山东大学药理学研究所丁华dinghuasduedu
多西他赛诱导乳腺癌Bcap37细胞凋亡作用的研究
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! 关键词 " 乳腺肿瘤#病理学 & 紫杉酚#投药和剂量 & 肿瘤细胞 ! 培养的 & 细胞凋亡 ! 乳腺肿瘤#药理学 & % ’ (, ’ (= ’ ( 3 2 6 7> + . 2 6 : 6 9 3 :;1 / 7 -&! , ; 2 3 : 2 0 + . + 3 2 6 7> + . 2 6 : 6 2 7 ; + . 2 0 . 4 7 2 [ . 2 8 : 4 > 4 6 7 3 2 7 4 + > k 8 + 6 2 = = 5 < = = 5 < 5 ! ( 7 1 : + 30 . . 6 0 1 . 7 1 3 8 2 + 7 + 6 4 6 = = ! 中图分类号 " 文献标识码 " 文章编号 " " $ $ ) $B "!!! ! ] $ )S% # ] " # & & ] ! (S! ) ( ’S& ) !R !I!!! ! !!
关于参与大学生科技创新项目的体会
The Science Education Article Collects No.32,2020 Sum No.5122020年第32期总第512期摘要大学生科技创新项目对学生创新思维的培养与实验技能的提高具有重要作用。
大学生通过参与创新实验，自主设计课题、参与结果讨论，能加深对专业知识的理解，提升综合素质。
关键词大学生科技创新项目；喷雾干燥法；微球The Experience about Participation in Science and Tech-nology Innovation Projects for College Students//LIN Guimei,SHEN HuaAbstract Science and technology innovation projects for college students play an important role in cultivating their innovative thinking and improving their experimental skills.By participating in innovation experiments,college students can independently design subjects and participate in the discussion of results,which can deepen their understanding of professional knowledge and improve their comprehensive quality.Key words science and technology innovation projects for col-lege students;spray drying method;microsphere1前言“大学生科技创新项目”是鼓励在读大学生积极走入实验室，将创新课题从书本推向实践、从设计推向成果的一条重要科创途径，目前在许多高校得以广泛开展。
绞股蓝总皂苷对谷氨酸所致大鼠海马组织损伤的保护作用
绞股蓝总皂苷对谷氨酸所致大鼠海马组织损伤的保护作用韩玉霞;魏欣冰;李霞;丁燕;辛华;丁华【期刊名称】《山东大学学报：医学版》【年(卷),期】2008(46)5【摘要】目的探讨绞股蓝总皂苷(gypenosides,GP)对大鼠侧脑室注射谷氨酸(glutamate,Glu)引起的海马组织氧化损伤的保护作用。
方法将大鼠随机分为假手术组、Glu损伤组、GP低(200 mg/kg)、中(400 mg/kg)、高(800 mg/kg)剂量组。
GP组预先灌胃给药10 d。
大鼠经侧脑室注射Glu后2 h取脑,测定各组大鼠海马组织匀浆中的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及产生羟自由基的能力;制备海马组织切片,观察各组形态学变化。
结果Glu损伤组大鼠海马组织中MDA含量和羟自由基生成能力均高于假手术组(P<0.05),而SOD和GSH-Px活性降低(P<0.05);与Glu损伤组比较,GP组MDA 含量和产生羟自由基的能力降低(P<0.01),SOD和GSH-PX活性明显增强(P<0.01);HE染色显示,GP组海马神经元变性及坏死较Glu损伤组明显减少。
GP 400 mg/kg对Glu所致海马组织氧化损伤的保护作用最为明显。
结论GP通过增强抗氧化酶活性,抑制羟自由基和脂质过氧化物生成而减轻Glu介导的氧化性神经损伤,发挥神经保护作用。
【总页数】4页(P449-452)【关键词】绞股蓝总皂苷;谷氨酸;氧化性神经毒性【作者】韩玉霞;魏欣冰;李霞;丁燕;辛华;丁华【作者单位】山东大学医学院药理学研究所,济南250012;山东大学医学院细胞生物学研究所,济南250012【正文语种】中文【中图分类】R965【相关文献】1.绞股蓝总皂苷对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 居立娟;王云东2.绞股蓝总皂苷对血管性痴呆大鼠海马一氧化氮合酶阳性神经元及核酸的保护作用研究 [J], 齐刚;杨程;张莉;吴光亮;熊杰;李积胜3.一氧化氮与光化学法诱导大鼠脑缺血早期损伤的关系和绞股蓝总皂苷对脑缺血损伤的保护作用 [J], 谢志忠;朱炳阳;唐小卿;廖端芳;余麟4.绞股蓝总皂苷对血管性痴呆大鼠海马一氧化氮合酶及核酸的保护作用 [J], 齐刚;张莉;吴光亮;熊杰;李积胜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂抗动脉粥样硬化机制研究进展
血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂抗动脉粥样硬化机制研究进展王允;丁华
【期刊名称】《中国动脉硬化杂志》
【年(卷),期】2005(13)6
【摘要】血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂从多方面阻滞血管紧张素Ⅱ的功能,来抑制动脉粥样硬化的形成和发展:降低核因子κB活性而抑制趋化因子及粘附分子的释放,对抗炎症反应;降低细胞内总氧化能力,减少自由基生成,减弱低密度脂蛋白氧化,抑制巨噬细胞吞噬氧化型低密度脂蛋白的能力,从而减少泡沫细胞形成;增加内皮源性血管舒张因子水平,保护血管内皮;抑制血管平滑肌细胞迁移和增殖;降低血小板黏附、聚集活性,抑制血栓形成;减少动脉斑块内胆固醇酯含量,减少巨噬细胞浸润、抑制基质金属蛋白酶1的表达,增加斑块稳定性。
【总页数】3页(P810-812)
【关键词】药理学;动脉粥样硬化;血管紧张素Ⅱ;血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂【作者】王允;丁华
【作者单位】山东大学医学院药理学研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R961
【相关文献】
1.血管紧张素Ⅱ 1型受体拮抗剂与醛固酮受体拮抗剂对逆转高血压伴左室扩大患者心肌重塑的作用 [J], 赵林双;丁东平;向光大;戚本玲;柯琴梅;乐岭;侯洁;曹红艳
2.血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂在动脉粥样硬化中的研究进展 [J], 于丽娜;徐延敏
3.Ang Ⅱ 1型受体拮抗剂抗动脉粥样硬化作用研究进展 [J], 丁华;王允
4.血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素受体拮抗剂改善2型糖尿病合并动脉粥样硬化患者血管内皮功能近期疗效的对比研究 [J], 王玲;黄新胜;周颖玲;陈纪言;林曙光
5.血管紧张素Ⅱ型受体拮抗剂在抗动脉粥样硬化中的作用 [J], 华琦
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生药学 绪论 第一章
贝母：川贝母、浙贝母、平贝母和伊贝母
西贝素苷 imperialine glycoside R=OGlu
川贝：卷叶贝母、暗紫贝母、甘肃贝母及梭砂贝母。 功能主治：本品味苦，性微寒，归肺经，具有清热化痰止咳之功，
To control active compounds (alkaloids) by TLC fingerprints
真
伪
原植物形态 Plant Morphology
多年生草本，茎丛生；上部稍扁， 稍弯曲；具槽纹，节略粗；叶近革 质；花被白色带浅紫色，先端紫红 色；唇瓣倒卵状，先端圆形，唇盘 上具紫斑。
金钗石斛
呈扁圆柱形，节间长2.5-3cm； 表面金黄色或黄中带绿色；有深纵 沟；质硬而脆，断面平坦；味苦
性状特征 Description
清代：赵学敏 本草纲目拾遗 载药921种，其中《本草纲目》 中未收载的有716种。 此外，清代吴其浚《植物名实图考》、《植物名实图考 长编》，是专论植物的著作，附图精细，考证详实，很有价 值。 晋•嵇含《南方草木状》世界上最早的区系植物志。 明•兰茂：《滇南本草》我国现存内容最丰富的古代地方 本草。
中药：根据中医学的理论和临床经验应用于医疗保健的 药物。包含中药材、中药饮片、中药汤剂和中成药(成方制 剂)。 中药材：既是切制成饮片，供调配中医煎服，或磨成细 粉服用或调敷外用；又是供中药厂生产中药成方制剂或制药
工业提取有效化学成分的原料药。
草药：一般是指草医用以治病或地区性口碑相传的民间 药，其中也有是本草记载的药物。随着药源普查和对草药的 不断研究，一些疗效较好的草药逐渐被中医界所应用，或作
现代中药是指来源于传统中药的经验和临床实践、依靠现代先进科学的 方法和手段，遵循严格的规范指标研制出的优质、高效、安全、稳定、质量 可控、服用方便并具有现代剂型的新一代中药。这种新型中药，科技含量高， 具有"三效"（高效、速效、长效）、"三小"（剂量小、毒性小、副作用小） 以及"三便"（便于贮存、携带及服用）等特点，符合并达到国际医药主流市 场对产品的指标和要求，因而有较强的竞争力，可以在国际广泛流通。 中药一类新药：参一胶囊 日本 德国 韩国
元胡止痛口服液药材、中间体及制剂的定量指纹图谱方法研究
第42 卷第 8 期2023 年8 月Vol.42 No.8984~991分析测试学报FENXI CESHI XUEBAO（Journal of Instrumental Analysis）元胡止痛口服液药材、中间体及制剂的定量指纹图谱方法研究颉佳乐1，2，兰婧1，2，曹智铭3，关建丽3，王毅1，2，4，龚行楚1，2，4*（1．浙江大学药学院，浙江杭州310058；2．浙江大学智能创新药物研究院，浙江杭州310018；3．河南福森药业有限公司，河南南阳474450；4．组分中药国家重点实验室浙江大学交叉创新中心，浙江杭州310058）摘要：建立了适用于元胡止痛口服液原料药材、中间体及制剂中若干生物碱类成分的定量指纹图谱方法。
采用DIKMA Diamonsil Plus C18－A色谱柱（4.6 mm × 250 mm，5 µm），以0.04%乙酸铵溶液（冰醋酸调至pH 4.0，A）－乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱，在280 nm下进行检测。
指纹图谱中含共有峰7个，其精密度、重复性、稳定性的相对标准偏差（RSD）均小于5.0%。
对延胡索乙素、去氢延胡索甲素进行定量分析，其分别在6.15 ~ 123 µg/mL和10.15 ~ 203 µg/mL范围内线性关系良好，相关系数（r2） > 0.999，进样精密度、方法重复性的RSD均小于5.0%，供试品溶液在24 h内稳定。
延胡索乙素、去氢延胡索甲素在低、中、高3个加标水平下的平均回收率为89.6% ~ 107%，RSD小于3.0%。
所建立的分析方法稳定、准确、可靠，能够对药材、中间体及制剂中的中等极性成分进行检测，可用于考察工业生产中元胡成分的量值传递情况，从而为改进元胡止痛口服液制药过程控制水平提供技术支持。
关键词：定量指纹图谱；含量测定；元胡止痛口服液；延胡索乙素；去氢延胡索甲素中图分类号：O657.63；R283文献标识码：A 文章编号：1004-4957（2023）08-0984-08Study on Quantitative Fingerprints for Raw Medicinal Materials，Intermediates and Preparations of Yuanhu Zhitong KoufuyeXIE Jia-le1，2，LAN Jing1，2，CAO Zhi-ming3，GUAN Jian-li3，WANG Yi1，2，4，GONG Xing-chu1，2，4*（1．College of Pharmaceutical Sciences，Zhejiang University，Hangzhou 310058，China；2．InnovationInstitute for Artificial Intelligence in Medicine，Zhejiang University，Hangzhou 310018，China；3．Henan Fusen Pharmaceutical Co.，Ltd.，Nanyang 474450，China；4．State Key Laboratory ofComponent－Based Chinese Medicine，Innovation Center in Zhejiang University，Hangzhou 310058，China）Abstract：A quantitative fingerprint method was established for several alkaloids in the raw medicinal materials，intermediates and preparations of Yuanhu Zhitong Koufuye．A DIKMA Diamonsil Plus C18－A chromatographic column（4.6 mm × 250 mm，5 µm） was used for separation with gradient elution. The mobile phase was consisted of solvent A（0.04% ammonium acetate solution，glacial acetic acid was used to regulate the pH value to 4.0） and solvent B（acetonitrile）．The detection wavelength was 280 nm．There were 7 common peaks in the fingerprint．The relative standard deviations（RSDs） of precision，re⁃peatability and stability were all less than 5.0%．The linear relationships of tetrahydropalmatine and dehy⁃drocorydaline were good within the range of 6.15－123 µg/mL and 10.15－203 µg/mL，respectively．The correlation coefficients（r2） were more than 0.999，and RSDs for injection precision and method re⁃peatability were less than 5.0%．The sample solution was stable within 24 h．The average recoveries for tetrahydropalmatine and dehydrocorydaline at low，medium and high levels ranged from 89.6% to 107%，with RSDs less than 3.0%．The established method is stable，accurate and reliable，and could be used to detect the medium polar components in the medicinal materials，intermediates and preparations，in⁃vestigating the quantity and measure value transfer of the components in Corydalis Rhizoma during indus⁃doi：10.19969/j.fxcsxb.23030303收稿日期：2023－03－03；修回日期：2023－04－10基金项目：国家中医药管理局创新团队与人才支持计划项目（ZYYCXTD-D-202002）；河南省重大科技专项项目（201111310800）；中央高校基本科研业务费专项资金资助项目（226-2022-00226）∗通讯作者：龚行楚，博士，副教授，研究方向：中药质量控制，E-mail：gongxingchu@985第 8 期颉佳乐等：元胡止痛口服液药材、中间体及制剂的定量指纹图谱方法研究trial production．The method provides a technical support for improving the control level for pharmaceuti⁃cal process of Yuanhu Zhitong Koufuye.Key words：quantitative fingerprint；content determination；Yuanhu Zhitong Koufuye；tetrahydro⁃palmatine；dehydrocorydaline延胡索为罂粟科植物延胡索（Corydalis yanhusuo W.T.Wang）的干燥块茎，味辛、苦，性温，可活血、行气、止痛［1］。
钛酸钡基压电-芬顿体系降解水中卡马西平的效果及机理研究
钛酸钡基压电-芬顿体系降解水中卡马西平的效果及机理研究钛酸钡基压电-芬顿体系降解水中卡马西平的效果及机理研究引言：水污染是当前全球面临的一个严重问题，其中药物残留污染成为了一个备受关注的领域。
卡马西平作为一种广泛使用的药物，在人类和动物的废水中被广泛检测到。
因此，开发高效的降解方法，去除水中的卡马西平，具有极其重要的意义。
在本研究中，我们探讨了钛酸钡基压电-芬顿体系在水中降解卡马西平的效果及机理。
材料与方法：实验中所使用的钛酸钡纳米颗粒是经过水热法制备而成，具有较大的比表面积和优良的压电性能。
在实验中，我们首先通过紫外-可见光谱（UV-vis）来监测卡马西平的降解情况。
进一步，为了探究卡马西平的降解机理，我们运用电荷转移率（CTR）和自由基产生率（FR）等方法进行深入研究。
结果与讨论：实验结果显示，钛酸钡基压电-芬顿体系能够高效降解水中的卡马西平。
在含有钛酸钡纳米颗粒的体系中，经过60分钟处理后，卡马西平的降解率可达到90%以上。
而对照组中，没有钛酸钡纳米颗粒的体系中，降解率只有20%左右。
从实验结果来看，钛酸钡纳米颗粒在卡马西平的降解中具有显著的催化作用。
进一步的研究表明，钛酸钡纳米颗粒能够通过压电效应产生机械应变，进而促进芬顿反应的进行。
芬顿反应是指过氧化氢与金属离子之间产生的自由基氧化反应，可以高效降解有机物污染物。
而压电效应产生的机械应变可以增加溶液中的扩散速率、提高氧的溶解度，并扩大反应界面。
这些因素共同作用能够提高芬顿反应的效果，并提高卡马西平的降解速率。
结论：综上所述，本研究针对钛酸钡基压电-芬顿体系在水中降解卡马西平的效果及机理进行了深入研究。
实验结果表明，钛酸钡纳米颗粒具有显著的催化作用，能够高效降解卡马西平。
进一步研究发现，钛酸钡纳米颗粒通过压电效应产生的机械应变能够促进芬顿反应的进行，从而提高卡马西平的降解速率。
这一研究结果对于开发高效的水处理方法，去除药物残留污染具有重要的意义。
苯巴比妥原料药中的两个杂质及其含量测定
苯巴比妥原料药中的两个杂质及其含量测定
孙艳华;徐英;韩勇;黄桂华
【期刊名称】《广东化工》
【年(卷),期】2010(037)007
【摘要】在苯巴比妥原料药中分离得到两个杂质,实验经过MS和IR对其定性,确定杂质分别是α-苯丁酰胺和甲基苯巴比妥;实验采用气相色谱法对苯巴比妥原料药中两个杂质的含量进行测定,以氮气为载气,DB-1701毛细管柱为固定相,α-苯丁酰胺和甲基苯巴比妥达到基线分离,精密度(RSD%)分别为2.1 %和1.9 %,回收率分别为102 %和98 %,结果准确可靠,可以用气相色谱法控制含量.
