血清铁浓度检测试剂盒说明书 可见分光光度法
分光光度法测定铁的含量
实验二十二分光光度法测定铁的含量时λmax的选择【目的要求】1．学习分光光度法原理及722分光光度计的使用方法。
2．掌握分光光度法测定有色物质时最大吸收波长的选择方法。
【基本原理】凡是被测组分本身具有颜色，或被测组分本身无色，但与适当的显色剂作用后能生成有色物质者，都可用分光光度法进行测定。
物质对单色光的吸收遵守光吸收定律──朗伯-比尔定律：AK c l式中，A为吸光度；K为吸光系数；c为溶液浓度；l为溶液厚度。
物质对单色光的吸收因波长的不同而异，在某一波长处出现吸收最大值，某一波长处出现吸收最小值。
因此用各种波长的光依次分别通过某种有色溶液时，测定吸收值，然后以吸收值为纵坐标，波长为横坐标作图，即得吸收曲线，由吸收曲线找出最大吸收波长λmax。
物质在最大吸收波长处进行测定时，分析的灵敏度最高。
当pH为4～8时，Fe3+和磺基水杨酸生成橙红色配合物。
【仪器和药品】10ml容量瓶，722型分光光度计，1ml吸量管，KJ型可调连续加液管，pH=4.7的缓冲溶液，擦镜纸，0.1mg·ml-1标准Fe3+溶液，0.2mol·L-1HNO3，0.25mol·L-1磺基水杨酸。
【实验步骤】1．用10ml容量瓶4个，编号后按表配制标准溶液。
2．在不同波长处测定溶液的吸光度将上述配好的溶液摇匀后，在722分光光度计上测定。
以1号溶液为空白，在波长400～600nm 范围内，每隔10nm测定１次2号溶液的吸光度，测定过程中，每变换一波长，都应调整零点及百分透光率（100％）。
记录各波长处溶液的吸光度（A），然后以吸光度为纵坐标、波长为横坐标绘制吸收曲线，从而选择出磺基水杨酸测定Fe3+的最大吸收波长。
3，4号溶液同法测定。
【问题讨论】为什么每次变动波长都应重新调节零点及百分透光度？【附注】1．0.25mol·L-1磺基水杨酸的配制称取54g磺基水杨酸溶于500ml蒸馏水中，加入100m1 10mol·L-1的氨水50～60m1，并用蒸馏水稀释至1000ml即得。
实验报告-紫外-可见分光光度法测铁的含量-
一、实验目的：
了解朗伯-比尔定律的应用，掌握邻二氮菲法测定铁的原理；了解分光光度计的构造；掌握分光光度计的正确使用方法；学会吸收曲线的绘制和样品的测定原理。
二、实验原理
邻菲啰啉是测定微量铁的较好试剂。
在pH＝2～9 的条件下，邻菲啰啉与Fe2+生成稳定的橙红色配合物，其反应式如下：
Fe3+能与领二氮菲生成淡蓝色配合物（不稳定），故显色前加入还原剂：盐酸羟胺使其还原为Fe2+。
三、仪器及试剂
紫外可见分光光度计、铁标准溶液：含铁0.01mg/mL、0.1%邻菲罗啉水溶液、10%盐酸羟胺水溶液、1mol/lNaAc缓冲溶液（pH4.6）。
四、实验步骤
1．吸收曲线的绘制和测量波长的选择
吸取0.0mL和6.0mL 铁标准溶液分别注入两个50 mL容量瓶中，依次加入5mlNaAc溶液，2.5ml盐酸羟胺溶液，5ml邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
用1cm比色皿，以试剂空白为参比，在440~560nm之间，每隔0.5nm测吸光度。
然后以波长为横坐标，吸光度A 为纵坐标，绘制吸收曲线，找出最大吸收波长。
2、标准曲线的绘制
分别吸取铁的标准溶液0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml于6只50ml容量瓶中，依次分别加入5ml醋酸－醋酸钠缓冲溶液，2.5ml盐酸羟胺溶液，5ml邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10分钟，在其最大吸收波长下，用1cm比色皿，以试剂溶液为空白，测定各溶液的吸光度，以铁含量(mg/50ml)为横坐标，溶液相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
五、实验记录及数据处理
（1）绘制曲线图。
（2）。
血清铁浓度检测试剂盒说明书
货号：MS2802 规格：100管/96样血清铁浓度检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：血清铁是指血液中转铁蛋白所结合的铁，该指标常用于鉴别缺铁性与非缺铁性贫血。
