猪口蹄疫抗体检测卡说明书(完整版)
猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒
猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒上架时间:2014-09-10 浏览次数:448猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒使用说明书【兽用名称】通用名猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒英文名ELISA Kit to Detect Antibody against FMD virus汉语拼音Zhu O xing Kou ti yi bing du ELISA kang ti jian ce shi ji he【原理】本试剂盒是采用猪O型口蹄疫病毒VP1基因工程表达产物包被微孔板，在试验中，加入稀释的对照血清和待检血清，经温育后，若样品中含有猪口蹄疫病毒VP1的特异性抗体，则将与包被板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与包被板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，加入HF溶液终止反应后，用酶标仪630nm 波长测定各反应孔中的OD值。
【作用与用途】用于检测猪血清中O型口蹄疫病毒抗体，适用于猪场口蹄疫病毒疫苗免疫状况的评价以及感染猪的血清学诊断。
【主要成分与含量】（1）抗原包被板2板（96孔/板）（2）阴性对照血清（蓝色盖子）1管（1ml/管）（3）阳性对照血清（红色盖子）1管（1ml/管）（4）羊抗猪酶标二抗（蓝色盖子）1瓶（20ml/瓶）（5）样品稀释液（黄色盖子） 1 瓶（50ml/瓶）（6）底物液A（红色盖子） 1 瓶（10ml/瓶）（7）底物液B（黑色盖子） 1 瓶（10ml/瓶）（8）终止液（蓝色盖子） 1 瓶（10ml/瓶）（9）20倍浓缩洗涤液（白色盖子）1瓶（30ml/瓶）（10）血清稀释板2板（96孔/板）（11）说明书1份【样品制备】取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。
【洗涤液配制】使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解（最好在37℃水中加热5~10分钟），然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释（例如：每板用20ml浓缩液加上380ml水），稀释好的洗涤液在2~8℃可以存放7天。
猪O型口蹄疫抗体水平检测与分析
猪场兽医VETERINARY猪O型口蹄疫抗体水平检测与分析刘 鸽，于会举，张培生，张 倩，宋 敏，杨慧敏，吴圆圆，屈勇刚*(石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003)口蹄疫（food and mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性和高度接触性的偶蹄动物传染病[1-5]，被国际兽医局（OIE)列为必须上报的动物疫病，被我国列为一类动物传染病[6-8]。
FMD属于小RNA病毒科口蹄疫病毒属，包括7个血清型（A、O、C、SATI、 SATⅡ、SATⅢ和亚洲I型，其中O型口蹄疫是世界上流行最广的一种血清型）和80多个血清亚型，并且各血清型之间无交叉免疫现象[9]。
1514年，FMD被首次报道，现已在全球蔓延，并严重威胁畜牧业的健康发展，给畜牧业造成巨大损失[10-13]。
在应对FMD方面，我国采取疫苗免疫接种和扑杀的综合防治措施，效果明显[14-16]。
近些年，我国强制免疫中广泛使用猪口蹄疫O型灭活疫苗和猪口蹄疫O型合成肽疫苗。
2015年下半年至今，猪肉价格较高，激发了养猪单位中畜牧工作者的工作积极性，极大地促进了养猪事业的发展。
为了解2014年1月—2016年9月北疆地区口蹄疫（FMD)的免疫抗体水平，本试验选择克拉玛依、沙湾、石河子、玛纳斯、奇台5个不同区域的19个规模化猪场进行猪O型口蹄疫ELISA抗体水平检测并做出初步分析，在一定程度上可为北疆地区口蹄疫防疫工作提供一定的参考。
1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 样品来源2014年1月至2016年9月采自新疆北疆地区的克拉玛依、沙湾、石河子、玛纳斯、奇台5个不同区域的19个规模化猪场不同类型猪群（0～10 d、11～ 20 d、21～30 d仔猪，后备母猪，经产母猪，种公猪），共采集血样980份。
1.1.2 材料和仪器猪O型口蹄疫病毒 ELISA 抗体检测试剂盒（武汉科前生物）、自动酶标仪（美国 Bio Tek 仪器有限公司）、一次性5 mL兽用采血器、微量移液器（Eppendorf公司）、若干个移液枪头（已高压灭菌）、恒温培养箱（光明医疗仪器厂）、平板震荡仪等。
猪口蹄疫病毒(FMDV)Elisa试剂盒说明书
猪口蹄疫病毒(FMDV)Elisa试剂盒说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T15ng/L – 480ng/L使用目的：本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中口蹄疫病毒(FMDV)含量。