【总页数】2页(P95-95,101)
【作者】孙艳华;徐英;韩勇;黄桂华
【作者单位】山东大学,药学院,山东,济南,250014;山东新华制药研究院,山东,淄博,255005;山东大学,药学院,山东,济南,250014;山东新华制药研究院,山东,淄博,255005;山东大学,药学院,山东,济南,250014;山东新华制药研究院,山东,淄博,255005;山东大学,药学院,山东,济南,250014
【正文语种】中文
【中图分类】O65
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定扑米酮中的杂质苯巴比妥含量 [J], 苏亮;陈新生
2.原料药中基因毒性杂质分类清除及控制策略 [J], 关元宙;梁毅
3.甘磷酸胆碱原料药中3种遗传毒性杂质含量测定方法的建立 [J], 张伟奇;王倩;何燕;王雪芹
4.芒果苷原料药中杂质高芒果苷的含量测定 [J], 冯旭;邓家刚;覃洁萍;席加喜;钟伟东;王胜波
5.左亚叶酸钠原料药中两个主要杂质结构的研究 [J], 饶雅琨;丁黎;于勇
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药物相互作用
or functional antagonism）
2．按药物与受体的相互作用
方式分为
（1）竞争性拮抗
（competitive antagonism）
（2）非竞争性拮抗
（no competitive antagonism）
药物效应的拮抗作用
相互作用的药物 口服抗凝药与维生素K 降糖药与糖皮质激素 沙丁胺醇与普萘洛尔 头孢菌素与红霉素 阿片类与纳洛酮 地西泮与氟马西尼 结 果 抗凝作用减弱 降糖作用减弱 扩张支气管减弱 杀菌活性降低 解救阿片类中毒 对抗地西泮中毒
二、呼吸系统不良反应
（一）吗啡与中枢抑制药合用 吗啡与水合氯醛、巴比妥类、苯妥 英钠、苯海拉明、乙醇、全麻药、吩噻嗪 类合用，可增强镇静、麻醉及镇痛效果， 但同时严重抑制呼吸中枢。 （二）汉肌松与四环素合用 四环素降低血钙，加强汉肌松的作 用，加重呼吸抑制，应间隔用药。
（三）氨基苷类抗生素与具有神经肌 肉阻滞作用的药物合用
抗酸药、抑制胃酸分泌药均可影响弱
酸性药物吸收。
（3）食物的影响
一般：食物减少药物的吸收或延缓药
物的吸收速度。
氨苄西林 F 可降低22％～50％
奶制品使环丙沙星F 降低30％～36％
某些药物与食物同服吸收增加：
螺内酯、更昔洛韦
高脂饮食增加灰黄霉素的吸收
（4）吸附作用 白陶土、活性碳、氢氧化 铝凝胶。
（三）增强（potentiation）
两种药物合用时，一种药物可使组织
或受体对另一种药物的敏感性增强。
（四）拮抗（antagonism）
一种药物部分或全部阻断另一种药物的 作用，合用时引起药效降低。 1．按药物作用的机制分为
（1）化学性拮抗
（chemical antagonism）
基于网络药理学和分子对接探讨三黄泻心汤治疗阿尔茨海默病的机制
山东科学ＳＨＡＮＤＯＮＧＳＣＩＥＮＣＥ第３６卷第５期２０２３年１０月出版Ｖｏｌ.３６Ｎｏ.５Ｏｃｔ.２０２３收稿日期:２０２２￣１０￣２９基金项目:山东省中医药科技发展计划(２０１９￣００４４)作者简介:王一帆(１９９８ )ꎬ男ꎬ硕士研究生ꎬ研究方向为中医内科学ꎮＥ￣ｍａｉｌ:ｑｄｓｄｊｎ＠１２６.ｃｏｍ∗通信作者ꎬ田财军(１９７４ )ꎬ男ꎬ博士ꎬ副主任医师ꎬ副教授ꎬ研究生导师ꎬ研究方向为中医内科学ꎮＥ￣ｍａｉｌ:ｔｃｊｓｄｕｔｃｍｎｅｕｒ＠１２６.ｃｏｍ基于网络药理学和分子对接探讨三黄泻心汤治疗阿尔茨海默病的机制王一帆ａꎬ张喆ｂꎬ田财军ｃ∗(山东中医药大学ａ.中医学院ꎻｂ.外国语学院ꎻｃ.第一临床医学院ꎬ山东济南２５００１３)摘要:运用网络药理学方法探讨三黄泻心汤治疗阿尔茨海默病(ＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅꎬＡＤ)的作用机制ꎮ利用中药系统药理学数据库与分析平台检索并筛选出三黄泻心汤的有效成分及作用靶点ꎮ通过ＧｅｎｅＣａｒｄｓ数据库检索并筛选出ＡＤ相关靶点ꎬ维恩图获取药物与疾病交集靶点ꎮ使用ＳＴＲＩＮＧ数据库得到蛋白质－蛋白质相互作用(ｐｒｏｔｅｉｎ￣ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎꎬＰＰＩ)网络信息ꎮ使用Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ构建药物－有效成分－靶点－疾病网络与ＰＰＩ网络图ꎬ通过ＤＡＶＩＤ数据库对共同靶点进行ＧＯ(ｇｅｎｅｏｎｔｏｌｏｇｙ)和ＫＥＧＧ(Ｋｙｏｔｏｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆｇｅｎｅｓａｎｄｇｅｎｏｍｅｓ)分析ꎮ使用ＳＹＢＹＬ￣Ｘ２.１.１软件进行分子对接验证ꎮ筛选出三黄泻心汤４７个有效成分ꎬ７１个药物与疾病交集靶点ꎬ主要活性成分为槲皮素㊁β￣谷甾醇㊁汉黄芩黄素㊁黄芩新素㊁半枝莲种素㊁苏荠苎黄酮ꎬ核心靶点为ＩＬ￣６㊁ＴＮＦ㊁ＩＬ￣１β㊁ＶＥＧＦＡ㊁ＴＰ５３ꎮＧＯ功能分析主要涉及药物反应㊁缺氧反应㊁细胞迁移的正向调节㊁一氧化氮生物合成过程的正调控等生物过程ꎬＫＥＧＧ分析主要涉及癌症通路㊁ＨＩＦ￣１信号通路㊁ＴＮＦ信号通路等通路ꎮ分子对接结果显示ꎬβ￣谷甾醇㊁半枝莲种素等核心成分ꎬ与ＴＰ５３㊁ＩＬ￣６等核心靶点之间有着较强的结合能力ꎮ初步阐释了三黄泻心汤可通过调节ＨＩＦ￣１㊁ＴＮＦ等信号通路ꎬ从而抑制Ａβ聚集与ｔａｕ磷酸化㊁阻断乙酰胆碱酯酶活化㊁抑制炎症进而干预阿尔茨海默病ꎮ关键词:网络药理学ꎻ分子对接ꎻ阿尔茨海默病ꎻ三黄泻心汤中图分类号:Ｒ２８５㊀㊀㊀文献标志码:Ａ㊀㊀㊀文章编号:１００２￣４０２６(２０２３)０５￣００１９￣０８开放科学(资源服务)标志码(ＯＳＩＤ):ＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＳａｎｈｕａｎｇＸｉｅｘｉｎｄｅｃｏｃｔｉｏｎｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅｂａｓｅｄｏｎｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｏｃｋｉｎｇｍｅｔｈｏｄＷＡＮＧＹｉｆａｎａꎬＺＨＡＮＧＺｈｅｂꎬＴＩＡＮＣａｉｊｕｎｃ∗(ａ.ＳｃｈｏｏｌｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎻｂ.ＳｃｈｏｏｌｏｆＦｏｒｅｉｇｎＬａｎｇｕａｇｅｓꎻｃ.ＳｃｈｏｏｌｏｆＴｈｅＦｉｒｓｔＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃａｌꎬＳｈａｎｄｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＪｉｎａｎ２５００１３ꎬＣｈｉｎａ)ＡｂｓｔｒａｃｔʒＴｈｅａｉｍｏｆｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｃｔｉｏｎｏｆＳａｎｈｕａｎｇＸｉｅｘｉｎＤｅｃｏｃｔｉｏｎｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ(ＡＤ)ｕｓｉｎｇａｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｐｐｒｏａｃｈ.ＴｈｅａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓａｎｄｔａｒｇｅｔｓｏｆｔｈｅＳａｎｈｕａｎｇＸｉｅｘｉｎｄｅｃｏｃｔｉｏｎｗｅｒｅｅｘａｍｉｎｅｄａｎｄｓｃｒｅｅｎｅｄｕｓｉｎｇｔｈｅｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｄａｔａｂａｓｅａｎｄｔｈｅａｎａｌｙｓｉｓｐｌａｔｆｏｒｍｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ.ＡＤ￣ｒｅｌａｔｅｄｔａｒｇｅｔｓｗｅｒｅｒｅｔｒｉｅｖｅｄａｎｄｓｃｒｅｅｎｅｄｔｈｒｏｕｇｈＧｅｎｅＣａｒｄｓｄａｔａｂａｓｅꎬａｎｄｄｒｕｇａｎｄｄｉｓｅａｓｅｉｎｔｅｒｓｅｃｔｉｏｎｔａｒｇｅｔｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｔｈｒｏｕｇｈｔｈｒｏｕｇｈＶｅｎｎｄｉａｇｒａｍ.ＴｈｅＳＴＲＩＮＧｄａｔａｂａｓｅｗａｓｕｓｅｄｔｏｏｂｔａｉｎｔｈｅｎｅｔｗｏｒｋｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎ￣ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ(ＰＰＩ).ＴｈｅＣｙｔｏｓｃａｐｅｗａｓｕｓｅｄｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｄｒｕｇｓ￣ａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ￣ｔａｒｇｅｔ￣ｄｉｓｅａｓｅｎｅｔｗｏｒｋａｎｄＰＰＩꎬａｎｄＤＡＶＩＤｄａｔａｂａｓｅｗａｓｕｓｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅｃｏｍｍｏｎｔａｒｇｅｔｓｉｎｇｅｎｅｏｎｔｏｌｏｇｙ(ＧＯ)ａｎｄＫｙｏｔｏｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆｇｅｎｅｓａｎｄｇｅｎｏｍｅｓ(ＫＥＧＧ).ＦｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅꎬｔｈｅＳｙｂｙｌ￣ｘ２.１.１ｓｏｆｔｗａｒｅｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｏｃｋｉｎｇｖａｌｉｄａｔｉｏｎ.Ｔｈｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇｙｉｅｌｄｅｄ４７ａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓａｎｄ７１ｒｅｌａｔｅｄｔａｒｇｅｔｓ.Ｈｅｒｅｉｎꎬｔｈｅｍａｉｎａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓｗｅｒｅｑｕｅｒｃｅｔｉｎꎬβ￣ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌꎬｗｏｇｏｎｉｎꎬｂａｉｃａｌｅｉｎꎬｒｉｖｕｌａｒｉｎꎬａｎｄｍｏｓｌｏｓｏｏｆｌａｖｏｎｅꎻａｎｄｔｈｅｃｏｒｅｔａｒｇｅｔｓｗｅｒｅＩＬ￣６ꎬＴＮＦꎬＩＬ￣１βꎬＶＥＧＦＡꎬＴＰ５３.ＴｈｅＧＯｆｕｎｃｔｉｏｎｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔａｎａｌｙｓｉｓｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｌｙｉｎｖｏｌｖｅｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｅｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｄｒｕｇｒｅｓｐｏｎｓｅꎬｈｙｐｏｘｉａｒｅｓｐｏｎｓｅꎬｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎꎬａｎｄｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ.ＫＥＧＧａｎａｌｙｓｉｓｍａｉｎｌｙｉｎｖｏｌｖｅｄｐａｔｈｗａｙｓｓｕｃｈａｓｃａｎｃｅｒｐａｔｈｗａｙｓꎬＨＩＦ￣１ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓꎬａｎｄＴＮＦｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓ.Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｏｃｋｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆａｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｓｔｒｏｎｇｂｉｎｄｉｎｇａｂｉｌｉｔｙｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｃｏｒｅｔａｒｇｅｔａｎｄｔｈｅｃｏｒｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓꎬｓｕｃｈａｓβ￣ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌａｎｄｒｉｖｕｌａｒｉｎ.ＴｈｉｓｓｔｕｄｙｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙｅｘｐｌａｉｎｅｄｔｈａｔｔｈｅＳａｎｈｕａｎｇＸｉｅｘｉｎＤｅｃｏｃｔｉｏｎｃａｎｉｎｔｅｒｆｅｒｅｗｉｔｈＡＤｂｙｍｏｄｕｌａｔｉｎｇＨＩＦ￣１ꎬＴＮＦꎬａｎｄｏｔｈｅｒｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓꎬｔｈｅｒｅｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇＡβａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎａｎｄｔａｕｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎꎬｂｌｏｃｋｉｎｇａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎꎬａｎｄｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ.ＫｅｙｗｏｒｄｓʒｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎻｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｏｃｋｉｎｇꎻＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅꎻＳａｎｈｕａｎｇＸｉｅｘｉｎｄｅｃｏｃｔｉｏｎ㊀㊀阿尔茨海默病(ＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅꎬＡＤ)ꎬ又称原发性老年痴呆ꎬ以认知记忆障碍为特点ꎬ是一种具有不可逆性和致死性的中枢神经系统退行性病变ꎮＡＤ病理特征包括β￣淀粉样蛋白(Ａβ)的沉积㊁微管蛋白(ｔａｕ)的异常磷酸化㊁突触损伤和神经功能障碍等[１￣２]ꎬ在疾病过程中ꎬ患者逐渐丧失记忆及思考能力ꎬ最终失去自主行为能力[３]ꎬ是全世界老年人(年龄ȡ６５岁)认知障碍和痴呆的主要原因[４]ꎬ且ＡＤ的发病率㊁治疗和护理费用正在逐年快速增长ꎬ为国家医疗体系以及患者的家庭带来了沉重的压力[５]ꎮ目前美国食品药品监督管理局批准治疗ＡＤ药物包括胆碱酯酶抑制剂与ＮＭＤＡ受体拮抗剂两类ꎬ而自２００３年以来ꎬ只有阿杜那单抗(ａｄｕｃａｎｕｍａｂ)被ＦＤＡ批准用于治疗ＡＤ[６]ꎬ且单纯采用西药治疗ＡＤꎬ作用靶点单一㊁不良反应较多ꎬ治疗效果并不理想ꎮ中医理论认为ꎬ 毒损脑络 与 瘀血阻滞 在ＡＤ的发生过程中起着重要作用ꎬ因此清热解毒㊁活血逐瘀可作为治疗ＡＤ的原则[７￣８]ꎮ三黄泻心汤出自东汉名医张仲景的«金匮要略»ꎬ由大黄㊁黄连㊁黄芩组成ꎬ具有清热解毒㊁活血逐瘀的功效ꎮ现代药理学研究认为ꎬ大黄中的大黄酚㊁大黄素具有清除自由基㊁抗氧化的作用[９]ꎬ而黄连素㊁黄芩苷可以减少Ａβ的生成并加速Ａβ的降解[１０￣１１]ꎬ临床上在ＡＤ等疾病的治疗中效果明显ꎮ本文通过网络药理学的方法预测三黄泻心汤治疗ＡＤ的活性化合物㊁潜在的靶点蛋白与信号通路ꎬ并通过分子对接进一步从受体与配体方面验证三黄泻心汤活性成分干预ＡＤ关键靶点的有效性ꎬ为其临床应用提供科学依据ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀三黄泻心汤有效成分与作用靶点的获取以黄连㊁黄芩㊁大黄为关键词ꎬ在中药系统药理学数据库与分析平台(ＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅｓｙｓｔｅｍｓｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｄａｔａｂａｓｅａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｐｌａｔｆｏｒｍꎬＴＣＭＳＰ)(ｈｔｔｐ://ｔｃｍｓｐｗ.ｃｏｍ)上检索三黄泻心汤中３味中药所含的化学成分ꎮ筛选条件为类药性(Ｄｒｕｇ￣ｌｉｋｅｎｅｓｓꎬＤＬ)ȡ０.１８且口服生物利用度(ＯｒａｌｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙꎬＯＢ)ȡ３０％[１２]ꎬ初步筛选出三黄泻心汤有效化学成分及靶点ꎬ并通过Ｕｎｉｐｒｏｔ数据库(ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｕｎｉｐｒｏｔ.ｏｒｇ/)查询出靶点蛋白对应的基因名称ꎮ１.２㊀ＡＤ靶点的收集使用ＧｅｎｅＣａｒｄｓ数据库(ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｇｅｎｅｃａｒｄｓ.ｏｒｇ/)与ＤｒｕｇＢａｎｋ数据库(ｈｔｔｐｓ://ｇｏ.ｄｒｕｇｂａｎｋ.ｃｏｍ/)ꎬ以Ａｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ为关键词进行搜索ꎬ收集ＡＤ的作用靶点ꎬ对检索出疾病靶点的相关分数(Ｒｅｌｅｖａｎｃｅｓｃｏｒｅ)取３倍中位数[１３]ꎬ将相关分数大于等于３倍中位数评分的靶点作为ＡＤ疾病靶点ꎮ１.３㊀疾病与药物共同靶点的筛选将筛选出的三黄泻心汤有效成分靶点与ＡＤ疾病靶点ꎬ通过Ｖｅｎｎｙ在线绘制平台(ｈｔｔｐ://ｗｗｗ.ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ.ｃｏｍ.ｃｎ)绘制维恩图ꎬ并获取三黄泻心汤有效成分靶点与ＡＤ疾病靶点的交集ꎮ１.４㊀药物－有效成分－靶点－疾病网络的构建将药物㊁有效成分㊁有效成分与疾病交集靶点㊁疾病名称导入Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ３.７.２软件中进行网络关系的构建与可视化分析ꎮ１.５㊀蛋白质－蛋白质相互作用网络图的构建将三黄泻心汤与ＡＤ交集靶点基因导入ＳＴＲＩＮＧ１１.５(ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｓｔｒｉｎｇ￣ｄｂ.ｏｒｇ/)数据库中进行蛋白质－蛋白质相互作用(ｐｒｏｔｅｉｎ￣ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎꎬＰＰＩ)网络模型的构建ꎬ将物种类别选择 Ｈｏｍｏｓａｐｉｅｎｓ ꎬ设置 置信分数ȡ０.４ [１４]ꎬ并将获得的蛋白交互信息导入Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ３.７.２软件进行可视化分析ꎮ１.６㊀通路富集分析使用ＤＡＶＩＤ数据库(ｈｔｔｐｓ://ｄａｖｉｄ.ｎｃｉｆｃｒｆ.ｇｏｖ/)对三黄泻心汤与ＡＤ交集靶点进行基因本体(ｇｅｎｅｏｎｔｏｌｏｇｙꎬＧＯ)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(ＫｙｏｔｏｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆｇｅｎｅｓａｎｄｇｅｎｏｍｅｓꎬＫＥＧＧ)通路分析ꎬ设置物种为 Ｈｏｍｅｓａｐｉｅｎｓ ꎬＧＯ分析选择生物过程(ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓꎬＢＰ)㊁细胞组分(ｃｅｌｌｕｌａｒｃｏｍｐｏｎｅｎｔꎬＣＣ)和分子功能(ｍｏｌｅｃｕｌｌａｒｆｕｃｔｉｏｎꎬＭＦ)ꎬ使用Ｒｓｔｕｄｉｏｇｇｐｌｏｔ２软件包根据－ｌｇＰ对ＢＰ㊁ＣＣ㊁ＭＦ排名前１０与ＫＥＧＧ排名前２０的条目进行ＧＯ与ＫＥＧＧ分析的可视化处理ꎮ１.７㊀分子对接通过ＰｕｂＣｈｅｍ(ｈｔｔｐ://ｗｗｗ.ｐｄｂ.ｏｒｇ/)平台获取三黄泻心汤活性成分的ＳＤＦ格式文件ꎬ使用Ｃｈｅｍ３ＤＰｒｏ１４.０将ＳＤＦ格式文件转换ｍｏｌ２格式文件ꎬ使用ＲＳＣＢＰＤＢ数据库(ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｒｃｓｂ.ｏｒｇ/)获取核心靶点蛋白质晶体结构的ＰＤＢ格式文件ꎬ使用ＳＹＢＹＬ￣Ｘ２.１.１进行分子对接ꎮ２㊀结果２.１㊀三黄泻心汤活性成分及作用靶点利用ＴＣＭＳＰ数据库ꎬ以ＤＬȡ０.１８ꎬＯＢȡ３０％为条件筛选后ꎬ通过Ｕｎｉｐｒｏｔ数据库进行靶点名称规范化ꎬ剔除有效成分重复值后ꎬ共得到４７个有效成分ꎬ其中黄连有效成分１１个ꎬ大黄有效成分７个ꎬ黄芩效成分３２个ꎬ主要有效成分见表１ꎬ全表见ＯＳＩＤ科学数据与内容附表１ꎮ表１㊀三黄泻心汤治疗ＡＤ主要有效成分Ｔａｂｌｅ１㊀大黄ＤＨ２ｒｈｅｉｎ大黄酸ＤＨ３ｔｏｒａｌａｃｔｏｎｅ决明内酯Ａｂｅｔａ￣ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌβ￣谷甾醇黄连ＨＬ１ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ黄连素ＨＬ２ｂｅｒｂｅｒｒｕｂｉｎｅ小檗红碱Ｂｅｐｉｂｅｒｂｅｒｉｎｅ表小檗碱Ｃｃｏｐｔｉｓｉｎｅ黄连碱ＨＱ１ａｃａｃｅｔｉｎ金合欢素ＨＱ２ｗｏｇｏｎｉｎ汉黄芩素黄芩Ａｂｅｔａ￣ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌβ￣谷甾醇Ｂｅｐｉｂｅｒｂｅｒｉｎｅ表小檗碱Ｃｃｏｐｔｉｓｉｎｅ黄连碱２.２㊀ＡＤ靶点使用ＧｅｎｅＣａｒｄｓ数据库得到ＡＤ相关基因靶点共９５９９个ꎬＲｅｌｅｖａｎｃｅｓｃｏｒｅ取３次中位数后的数值为１１.２８３７ꎬ故设定Ｒｅｌｅｖａｎｃｅｓｃｏｒｅȡ１１.２８３７的靶点为ＡＤ的潜在靶点ꎬ共筛选得到１２００个靶点ꎮ２.３㊀三黄泻心汤与ＡＤ靶点的交集通过Ｖｅｎｎｙ在线制图工具平台ꎬ绘制三黄泻心汤有效成分靶点与ＡＤ潜在靶点的维恩图ꎬ得到７１个交集靶点ꎬ见ＯＳＩＤ科学数据与内容附图１ꎮ２.４㊀三黄泻心汤药物－有效成分－靶点－疾病网络构建结果药物－有效成分－靶点－疾病网络图显示ꎬ图中包含１２２个节点ꎬ４９８条边ꎮ图中节点越大ꎬ则代表其连接度(ｄｅｇｒｅｅ)越高ꎬ连接度排名前６名的化合物分别为槲皮素㊁β￣谷甾醇㊁汉黄芩素㊁黄芩新素㊁半枝莲种素㊁苏荠苎黄酮ꎬ见ＯＳＩＤ科学数据与内容附图２ꎮ２.５㊀ＰＰＩ网络的建立ＡＤ与三黄泻心汤交集靶点的ＰＰＩ网络图显示ꎬ图中共有７１个靶点蛋白与１４６８条相互作用的边ꎬ连接度前５的核心靶点蛋白为ＩＬ￣６㊁ＴＮＦ㊁ＡＴＫ１㊁ＰＴＧＳ２㊁ＶＥＧＦＡꎬ见ＯＳＩＤ科学数据与内容附图３ꎮ２.６㊀ＧＯ与ＫＥＧＧ富集分析使用ＤＡＶＩＤ数据库ｖ６.８对三黄泻心汤与ＡＤ的交集靶点进行ＧＯ与ＫＥＧＧ通路富集分析ꎬ并根据Ｐ<０.０１㊁ＦＤＲ<０.０５为条件进行筛选ꎬ共得到１４３条ＧＯ条目与７９条ＫＥＧＧ条目ꎮＯＳＩＤ科学数据与内容附图４显示ꎬＢＰ主要涉及药物反应㊁缺氧反应㊁细胞迁移的正向调节㊁一氧化氮生物合成过程的正调控ꎻＣＣ主要涉及细胞外空间㊁细胞外区域㊁小窝㊁薄膜筏等ꎻＭＦ主要涉及丝氨酸内肽酶活性㊁酶结合㊁蛋白质同二聚化活性㊁相同蛋白质结合等ꎮＯＳＩＤ科学数据与内容附图５显示ＫＥＧＧ富集分析主要涉癌症通路㊁ＨＩＦ￣１信号通路㊁ＴＮＦ信号通路等ꎮ２.７㊀分子对接选取ＡＤ关键靶点蛋白ＩＬ￣６㊁ＴＮＦ㊁ＩＬ￣１β㊁ＶＥＧＦＡ㊁ＴＰ５３分别与三黄泻心汤活性成分槲皮素㊁β￣谷甾醇㊁汉黄芩黄素㊁黄芩新素㊁半枝莲种素㊁苏荠苎黄酮进行分子对接并得到对接分数ꎬ见表２ꎬ通过Ｒｓｔｕｄｉｏｇｇｐｕｂｒ软件包绘制对接分数气泡图ꎬ见图１ꎬ同时得到分子对接结果示意图ꎬ部分示意图见图２ꎬ对接分数ȡ５代表活性成分与靶点具有较好的结合作用[１５]ꎮ本次分子对接结果显示活性最强的对接组合为ＩＬ￣６与β￣谷甾醇㊁ＴＰ５３与半枝莲种素㊁ＴＮＦ与黄芩新素㊁ＴＰ５３与黄芩新素㊁ＩＬ￣６与苏荠苎黄酮ꎮ表２㊀分子对接分数㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀注: 代表二者无相互作用关系ꎮ图１㊀对接分数气泡图Ｆｉｇ.１㊀Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｏｃｋｉｎｇｓｃｏｒｅｓｂｕｂｂｌｅｃｈａｒｔ图２㊀三黄泻心汤主活性成分与关键靶点分子对接模式图Ｆｉｇ.２㊀ＤｏｃｋｉｎｇｍｏｄｅｄｉａｇｒａｍｓｈｏｗｉｎｇｔｈｅｍａｉｎａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓａｎｄｋｅｙｔａｒｇｅｔｍｏｌｅｃｕｌｅｓｏｆＳａｎｈｕａｎｇＸｉｅｘｉｎｄｅｃｏｃｔｉｏｎ３㊀讨论中医认为 诸热瞀瘛ꎬ皆属于火 其人喜忘者ꎬ必有蓄血 ꎬ因此在ＡＤ的治疗中不应忽略热毒与瘀血这两种致病因素ꎮ三黄泻心汤中黄连㊁黄芩具有清热解毒之效ꎬ大黄具有泻下攻积㊁逐瘀通经之效ꎬ三药合用ꎬ清热解毒㊁活血逐瘀之功甚强ꎮ现代药理学研究证明ꎬ大黄㊁黄连㊁黄芩可以通过抗氧化应激反应ꎬ抑制疾病特异性淀粉样蛋白的聚集ꎬ降低β￣淀粉样蛋白与ｔａｕ磷酸化水平㊁提高蛋白磷酸酶２Ａ活性等方式改善ＡＤ临床症状[１６]ꎮ本研究发现ꎬ三黄泻心汤治疗ＡＤ的核心成分主要包括槲皮素㊁β￣谷甾醇㊁汉黄芩黄素等ꎮＡβ瀑布学说㊁胆碱能缺陷假学说㊁神经炎症假说等是解释ＡＤ产生的重要理论ꎬ槲皮素是一种黄酮类化合物ꎬ可以通过抑制Ａβ聚集与ｔａｕ磷酸化㊁抑制乙酰胆碱酯酶水解乙酰胆碱㊁减弱氧化应激反应㊁减轻神经炎症等方式达到保护神经元细胞从而防治ＡＤ的功效[１７]ꎮβ￣谷甾醇具有很强的抗胆碱酯酶作用ꎬ并具有清除自由基的功效ꎬ能够预防由自由基引起的神经退行性病变ꎬ同时β￣谷甾醇可较为容易地穿过血脑屏障ꎬ对于ＡＤ的治疗具有很高的生物利用度[１８]ꎮ汉黄芩素可以干预Ａβ聚集并显著抑制ＳＨ￣ＳＹ５Ｙ神经母细胞瘤细胞中的胆碱酯酶活性ꎬ阻断Ａβ４２诱导的乙酰胆碱酯酶活化[１９]ꎬ减少ＢＡＣＥ１细胞中Ａβ的分泌ꎬ并且可以通过ｍＴＯＲ抑制作用抑制ＧＳＫ３β活性ꎬ从而减少ｔａｕ磷酸化达到保护㊁营养神经的作用[２０]ꎮ通过ＰＰＩ网络发现ＩＬ￣６㊁ＴＮＦ㊁ＩＬ￣１β㊁ＶＥＧＦＡ㊁ＴＰ５３是三黄泻心汤治疗ＡＤ的核心靶点ꎮ有越来越多的研究表明ꎬ炎症反应在ＡＤ病理过程中尤其是疾病的早期阶段有着重要的参与[２１]ꎬ炎性因子ＩＬ￣６与认知障碍严重程度密切相关ꎬ可以加速神经退行性过程ꎬ并且与Ａβ沉积㊁脱髓鞘㊁白质高信号和神经变性过程相关[２２￣２３]ꎮＴＮＦ是炎症的主要调节因子之一ꎬ具有协调促炎细胞因子级联反应的作用ꎬ由ＴＮＦ介导的炎症可能导致Ａβ斑块和ｔａｕ过度磷酸化[２４]ꎮ葡萄糖代谢降低是ＡＤ的特征之一ꎬ己糖激酶是葡萄糖代谢的关键酶之一ꎬＩＬ￣１β表达的减少可以使己糖激酶表达增加ꎬ进而抑制炎症反应㊁增加葡萄糖代谢ꎬ促进ＡＤ的恢复[２５]ꎮＶＥＧＦＡ与血管生成㊁毛细血管血流量有关ꎬ抑制ＶＥＧＦ信号可以减少白细胞黏附在脑微血管内皮ꎬ改善ＡＤ患者脑微血管血流[２６]ꎮＴＰ５３活性的失调会导致神经元功能障碍进而导致神经变性[２７]ꎬ因此有效地干预ＴＰ５３的表达可以起到改善脑损伤的作用ꎮＧＯ富集分析显示三黄泻心汤治疗ＡＤ主要集中在药物反应㊁缺氧的反应㊁细胞迁移的正向调节㊁丝氨酸内肽酶活性㊁酶结合㊁蛋白质同二聚化活性等方面ꎮＫＥＧＧ分析说明三黄泻心汤治疗ＡＤ与多条通路相关ꎬ包括癌症通路㊁ＨＩＦ￣１信号通路㊁ＴＮＦ信号通路等ꎮ脑缺血缺氧是ＡＤ发病的重要环境因素ꎬＨＩＦ￣１信号通路与细胞低氧应激密切相关ꎬ缺氧诱导因子也会对神经系统发育产生重要影响ꎬＡＤ患者会出现大量小胶质细胞围绕Ａβ斑块周围大量增加的特征[２８]ꎬ而小胶质细胞炎症的产生ꎬ会伴随着氧化磷酸化到糖酵解的代谢重编程ꎬ这一代谢重编程则依赖于ＨＩＦ通路[２９]ꎬ所以ＨＩＦ￣１信号通路与ＡＤ的病理改变可能有着紧密的联系ꎮ系统性感染是产生认知障碍的原因之一[３０]ꎬＴＮＦ信号通路参与多系统的慢性炎症与变性疾病ꎬ是神经炎症的关键介质之一[３１]ꎬ与中枢神经系统退行性病变有着密切联系ꎬ同时在ＡＤ病理过程中ꎬＴＮＦＲ信号还参与ＡＰＰ(淀粉样蛋白前体蛋白)加工ꎬ影响Ａβ斑块产生[３２]ꎮ我们将筛选出的三黄泻心汤的核心成分与ＡＤ的核心靶点分别进行分子对接ꎬ对接结果显示ＩＬ￣６与β￣谷甾醇㊁ＴＰ５３与半枝莲种素ꎬＴＮＦ与黄芩新素㊁ＴＰ５３黄芩新素㊁ＩＬ￣６与苏荠苎黄酮ꎬ有着较强的结合能力ꎮ因此我们推测三黄泻心汤可能是通过这些化合物作用于多个靶点从而达到治疗ＡＤ的效果ꎮ综上所述ꎬ本研究利用网络药理学与分子对接的方法得出ꎬ三黄泻心汤可以通过多活性成分㊁多靶点㊁多通路抑制Ａβ聚集与ｔａｕ磷酸化㊁阻断乙酰胆碱酯酶活化㊁抑制炎症反应进而达到治疗ＡＤ的临床疗效ꎮ参考文献:[１]ＨＯＮＧＳꎬＢＥＪＡ￣ＧＬＡＳＳＥＲＶＦꎬＮＦＯＮＯＹＩＭＢＭꎬｅｔａｌ.ＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｎｄｍｉｃｒｏｇｌｉａｍｅｄｉａｔｅｅａｒｌｙｓｙｎａｐｓｅｌｏｓｓｉｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｓ[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ２０１６ꎬ３５２(６２８６):７１２￣７１６.ＤＯＩ:１０.１１２６/ｓｃｉｅｎｃｅ.ａａｄ８３７３.[２]ＬＥＥＪＨꎬＹＡＮＧＤＳꎬＧＯＵＬＢＯＵＲＮＥＣＮꎬｅｔａｌ.ＦａｕｌｔｙａｕｔｏｌｙｓｏｓｏｍｅａｃｉｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｓｉｎｄｕｃｅｓａｕｔｏｐｈａｇｉｃｂｕｉｌｄ￣ｕｐｏｆＡβｉｎｎｅｕｒｏｎｓꎬｙｉｅｌｄｉｎｇｓｅｎｉｌｅｐｌａｑｕｅｓ[Ｊ].ＮａｔｕｒｅＮｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅꎬ２０２２ꎬ２５(６):６８８￣７０１.ＤＯＩ:１０.１０３８/ｓ４１５９３￣０２２￣０１０８４￣８.[３]林婷婷ꎬ詹亚熹ꎬ付书梅ꎬ等.阿尔茨海默病相关药物靶点和临床治疗进展[Ｊ].中国科学技术大学学报ꎬ２０１８ꎬ４８(１０):８２５￣８３７.ＤＯＩ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.０２５３￣２７７８.２０１８.１０.００９.[４]ＡＴＲＩＡ.Ｔｈｅａｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅｃｌｉｎｉｃａｌｓｐｅｃｔｒｕｍ:Ｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄｍａｎａｇｅｍｅｎｔ[Ｊ].ＴｈｅＭｅｄｉｃａｌＣｌｉｎｉｃｓｏｆＮｏｒｔｈＡｍｅｒｉｃａꎬ２０１９ꎬ１０３(２):２６３￣２９３.ＤＯＩ:１０.１０１６/ｊ.ｍｃｎａ.２０１８.１０.００９.[５]ＪＩＡＪＰꎬＷＥＩＣＢꎬＣＨＥＮＳＱꎬｅｔａｌ.ＴｈｅｃｏｓｔｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅｉｎＣｈｉｎａａｎｄｒｅ￣ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎｏｆｃｏｓｔｓｗｏｒｌｄｗｉｄｅ[Ｊ].Ａｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓ＆Ｄｅｍｅｎｔｉａꎬ２０１８ꎬ１４(４):４８３￣４９１.ＤＯＩ:１０.１０１６/ｊ.ｊａｌｚ.２０１７.１２.００６.[６]ＡＴＨＡＲＴꎬＢＡＬＵＳＨＩＫＡꎬＫＨＡＮＳＡ.ＲｅｃｅｎｔａｄｖａｎｃｅｓｏｎｄｒｕｇｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｅｍｅｒｇｉｎｇｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｇｅｎｔｓｆｏｒＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙＲｅｐｏｒｔｓꎬ２０２１ꎬ４８(７):５６２９￣５６４５.ＤＯＩ:１０.１００７/ｓ１１０３３￣０２１￣０６５１２￣９.[７]田恺ꎬ张向宇ꎬ牛博真ꎬ等.基于 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[１７]ＫＨＡＮＨꎬＵＬＬＡＨＨꎬＡＳＣＨＮＥＲＭꎬｅｔａｌ.Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｑｕｅｒｃｅｔｉｎｉｎａｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓꎬ２０１９ꎬ１０(１):５９.ＤＯＩ:１０.３３９０/ｂｉｏｍ１００１００５９.[１８]ＡＹＡＺＭꎬＪＵＮＡＩＤＭꎬＵＬＬＡＨＦꎬｅｔａｌ.Ａｎｔｉ￣ａｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｓｔｕｄｉｅｓｏｎβ￣ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＰｏｌｙｇｏｎｕｍｈｙｄｒｏｐｉｐｅｒＬ[Ｊ].ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬ２０１７ꎬ８:６９７.ＤＯＩ:１０.３３８９/ｆｐｈａｒ.２０１７.００６９７.[１９]ＨＡＭＰＥＬＨꎬＭＭＥＳＵＬＡＭＭꎬＣＵＥＬＬＯＡＣꎬｅｔａｌ.Ｒｅｖｉｓｉｔｉｎｇｔｈｅｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃｈｙｐｏｔｈｅｓｉｓｉｎａｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ:Ｅｍｅｒｇｉｎｇｅｖｉｄｅｎｃｅｆｒｏｍｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｒｅｓｅａｒｃｈ[Ｊ].ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓＤｉｓｅａｓｅꎬ２０１９ꎬ６(１):２￣１５.ＤＯＩ:１０.１４２８３/ｊｐａｄ.２０１８.４３.[２０]ＺＨＵＹＹꎬＷＡＮＧＪ.Ｗｏｇｏｎｉｎｉｎｃｒｅａｓｅｓβ￣ａｍｙｌｏｉｄｃｌｅａｒａｎｃｅａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｓｔａｕｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｖｉａｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｍａｍｍａｌｉａｎｔａｒｇｅｔｏｆｒａｐａｍｙｃｉｎ:ＰｏｔｅｎｔｉａｌｄｒｕｇｔｏｔｒｅａｔＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].ＮｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓꎬ２０１５ꎬ３６(７):１１８１￣１１８８.ＤＯＩ:１０.１００７/ｓ１００７２￣０１５￣２０７０￣ｚ.[２１]ＨＯＬＭＥＳＣ.Ｒｅｖｉｅｗ:ＳｙｓｔｅｍｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].ＮｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｙａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＮｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２０１３ꎬ３９(１):５１￣６８.ＤＯＩ:１０.１１１１/ｊ.１３６５￣２９９０.２０１２.０１３０７.ｘ.[２２]ＬＡＩＫＳＰꎬＬＩＵＣＳꎬＲＡＵＡꎬｅｔａｌ.ＰｅｒｉｐｈｅｒａｌｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｍａｒｋｅｒｓｉｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ:Ａｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｒｅｖｉｅｗａｎｄｍｅｔａ￣ａｎａｌｙｓｉｓｏｆ１７５ｓｔｕｄｉｅｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙꎬＮｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ＆Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙꎬ２０１７ꎬ８８(１０):８７６￣８８２.ＤＯＩ:１０.１１３６/ｊｎｎｐ￣２０１７￣３１６２０１.[２３]ＢＡＯＹꎬＣＡＯＸＴ.Ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｐｏｔｅｎｔｉａｌａｎｄｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅ￣ｐｒｏｄｕｃｉｎｇＢｃｅｌｌｓｕｂｓｅｔｓ:Ａｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｒｅｖｉｅｗ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙꎬ２０１４ꎬ５５:１０￣２３.ＤＯＩ:１０.１０１６/ｊ.ｊａｕｔ.２０１４.０４.００１.[２４]ＢＡＪＴꎬＳＥＴＨＲ.ＲｏｌｅｏｆｃｕｒｃｕｍｉｎｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＴＮＦ￣αｍｅｄｉａｔｅｄｂｒａｉｎｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｓ[Ｊ].ＲｅｃｅｎｔＰａｔｅｎｔｓｏｎＩｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ＆ＡｌｌｅｒｇｙＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙꎬ２０１８ꎬ１２(１):６９￣７７.ＤＯＩ:１０.２１７４/１８７２２１３Ｘ１２６６６１８０７０３１６３８２４.[２５]ＨＡＮＳＸꎬＨＥＺＪꎬＪＡＣＯＢＣꎬｅｔａｌ.ＥｆｆｅｃｔｏｆｉｎｃｒｅａｓｅｄＩＬ￣１βｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＫｉｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＳｃｉｅｎｃｅｓꎬ２０２１ꎬ２２(３):１３０６.ＤＯＩ:１０.３３９０/ｉｊｍｓ２２０３１３０６.[２６]ＡＬＩＭꎬＦＡＬＫＥＮＨＡＩＮＫꎬＮＪＩＲＵＢＮꎬｅｔａｌ.ＶＥＧＦｓｉｇｎａｌｌｉｎｇｃａｕｓｅｓｓｔａｌｌｓｉｎｂｒａｉｎｃａｐｉｌｌａｒｉｅｓａｎｄｒｅｄｕｃｅｓｃｅｒｅｂｒａｌｂｌｏｏｄｆｌｏｗｉｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｍｉｃｅ[Ｊ].Ｂｒａｉｎꎬ２０２２ꎬ１４５(４):１４４９￣１４６３.ＤＯＩ:１０.１０９３/ｂｒａｉｎ/ａｗａｂ３８７.[２７]ＡＢＡＴＥＧꎬＦＲＩＳＯＮＩＧＢꎬＢＯＵＲＤＯＮＪＣꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｐｌｅｉｏｔｒｏｐｉｃｒｏｌｅｏｆｐ５３ｉｎｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ/ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｎｅｕｒｏｎｓ:ＦｏｃｕｓｏｎｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].ＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓＲｅｓｅａｒｃｈ＆Ｔｈｅｒａｐｙꎬ２０２０ꎬ１２(１):１６０.ＤＯＩ:１０.１１８６/ｓ１３１９５￣０２０￣００７３２￣０.[２８]吕炜ꎬ韩彦青ꎬ郭小宇ꎬ等.犬尿氨酸通路在阿尔兹海默病中的研究进展[Ｊ].海南医学院学报ꎬ２０２０ꎬ２６(９):７１２￣７１６.ＤＯＩ:１０.１３２１０/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｈｍｕ.２０２００２１２.００７.[２９]ＢＡＩＫＳＨꎬＫＡＮＧＳꎬＬＥＥＷꎬｅｔａｌ.Ａｂｒｅａｋｄｏｗｎｉｎｍｅｔａｂｏｌｉｃｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇｃａｕｓｅｓｍｉｃｒｏｇｌｉａｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎａｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].ＣｅｌｌＭｅｔａｂｏｌｉｓｍꎬ２０１９ꎬ３０(３):４９３￣５０７.ｅ６.ＤＯＩ:１０.１０１６/ｊ.ｃｍｅｔ.２０１９.０６.００５.[３０]ＡＳＢＹＤꎬＢＯＣＨＥＤꎬＡＬＬＡＮＳꎬｅｔａｌ.ＳｙｓｔｅｍｉｃｉｎｆｅｃｔｉｏｎｅｘａｃｅｒｂａｔｅｓｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃｕｌａｒｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].Ｂｒａｉｎꎬ２０２１ꎬ１４４(６):１８６９￣１８８３.ＤＯＩ:１０.１０９３/ｂｒａｉｎ/ａｗａｂ０９４.[３１]ＪＡＹＡＲＡＭＡＮＡꎬＨＴＩＫＥＴＴꎬＪＡＭＥＳＲꎬｅｔａｌ.ＴＮＦ￣ｍｅｄｉａｔｅｄｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｓｌｉｎｋｅｄｔｏｎｅｕｒｏｎａｌｎｅｃｒｏｐｔｏｓｉｓｉｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ[Ｊ].ＡｃｔａＮｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓꎬ２０２１ꎬ９(１):１￣２１.ＤＯＩ:１０.１１８６/ｓ４０４７８￣０２１￣０１２６４￣ｗ. [３２]ＣＨＥＮＧＸꎬＳＨＥＮＹꎬＬＩＲＮ.ＴａｒｇｅｔｉｎｇＴＮＦ:ＡｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓｔｒａｔｅｇｙｆｏｒＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙＴｏｄａｙꎬ２０１４ꎬ１９(１１):１８２２￣１８２７.ＤＯＩ:１０.１０１６/ｊ.ｄｒｕｄｉｓ.２０１４.０６.０２９.。
2006年我国生化药物研究进展
2006年我国生化药物研究进展
张天民;李娜;王凤山
【期刊名称】《中国医疗前沿》
【年(卷),期】2007(000)013
【摘要】目的综述2006年我国生化药物的研究进展.方法根据国内文献,选择具有较大学术意义或实用价值的内容,按氨基酸、肽和蛋白质类、酶类、糖类、脂质类及核酸类药物分别介绍.结果与结论氨基酸、肽和蛋白质、糖类药物的研究较多,主要集中在这些药物的药理作用、新剂型、制备工艺和临床应用方面.