测定原理：亚硫酸钠还原血清Fe3+生成成Fe2+，Fe2+进一步与2, 2’- 联吡啶显色，在520nm处有吸收峰，测定该波长光吸收值即可计算血清铁含量。
自备实验用品及仪器：离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、冰醋酸、氯仿和蒸馏水。
试剂组成和配置：试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存。
临用前配制，加入15mL蒸馏水充分溶解。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。
临用前配制，加入469μL冰醋酸，加入15mL蒸馏水充分溶解。
标准液：液体×1 支（EP管），100μmol/L Fe3+标准液，4℃保存。
测定：1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到520nm，蒸馏水调零。
2. 标准液解冻：提前取出标准液，置于室温下充分解冻后混匀。
3. 空白管：取EP管，依次加入125μL蒸馏水，125μL试剂一，125μL试剂二，混匀后盖紧，置于沸水浴5min，自来水冷却。
加入62μL氯仿（自备），充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液210μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520nm 测定吸光度，记为A空白管。
4. 标准管：取EP管，依次加入125μL标准液，125μL试剂一，125μL试剂二，混匀后盖紧，置于沸水浴5min，自来水冷却。
加入62μL氯仿，充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液210μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520nm测定吸光度，记为A标准管。
5. 测定管：取EP管，依次加入125μL血清，125μL试剂一，125μL试剂二，混匀后盖紧，置于沸水浴5min，自来水冷却。
血清总铁结合力(Total Iron Binding Capacity,TIBC)试剂盒说明书
货号：MS2811 规格：100管/96样血清总铁结合力(Total Iron Binding Capacity，TIBC)试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：血清总铁结合能力指血清转铁蛋白可结合铁的能力，其含量高低与缺铁性贫血、急性肝炎等疾病的发生密切相关。
测定原理：Fe2+与菲洛嗪反应形成紫红色化合物，在562nm处有特征吸收峰。
碱性条件下，血清转铁蛋白可以与Fe3+结合，剩余未结合的Fe3+可以被还原成Fe2+，此时吸光度A1与未结合Fe3+数量正相关；酸化后，转铁蛋白结合的Fe3+释放，并且进一步被还原 Fe2+，此时吸光度A2与总Fe3+数量正相关。
A2减A1与TIBC浓度呈正比。
自备实验用品及仪器：天平、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
（临用前根据用量将A液和B液按1:1混合）试剂四：液体 7mL×1 瓶，4℃保存。
测定操作表：1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至562nm。
血清总铁结合力计算公式：总铁结合能力定义：37℃条件下，每升血清结合Fe3+的μmol数。
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线：y=0.5478x+0.0281，R2=0.9981总铁结合能力TIBC（μmol/L）=（ΔA-0.0281）÷0.5478×V反总÷V样=20.99×（ΔA-0.0281）b. 用 96 孔板测定的计算公式如下第1页，共2页标准曲线：y=0.2739x+0.0281，R2=0.9981总铁结合能力TIBC（μmol/L）=（ΔA-0.0281）÷0.2739×V反总÷V样=41.98×（ΔA-0.0281）V 反总：反应总体积，0.46mL；V 样：反应中样本体积，0.04mL注意事项：1. 吸光值大于0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
