ＜． 。 ０
３ 讨 论
△ Ｐ０ ５ ＜ ． ；与高糖组 比 ０ 较
▲ Ｐ０５ ＜． ；与高脂组 比 ※ Ｐ０ ５ ０ 较 ＜． ： ０
抗 ，使内皮细胞和系膜 细胞之间的异常相互作用得到有效控 制，从而产生明显的肾脏保护作用。
在糖尿病肾病 的发生发展过程 中，糖代谢紊乱一直备受重 中提出脂代谢障碍为糖尿病及其并发症的原发病理生理改变以
视，但随着 Ｍｃ ａｒ ２０ 年美国糖尿病学会 （ Ｄ Ｇｒ ｙ在 ０ １ Ａ Ａ）年会 护作用是独立于降压作用之外的 ，它不仅能改善血流动力学紊
ｅｏｏｙｏ ｔ ｅ ｉ ｅ ｓＤ ａｅ ｓ ０ １ ０Ｓｐ ｌ ） ． ｔ ｌ ｆｙ ｄａ ｔ ． ｉ ｔ ， ０ ， （ｕ ｐ２： ｉ ｇ ｐ２ ｂｅ ｂｅ２ ５ ６ ［］ Ｌ ｅＨＳ Ｓ ｎ Ｙ Ｏ ｉｉ ｄＬ ｗ Ｄ ｎｉ ｉｏｒｔｎ ａｄ ３ ｅ ， ｏｇ Ｃ ． ｘｄ ｅ ｏ － ｅｓｙＬｐ ｐｏｅ ｎ ｚ ｔ ｉ
《 求医问药》下半月刊
Ｓｅ ｅ ｉａ ｎ ｓ ｈ ｅｉｉｅ ０ １ ｅｋＭ ｄｃ ｌＡｄＡ ｋＴｅＭｄｃｎ ２ １ 年第 ９ 卷 第６ 期
２ ５
注： 与正常对照组比较 ＜ ． ；与单培养 比 Ｐ０ ５ Ｏ 较 △ ＰＯ ５ ＜． ；与高糖组 比 ０ 较 与高糖高脂组比较 ｊ ＜ ． 。 ｆ ０５ ｝ ０ Ｐ 表 ２ 共培养及单培养各组 Ｆ 含量 ｎ
（ 上接第 ２ ６页 ）［】 张素 良，张少波． ７ 思密达 治疗迟发型母乳
［Ｏ 魏雪莲 ，关晓洁． １】 妈咪爱散剂联合思密达治疗新生儿母乳
性黄疸 １ 例报告． 医药实践． １． （ ） ６． ５ ７ 临床 ２ ０ ９ Ａ：４ ６ ０ １６ ４ ４ ［ 施文洁， ． ０ ８ ］ 钱琪 １ 例母乳 性黄疸 的临床 分析． １ 中国实用 医
Ａ Ｊ ｅｈｏ．０ ８２（） －． ｐｂ２０ ｅ ． ｍ Ｎ ｐ １ ０ ； １ １ Ｅ ｕ ０７Ｓｐ ０ ｒ ２ ８ ：７ ２ ［］ Ｍｃ ａｒ Ｄ Ｄ ｓ ｇｌ ｉ ｆ ａｙａｉ ｅ ｂ ｌｍ ｅ ２ Ｇ ｒ Ｊ ． ｙｒ ｕａｏ ｏ ｔ ｃ ｍ ｔ ｏｉ ｉ ｔ ｙ ｅ ｔｎ ｆｒ ｄ ａ ｓ ｎ ｈ
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《 求医 问药 ＞下半月刊
Ｓｅ ｅｉａ ｎ ｓ ｈ ｅ ｉｉｅ ０１ ｅｋＭ ｄｃｌＡｄＡｋＴｅＭｄｃｎ ２ １ 年第 ９ 卷 第６ 期
浅谈高糖高脂环境下 肾小球内皮细胞与系膜细胞间相互作用
对细胞外基质产生的影响
赵晋 晋 １ 雷 闽湘 ２
（ 湖南省长沙市第一医院内分泌科 湖南 长沙 ４ ００ ：２中南大学湘雅医院内分泌科 湖南 长沙 ４ ０ ０ ） １ １０ ８ １０ ８
ｌ 材料和方法 １１ 材料 ． 人脐静脉内皮细胞株购于北京大学医学院肿瘤研究 备测 。Ｆ ｎ及 Ｃ ｌＶ测定依照 Ｅ ＩＡ试剂盒说明检测 。Ｅ － 蛋 ｏＩ ＬＳ Ｔ１ 白测定按照 Ｅ － 放免试剂盒说明检测。 Ｔ１
１ ． 统 计学处理 采用 Ｓ Ｓ １． ．４ ２ Ｐ Ｓ１ ０统计 软件包进 行数据处
２ｈ ４ 达高峰 （ ＜ ． ） 高糖对 Ｃ ｌ Ｐ０ ５ ； ０ ｏＩ Ｖ、Ｆ 的促进作用与渗透 ｎ 压无关 ，相同渗透压的甘露醇对 Ｃ ｌＶ、Ｆ ｏ Ｉ ｎ的分泌无明显影响 （＞ ． ） ＰＯ ５ 。高糖高脂组细胞上清液中 Ｃ ｌ Ｆ 的增加更为 ０ ｏＩ Ｖ、 ｎ 明显 （ ＜ ． ） 表 １ ｏ Ｐ ００ （ ，２） ５
这一机制被认为与 Ｐ Ｃ系统和 Ｔ Ｆ Ｂｌ Ｋ Ｇ ． 激活相关 。