【总页数】4页(P961-964)
【作者】张天民;李娜;王凤山
【作者单位】山东大学药学院生化与生物技术药物研究所,济南,250012;山东大学药学院生化与生物技术药物研究所,济南,250012;山东大学药学院生化与生物技术药物研究所,济南,250012
【正文语种】中文
【中图分类】R97
【相关文献】
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3.近5年我国生化药物的研究进展 [J], 张天民;边玲
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5.2001年我国生化药物的研究进展 [J], 毕金荣;徐静
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《2024年穿山龙总皂苷对CIA大鼠关节滑膜血管新生相关因子及其受体的影响》范文
《穿山龙总皂苷对CIA大鼠关节滑膜血管新生相关因子及其受体的影响》篇一一、引言风湿性关节炎（CIA）是一种常见的自身免疫性疾病，主要表现为关节疼痛、肿胀、僵硬以及滑膜组织中血管新生的增加。
近年来，随着中医药的深入研究，穿山龙作为一种传统中药材，其总皂苷成分在抗炎、抗风湿等方面展现出良好的疗效。
本文旨在探讨穿山龙总皂苷对CIA大鼠关节滑膜血管新生相关因子及其受体的影响，以期为临床治疗提供新的思路和方法。
二、材料与方法1. 材料（1）实验动物：选用健康成年SD大鼠，建立CIA模型。
（2）药物：穿山龙总皂苷，实验室自制。
（3）试剂与仪器：相关因子检测试剂盒、免疫组化试剂、显微镜等。
2. 方法（1）CIA模型建立：采用经典免疫学方法建立CIA大鼠模型。
（2）分组与给药：将大鼠随机分为正常组、模型组、穿山龙总皂苷治疗组，进行药物治疗。
（3）样本采集与处理：采集大鼠关节滑膜组织，进行相关因子检测及免疫组化分析。
（4）数据分析：采用SPSS软件进行数据分析，比较各组间差异。
三、实验结果1. 穿山龙总皂苷对CIA大鼠关节滑膜血管新生的影响实验结果显示，穿山龙总皂苷治疗组大鼠关节滑膜血管新生程度较模型组明显减轻，血管密度降低，表明穿山龙总皂苷具有抑制血管新生的作用。
2. 穿山龙总皂苷对关节滑膜相关因子的影响穿山龙总皂苷治疗组大鼠关节滑膜中血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）等促血管新生因子的表达水平较模型组降低，而抑血管新生因子如血管抑素（Endostatin）的表达水平升高。
这表明穿山龙总皂苷通过调节相关因子的表达来抑制血管新生。
3. 穿山龙总皂苷对血管新生受体的影响实验发现，穿山龙总皂苷治疗组大鼠关节滑膜中VEGF受体、bFGF受体的表达水平较模型组降低。
这表明穿山龙总皂苷可能通过抑制相关受体的表达来阻断血管新生的信号传导途径。
四、讨论穿山龙总皂苷对CIA大鼠关节滑膜血管新生的抑制作用可能与调节相关因子的表达及受体有关。
基于网络药理学方法与分子对接技术探究左西孟旦治疗低氧肺动脉高压的作用机制
网络出版时间：２０２４－０３－０９１５：５１：４７ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｌｉｎｋ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｕｒｌｉｄ／３４．１０８６．Ｒ．２０２４０３０６．１７２７．０４８基于网络药理学方法与分子对接技术探究左西孟旦治疗低氧肺动脉高压的作用机制张晓丹１，２，３，谢玉良１，２，３，高梦丹１，２，３，袁奥雪１，２，３，李涵飞１，２，３，祝田田１，２，３（１．新乡医学院药学院，２．河南省心血管重构与药物干预国际联合实验室，３．新乡市心血管重构干预与分子靶向治疗药物研发重点实验室，河南新乡 ４５３００３）收稿日期：２０２３－１１－３０，修回日期：２０２４－０１－３１基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８１８０００５１）；河南省科技发展计划项目（Ｎｏ２１２１０２３１０３１９）作者简介：张晓丹（２００１－），女，本科，研究方向：心血管药理学，Ｅ ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｘｄ０３１２＠１６３．ｃｏｍ；祝田田（１９９２－），女，博士，副教授，硕士生导师，研究方向：心血管药理学，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｚｈｕｔｔ＠ｘｘｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２３０６０９３文献标识码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２４）０３－０５６５－０９中国图书分类号：Ｒ ３３２；Ｒ３１９；Ｒ５４４；Ｒ８４５ ２２；Ｒ９７２ ４摘要：目的 通过动物实验探究左西孟旦（ｌｅｖｏｓｉｍｅｎｄａｎ，ＬＥ ＶＯ）对低氧肺动脉高压（ｈｙｐｏｘｉｃｐｕｌｍｏｎａｒｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，ＨＰＨ）的作用，使用网络药理学方法与分子对接技术进一步探索其潜在作用机制。
方法 构建ＨＰＨ大鼠模型，检测右心收缩压及右心重构指数；通过ＨＥ、Ｍａｓｓｏｎ和ＶＧ染色分析大鼠肺组织病理学变化。
检索ＳｗｉｓｓＴａｒｇｅｔＰｒｅｄｉｃｔｉｏｎ、Ｄｒｕｇ ＢａｎｋＯｎｌｉｎｅ、ＢａｔＭａｎ、Ｔａｒｇｅｔｎｅｔ、ＳＥＡ、ＰｈａｒｍＭａｐｐｅｒ数据库，筛选药物靶点；从ＧｅｎｅＣａｒｄｓ、ＯＭＩＭ数据库中检索疾病靶点；确定二者交集靶点后，构建“药物－靶点－疾病”网络；构建蛋白互作网络并筛选出核心靶点；使用ＤＡＶＩＤ数据库进行ＧＯ和ＫＥＧＧ通路富集分析；用ＡｕｔｏＤｏｃｋ软件对核心靶点进行分子对接。
基于斑马鱼模型研究木蝴蝶苷A的抗阿尔茨海默病活性和作用机制
山东科学ＳＨＡＮＤＯＮＧＳＣＩＥＮＣＥ第３６卷第６期２０２３年１２月出版Ｖｏｌ.３６Ｎｏ.６Ｄｅｃ.２０２３收稿日期:２０２３￣０１￣３１基金项目:济南市 新高校２０条 项目(２０２１ＧＸＲＣ１０６)ꎻ齐鲁工业大学(山东省科学院)科教产融合试点工程项目(２０２２ＰＹ０３３ꎬ２０２２ＪＢＺ０１￣０６)作者简介:时瑞碟(１９９７ )ꎬ女ꎬ硕士研究生ꎬ研究方向为神经药理学ꎮＥ￣ｍａｉｌ:ｓｈｉｒｕｉｄｉｅ＠１６３.ｃｏｍ∗通信作者ꎬ靳梦(１９８５ )ꎬ女ꎬ博士ꎬ研究员ꎬ硕士生导师ꎬ研究方向为神经系统疾病模型建立和神经药理学ꎮＥ￣ｍａｉｌ:ｍｊｉｎ１９８５＠ｈｏｔｍａｉｌ.ｃｏｍ张秀军(１９６６ )ꎬ男ꎬ博士ꎬ教授ꎬ博士生导师ꎬ研究方向为药理学㊁毒理学ꎮＥ￣ｍａｉｌ:ｚｈａｎｇｘｉｕｊｕｎ６６＠１６３.ｃｏｍ基于斑马鱼模型研究木蝴蝶苷Ａ的抗阿尔茨海默病活性和作用机制时瑞碟１ꎬ２ꎬ高鑫２ꎬ王宝堃２ꎬ高代丽２ꎬ靳梦２∗ꎬ张秀军１∗(１.华北理工大学心理与精神卫生学院ꎬ河北唐山０６３２００ꎻ２.齐鲁工业大学(山东省科学院)生物研究所山东省科学院药物筛选技术重点实验室ꎬ山东济南２５０１０３)摘要:基于六水合氯化铝诱导的斑马鱼阿尔茨海默病模型ꎬ探究木蝴蝶苷Ａ的抗阿尔茨海默病活性及作用机制ꎮ将受精后３ｄ的野生型ＡＢ品系斑马鱼随机分为阴性对照组ꎬ８０μｍｏｌ/Ｌ六水合氯化铝模型对照组ꎬ８０μｍｏｌ/Ｌ六水合氯化铝与６μｍｏｌ/Ｌ多奈哌齐阳性对照组ꎬ８０μｍｏｌ/Ｌ六水合氯化铝与不同浓度(５㊁１０㊁２０μｍｏｌ/Ｌ)木蝴蝶苷Ａ受试物组ꎮ斑马鱼受精后６ｄꎬ利用明暗交替行为学实验观察不同处理组斑马鱼行为差异并分析其变化ꎻ通过硫黄素Ｓ染色测定各组斑马鱼头部Ａβ斑块沉积数ꎻ采用酶活测定试剂盒检测各组斑马鱼乙酰胆碱酯酶活性ꎻ以实时荧光定量ＰＣＲ检测自噬相关基因(ｂｅｃｌｉｎ１㊁ｕｌｋ１ｂ㊁ｕｌｋ２和ａｔｇ７)的表达变化ꎻ借助分子对接技术验证木蝴蝶苷Ａ与自噬相关蛋白(ｂｅｃｌｉｎ１㊁ｕｌｋ１ｂ㊁ｕｌｋ２和ａｔｇ７)结合的可靠性ꎮ结果表明ꎬ木蝴蝶苷Ａ缓解了六水合氯化铝造成的斑马鱼运动障碍ꎬ降低了Ａβ斑块沉积数和乙酰胆碱酯酶活性水平ꎬ使自噬相关基因的异常表达趋于正常ꎮ该研究初步揭示了木蝴蝶苷Ａ能够缓解六水合氯化铝诱导的斑马鱼运动障碍ꎬ其机制可能与激活细胞自噬有关ꎬ这为木蝴蝶苷Ａ的临床应用及其治疗阿尔茨海默病的相关研究提供了理论依据ꎮ关键词:阿尔茨海默病ꎻ六水合氯化铝ꎻ自噬ꎻ斑马鱼ꎻ木蝴蝶苷Ａ中图分类号:Ｒ９６５㊀㊀㊀文献标志码:Ａ㊀㊀㊀文章编号:１００２￣４０２６(２０２３)０６￣００２８￣１０开放科学(资源服务)标志码(ＯＳＩＤ):Ａｎｔｉ￣ＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｏｒｏｘｉｎＡａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｃｔｉｏｎｂａｓｅｄｏｎｚｅｂｒａｆｉｓｈｍｏｄｅｌＳＨＩＲｕｉｄｉｅ１ꎬ２ꎬＧＡＯＸｉｎ２ꎬＷＡＮＧＢａｏｋｕｎ２ꎬＧＡＯＤａｉｌｉ２ꎬＪＩＮＭｅｎｇ２∗ꎬＺＨＡＮＧＸｉｕｊｕｎ１∗(１.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｓｙｃｈｏｌｏｇｙａｎｄＭｅｎｔａｌＨｅａｌｔｈꎬＮｏｒｔｈＣｈｉｎａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬＴａｎｇｓｈａｎ０６３２００ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＤｒｕｇＳｃｒｅｅｎｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓꎬＢｉｏｌｏｇｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅꎬＱｉｌｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ(ＳｈａｎｄｏｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ)ꎬＪｉｎａｎ２５０１０３ꎬＣｈｉｎａ)ＡｂｓｔｒａｃｔʒＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅａｍｅｌｉｏｒａｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｏｒｏｘｉｎＡｏｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ(ＡＤ)ａｎｄｔｈｅｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｃｔｉｏｎꎬａｚｅｂｒａｆｉｓｈＡＤｍｏｄｅｌｉｎｄｕｃｅｄｂｙａｌｕｍｉｎｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅｈｅｘａｈｙｄｒａｔｅ(ＡｌＣｌ３)ｗａｓｕｓｅｄ.Ｗｉｌｄ￣ｔｙｐｅｚｅｂｒａｆｉｓｈＡＢｌａｒｖａｅａｔ３ｄｐｆ(ｄａｙｓｐｏｓｔｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ)ｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｇｒｏｕｐｓꎬｉｎｃｌｕｄｉｎｇｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐꎬＡｌＣｌ３(８０μｍｏｌ/Ｌ)ｍｏｄｅｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐꎬＡｌＣｌ３(８０μｍｏｌ/Ｌ)ｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｄｏｎｅｐｅｚｉｌ(６μｍｏｌ/Ｌ)ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐꎬａｎｄＡｌＣｌ３(８０μｍｏｌ/Ｌ)ｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ(５ꎬ１０ꎬａｎｄ２０μｍｏｌ/Ｌ)ｏｆｏｒｏｘｉｎＡｔｅｓｔｇｒｏｕｐ.Ａｔ６ｄｐｆꎬｚｅｂｒａｆｉｓｈｂｅｈａｖｉｏｒｗａｓｍｏｎｉｔｏｒｅｄａｎｄａｎａｌｙｚｅｄｕｓｉｎｇｚｅｂｒａｆｉｓｈｌｉｇｈｔ￣ｄａｒｋｌｏｃｏｍｏｔｉｏｎｔｅｓｔ.ＡβｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎｚｅｂｒａｆｉｓｈｈｅａｄｓｗａｓａｓｓａｙｅｄｂｙｔｈｉｏｆｌａｖｉｎＳｓｔａｉｎｉｎｇ.Ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅａｓｓａｙｋｉｔｔｅｓｔｅｄａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ(ＡｃｈＥ)ａｃｔｉｖｉｔｙ.Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎꎬｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｕｔｏｐｈａｇｙ￣ｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓ(ｂｅｃｌｉｎ１㊁ｕｌｋ１ｂ㊁ｕｌｋ２ａｎｄａｔｇ７)ｗａｓｔｅｓｔｅｄｂｙｒｅａｌ￣ｔｉｍｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ.ＭｏｌｅｃｕｌａｒｄｏｃｋｉｎｇｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｔｏｖａｌｉｄａｔｅｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｏｒｏｘｉｎＡａｎｄａｕｔｏｐｈａｇｙ￣ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ(ｂｅｃｌｉｎ１㊁ｕｌｋ１ｂ㊁ｕｌｋ２ａｎｄａｔｇ７).ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｏｒｏｘｉｎＡｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｌｉｅｖｅｄｔｈｅｄｙｓｋｉｎｅｓｉａａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｅｄＡβｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄＡｃｈＥａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｚｅｂｒａｆｉｓｈｉｎｄｕｃｅｄｂｙＡｌＣｌ３.Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｕｔｏｐｈａｇｙ￣ｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓｔｅｎｄｅｄｔｏｂｅｎｏｒｍａｌａｆｔｅｒｏｒｏｘｉｎＡｔｒｅａｔｍｅｎｔ.ＴｈｉｓｓｔｕｄｙｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｏｒｏｘｉｎＡａｌｌｅｖｉａｔｅｄＡｌＣｌ３￣ｉｎｄｕｃｅｄＡＤｓｙｍｐｔｏｍｓｉｎｚｅｂｒａｆｉｓｈꎬｗｈｅｒｅｔｈｅｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｃｔｉｏｎｉｓｐｏｓｓｉｂｌｙａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈａｃｔｉｖａｔｅｄａｕｔｏｐｈａｇｙꎬｐｒｏｖｉｄｉｎｇａｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｏｒｏｘｉｎＡａｎｄｉｔｓｒｅｌａｔｅｄｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｔｒｅａｔｉｎｇＡＤ.ＫｅｙｗｏｒｄｓʒＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅꎻａｌｕｍｉｎｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅｈｅｘａｈｙｄｒａｔｅꎻａｕｔｏｐｈａｇｙꎻｚｅｂｒａｆｉｓｈꎻｏｒｏｘｉｎＡ㊀㊀阿尔茨海默病(ＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅꎬＡＤ)是一种常见的神经退行性疾病ꎬ主要病理特征是细胞外β￣淀粉样蛋白(ａｍｙｌｏｉｄβ￣ｐｒｏｔｅｉｎꎬＡβ)斑块的沉积和细胞内神经原纤维缠结的形成[１]ꎮＡＤ的发病机制复杂多样ꎬ目前广为认可的发病机制假说包括淀粉样蛋白级联假说㊁ｔａｕ蛋白异常磷酸化假说㊁胆碱能假说等[２]ꎮ目前针对ＡＤ的治疗ꎬ主要是胆碱酯酶抑制剂(多奈哌齐㊁加兰他敏和卡巴拉汀)和Ｎ￣甲基￣Ｄ￣天冬氨酸受体拮抗剂(美金刚)[２]ꎮ这些药物虽然能在一定程度上改善ＡＤ患者的行为和认知障碍ꎬ但并不能治愈或者预防该疾病ꎮ自噬是细胞自我降解的过程ꎬ在去除错误折叠或聚集的蛋白质㊁清除受损细胞器等方面起着重要作用[３]ꎮ研究表明自噬的增强能够降低人神经元细胞中ｔａｕ蛋白的过度磷酸化ꎬ缓解ＡＤ小鼠模型的记忆障碍[４]ꎮ杜仲雄花通过调节自噬基因异常表达来改善ＡＤ样症状[５]ꎮ自噬与ＡＤ病理之间存在复杂的联系ꎬ这表明自噬相关蛋白(ｂｅｃｌｉｎ１㊁ｕｌｋ２㊁ｕｌｋ１ｂ和ａｔｇ７)可能是ＡＤ治疗的重要靶点ꎮ中药木蝴蝶来源于紫葳科植物木蝴蝶的干燥成熟种子ꎬ具有清肺利咽㊁疏肝和胃等作用[６]ꎮ木蝴蝶苷Ａ是木蝴蝶提取而得到的一种黄酮类物质ꎮ研究表明ꎬ木蝴蝶苷Ａ具有抗氧化㊁抗炎㊁抗病毒㊁抗癌等特性ꎬ但目前还缺乏关于木蝴蝶苷Ａ对神经系统疾病作用的研究[７￣８]ꎮ斑马鱼是人类疾病和药物开发的理想模型系统ꎬ常用于研究ＡＤ㊁帕金森病㊁精神分裂症等神经退行性疾病ꎮ六水合氯化铝诱导的斑马鱼ＡＤ模型ꎬ是一种比较成熟的能够反映ＡＤ主要特征性病理变化的体内动物模型[９]ꎮ本研究中ꎬ我们使用六水合氯化铝诱导的斑马鱼ＡＤ模型ꎬ通过观察并记录斑马鱼的行为表现ꎬ检测乙酰胆碱酯酶(ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅꎬＡｃｈＥ)的活性和Ａβ斑块沉积以及测定自噬相关基因的表达变化ꎬ从而分析木蝴蝶苷Ａ对六水合氯化铝诱导的斑马鱼ＡＤ症状是否具有缓解作用ꎬ并对其机制进行探究ꎮ１㊀仪器与材料１.１㊀实验仪器Ｚ￣Ａ￣Ｓ５斑马鱼养殖系统(上海海圣公司)ꎻＺｅｂｒａＬａｂ３.３Ｚｅｂｒａｂｏｘ斑马鱼行为分析仪(法国Ｖｉｅｗｐｏｉｎｔ公司)ꎻＨＰＧ￣２８０ＢＸ光照培养箱(东联电子技术开发有限公司)ꎻ１３７２０实时荧光定量ＰＣＲ仪器(瑞士Ｒｏｃｈｅ诊断产品有限公司)ꎻＣ１０００Ｔｏｕｃｈ梯度ＰＣＲ仪(美国Ｂｉｏ￣Ｒａｄ公司)ꎻＦＶ１２００激光扫描共聚焦显微镜(日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司)ꎻＮａｎｏＤｒｏｐＯｎｅ超微量分光光度计(上海基因生物技术国际贸易有限公司)ꎻＳｐｅｃｔｒａＭＲ全波长酶标仪(美国Ｄｙｎｅｘ公司)ꎮ１.２㊀实验材料木蝴蝶苷Ａ(批号ＤＭ００２８ꎬ纯度ȡ９６％ꎬ成都乐美天医药科技有限公司)ꎻ六水合氯化铝(批号Ａ１１２５１１ꎬ纯度９９.９９％ꎬ上海阿拉丁生化科技股份有限公司)ꎻ盐酸多奈哌齐(批号Ｄ１２９９４８ꎬ纯度ȡ９８％ꎬ上海阿拉丁生化科技股份有限公司)ꎻＲＮＡ快速提取试剂盒(批号３１２４２３ＡＸꎬ北京艾德莱生物科技有限公司)ꎻ逆转录试剂盒(批号Ｅ０４７￣０１Ｂꎬ苏州近岸蛋白质科技股份有限公司)ꎻＢＣＡ蛋白浓度测定试剂盒(批号************ꎬ上海碧云天生物技术有限公司)ꎻ实时荧光定量ＰＣＲ试剂盒(批号Ｅ０９６￣０１Ｂꎬ苏州近岸蛋白质科技股份有限公司)ꎻ硫磺素Ｓ(批号ＭＫＣＨ４１０８ꎬ美国Ｓｉｇｍａ公司)ꎻＡｃｈＥ活性检测试剂盒(批号２０２００８２９ꎬ南京建成生物工程研究所)ꎻＮ￣苯基硫脲(批号Ｐ７６２９ꎬ美国Ｓｉｇｍａ公司)ꎻ０.３％ＴｒｉｔｏｎＸ￣１００(批号３４６６８５０ꎬ上海生工生物工程有限公司)ꎻ柠檬酸钠抗原修复液(１ˑ)(批号２０１９０３２２ꎬ北京索莱宝科技有限公司)ꎻ４％多聚甲醛(批号７１０４１８００ꎬ北京兰杰柯科技有限公司)ꎮ１.３㊀斑马鱼品系野生型ＡＢ品系斑马鱼由山东省科学院生物研究所提供ꎮ将成年斑马鱼饲养在恒温２８ħ的养殖系统中ꎬ每天同一时间段给与１４ｈ/１０ｈ的光照循环ꎬ定点喂食两次丰年虾ꎮ将成年斑马鱼按照２:２的雌雄比例于前一天分别放置于鱼缸中ꎬ用挡板将雌雄鱼分开ꎬ并于第二天早上８:３０抽取挡板ꎬ大概２ｈ后ꎬ将鱼缸中的鱼卵转移到玻璃缸中ꎬ并加入５ｇ/Ｌ的亚甲基蓝ꎬ之后放置在恒温２８ħ的光照培养箱中培养ꎮ２㊀方法２.１㊀实验分组及处理将受精后３ｄ的斑马鱼随机转移到６孔细胞培养板中ꎬ之后将斑马鱼随机分为６个组:阴性对照组ꎬ六水合氯化铝(８０μｍｏｌ/Ｌ)模型对照组ꎬ六水合氯化铝和不同浓度(５㊁１０和２０μｍｏｌ/Ｌ)木蝴蝶苷Ａ受试物共处理组ꎬ六水合氯化铝和多奈哌齐(６μｍｏｌ/Ｌ)阳性对照组ꎮ每天给药一次ꎬ之后放置在光照培养箱中培养ꎮ在斑马鱼受精后６ｄ进行明暗交替行为学观察ꎬＡｃｈＥ活性检测ꎬ斑马鱼头部Ａβ斑块数检测和实时荧光定量ＰＣＲ分析自噬相关基因的表达ꎮ２.２㊀明暗交替行为学观察将受精后６ｄ的斑马鱼(ｎ＝３２)分别吸入到４８孔板中ꎬ每孔加入１ｍＬ的养鱼水ꎮ将斑马鱼置于行为学观测箱中在１００％光照环境中适应１０ｍｉｎꎬ之后进行６０ｍｉｎ包括３组明暗交替循环(１０ｍｉｎ黑暗ꎬ１０ｍｉｎ光照)的行为学测试ꎮ实验结束后利用Ｚｅｂｒａｂｏｘ斑马鱼行为分析仪对斑马鱼的游动轨迹㊁游动速度和游动距离进行分析ꎮ２.３㊀ＡｃｈＥ活性检测将药物处理结束的受精后６ｄ的斑马鱼(ｎ＝１００)收集在１.５ｍＬ的离心管中ꎬ每管加入２００μＬ的生理盐水ꎬ之后用破碎机进行破碎匀浆ꎮ以１１０００ｒ/ｍｉｎ的转速在４ħ离心１０ｍｉｎ后取上清液ꎬ之后按照ＢＣＡ蛋白浓度测定试剂盒说明书进行操作ꎬ用全波长酶标仪测定５６２ｎｍ处的光密度值(ｏｐｔｉｃａｌｄｅｎｓｉｔｙꎬＯＤ)并计算样品的蛋白浓度ꎮ之后根据ＡｃｈＥ活性检测试剂盒的说明书ꎬ稍作修改后进行实验ꎮ具体操作为分别吸取双蒸水㊁底物缓冲液和显色应用液各５㊁５０㊁５０μＬ配置空白管所需溶液ꎻ分别吸取标准液㊁底物缓冲液和显色应用液各５㊁５０㊁５０μＬ配置标准管所需溶液ꎻ分别吸取各组斑马鱼样品蛋白上清液㊁底物缓冲液和显色应用液各５㊁５０㊁５０μＬ配置不同处理组的测定溶液ꎮ之后将各组配置好的溶液振荡混匀后加入到９６孔板中ꎬ每个处理组５次重复ꎮ在３７ħ恒温培养箱中孵育２０ｍｉｎ后ꎬ每孔加入１０μＬ的透明剂和３μＬ的抑制剂ꎮ在室温下放置１５ｍｉｎ后ꎬ使用酶标仪在４１２ｎｍ波长和０.５ｃｍ光径处测定ＯＤ值ꎬ之后根据各样品组的ＯＤ值和浓度ꎬ计算得出各处理组的ＡｃｈＥ活力ꎮ２.４㊀斑马鱼头部Ａβ斑块数检测将受精后的斑马鱼卵收到养鱼缸之后ꎬ加入１ｍｇ/ｍＬ的Ｎ￣苯基硫脲以抑制黑色素的形成ꎮ每天同一时间换一次液ꎬ其他药物处理方法同２.１节所述ꎮ将４％多聚甲醛处理后的受精后６ｄ的斑马鱼放入４ħ冰箱中过夜ꎮ第二天使用磷酸缓冲盐缓冲液(ｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒｅｄｓａｌｉｎｅꎬＰＢＳ)将斑马鱼清洗３次ꎬ每次１０ｍｉｎꎮ将清洗完的斑马鱼使用１％的琼脂凝胶固定后ꎬ进行酒精梯度脱水ꎬ二甲苯透明ꎬ石蜡浸润ꎮ之后将处理完的蜡块ꎬ以７μｍ间距进行横切切片ꎮ脱蜡之后在室温下用ＰＢＳ洗涤切片５ｍｉｎꎬ重复３次ꎮ吸干水分ꎬ用免疫组化笔将载玻片上的组织框起来ꎮ然后按照３μＬ:１ｍＬ比例配制０.３％ＴｒｉｔｏｎＸ￣１００和柠檬酸钠抗原修复液(１ˑ)ꎬ混匀后加到框起来的组织上ꎬ在４ħ冰箱孵育２０ｍｉｎ后ꎬ用ＰＢＳ清洗２次ꎬ每次５ｍｉｎꎮ用滤纸将载玻片上的ＰＢＳ完全吸干后ꎬ在免疫组化笔圈住的部分加入０.３％硫黄素Ｓꎬ并放入４ħ冰箱避光过夜ꎮ第二天用ＰＢＳ在避光环境下洗涤切片１０ｍｉｎꎬ重复３次ꎬ之后用激光扫描共聚焦显微镜观察斑马鱼头部Ａβ斑块沉积状况并进行拍照ꎮ使用Ｉｍａｇｅ￣ＰｒｏＰｌｕｓ５.１分析图像ꎬ并计数斑马鱼头部Ａβ斑块沉积数ꎮ２.５㊀实时荧光定量ＰＣＲ分析自噬相关基因的表达将药物处理结束的受精后６ｄ的斑马鱼(ｎ＝３０)收集在１.５ｍＬ的离心管中ꎬ每管加入５００μＬ的裂解液ꎬ之后用破碎机进行破碎匀浆ꎮ按照ＲＮＡ快速提取试剂盒的说明书进行ＲＮＡ提取后ꎬ利用超微量分光光度计检测不同组别斑马鱼的ＲＮＡ浓度ꎮ之后立即使用Ｃ１０００Ｔｏｕｃｈ梯度ＰＣＲ仪将ＲＮＡ进行逆转录ꎬ将逆转录得到的ｃＤＮＡ进行稀释ꎬ之后根据实时荧光定量ＰＣＲ试剂盒说明书ꎬ加入相应的引物ꎮ用实时荧光定量ＰＣＲ仪对基因进行扩增ꎬ扩增结束后ꎬ用Ｃｑ值计算各组样品基因的差异表达ꎬ选用ｒｐｌ１３ａ为内参ꎬ目的基因与内参基因的Ｃｑ差值用ΔＣｑ表示ꎬΔΔＣｑ值为各样品的ΔＣｑ值与Ｃｔｌ组ΔＣｑ值平均数的差值ꎬｍＲＮＡ的相对表达量根据２－ΔΔＣｑ相对定量法计算ꎬ每组设置３个重复组ꎮ引物序列见表１ꎮ表１㊀实时荧光定量ＰＣＲ所需引物序列信息ＴａｂｌｅＰＣＲｒｐｌ１３ａ上游:ＴＣＴＧＧＡＧＧＡＣＴＧＴＡＡＧＡＧＧＴＡＴＧＣ下游:ＡＧＡＣＧＣＡＣＡＡＴＣＴＴＧＡＧＡＧＣＡＧｂｅｃｌｉｎ１上游:ＧＴＴＣＡＧＧＴＧＧＴＣＴＧＣＧＴＴＴＴ下游:ＧＣＡＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＴＧＴＣＡｕｌｋ１ｂ上游:ＡＧＧＣＣＧＡＡＡＧＴＣＴＣＡＣＴＴＣＡ下游:ＡＧＣＣＡＴＧＴＡＣＡＴＣＧＧＡＧＡＣＣｕｌｋ２上游:ＡＣＣＴＣＴＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＣＡＡＡＡＴ下游:ＧＡＧＡＴＴＧＣＡＡＧＡＧＧＣＴＴＧＡＧＴＴａｔｇ７上游:ＡＧＡＧＴＣＣＡＧＴＣＣＧＡＴＧＴＣ下游:ＡＧＡＡＧＴＡＡＣＡＧＣＣＧＡＧＡＣＧ２.６㊀分子对接的准备过程木蝴蝶苷Ａ的３Ｄ结构从ＰｕｂＣｈｅｍ(ｈｔｔｐｓ://ｐｕｂｃｈｅｍ.ｎｃｂｉ.ｎｌｍ.ｎｉｈ.ｇｏｖ/)数据库中下载ꎬ自噬相关蛋白(ｂｅｃｌｉｎ１㊁ｕｌｋ１ｂ㊁ｕｌｋ２和ａｔｇ７)的３Ｄ结构从ＰｒｏｔｅｉｎＤａｔａＢａｎｋ(ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｒｃｓｂ.ｏｒｇ/)数据库下载ꎮ使用薛定谔分子对接软件对自噬相关蛋白进行加氢㊁去水等处理ꎬ之后将自噬相关蛋白和木蝴蝶苷Ａ进行对接ꎬ以对接分数作为分子对接的结果ꎬ最后借助Ｐｙｍｏｌ进行可视化分析ꎮ２.７㊀统计分析使用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ７.０通过单向方差分析和双向方差分析进行统计分析ꎬ结果用ｘʃｓ表示ꎬＰ<０.０５表示差异有统计学意义ꎮ３㊀结果３.１㊀木蝴蝶苷Ａ具有缓解六水合氯化铝诱导的斑马鱼运动障碍作用如图１(ａ)和１(ｂ)所示ꎬ与空白对照组的斑马鱼相比ꎬ六水合氯化铝模型对照组中斑马鱼的游动总距离明显变短(Ｐ<０.００１)ꎬ游动速度减缓ꎮ与六水合氯化铝模型对照组相比ꎬ不同浓度的木蝴蝶苷Ａ受试物(５㊁１０㊁２０μｍｏｌ/Ｌ)与六水合氯化铝共同处理时ꎬ斑马鱼的游动总距离(Ｐ＝０.００９ꎬＰ＝０.００２ꎬＰ<０.００１)和速度均显著增加ꎮ与六水合氯化铝模型对照组相比ꎬ六水合氯化铝和多奈哌齐阳性对照组的速度和总距离有所增加ꎬ其结果(Ｐ＝０.２３)不具有统计学意义ꎮ如图１(ａ)所示ꎬ在黑暗环境下ꎬ不同药物处理组斑马鱼的游动距离变化与总游动距离变化具有一致性ꎮ以上结果表明ꎬ木蝴蝶苷Ａ对六水合氯化铝诱导的斑马鱼运动障碍具有一定的缓解作用ꎮ注:∗∗Ｐ<０.０１ｖｓ.空白对照组ꎬ∗∗∗Ｐ<０.００１ｖｓ.空白对照组ꎻ＃＃Ｐ<０.０１ｖｓ.模型对照组ꎬ＃＃＃Ｐ<０.００１ｖｓ.模型对照组ꎻｎ＝３２ꎻ红色线为快速游动轨迹ꎬ绿色线为中速游动轨迹ꎬ黑色线为慢速游动轨迹ꎮ图１㊀木蝴蝶苷Ａ对六水合氯化铝诱导的斑马鱼运动障碍的影响Ｆｉｇ.１㊀ＥｆｆｅｃｔｏｆｏｒｏｘｉｎＡｏｎａｌｕｍｉｎｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅｈｅｘａｈｙｄｒａｔｅ￣ｉｎｄｕｃｅｄｌｏｃｏｍｏｔｉｏｎｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓｉｎｚｅｂｒａｆｉｓｈ３.２㊀木蝴蝶苷Ａ对斑马鱼头部Ａβ斑块沉积的抑制作用如图２(ａ)和２(ｂ)所示ꎬ与空白对照组相比ꎬ六水合氯化铝模型对照组的斑马鱼大脑中Ａβ斑块的数明显增多(Ｐ<０.００１)ꎮ与六水合氯化铝模型对照组相比ꎬ六水合氯化铝和多奈哌齐阳性对照组中Ａβ斑块沉积数减少(Ｐ＝０.０６)ꎬ六水合氯化铝和木蝴蝶苷Ａ受试物组的Ａβ斑块沉积数显著降低(Ｐ＝０.０３ꎬＰ＝０.００２)ꎮ注:∗∗∗Ｐ<０.００１ｖｓ.空白对照组ꎻ＃Ｐ<０.０５ｖｓ.模型对照组ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ｖｓ.模型对照组ꎻｎ＝８ꎮ图２㊀木蝴蝶苷Ａ对斑马鱼头部Ａβ斑块沉积的抑制Ｆｉｇ.２㊀ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｏｒｏｘｉｎＡｏｎＡβｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎｚｅｂｒａｆｉｓｈ３.