Fe说明书
铁（Fe）测定试剂盒（亚铁嗪比色法）使用说明书【产品名称】通用名称：铁（Fe）测定试剂盒（亚铁嗪比色法）商品名称：英文名称：Reagent Kit for Iron (Fe) Test (Ferrozine Colorimetry) 【包装规格】SI7967 R1 7 × 50 ml R2 2 × 42 mlSI7753 R1 2 × 64 ml R2 2 × 16 mlSI7754 R1 8 × 60 ml R2 2 × 60 mlSI7553 R1 4 × 50 ml R2 1 × 50 mlSI7554 R1 6 × 100 ml R2 2 × 60 mlSI7253 R1 3 × 20 ml R2 3 × 5 mlSI7254 R1 4 × 50 ml R2 2 × 20 mlSI5054 R1 2 × 100 ml R2 2 × 20 mlSI0054 R1 4 × 100 ml R2 1 × 100 mlSI0001 R1 1 × 64 ml R2 1 × 16 ml朗道校准血清CAL2350 1 × 5ml【预期用途】本试剂盒用于检测人体样本中铁离子的含量，临床上主要用于贫血的辅助诊断。
【检验原理】血清样本中与转铁蛋白结合的铁，在酸性介质中从转铁蛋白中解离出来，再被还原剂抗坏血酸等还原为二价铁，后者与亚铁嗪络合成紫红色复合物，在562nm处该复合物有特定吸收峰，其吸光度与血【主要组成成分】氯化胍 4.5mol/L硫脲100mmol/L R2：亚铁嗪 1.7mmol/L 抗坏血酸40mmol/L不同批号试剂盒各组分不能互换。
【储存条件及有效期】未开封的试剂2~8℃密闭避光保存（勿冷冻），有效期为18个月。
血清铁测定试剂盒说明书50T
本试剂盒仅用于科研、实验室血清铁测定试剂盒说明书50T一、原理：在酸性溶液和还原剂的作用下，使运铁蛋白中铁与蛋白分离，使血清中的高铁还原成亚铁，后者与双吡啶结合成粉红色的络合物，在一定范围内，铁离子的多少与色泽成正比。
二、试剂的组成与配制：1、100mg/L铁标准贮备液：1ml 溶液一瓶，4℃保存3个月。
2mg/L铁标准应用液的配制：取铁标准贮备液0.2ml加蒸馏水定溶至10ml, 4℃保存。
2、铁显色剂：2号甲粉剂一支，2号乙粉剂一支，二号丙液100ml×1瓶，4℃保存6个月。
用时将甲、乙二粉剂倒入丙液中，充分混匀，溶解，即为铁显色剂，4℃避光保存。
2mg/L铁标准应用液(ml)0.5血清(ml) 0.5 铁显色剂（ml） 1.51.51.5混匀后，沸水浴5分钟，（空白及标准管可以不煮），冷却后离心，3500转/分，离心10分钟，取上清液1.0ml,0.5cm光径，波长520nm,双蒸水调零，测各管吸光度OD值。
四、计算与举例：1、计算公式：血清铁（mg/L）=空白管吸光度标准管吸光度空白管吸光度测定管吸光度??×标准浓度（2mg/L）血清铁（umol/L）=空白管吸光度标准管吸光度空白管吸光度测定管吸光度??×标准浓度(35.81umol/L)*标准管铁含量为2000ug/L,铁原子量为55.847，所以标准管铁含量为35.81umol/L 2、举例：取血浆0.5ml按操作表进行血清（浆）铁测定，在520nm处，0.5cm光径，测定各管吸光度为：空白管0.000，标准管0.038，测定管0.037，则计算如下：血清铁(umol/L)=空白管吸光度标准管吸光度空白管吸光度测定管吸光度??×标准液浓度=0038.00037.0??×35.81=34.87（umol/L）五、注意点：1、玻璃器材需严格清洗，避免铁的污染，建议最好用一次性塑料试管。
2、若上清浑浊，可再用另一试管再次离心后比色。
铁含量亚铁嗪比色法检测试剂盒说明书分光法48样
铁含量（亚铁嗪比色法）检测试剂盒说明书（分光法48样）一、产品简介：在酸性介质中铁从复合物中解离出来，再被还原剂还原成二价铁，并与亚铁嗪生成紫红色化合物，该有色物质在562nm处有特征吸收峰，进而计算得出铁含量。
