无菌知识与无菌操作注意事项

无菌知识与无菌操作注意事项
目录：
1、微生物基本知识
2、无菌的基本知识
3、GMP中关于洁净区管理的基本要求
4、洁净区人员卫生规范
5、洁净区人员行为规范
6、具体工作中的注意事项
具体内容：
1、微生物基本知识
1.1微生物包括：细菌、真菌、放线菌、蓝线菌、立克次氏体、支原体、衣原体、病毒。

1.2细菌的特点：体积小、面积大；吸收多、转化快；生产旺、繁殖快；
适应性强；分布广、种类多
1.3细菌的形态：○1球菌○2杆菌○3螺旋菌
1.4细菌的结构：
○1基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞核、核质体
○2特殊构造：鞭毛、菌毛、芽孢、美膜、气泡
1.5芽孢：某些细菌在其生产的一定阶段，于营养细胞内形成一个圆形或卵圆形的内生孢子，是细菌的休眼体。

特点：含水量低、壁原而致密，对热、化学剂、辐射、压力、抵抗力强。

1.6常见污染药物的菌体都是一些生命力强的菌体，如葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、枯草杆菌以及一些霉菌等。

2、无菌的基本知识
按照无菌的最严格的定义，只有完全没有活微生物的样品才认为是无菌的。

但由于检查有一定的限度，它属于小概率事件，不可能破坏所有的药品，所以对于整批药品而言，实际上不能证明绝对无菌。

因此，声称无菌的一批产品的无菌情况是按照概率来定义的。

所以不能仅靠无菌检查来保证产品的无菌，而应通过全过程的无菌管理来保证产品的无菌。

我公司生产的产品主要用于注射剂的原料，因此要严格控制其无菌和澄明度。

如果使用了染菌的针剂，若是非致病菌，可能回引起局部的炎症，而若是致病菌，就可能会引起相应的疾病，染菌严重的药品若用于输液，会引起脓毒症、败血症甚至死亡。

较大的微粒可造成局部循环障碍，引起血管栓塞；微粒过多，造成局部堵塞和供血不足，组织缺氧而产生水肿
和静脉炎；异物侵入组织，由于巨噬细胞的包围和增殖引起的肉芽肿。

此外，威力还可引起过敏反应、热原样反应。

灭菌与消毒
灭菌方法：
物理灭菌法（干热灭菌、湿热灭菌、辐射灭菌、过滤除菌）；
化学灭菌法（化学药剂杀菌法、气体灭菌法）
2.1化学消毒：
2.2物理灭菌
紫外线是一种比可见的紫外光波长还要短的不可见电磁波，它的波长范围是100~380nm，微生物体内都含有核酸，而核酸吸收紫外线照射的辐射能后可引起光化破坏作用，从而杀死微生物。