３㊀木蝴蝶苷Ａ对ＡｃｈＥ活性的抑制作用抑制ＡｃｈＥ活性ꎬ可以提高脑中的乙酰胆碱水平ꎬ从而改善ＡＤ患者的学习记忆障碍[１０]ꎮ在本实验中ꎬ研究探讨了木蝴蝶苷Ａ对六水合氯化铝处理的斑马鱼ＡｃｈＥ活性的影响ꎮ如图３所示ꎬ与空白对照组相比ꎬ六水合氯化铝模型对照组斑马鱼的ＡｃｈＥ活性显著增加(Ｐ<０.００１)ꎮ与六水合氯化铝模型对照组相比ꎬ六水合氯化铝和多奈哌齐阳性对照组中斑马鱼的ＡｃｈＥ活性显著降低(Ｐ＝０.００８)ꎬ在六水合氯化铝和木蝴蝶苷Ａ受试物组中斑马鱼的ＡｃｈＥ活性也显著降低(Ｐ<０.００１)ꎬ且剂量与效应呈正相关ꎮ注:∗∗Ｐ<０.０１ｖｓ.空白对照组ꎻ＃＃Ｐ<０.０１ｖｓ.模型对照组ꎬ＃＃＃Ｐ<０.０１ｖｓ.模型对照组ꎻｎ＝５ꎮ图３㊀木蝴蝶苷Ａ对斑马鱼ＡｃｈＥ活性的抑制Ｆｉｇ.３㊀ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｏｒｏｘｉｎＡｏｎｔｈｅＡｃｈＥａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｚｅｂｒａｆｉｓｈ３.４㊀木蝴蝶苷Ａ对自噬相关基因表达的影响如图４所示ꎬ与空白对照组相比ꎬ六水合氯化铝模型对照组中ｂｅｃｌｉｎ１㊁ｕｌｋ１ｂ㊁ｕｌｋ２㊁和ａｔｇ７的表达明显下调(Ｐ＝０.０２ꎬＰ<０.００１ꎬＰ<０.００１ꎬＰ<０.００１)ꎮ如图４(ａ)所示ꎬ与六水合氯化铝模型对照组相比ꎬ六水合氯化铝与５㊁２０μｍｏｌ/Ｌ木蝴蝶苷Ａ受试物组ｂｅｃｌｉｎ１表达明显上调(Ｐ＝０.００１ꎬＰ<０.００１)ꎻ如图４(ｂ)所示ꎬ六水合氯化铝与不同浓度木蝴蝶苷Ａ(５㊁１０㊁２０μｍｏｌ/Ｌ)受试物组中ｕｌｋ１ｂ的表达明显上调(Ｐ<０.００１ꎬＰ<０.００１ꎬＰ<０.００１)ꎻ如图４(ｃ)所示ꎬ六水合氯化铝与５㊁２０μｍｏｌ/Ｌ木蝴蝶苷Ａ受试物组ｕｌｋ２表达明显上调(Ｐ<０.００１ꎬＰ<０.００１)ꎻ如图４(ｄ)所示ꎬ六水合氯化铝与不同浓度木蝴蝶苷Ａ(５㊁１０㊁２０μｍｏｌ/Ｌ)受试物ａｔｇ７的表达也明显上调(Ｐ＝０.０１ꎬＰ<０.００１ꎬＰ<０.００１)ꎮ注:∗Ｐ<０.０５ｖｓ.空白对照组ꎬ∗∗∗Ｐ<０.００１ｖｓ.空白对照组ꎻ＃Ｐ<０.０５ｖｓ.六水合氯化铝ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ｖｓ.六水合氯化铝ꎬ＃＃＃Ｐ<０.０１ｖｓ.六水合氯化铝ꎻｎ＝４０ꎮ图４㊀木蝴蝶苷Ａ对自噬相关基因表达的影响Ｆｉｇ.４㊀ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｏｒｏｘｉｎＡｏｎａｕｔｏｐｈａｇｙｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ３.５㊀分子对接结果通过２.６方法对木蝴蝶苷Ａ与自噬相关蛋白(ｂｅｃｌｉｎ１㊁ｕｌｋ１ｂ㊁ｕｌｋ２和ａｔｇ７)进行分子对接ꎬ得出图５ꎬ即ｂｅｌｃｌｉｎ１(ＰＤＢＩＤ:４ＺＷ１)与木蝴蝶苷Ａ的对接㊁ｕｌｋ１ｂ(ＰＤＢＩＤ:６ＹＩＤ)与木蝴蝶苷Ａ的对接㊁ｕｌｋ２(ＰＤＢＩＤ:６ＱＡＴ)与木蝴蝶苷Ａ的对接㊁ａｔｇ７(ＰＤＢＩＤ:４ＰＨ４)与木蝴蝶苷Ａ的对接ꎮ木蝴蝶苷Ａ与ｂｅｌｃｌｉｎ１㊁ｕｌｋ１ｂ㊁ｕｌｋ２和ａｔｇ７的对接分数分别为－６.７０７㊁－７.７０８㊁－７.８８８㊁－７.２４９ꎬ这说明木蝴蝶苷Ａ对自噬相关蛋白发挥调控作用ꎮ图５㊀木蝴蝶苷Ａ与自噬相关蛋白的对接结果Ｆｉｇ.５㊀Ｄｏｃｋｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｏｆａｕｔｏｐｈａｇｙ￣ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｗｉｔｈｏｒｏｘｉｎＡｓｈｏｗｉｎｇｔｈｅｂｉｎｄｉｎｇ４㊀讨论与结论ＡＤ是一种进行性神经退行性疾病ꎬ可导致神经元丧失㊁脑萎缩和死亡ꎮ研究表明ꎬ木蝴蝶能够改善ＡＤ小鼠的学习记忆能力ꎬ但具体哪些化学成分起作用还未见报道ꎬ所以我们利用六水合氯化铝诱导的斑马鱼ＡＤ模型去探讨木蝴蝶苷Ａ的抗ＡＤ活性ꎮ正常斑马鱼在面对突然的刺激时ꎬ会表现出快速的保护反应ꎮ研究表明斑马鱼幼鱼在受精后４ｄ后暴露于明暗交替的刺激时ꎬ在光亮中运动活动会突然增加[１１]ꎮ斑马鱼明暗交替行为学测试常被用来识别测定药物的神经保护活性ꎬ通过评估斑马鱼的游动轨迹㊁游动距离和速度ꎬ可以了解其神经行为效应[１０]ꎮ在本研究中ꎬ明暗交替行为学测试表明ꎬ与空白对照组相比六水合氯化铝模型组的斑马鱼游动速度减慢ꎬ游动距离变短ꎬ表明斑马鱼的认知能力受损ꎬ反应迟缓ꎬ不能对外界刺激做出及时的反应ꎮ而经过木蝴蝶苷Ａ的处理ꎬ这种表现有所改变ꎬ这提示木蝴蝶苷Ａ对六水合氯化铝诱导的斑马鱼运动障碍具有缓解作用ꎮＡＤ的特征在于海马和新皮层中ＡｃｈＥ活性升高ꎬ使ＡＤ患者脑内乙酰胆碱水平降低ꎬ影响神经信号的传递ꎬ从而损伤学习记忆能力[１２]ꎮ抑制ＡｃｈＥ活性ꎬ可以提高脑中的乙酰胆碱水平ꎬ改善ＡＤ患者的学习记忆障碍[１３]ꎮ有研究表明暴露于六水合氯化铝的斑马鱼在５０~２５０μｍｏｌ/Ｌ的浓度范围内显示出ＡｃｈＥ活性增加ꎬ运动活性缺乏[１４]ꎮ我们的研究结果表明ꎬ六水合氯化铝和木蝴蝶苷Ａ受试物组的斑马鱼ＡｃｈＥ的活性水平降低ꎬ这说明木蝴蝶苷Ａ能够抑制ＡｃｈＥ活性ꎬ减少乙酰胆碱的水解ꎮＡβ的细胞毒性已在众多体内和体外研究中得到证实ꎬ脑实质中Ａβ斑块的沉积在ＡＤ发病机制中起着核心作用[１５]ꎮＡβ沉积会引发一系列相关反应ꎬ导致ｔａｕ蛋白的错误折叠和组装ꎬ进而将病变扩散到整个神经回路和皮层ꎬ最终损害神经系统ꎬ导致认知能力下降[１６]ꎮ我们的研究表明ꎬ木蝴蝶苷Ａ明显降低了ＡＤ模型中斑马鱼头部的Ａβ斑块计数ꎮ以上表明木蝴蝶苷Ａ能够缓解六水合氯化铝诱导的ＡＤ样症状ꎮ为了进一步探究木蝴蝶苷Ａ是如何发挥抗ＡＤ活性的ꎬ我们进行了机制探究ꎮ自噬在Ａβ的生成和代谢中起重要作用ꎬ与ＡＤ发病进展密切相关[１７]ꎮｂｅｃｌｉｎ１是酵母自噬蛋白ａｔｇ６和ａｐｇ６的同系物ꎬ被认为是自噬体形成的标记蛋白ꎮ研究表明抑制ｂｅｃｌｉｎ１的表达会增加ＡＤ中Ａβ的聚集ꎬ从而加速神经病变[１８]ꎮ还有研究表明ＡＤ患者神经元ｂｅｃｌｉｎ１表达明显下降[１９]ꎮ在本研究中ꎬ六水合氯化铝模型组ꎬｂｅｃｌｉｎ１的基因表达量明显下调ꎬ六水合氯化铝和木蝴蝶苷Ａ受试物组ｂｅｃｌｉｎ１的表达量上调ꎬ说明木蝴蝶苷Ａ能够促进Ａβ在细胞内部降解ꎮｕｌｋ１ｂ具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性ꎬｕｌｋ２和ｕｌｋ１ｂ在自噬的起始阶段发挥着重要的调控作用[２０]ꎮ六水合氯化铝模型组ｕｌｋ２和ｕｌｋ１ｂ的表达明显下调ꎬ而六水合氯化铝和木蝴蝶苷Ａ受试物组ｕｌｋ２和ｕｌｋ１ｂ的表达明显上调ꎬ说明木蝴蝶苷Ａ能够激活自噬的表达ꎮａｔｇ７是与自噬相关的细胞降解和再循环的必需蛋白质ꎬ主要参与自噬小体的形成ꎬ是调节自噬偶联系统的关键基因[２１]ꎮ研究发现ＡＤ小鼠模型大脑皮层和海马体中ａｔｇ７蛋白水平降低[２２]ꎮ六水合氯化铝模型组ꎬａｔｇ７的表达明显降低ꎬ抑制了自噬的过程ꎬ而六水合氯化铝和木蝴蝶苷Ａ受试物组ａｔｇ７的表达明显上调ꎬ说明ａｔｇ７激活了自噬ꎬ可能促进自噬性溶酶体的形成ꎬ恢复细胞内稳态ꎮ基于分子对接初步模拟木蝴蝶苷Ａ与自噬相关蛋白(ｂｅｃｌｉｎ１㊁ｕｌｋ１ｂ㊁ｕｌｋ２和ａｔｇ７)之间的分子作用机制ꎬ对接分数的大小直接反应预测结果的可靠性ꎬ对接分数越小表示结合活性越高ꎮ其对接分数均为负数ꎬ表明木蝴蝶苷Ａ与自噬相关蛋白(ｂｅｃｌｉｎ１㊁ｕｌｋ１ｂ㊁ｕｌｋ２和ａｔｇ７)具有良好的结合能力ꎮ这进一步验证了木蝴蝶苷Ａ能对自噬相关蛋白发挥调控作用ꎬ但后续仍需进一步的生物实验验证ꎮ本研究通过对六水合氯化铝诱导的斑马鱼行为的观察㊁ＡｃｈＥ活性的检测以及Ａβ斑块的沉积情况ꎬ预测了木蝴蝶苷Ａ对ＡＤ的潜在治疗作用ꎮ实时荧光定量ＰＣＲ以及分子对接的结果提示木蝴蝶苷Ａ可能通过激活自噬ꎬ从而发挥抗ＡＤ活性ꎮ本研究为治疗ＡＤ药物研发拓展了新思路ꎬ但还需要采取哺乳动物实验及临床试验等方法做进一步的验证ꎮ参考文献:[１]ＴＡＴＵＬＩＡＮＳＡ.ＣｈａｌｌｅｎｇｅｓａｎｄｈｏｐｅｓｆｏｒＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙＴｏｄａｙꎬ２０２２ꎬ２７(４):１０２７￣１０４３.ＤＯＩ:１０.１０１６/ｊ.ｄｒｕｄｉｓ.２０２２.０１.０１６.[２]ＴＡＭＫꎬＪＵＹＪ.ＰａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｍｅｃｈａｎｉｓｍｓａｎｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｆｏｒＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].ＮｅｕｒａｌＲｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈꎬ２０２２ꎬ１７(３):５４３.ＤＯＩ:１０.４１０３/１６７３￣５３７４.３２０９７０.[３]ＳＲＩＲＡＭＮꎬＳＡＨＭＫ.ＲｅｇｕｌａｔｏｒｙｉｎｓｉｇｈｔｓｉｎｔｏｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃａｎｃｅｒａｎｄＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｏｒｄｅｒｆｒｏｍａｕｔｏｐｈａｇｙｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ[Ｊ].ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙＲｅｐｏｒｔｓꎬ２０２１ꎬ４８(１２):８２２７￣８２３２.ＤＯＩ:１０.１００７/ｓ１１０３３￣０２１￣０６８３８￣４.[４]ＦＡＮＧＥＦꎬＨＯＵＹＪꎬＰＡＬＩＫＡＲＡＳＫꎬｅｔａｌ.Ｍｉｔｏｐｈａｇｙｉｎｈｉｂｉｔｓａｍｙｌｏｉｄ￣βａｎｄｔａｕｐａｔｈｏｌｏｇｙａｎｄｒｅｖｅｒｓｅｓｃｏｇｎｉｔｉｖｅｄｅｆｉｃｉｔｓｉｎｍｏｄｅｌｓｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].ＮａｔｕｒｅＮｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅꎬ２０１９ꎬ２２(３):４０１￣４１２.ＤＯＩ:１０.１０３８/ｓ４１５９３￣０１８￣０３３２￣９. [５]ＳＵＮＣꎬＺＨＡＮＧＳＳꎬＢＡＳＫꎬｅｔａｌ.ＥｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓｏｌｉｖｅｍａｌｅｆｌｏｗｅｒｅｘｔｒａｃｔｓＡｍｅｌｉｏｒａｔｅａｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ￣ｌｉｋｅｐａｔｈｏｌｏｇｙｉｎｚｅｂｒａｆｉｓｈｖｉａｒｅｇｕｌａｔｉｎｇａｕｔｏｐｈａｇｙꎬａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅꎬａｎｄｔｈｅｄｏｐａｍｉｎｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ[Ｊ].ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＮｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅꎬ２０２２ꎬ１５:９０１９５３.ＤＯＩ:１０.３３８９/ｆｎｍｏｌ.２０２２.９０１９５３.[６]国家药典委员会.中华人民共和国药典２０２０年版二部[Ｍ].北京:中国医药科技出版社ꎬ２０２０.[７]ＣＨＥＮＧＸＤꎬＨＵＡＮＧＴＴꎬＷＡＮＧＣＨꎬｅｔａｌ.ＮａｔｕｒａｌｃｏｍｐｏｕｎｄｌｉｂｒａｒｙｓｃｒｅｅｎｉｎｇｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓｏｒｏｘｉｎＡｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａ/ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ[Ｊ].ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬ２０２２ꎬ１３:８９４８９９.ＤＯＩ:１０.３３８９/ｆｐｈａｒ.２０２２.８９４８９９. 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[１８]ＰＩＣＫＦＯＲＤＦꎬＭＡＳＬＩＡＨＥꎬＢＲＩＴＳＣＨＧＩＭꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅａｕｔｏｐｈａｇｙ￣ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｂｅｃｌｉｎ１ｓｈｏｗｓｒｅｄｕｃｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｅａｒｌｙＡｌｚｈｅｉｍｅｒｄｉｓｅａｓｅａｎｄｒｅｇｕｌａｔｅｓａｍｙｌｏｉｄｂｅｔａａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｍｉｃｅ[Ｊ].ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎꎬ２００８ꎬ１１８(６):２１９０￣２１９９.ＤＯＩ:１０.１１７２/ＪＣＩ３３５８５.[１９]ＪＡＥＧＥＲＰＡꎬＰＩＣＫＦＯＲＤＦꎬＳＵＮＣＨꎬｅｔａｌ.Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆａｍｙｌｏｉｄｐｒｅｃｕｒｓｏｒｐｒｏｔｅｉｎｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｂｙｔｈｅｂｅｃｌｉｎ１ｃｏｍｐｌｅｘ[Ｊ].ＰＬｏＳＯｎｅꎬ２０１０ꎬ５(６):ｅ１１１０２.ＤＯＩ:１０.１３７１/ｊｏｕｒｎａｌ.ｐｏｎｅ.００１１１０２.[２０]ＭＣＡＬＰＩＮＥＦꎬＷＩＬＬＩＡＭＳＯＮＬＥꎬＴＯＯＺＥＳＡꎬｅｔａｌ.Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｎｕｔｒｉｅｎｔ￣ｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｕｔｏｐｈａｇｙｂｙｕｎｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ５１￣ｌｉｋｅｋｉｎａｓｅｓ１ａｎｄ２[Ｊ].Ａｕｔｏｐｈａｇｙꎬ２０１３ꎬ９(３):３６１￣３７３.ＤＯＩ:１０.４１６１/ａｕｔｏ.２３０６６.[２１]任李梅ꎬ杨松ꎬ卢姝言ꎬ等.人参总皂苷在巨噬细胞ＲＡＷ２６４.７中降低脂多糖诱导的炎症和氧化应激[Ｊ].中国医院药学杂志ꎬ２０２２ꎬ４２(９):８９６￣９０１.ＤＯＩ:１０.１３２８６/ｊ.１００１￣５２１３.２０２２.０９.０４.[２２]ＣＡＲＶＡＬＨＯＣꎬＳＡＮＴＯＳＭＳꎬＯＬＩＶＥＩＲＡＣＲꎬｅｔａｌ.Ａｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅａｎｄｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓ￣ｒｅｌａｔｅｄａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓｉｎｂｒａｉｎｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａꎬａｕｔｏｐｈａｇｙａｎｄｓｙｎａｐｔｉｃｍａｒｋｅｒｓ[Ｊ].ＢｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａ(ＢＢＡ)￣ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢａｓｉｓｏｆＤｉｓｅａｓｅꎬ２０１５ꎬ１８５２(８):１６６５￣１６７５.ＤＯＩ:１０.１０１６/ｊ.ｂｂａｄｉｓ.２０１５.０５.００１.。