适用于检测组织、血清等样品中的铁含量。
二、试剂盒组分与配制：二、所需仪器和用品：可见分光光度计、Im1.玻璃比色皿（光径ICm）、可调式移液器、离心机、蒸储水。
四、铁含量检测：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！Iv样本制备：①组织样本：取约0.1g组织，加入Im1.提取液，进行冰浴匀浆。
4o C×12000rpm离心5min,取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积（m1.）为1：5~10的比例进行提取。
②细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入Im1.提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W,超声3s,间隔IOs,重复30次）；1200OrPm4℃离心Iomin,取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌，’细胞数量（104）：提取液（m1.）为500~1000:1的比例进行提取。
③液体样本：澄清的液体可直接检测；若浑浊则离心后取上清液检测。
2、上机检测：①可见分光光度计预热30min,设定波长到562nm,蒸储水调零。
②所有试剂解冻至室温，在EP管中依次加入：试剂二I40I40 40充分混匀，置室温15min后，若浑浊则需30（X）rpm离心5min后取全部上清液至Im1.玻璃比色皿（光径1cm）中，于波长562nm处读取各管吸光度A。
五、结果计算：1、按照组织质量计算：铁含量（μg∕g）=（C标准XVI）X（A测定-A空白）÷（A标准-A空白）÷（VI÷VxW）=2×（A测定-A空白）÷（A标准-A空白）÷W铁含量（nmo1.∕g）=（C标准XV1.）X（A测定-A空白）:（A标准-A空白）÷（VI:VXW）XI （P÷Mr=35.8IX（A测定-A空白）+（A标准-A空白）÷W2、按细胞数量计算：铁含量（μg∕104ce1.1.）=（C标准XVI）X（A测定・A空白）:（A标准・A空白H（VI÷Vx细胞数量）=2×（A测定-A空白H（A标准-A空白）4•细胞数量铁含量（nmo1./IO,ce1.1.）=（C标准XVI）X（A测定・A空白）÷∙（A标准-A空白）÷（VWVx 细胞数量）×103÷Mr=35.81×（A测定・A空白H（A标准・A空白）♦细胞数量3、按照液体体积计算：铁含量（μg∕m1.）=（C标准XVI）X（A测定・A空白）÷（A标准・A空白）÷V1=2×（A测定-A空白）÷∙（A标准・A空白）铁含量（μmo1.∕1.）=（C标准XVI）X（A测定-A空白片（A标准-A空白HV1.X1.O3.Mr=35.81×（A测定・A空白H（A标准・A空白）C标准…铁标品浓度，2μg∕m1.; V1.…加入样本体积，0.24m1.：Vi提取液体积，1m1.：W一样本取样质量，g；Mr―铁分子量，55.847o。
邻菲罗啉紫外可见分光光度法测定铁含量（详细）
邻菲罗啉紫外可见分光光度法测定铁含量一、仪器1．紫外可见分光光度计(UV-1800PC-DS)；配1cm石英比色皿2个（比色皿可以自带）；2．容量瓶：100mL1个；50mL11个；3．吸量管：5mL2支；10mL3支；二、试剂1．标准储备溶液：200μg·mL-1铁标准储备溶液。
2．未知液：未知浓度的铁标准溶液。
20μg·mL-13．其他：100g·L-1盐酸羟胺溶液、1g·L-1邻菲罗啉溶液、pH=4.5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液。
三、实验操作1．吸收池配套性检查玻璃吸收池在600nm装蒸馏水，以一个吸收池为参比，调节τ为100%，测定其余吸收池的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，记录其余比色皿的吸光度值作为校正值。