综上所述 ，高糖高脂环境下内皮细胞与系膜细胞间可能存 在异常的相互 作用 ，这一相互作用可以促进细胞外基质的产
生。而氯沙坦可以通过抑制细胞外基质的产生，干预这一异常
的相互作用 ，这可能也是氯沙坦治疗糖尿病’ 肾病的重要机制之
＿ ３ 培养 ，系膜细胞单培养两种 。每种培养方式分别按照培养条件 ２ 氯沙坦对内皮细胞和系膜细胞相互作用的干预 细胞上清 随机分为六组：Ａ正常对照组（． ｍ １ ． ５ ｍ ｏＬ 葡萄糖） Ｂ 甘露 液中 Ｃ ｌ 、Ｆ 含量在培养 ｌ，２，４ｈ ５ ／Ｄ ； ｏＩ ｎ Ｖ ２ ４ ８ 时氯沙坦干预组与高 醇组 （ ４ ｍ ｌ 甘 露醇 ） ２．ｍ ｏＬ ５ ／ ；Ｃ 高糖组 （ ０ ｍ ｌ ． 萄 ３ｍ ｏＬＤ 葡 糖高脂组 比 ， 均＜． 表 １ ２。 ／ 较 Ｐ ０ ５（ ， ） Ｏ 表 １ 共培养及单培养各组 Ｃ ｌ ｏＩ Ｖ含量（ ／） ｕＬ ｇ
２ 内皮 细胞 与 系膜 细 胞相 互作 用对 Ｆ 、Ｃ ｌＶ 的影 响 ． ２ ｎ ｏＩ 正
壁后再将系膜细胞 以 ２ １５ 孔接种于微孑底膜套皿内。待 × ０ 个／ Ｌ 细胞生长至 ８％ ０ 融合时换用无血清的 Ｄ Ｍ 同步化 １ 后 ， ＭＥ ２ ｈ 加入条件培养液进行干预。 １ ． 实验分组 按培养方式不 同分为 内皮细胞与系膜细胞共 ．２ ２
抗剂（ｒ 目前已广泛应用于糖尿病肾病的临床治疗 中。氯沙 Ａ Ｂ） 坦作为一种重要的 ＡＲ Ｂ类药物 ，许多研究证实其对 肾脏的保 乱 ，更重要 的是能够抑制糖尿病状态下多种损伤介质的表达 。 本文 的研究结果显示加入氯沙坦干预能明显减少高糖高脂所致 的 Ｃｌ ｏ１ Ｖ、Ｆ 增加 ，提示氯沙坦可以通过对 Ｅ Ｍ 的分泌的拮 ｎ Ｃ
来， 脂代谢紊乱也越来越受到人们的关注 ， 前脂代谢紊乱也被 目
证实是 Ｄ Ｎ的一种独立损伤因素［。糖尿病 肾病特征性的病理 ２ ］
变化为系膜细胞增生 、细胞外基质聚积及 肾小球基底膜增厚 。 系膜区细胞外基质过度堆积是导致糖尿病 肾病 肾小球硬化的直 接原 因之一 ，众多研究表 明，Ｆ ｎ和 Ｃ ｌＶ是反应细胞外基质 ｏＩ 胶原代谢的敏感指标。本研究发现 ，不论在共培养还是在单培 养条件下 ，高糖和高脂均可 以促进系膜细胞 Ｆ ｎ和 Ｃ ｌＶ 的产 ｏＩ 生 ，而在高糖高脂联合作用条件下 ，这一促进作用更加明显 ，
Ｏｘｄ ｔ ｅ Ｓｒ ｓ ｎ ｔ ｅＤｅ ｅｏ ｍｅ ｔｏ ｏ ｒ ｌ ｓ ｌ ｏ ｉ． ｉ ａｉ ｔｅ ｓｉ ｖ ｌ ｐ ｎ ｆＧｌ ｍｅ ｕ ｏ ｃｅ ｓｓ Ａ ｖ ｈ ｒ ｍ Ｊ
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所 。人肾小球系膜细胞株由东南大学附属中大医院内分泌科孙 ２ 结 果 子林教授 惠赠。微孔底膜套皿购于 Ｍｉｉｏｅ ｌｐｒ 公司 ；Ｄ 葡萄糖 、 ｌ ． 溶 血 卵 磷 脂（Ｐ ） Ｌ Ｃ 、甘露 醇 购 自 Ｓｇ ｉ ｍａ公 司 ；Ｃ ｌ 及 Ｆ ｏＩ Ｖ ｎ Ｅ ＩＡ试剂盒购 自长沙嘉美生物公司。 ＬＳ
。
一
Ｏ
本实验发现，与系膜细胞单培养相 比，正常葡萄糖水平 下将内皮细胞与系膜细胞共 同培养 ，上清液 Ｃ ｌＶ及 Ｆ 含量 ｏ Ｉ ｎ 均无 明显变化 ；而 在高糖及高脂 条件下两种细胞共培养时 ， Ｃ ｌＶ及 Ｆ ｏＩ ｎ蛋 白含量 均 明显 高于单培养 时的数值 。结果表 明，内皮细胞与系膜细胞之间可能存在一定的相互作用 ，导致 损伤反应在肾小球局部不断放大 ，加重细胞外基质的积聚。 肾脏局部肾素 。 血管紧张素． 固酮 （ Ａ 醛 Ｒ Ｓ）系统在糖尿病 肾病的发病机制 中的作用 日益受到重视 ，而血管紧张素受体拮