【CN110124022A】一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗及

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910318204.2(22)申请日 2019.04.19

(83)生物保藏信息

CGMCC NO：13858 2017.05.26CGMCC NO：13335 2016.11.22CGMCC NO：16802 2018.11.09CGMCC NO：13334 2016.11.22CGMCC NO：13333 2016.11.22

(71)申请人 河南省农业科学院畜牧兽医研究所地址 450000 河南省郑州市金水区花园路

116号(72)发明人 徐引弟　王治方　张青娴　朱文豪　

许峰　焦文强　李海利　郎利敏　张立宪　游一　王克领　

(74)专利代理机构 郑州明华专利代理事务所

(普通合伙) 41162

代理人 高丽华(51)Int.Cl.

A61K 39/02(2006.01)A61K 39/102(2006.01)A61K 39/09(2006.01)A61P 31/04(2006.01)C12N 1/20(2006.01)C12R 1/35(2006.01)C12R 1/21(2006.01)C12R 1/46(2006.01)C12R 1/01(2006.01)

(54)发明名称

一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗及其应用(57)摘要

本发明涉及兽用生物制品技术领域，具体涉及一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗，包括灭活的猪肺炎支原体菌株HNMhy1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原、灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP1血清型抗原和免疫佐剂，五种菌株均有良好的免疫原性，可以很好的预防临床猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌、猪链球菌和胸膜肺炎放线杆菌型的感染，安全性好，免疫效果好、免疫期长，同时可以达到一针防多病，

降低成本。

权利要求书2页 说明书18页

序列表8页 附图5页

CN 110124022 A 2019.08.16

C N 110124022

A

权　利　要　求　书1/2页CN 110124022 A

1.一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗，其特征在于：包括灭活的猪肺炎支原体菌株HNMhy1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原、灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP1血清型抗原。

2.根据权利要求1所述的一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗，其特征在于：所述菌株HNMhy1为猪肺炎支原体，于2017年5月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：13858；所述菌株HNHPS1为血清4型副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis），于2016年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：13335；所述菌株HN1570为血清5型副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis），于2018年11月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：16802；所述菌株HNSS1为2型猪链球菌（Streptococcus suis），于2016年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，，保藏编号为CGMCC NO：13334；所述菌株HNAPP1为1型胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacilus pleuropneumoniae）, 于2016年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：13333。

3.根据权利要求1所述的一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗，其特征在于：所述灭活的猪肺炎支原体菌株HNMhy1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原和灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP1血清型抗原的比例为1∶1∶1∶1∶1。

4.一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

增殖：将猪肺炎支原体HNMhy1株、副猪嗜血杆菌4型HNHPS1株、副猪嗜血杆菌5型HN1570株、猪链球菌2型HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌1型HNAPP1株分别繁殖培养，获得猪肺炎支原体HNMhy1株、副猪嗜血杆菌HNHPS1株、副猪嗜血杆菌HN1570株、猪链球菌HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌HNAPP1株菌液，并分别进行活菌计数；

灭活：分别向步骤a中获得的猪肺炎支原体HNMhy1株、副猪嗜血杆菌HNHPS1株、副猪嗜血杆菌HN1570株、猪链球菌HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌HNAPP1株菌液中按照菌液体积的0.2%加入甲醛溶液，于37℃灭活24h；

浓缩：使用超滤装置分别浓缩灭活后检验合格的猪肺炎支原体HNMhy1株、副猪嗜血杆菌HNHPS1株、副猪嗜血杆菌HN1570株、猪链球菌HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌HNAPP1株菌液，根据灭活前的活菌计数，用无菌生理盐水调整浓缩终浓度为1.0×1010 CFU/mL；

制备疫苗：

（1）油相的制备：按体积比取注射用白油92份加入油相罐内，向罐内加入硬脂酸铝1份，边加边搅拌直至完全透明，再加入司本-80 6份，116℃高压灭菌40min，冷却至室温后再加入维生素A和维生素E各0.5份，混合均匀使维生素A和维生素E的浓度均为300IU/Ml，得到油相备用；

（2）水相的制备：将浓缩后获得的猪肺炎支原体HNMhy1株、副猪嗜血杆菌HNHPS1株、HN1570株、猪链球菌HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌HNAPP1株抗原液，按照1∶1∶1∶1∶1的比例

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