2．标准使用溶液的制备用10mL吸量管移取200 ug/mL 铁的标准储备溶液10.00 mL 于100 mL 容量瓶中，配制成20 ug/mL浓度的标准使用溶液。
3．绘制吸收曲线选择测量波长⑴用10mL吸量管移取20 ug/mL 铁的标准溶液5.00 mL 于50 mL 容量瓶中，⑵用5mL吸量管依次加入然后加入5mL100g·L-1盐酸羟胺溶液，摇匀。
放置2min后，⑶用5mL吸量管加入5mL1g·L-1邻菲罗啉溶液，⑷用10mL吸量管加入10mLpH=4.5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液，⑸用蒸馏水稀释至刻度线摇匀。
⑹用1cm吸收池，以试剂空白为参比，在400~600nm间扫描其吸收曲线，并根据吸收曲线的吸光度确定最大吸收波长。
4．标准工作曲线的绘制⑴取50 mL容量瓶6只，分别移取（务必准确移取）20 ug/mL铁标准溶液2.0 mL，4.0 mL，6. 0mL ，8.0 mL ，10.0 mL于5只容量瓶中，不加铁标准溶液醅空白液作参比，⑵各加5ml盐酸羟胺溶液，摇匀经二分钟后，再各加10ml NaAc溶液及5ml 邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度线,充分摇匀,待测定。
血清铁检测试剂盒(亚铁嗪比色法)
铁检测试剂盒(亚铁嗪比色法)简介：铁是人体必需微量元素，总含量约为3270mg 。
铁分布较广，有67.6%的铁作为血红蛋白分子的辅基分布于血红蛋白中，参与铁的运输。
Leagene 铁检测试剂盒(亚铁嗪比色法)再被还原剂还原为Fe 2+，后者与亚铁嗪生成紫红色化合物，通过分光光度计检测562nm 处吸光度值，适用于检测血清、血浆、组织等样品中的铁含量。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 (选做)制备样品：① 浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于Fe 的检测。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于Fe 的检测。
高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的Fe ，可以使用ddH 2O 稀释，不宜使用普通蒸馏水稀释。
④(选做)样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计 算单位蛋白重量组织或细胞内的Fe 含量。
2、 制备铁标准工作液。
配制好以后，4℃避光保存3个月有效。
3、 Fe 检测：选用经稀盐酸处理及去离子水清洁的干燥试管或者一次性无菌聚乙烯离心管，按下表操作。
编号 名称TC1016 50T Storage试剂(A): 铁标准(100μg/ml) 1ml 4℃ 避光 试剂(C): Fe Assay buffer 60ml 4℃ 试剂(D): 亚铁嗪显色液 3ml 4℃ 避光 试剂(E): ddH 2O 10mlRT 使用说明书1份加入物 空白管 标准管 测定管 ddH 2O/ml 0.45 — — 铁标准(2μg/ml)/ml — 0.45 — 待测样品/ml——0.45Fe Assay buffer/ml 1.2 1.2 1.2混匀，于562nm处，以空白管调零，读取测定管吸光度(即血清空白)。
亚铁嗪显色液/ml 0.05 0.05 0.054、混匀，室温静置，分光光度计562nm处检测，以空白管调零，比色杯光径0.5cm，再次读取各管吸光度，1h内比色完毕。
血清总铁结合力
货号: QS2811 规格：50管/48样血清总铁结合力(Total Iron Binding Capacity，TIBC)试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：血清总铁结合能力指血清转铁蛋白可结合铁的能力，其含量高低与缺铁性贫血、急性肝炎等疾病的发生密切相关。
测定原理：Fe2+与菲洛嗪反应形成紫红色化合物，在562nm处有特征吸收峰。
碱性条件下，血清转铁蛋白可以与Fe3+结合，剩余未结合的Fe3+可以被还原成Fe2+，此时吸光度A1与未结合Fe3+数量正相关；酸化后，转铁蛋白结合的Fe3+释放，并且进一步被还原成Fe2+，此时吸光度A2与总Fe3+数量正相关。