抗癫痫药物的应用及研制
抗癫痫药物的应用及研制
丁华
【期刊名称】《山东医药》
【年(卷),期】1996(36)7
【摘要】抗癫痫药物的应用及研制山东医科大学（２５００１２）丁华临床应用
抗癫痫药物的目的应是有效地控制发作而又不引起神经精神方面的不良反应。
苯妥英钠、苯巴比妥、丙戊酸钠长期应用都可对患者高级神经中枢的生理功能产生明显影响，表现为精神心理异常，注意力和智力减退，...
【总页数】2页(P40-41)
【作者】丁华
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】R748.05
【相关文献】
1.新型抗癫痫药物—从盲目筛选到定向研制 [J], Port.,RJ;唐向东
2.纳米材料修饰电极在抗癫痫药物检测中的应用 [J], 黄菲;周慧;毛云飞;沈明;金党琴;钱琛
3.抗癫痫一线药物丙戊酸应用分析 [J], 常怡勇
4.抗癫痫药物应用指南Ⅰ——新型抗癫痫药物的药力和耐受性:新发癫痫的治疗 [J], 陆钦池;高枚春
5.体液中多种药物与毒物的快速测定与临床应用研究──Ⅳ．RP－HPLC法同时测定血清中3种抗癫痫药物 [J], 闫小华;李焕德;张松操;刘玉兰;肖克岳
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山东大学药理学研究所
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13
Section 2
The Basic Electrophysilogic Action of Antiarrhythmic Drugs and The Drug Classification
14
1. The basic electrophysilogic action
1)↓automaticity a.↓slop of phase 4 depolarization: ↓Na+in or Ca2+in b.↑Threshold potential c.↑maximum diastolic potential: ↑K+out
心律失常抑制标准：室早减少80%以上，室 速减少90%以上。
入选病人2309例。结果可见1727例心律失常 抑制良好；135例部分抑制；447例室性心律失 常增加，死亡率7.3%，安慰剂组死亡率3.0%。 其中心律失常或心跳骤停者治疗组4.5%，安慰剂 组1.7%。
结果说明英卡胺和氟卡胺虽能较好的抑制MI后
unidirectional block→bidirectional block
K+↓→↑K+ efflux →↑conduction → ↓unidirectional block c. Relative increase ERP: ERP/APD↑
Pharmacokinetics:
Therapeutic use:
Blocking K+ channel , ↓ K+ efflux ↑ repolarization, APD and ERP ↑
37
Amiodarone(胺碘酮)
Pharmacological effects:
国内几种生化药物的研究和应用概况
国内几种生化药物的研究和应用概况
王海峰;孔德新
【期刊名称】《食品与药品》
【年(卷),期】1994(000)006
【摘要】近几年来我国生化药物的研究取得了很大进展。
已生产的生化药物按原料计已从70年代近100个品种发展到近140个品种,载入药典和部颁标准的约占20％,地方标准已从原来的150多个规格增加到300多个规格。
本文就几种重要生化药物的研究和应用作一简介,以供科研同行和生化药厂工作人员参考。
【总页数】2页(P26-28)
【作者】王海峰;孔德新
【作者单位】山东大学生物系生化教研室;山东大学生物系生化教研室济南250100;济南 250100
【正文语种】中文
【中图分类】R977
【相关文献】
1.国内应用几种物理因子镇痛的概况 [J], 毛容秋
2.几种家用防蛀剂的应用及其毒理学研究概况 [J], 曹贵安;张志仁
3.几种生化药物临床应用研究进展 [J], 房德敏
4.几种重要生化药物在国内的临床应用 [J], 张天民;王凤山
5.国内天然植物精油的应用研究概况 [J], 陈卫东; 陈艳丽
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上海交大和山东大学联合发现砒霜影响蛋白通路而致肿瘤细胞凋亡
上海交大和山东大学联合发现砒霜影响蛋白通路而致肿瘤细胞
凋亡
佚名
【期刊名称】《生物学教学》
【年(卷),期】2016(41)5
【摘要】据科学网2015年12月15日报道，上海交大和山大的一项合作研究证实，砒霜（三氧化二砷，As2O3）可以明显抑制肿瘤细胞中糖酵解通路限速酶已糖激酶2（HK2）的活性而影响细胞代谢，最终导致肿瘤细胞的凋亡。
相关研究成果近日在线发表于美国《国家科学院院刊》。
【总页数】1页(P80-80)
【关键词】肿瘤细胞凋亡;上海交大;山东大学;通路;砒霜;蛋白;三氧化二砷;细胞代谢【正文语种】中文
【中图分类】Q279
【相关文献】
1.Ezrin蛋白在肿瘤坏死因子致大鼠肺微血管内皮细胞炎性损伤中表达及Rac 1信号通路的影响 [J], 唐思慧;岳扬;孙耕耘
2.Ezrin蛋白在肿瘤坏死因子致大鼠肺微血管内皮细胞炎性损伤中表达及Rac 1信号通路的影响 [J], 唐思慧;岳扬;孙耕耘;
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4.基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路探讨针刺对超负荷运动致骨骼肌损
伤大鼠氧化应激损伤及骨骼肌细胞凋亡的影响 [J], 刘祥华;罗湘筠;李文倩
5.影响蛋白通路砒霜可抗肿瘤 [J],
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Section 3 Specific Antiarrhythmic Agents
1. ClassⅠ Sodium channelblocking agents
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钠通道阻滞剂的分类
分类 药物 钠阻滞强度 结合/解离常数 心电图表现 状态依赖
→ bidirectional block c.↑ERP
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2.The classification Class by Vaughan Williams （1971）
ClassⅠ Sodium channel-blocking
agents: IA , IB, IC ClassⅡ β-R blockers Class Ⅲ Prolonging APD agents Class Ⅳ Calcium channel blockers
IA 奎尼丁
普鲁卡因胺 ++
1—10秒
延长QT 激活态
IB 利多卡因
美西律
+
<1秒
不明显 失活态
IC 普罗帕酮
氟卡尼
+++
>10秒
QRS增宽 激活态
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1) ClassⅠA
a. Inhibit Na+ influx moderately : ↓Vmax, ↓conduction ↓phase 4 slope, ↓automaticity
1)↓automaticity (autorhythmicity) a.↓slope of phase 4 depolarization: ↓Na+in or Ca2+in b.↑Threshold potential c.↑maximum diastolic potential: ↑K+out D. ↑APD ↓ K+out
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2)↓EAD or DAD:
Accelerate repolarization,
Block Na+ in or Ca2+ in
3) Avoid reentry: a.↑conduction:↓unidirectional block b.↓conduction : unidirectional block
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Therapeutic Uses: Broad-spectrum
Atrial fibrillation; Atrial flutter; Supraventricular and ventricular
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(3) Disturbances in impulse conduction
1) Simple conduction disturbances: conduction ↓ conduction block
2) Reentry (circus movement)
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CHAPTER 25
ANTIARRHYTHMIC DRUGS
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2
Arrhythmia:
Arrhythmias consist of cardiac depolarizations
that deviate from the sinus rhythm--ie, There is an abnormality in the site of origin of the impulse, its rate or regularity , or its conduction .
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Section 2
The Basic Electrophysiology Action of Antiarrhythmic Drugs and The Classification of Drugs
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1. The basic electrophysiology action
(1) Disturbances in impulse formation: Increased automaticity
(2) Afterdepolarization and triggered activity: Early afterdepolarization (EAD) Delayed afterdepolarization (DAD)
b. ↓ K+ efflux , Increase the ERP
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Quinidine(奎尼丁)
Pharmacological Effects: Cardiac Effects:
↓autorhythmicity;↓conduction;↑ERP ↓myocardial contractility Extracardiac Effects: α-adrenergic blocking anticholinergic effect
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3
The types of Arrhythmia:
缓慢型 : 窦性心动过缓 (sinus bradycardia) 房室传导阻滞 (atrio-ventricular block)
快速型 : 房性早搏 (atrial premature contraction) 房性心动过速 (atrial tachycardia,AT) 心房颤动 (atrial fibrillation, AF) 心房扑动 (atrial flutter, AFL) 阵发性室上性心动过速 (paroxysmal supraventricular tachycardia) 室性早搏 (ventricular premature contraction) 室性心动过速 (ventricular tachycardia,VT) 心室颤动 (ventricular fibrillation, VF)
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Section 1
The Physiological Basis of Arrhythmia
1. The electrophysiology of normal 2. cardiac rhythm
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2. The electrophysiological mechanism of arrhythmias