注意：紫外线不能直接照射在皮肤上，如照射时间较长，会出现皮肤变黑和烧灼等现象，如果眼睛受到紫外线辐射则会得结膜炎后角膜炎。

由于紫外线的杀菌只限于被照射物的表面，不能透入溶液或固体物质的深部，因此最适宜做空气杀菌。

3、GMP中关于洁净区管理的基本要求
3.1、洁净室（区）内人员数量应严格控制。

其工作人员（包括维修、辅助人员）应定期进行卫生和微生物学基础知识、洁净作业等方面的培训及考核；对进入洁净室（区）的临时外来人员应进行指导和监督。

3.2、洁净室（区）与非洁净室（区）之间必须设置缓冲设施，人、物流走向合理。

3.3、100级洁净室（区）内不得设置地漏，操作人员不应裸手操作，当不可避免时，手
部应及时消毒。

3.4、10,000级洁净室（区）使用的传输设备不得穿越较低级别区域。

3.5、100,000级以上区域的洁净工作服应在洁净室（区）内洗涤、干燥、整理，必要时应按要求灭菌。

3.6、洁净室（区）内设备保温层表面应平整、光洁，不得有颗粒性物质脱落。

3.7、洁净室（区）内应使用无脱落物、易清洗、易清毒的卫生工具，卫生工具要存放于对产品不造成污染的指定地点，并应限定使用区域。

3.8、洁净室（区）在静态条件下检测的尘埃粒子数、浮游菌数或沉降菌数必须符合规定，应定期监控动态条件下的洁净状况。

3.9、洁净室（区）的净化空气如可循环使用，应采取有效措施避免污染和交叉污染。

3.10、空气净化系统应按规定清洁、维修、保养并作记录。

4、洁净区人员卫生规范
4.1.一般生产区
⑴生产人员要有健康档案，每年至少体检一次。

⑵传染病、皮肤病患者和体表有伤口者不得从事直接接触药品的生产。

⑶要经常洗澡、理发、刮胡须、修剪指甲、勤换衣服、保持个人清洁。

⑷不得裸手直接接触药品。

4.2 十万级区
除符合4.1的要求外，还应符合：
⑴直接接触药品工序的操作人员，不得化妆，佩带饰物与手表，眼镜要进行相应的清洁后方能带入。

按规定洗手、更衣，戴帽应不露头发。

工作服、鞋、帽不得穿离本工作区。

⑵仅限于该区域的生产人员和经批准的人员进入，不得串岗，尽量减少参观人员。

⑶出入本区人员应严格遵守净化程序。

4.3万级区及百级区
除符合4.1、4.2的要求外，还应符合：
⑴操作人员不得有外伤、炎症、瘙痒症。

每班必须换内、外衣一次。

⑵百级区不得裸手操作，手部要半小时消一次毒。

⑶本区操作人员数量要控制到最低限度，少走动、动作要轻、缓，严禁跑、跳、打闹、摘口罩、挽袖子，在非坐具及地面上坐卧等。

⑷本区域的工作人员（包括维修、辅助人员）应定期进行卫生和微生物学基础知识，洁净作业等方面的培训及考核，对进入本区的临时外来人员要进行详细的指导和严格的监督。

5、洁净区人员行为规范
5.1只能用无菌工具接触无菌药品。

无菌工具（比如铲子），只能用于处理无菌原料。

两次使用之间，无菌工具应放在无菌容器中。

如果有必要，这些无菌工具在操作过程中应及时更换。

在最初的灭菌后，无菌手套应经常消毒以减少污染机率。

人员不得直接接触无菌药品、容器、挡板、关键的表面。

5.2缓慢而又谨慎的操作。

剧烈运动或操作会在控制区产生不能被接受的空气湍流。

这种操作会破坏无菌环境，对洁净区的设计参数和控制是一个挑战。

在洁净区工作要遵循这个原则，即：缓慢小心的操作。

5.3人的身体不能进百级层流罩。

百级层流罩设计用于保护设备表面、包装容器和产品无菌，在无菌区域，人员不能破坏百级层流罩的单向流向。

5.4采取必要的操作方式以保证产品的无菌，为了保持附近无菌原料的无菌性，正确的无菌操作应当是从侧面接触药品而不是从上面接触药品（在垂直的百级层流罩中），同样，不能在直接面对无菌生产线的区域内说话。

6、具体工作中的注意事项
6.1 卫生要求：
厂房设施：
地面、门窗、玻璃、墙面、顶棚、灯具洁净完好，无浮土、粉尘、脏物、水迹；
生产车间全部门窗要关闭。

防止昆虫进入。

更衣室、浴室及厕所的设置不得对洁净室(区)产生不良影响。

设备：
设备管道管线排列整齐，设备表面无锈迹，保温完好，无跑、冒、滴、漏；设备、管道及容器具、清洁工具应做到光洁无污垢；
管道与设备标识要完整。

空调进风口、排风口及其他附属装置洁净无尘；
设备、容器、工具定置放置，并符合清洁标准，放置时不应影响气流的流向。

卫生洁具：
1、不同级别的洁净区的卫生洁具要分别存放，不可混放。

2、生产区不得有非生产物品、个人杂物等。

6.2防止异物：
因为产品是直接注射入体内，故对异物要求很严格。

因此，在许多易引入异物的地点，操作时应细心操作：
清洗设备时注意死角，将异物和残留物完全清洁掉；
罐开盖时应轻拿轻放，避免碰撞掉入异物；
对无菌室的工具使用前后一定要清点数目（尤其是分装岗位），避免丢入产品中；
生产分装前的清场工作，要清理与本批无关的东西，如：其它批产品、无关的工器具、塑料袋、标签等等。

6.3洁净区无菌环境的保持：
人是最大的污染源。

注意保持无菌室内人数不能太多。

注意在随时关门（因为在洁净区内不同级别之间会保持一定的压差）。

递物柜不得双门对开等。

6.4包装操作：
注意双人复核；
清点每批的数量；
包装线清场注意其它批次的产品及包装标识材料；
包装时注意检查封口严密性；
打印标签要注意批号、生产日期、有效期等；
所有的动作都应有相应的记录。

6.5万级生产区域各操作间的卫生管理
万级生产区域各操作间的卫生管理本规程分设备清洗和房间清洗两部分。

设备清洗按相应清洗规程进行操作。

设备清洗：设备应定期清洁、消毒；
操作间的清洗：
分日清洗、周清洗和月清洗：
1）、日清洗规程：
清除、清洗废物贮器并以消毒清洁剂擦洗。

用消毒清洁剂擦门窗、地面、室内用具及设备外壁
用消毒清洁剂擦去墙面及其附属装置上污迹
2）、周清洗规程：
用消毒清洁剂擦拭室内一切表面，包括墙面及顶棚
3 ）、月清洗规程：
室内消毒或根据室内菌检情况决定消毒周期
根据测试数据更换通风过滤介质。