A2减A1与TIBC浓度呈正比。
自备实验用品及仪器：天平、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
（临用前根据用量将A液和B液按1:1混合）试剂四：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
血清总铁结合力计算公式：标准曲线：y=0.5478x+0.0281，R2=0.9981总铁结合能力定义：37℃条件下，每升血清结合 Fe3+的μmol数。
总铁结合能力 TIBC（μmol/L）=（△A-0.0281）÷0.5478×V 反总÷V 样= 23.731×(A-0.0281) V 反总：反应总体积，1.3mL；V 样：反应中样本体积，0.1mL第1页，共2页注意事项：1. 吸光值大于0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
2. 试剂二、试剂三有一定的毒性，操作时请做好防护措施。
3. 检测限为4.78μmol/L。
第2页，共2页。
分光光度法测定铁的含量实验报告
分光光度法测定铁的含量实验报告一、实验目的1、掌握分光光度法测定铁含量的基本原理和方法。
2、学会使用分光光度计进行定量分析。
3、熟悉标准曲线的绘制和应用。
二、实验原理分光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法。
在分光光度法中，通常选择一定波长的单色光通过含有被测物质的溶液，测量溶液对该波长光的吸光度，从而确定物质的含量。
本实验中，利用邻二氮菲与二价铁离子在 pH 为 2~9 的条件下形成稳定的橙红色配合物，该配合物在 510nm 处有最大吸收峰。
通过测定不同浓度的铁标准溶液在 510nm 处的吸光度，绘制标准曲线，然后测定未知溶液的吸光度，根据标准曲线计算出未知溶液中铁的含量。
三、实验仪器与试剂1、仪器722 型分光光度计容量瓶（50mL、100mL）移液管（1mL、2mL、5mL、10mL）吸量管（5mL、10mL）比色皿烧杯（50mL、100mL）玻璃棒电子天平2、试剂硫酸亚铁铵（NH₄）₂Fe(SO₄)₂·6H₂O邻二氮菲（15g/L）盐酸羟胺（100g/L）1mol/L 盐酸溶液1mol/L 氢氧化钠溶液四、实验步骤1、标准溶液的配制准确称取 03474g 硫酸亚铁铵（NH₄）₂Fe(SO₄)₂·6H₂O于小烧杯中，用 10mL 1mol/L 盐酸溶液溶解，转移至 100mL 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，得到浓度为 01000mg/mL 的铁标准储备液。
用移液管分别吸取 000mL、200mL、400mL、600mL、800mL、1000mL 铁标准储备液于 50mL 容量瓶中，各加入 1mL 100g/L 盐酸羟胺溶液，摇匀，放置 2min 后，再加入 2mL 15g/L 邻二氮菲溶液和 5mL 1mol/L 氢氧化钠溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，得到浓度分别为000μg/mL、400μg/mL、800μg/mL、1200μg/mL、1600μg/mL、2000μg/mL 的铁标准系列溶液。
【精品】铁的测定分光光度法
【精品】铁的测定-分光光度法分光光度法是一种常用的金属测定方法，具有精度高、操作简便、快速等优点。
以下是测定铁的步骤：一、目的本方法的目的是通过分光光度法测定样品中的铁含量，以便了解样品的化学性质和成分，为进一步的分析和研究提供依据。
二、原理分光光度法是一种基于物质对光吸收的定量分析方法。
在特定波长下，铁离子与显色剂反应生成有色物质，该有色物质在特定波长下的吸光度与铁离子的浓度成正比。
通过测量吸光度，可以确定样品中铁离子的含量。
本方法采用1,10-邻二氮杂菲作为显色剂，其在弱酸条件下与铁离子反应生成橙红色的络合物。
三、试剂和材料1.1,10-邻二氮杂菲：1g/L乙醇溶液。
2.盐酸：1mol/L溶液。
