重医细菌学检验复习题

1、实验室生物安全(Laboratory biosafety):实验室的生物安全条件和状态不低于容许水平，可避免实验室人员、来访人员、社区及环境受到不可接受的损害，符合相差法规、标准等对实验室生物安全责任的要求。

2、生物安全防护基本要求

实验室生物安全防护（biosafety protection for laboratories）

实验对象：致病的微生物及其毒素

综合措施：实验室设计建造、个体防护设施、工作及操作程序和规程等

确保：实验室工作人员不受实验对象侵染，周围环境的生物安全。

实验室生物安全通用原则

积极防止操作者在污染的环境中接触生物危害物；

主动封闭生物危害材料产生之源，防止从操作部位向周围环境释放；

尽量减少生物危害材料向周围环境意外释放所造成的后果。

3、实验室必须设有专职的生物安全负责人

实验室负责人为实验室生物安全的第一责任人。

生物安全等级

生物安全防护实验室根据所处理的微生物及其毒素的危害程度分为四级。

实验室生物安全防护要求：一级最低，四级最高。

4、在主实验室合理设置清洁区、半污染区和污染区

5、各级生物防护实验室特点

一级生物安全防护实验室（BSL-1/P1）：适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。

二级生物安全防护实验室（ BSL-2/P2 ）

实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。

在处理危险度2 级或更高危险度级别的微生物时，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志。

三级生物安全防护实验室（BSL-3/P3）：适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，通常已有预防传染的疫苗。

四级生物安全防护实验室（ BSL-4/P4 ）：适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素。

6、控制措施

安全设备和个体防护是实验室工作人员与致病微生物及其毒素直接接触的一级屏障。

所有可能使致病微生物及其毒素溅出或产生气溶胶的操作，都必须在生物安全柜内进行。

7、生物安全柜（BSC）biosafety cabinet(概念、分级及特点)

具备气流控制及高效空气过滤装置的操作柜，可有效降低实验过程中产生的有害气溶胶对操作者和环境的危害。(净化排气)

根据生物安全防护水平的差异，生物安全柜可分为I、Ⅱ、Ⅲ级3种类型。

实验室应按要求分别配备I、Ⅱ、Ⅲ级生物安全柜。

Ⅰ级生物安全柜：外部空气

保证工作人员不受侵害，但不保证实验对象不受污染。

Ⅱ级生物安全柜：经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气

既保证工作人员不受侵害，也保证实验对象不受污染；

Ⅲ级生物安全柜：经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气

8、生物安全柜和超净工作台的区别

超净工作台：保护样品，不保护操作者和环境 生物安全柜：保护操作者、环境以及实验材料

正压、简单 负压、复杂 不能以净化工作台代替生物安全柜，反之则可以。

9.标准的细菌等微生物操作要求

实验室负责人......工作人员洗手、工作区域不允许吃/喝/抽 ......戴护目镜或面罩、食物储存

禁止口吸吸管、减少飞溅物/气溶胶、工作台表面的去污/灭活、废物去污后处理 10、注：高压蒸汽灭菌：负责消毒者不准离开消毒室。

制备培养基..... 无菌操作.、使用酒精灯、灭菌吸管......10倍递增稀释......无菌操作；

三三制：稀释三级，每一稀释度用三个平行平板；取供试液加注于平皿时，供试液须充分混匀。

培养基倾注于平皿：45℃±1℃、整个操作过程应在lh 内完成、无菌检验......

第二章、细菌学检验基本技术

临床样本的采集与送检

1、食品样本采集原则

根据检验目的、食品特点、批量、检验方法、微生物的危害程度等确定采样方案。 随机采样→代表性

无菌操作，防污染。（外源性污染、样本变质和细菌生长） 食物中毒时，采集可疑食物样本。 2、食品样本采集种类 大样、中样、小样。

样本 采样时间

采样方法

注意事项

血骨髓

发病早期、急

性期或

症状典型时

成人10ml ，儿童3～

5ml ；骨髓1～2ml 。

样本切勿冰箱存放；无菌操作； 废弃物高压灭菌。

尿液

晨起

中段尿

防杂菌污染，无菌操作。尽快送检，不得加防腐剂或消毒剂。

粪便 急性期 脓血、黏液的粪便；絮状物；

直肠拭子

无菌采样；新鲜；立即送检 。

痰 上呼吸道样本

晨间

无限制 自然咳痰、支气管镜、 胃内采痰法等； 鼻咽拭子

漱口；

立即送检或4℃保存。

大样：一整批样本。

中样：从样本各部分所取得的混合样本，一般为200g。

小样：分析用，检样，25g。

注：检验结果报告后，剩余样品或同批样品不进行微生物项目的复检

3、细菌的形态结构检查法

借助显微镜，对细菌形态、大小、排列、结构进行直接观察。

在细菌检验中极其重要，是细菌分类和鉴定不可缺少的组成部分。

样本中有无细菌及其大致的数量。

细菌的形态、大小、排列、结构和染色反应性。

培养物是否为纯种。

普通光学显微镜（0.2μm ×1000＝0.2mm）细菌染色样本；弱光下用于不染色样本活菌的运动情况

暗视野显微镜（0.04μm：50倍）不染色样本活菌的形态

相差显微镜：活体细胞的外形和运动方式；细胞内部某些细微结构及这些结构的数量

4、不染色检查：主要用于观察细菌的动力

有鞭毛的细菌为真正运动

无鞭毛的细菌则为布朗运动(即分子运动)

染色检查

细菌染色→显微镜观察。

常用的细菌染料：人工合成带苯环的染料，色基+助色基

单纯染料：苏丹染料

酸性染料：伊红、酸性品红、刚果红等

碱性染料：美蓝、孔雀绿、甲紫和碱性复红等

复合染料：姬姆萨染料、瑞氏染料等

5、单染色法：用一种染料染色，使各种细菌均染成同一颜色。操作简单，易于使用。只能显示细菌的形态及大小。如用美蓝或稀释石炭酸复红等

6、复染色法：用两种以上染料染色细菌，显示细菌形态大小，鉴别细菌种类

鉴别染色法:革兰染色法、抗酸染色法

Grams染色操作步骤：初染、媒染、脱色、复染

抗酸染色法：抗酸菌：分枝杆菌/分枝菌酸。一般不易着色，一旦染上色后又不易被盐酸酒精脱色。

经过加热和延长染色时间来促使抗酸菌着色。

步骤：初染、脱色、复染

7、负染色法：背景着色而细菌本身不着色。

细菌荚膜常用墨汁负染色法配合单染色法(如美蓝)，背景呈黑色，菌体染成蓝色，荚膜不着色，包绕在菌体周围成为一层透明的空圈。

该法具有快速、经济、简便易行、高度反差、分辨率高的特点。

8、培养基的种类－－按物理性状分

液体培养基：增菌、作生化试验等

半固体培养基：观察细菌的动力、分类鉴定、保存菌种及噬菌体效价滴定等。琼脂用量为0.5%～1%

固体培养基：主要用于分离培养；平板、斜面、高层及高层斜面；琼脂用量为1.5%～2%

9、培养基的种类－－按用途分

基础培养基(basic medium)营养培养基(nutrient medium) 增菌培养基(enrichment medium) 选择性培养基(selective medium) 鉴别培养基(differential medium)专用培养基(dedicated medium)

10、增菌培养基：多为液体。↑目的菌，↓杂菌。营养成分＋抑制物质

选择性增菌培养基；非选择性增菌培养基