3.铁标准溶液：准确称取0.1000g纯铁，加入2mL盐酸，溶解后，用水定容到100mL，得到100mg/mL的铁标准溶液。
4.磷酸：5mol/L溶液。
5.醋酸铵：50g/L溶液。
6.氢氧化钠：20g/L溶液。
7.盐酸：2mol/L溶液。
8.盐酸：0.5mol/L溶液。
9.氨水：2mol/L溶液。
10.磷酸：2mol/L溶液。
四、操作步骤1.制备标准曲线：取6支比色管，分别加入0mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL的铁标准溶液，加入适量水，然后加入1,10-邻二氮杂菲溶液和盐酸溶液各2mL，混匀后加入醋酸铵溶液5mL和氢氧化钠溶液3mL，再加入磷酸溶液5mL，混匀后在室温下放置30min后，用1cm比色皿在波长510nm处测定吸光度，绘制标准曲线。
2.样品处理：准确称取0.5g样品，加入适量水溶解，然后加入氢氧化钠溶液3mL，使样品完全沉淀并过滤，将滤液收集在比色管中。
加入1,10-邻二氮杂菲溶液和盐酸溶液各2mL，混匀后加入醋酸铵溶液5mL和磷酸溶液5mL，混匀后在室温下放置30min后，用1cm比色皿在波长510nm处测定吸光度。
3.数据处理：从标准曲线中查得样品中铁离子的浓度（mg/mL），再根据样品的质量计算出样品中铁的含量（mg/g）。
分光光度法测铁含量
分光光度法测铁含量
分光光度法是一种常用于测定溶液中物质含量的方法，适用于测定铁元素的含量。
测定铁含量的步骤如下：
1. 准备样品：将待测溶液准备好，确保其浓度在分光光度法所能检测范围内。
如果浓度过高，则需要进行稀释操作；如果浓度过低，则可能需要进行富集或者预处理。
2. 校准仪器：使用已知浓度的铁标准溶液进行仪器校准。
通过测定一系列不同浓度的标准溶液的吸光度并绘制标准曲线，可以建立浓度与吸光度之间的关系。
3. 测定样品：将样品放入分光光度计中，选择合适的波长进行测定。
在选定波长下，测量样品吸光度，并记录下来。
4. 计算结果：利用标准曲线，根据测得的样品吸光度值，推算出对应的铁离子浓度。
根据样品的体积和稀释倍数，可以计算出样品中的铁含量。
需要注意的是，在进行分光光度法测定时，应当控制好实验条件，确
保仪器的可靠性和准确性。
此外，样品的处理和预处理也是非常关键的步骤，需要根据具体情况进行适当的操作，以保证测量结果的准确性。
铁测定试剂盒(5-Br-PADAP显色剂法)产品技术要求北检·新创源
铁测定试剂盒（5-Br-PADAP显色剂法）适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中铁的含量。
1.1规格具体产品规格见下表:1.2组成成分试剂1：醋酸-醋酸钠≥50mmol/L试剂2：5-Br-PADAP ≥0.01%2.1 外观2.1.1 外包装完整无破损；2.1.2 试剂1：无色或橙黄色澄清透明液体；2.1.3 试剂2：橙红色澄清透明液体。
2.2 净含量净含量不低于标示值。
2.3 试剂空白吸光度在主波长546nm、副波长700nm、37℃条件下, 试剂空白吸光度不大于0.8。
2.4 线性2.4.1 线性范围[1.3，90.0]μmol/L，相关系数r＞0.990。
2.4.2 线性偏差（10.0，90.0]μmol/L线性范围内，相对偏差不超过±10%；[1.3，10.0]μmol/L线性范围内，绝对偏差不超过±1μmol/L。
2.5 分析灵敏度检测浓度为38.3μmol/L的样本时，吸光度变化不小于0.08。
2.6 重复性测试（6.0±2.0）μmol/L、（20.0±5.0）μmol/L和（35.0±5.0）μmol/L的血清样本或质控样本，重复测试20次，CV≤8%。
2.7 批间差用三个不同批号的试剂测试（20.0±5.0）μmol/L的同一样本，重复测试3次，相对极差R≤8%。
2.8 准确度测定GBW09152标准物质，测定结果不超过标示值的±10%。
2.9 稳定性原包装试剂2～8℃避光储存，有效期12个月。
取到效期后两个月内产品进行检测，检测结果应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6和2.8的要求。
紫外可见分光光度法-测量溶液中全铁的含量.
已知标准样品浓度值方式（C）和已知标准样品
斜率方式（F）。（4）用波长选择旋钮设置您所
需要的分析波长
三、实验步骤 （5）将参比样品溶液和被测样品溶液分别倒入比
色皿中，将比色皿放入相应的槽位中。（6）将黑
体置入光路中，在T方式下按“0%T”键，此时显 示器显示“000.0”。（7）将参比样品拉入光路中， 按“0A/100%T”键调0A/100%T，此时显示器显 示“BLA”直至显示100.0%T或0.000A为止。（8）
三、实验步骤
4、标准曲线绘制 在最佳吸收波长条件下，用1cm吸收池，以空白 （1号）溶液为参比，分别测定2~6号容量瓶中的 标准溶液的A，以铁含量为横坐标，A为纵坐标绘
制标准曲线
三、实验步骤 5、试样中铁含量测定 准确吸取25.00ml待测水样于50ml容量瓶中然后 再分别加入1.00ml盐酸羟胺，2.00ml邻二氮菲，
当仪器显示出100.0%T或0.000A后，使测量模式
为吸光度条件下，将被测样品拉入光路，此时显 示器显示的是被测样品的吸光度。
三、实验步骤 2、显色标准溶液配制 用吸量管吸取0.00，0.50，1.00，1.50，2.00， 2.50ml铁标准溶液（10-3mol/L），分别置于6个
50ml容量瓶中，然后再分别加入1.00ml盐酸羟胺，
邻二氮菲与二价的铁离子在PH2.0～9.0溶液中
形成橙红色配合物。三价铁离子与邻二氮菲作
用形成蓝色配合物，稳定性较差，因此实际应
用中常加入还原剂使三价铁离子还原为二价铁 离子，与显色剂邻二氮菲作用。常用盐酸羟胺 作还原剂，测解。本实验采 用PH5.0～6.0的醋酸－醋酸钠缓冲溶液，可使 显色反应进行完全。
入射光 I0
透射光 It
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血清铁浓度检测试剂盒说明书可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC1730
规格：50T/48S
产品内容：
试剂一：粉剂×2瓶，4℃保存。
临用前配制，每瓶各加入10mL蒸馏水充分溶解。
试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存。
临用前配制，每瓶各加入313μL冰醋酸，加入10mL蒸馏水充分溶解。
标准液：液体3mL×1瓶，1000μmol/L Fe3+标准液，4℃保存。
临用前用蒸馏水稀释8倍即125μmol/L 的标准溶液进行实验。
产品说明：
血清铁是指血液中转铁蛋白所结合的铁，该指标常用于鉴别缺铁性与非缺铁性贫血。
亚硫酸钠还原血清Fe3+生成成Fe2+，Fe2+进一步与2,2’-联吡啶显色，在520nm处有吸收峰，测定该波长光吸收值即可计算血清铁含量。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、离心机、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、冰醋酸、氯仿和蒸馏水。
操作步骤：
1.分光光度计预热30min以上，调节波长到520nm，蒸馏水调零。
2.标准液：提前取出标准液用蒸馏水稀释8倍即125μmol/L。
3.操作表：
加入试剂（μL）空白管测定管标准管蒸馏水400--125μmol/mL标准液--400血清（浆）-400-试剂一400400400
试剂二400400400混匀后盖紧，置于沸水浴5min，自来水冷却；加入200μL氯仿（自备），充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液700μL，加入1mL玻璃比色皿，于520nm立即测定吸光度，分别记为A空白管，A测定管，A标准管。
血清铁浓度计算：
血清铁含量(μmol/L)=[C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)] =125×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管) C标准液：125μmol/L Fe3+标准液。
注意事项：
1、血清铁含量少，所用器皿（EP管）需要注意，避免被铁污染。
2、试剂一和试剂二溶液不稳定，需现配现用，新配制的试剂只能当天使用。
3、当A测定管－A空白管大于0.5时，建议将血清（浆）用蒸馏水稀释后测定。