猪口蹄疫病毒(FMDV)Elisa试剂盒说明书实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪口蹄疫病毒(FMDV)水平。
用纯化的猪口蹄疫病毒(FMDV)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入口蹄疫病毒(FMDV)，再与HRP标记的口蹄疫病毒(FMDV)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的口蹄疫病毒(FMDV)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中猪口蹄疫病毒(FMDV)浓度。
试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶 7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶 8 标准品(960ng/L) 0.5ml×1瓶3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶 10 说明书 1份5 显色剂A液6ml×1瓶 11 封板膜 2张6 显色剂B液6ml×1/瓶 12 密封袋 1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
480 ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液240 ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液120ng/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液60 ng/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液30 ng/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
猪瘟抗体检测卡说明书(完整版)
猪瘟抗体快速检测试剂盒——（胶体金法）使用说明书【名称】通用名称：猪瘟抗体快速检测试剂盒（胶体金法）英文名称：Rapid Anti-CSFV Test汉语拼音：Zhuwen Kangti Kuaisu Jiance ShijiHe(Jiaoti Jin Fa)【用途】用于检测猪血清/血浆/全血样品中猪瘟(Classical Swine Fever, CSF)抗体。
【实验原理】猪瘟抗体快速检测试剂盒（胶体金法），系采用胶体金免疫层析技术，检测样品（血清、血浆或全血）中猪瘟抗体的方法。
在玻璃纤维纸上预包被金标记灭活猪瘟抗原（Au-Agl），在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被猪瘟抗原(Ag2)和兔抗猪瘟抗体。
当检测样品为阳性时，样品中猪瘟抗体与胶体金标记猪瘟抗原（Au-Ag1）结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的猪瘟抗原(Ag2)形成“Au-Ag1-猪瘟抗体-Ag2-固相材料”免疫复合物而凝聚显色，游离金标记抗原则在对照线处与兔抗猪瘟抗体结合而富集显色。
阴性样品则仅在对照线处显色。
操作简便，快速，结果直观、准确，灵敏度高，容易判定。
【试剂盒组成】1.猪瘟抗体检测卡50头份2.说明书1份3.一次滴管50根【操作方法】1.用1.5ml样品管，采血0.5-1ml待检测血清自然析出或用离心机离心10分钟左右，使血清析出。
2.将检测卡平置于桌面上，用吸管吸取被检血清，在检测卡的椭圆形加样孔内加入2滴约80~100ul。
在室温下反应20分钟判定结果。
（检测卡如在4℃保存，必须恢复至室温后方可进行检测）【结果判定】阳性：对照线区（C）和检测线区(T)各出现一条紫红色线。
检测线(T)的颜色越深，表明猪瘟抗体的滴度越高。
阴性：只有对照线区（C）出现一条紫红色线。
无效：未出现紫红色线或只在检测区(T)出现紫红色线，对照线区(C)未出现紫红色线。
【诊断参考】被检样品加样后20分钟可与对照卡的色带滴度进行参考比较。
口蹄疫A型抗体检测试剂盒(酶联免疫法) 使用说明书
口蹄疫A型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书【产品名称】通用名：口蹄疫A型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）英文名：Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus A（ELISA）【包装规格】×2/盒96T×1/盒、96T、96T×5/盒【预期用途】口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，FMDV）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，其特征为口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和烂斑。
本试剂用于检测牛、羊、猪血清中口蹄疫A型抗体，可用于口蹄疫A型疫苗免疫效果评价。
【原理】本试剂盒由预包被口蹄疫A型抗体的酶标板、抗体工作液、抗原液、酶标记物及其他配套试剂组成，应用阻断酶联免疫法（ELISA）原理检测牛、羊、猪血清样本中口蹄疫A型抗体。
实验时将稀释的样本与抗原液同时加入酶标板中孵育，样本中的抗体与酶标板上的抗体竞争抗原，阻断抗原与板的结合；经洗涤后，再加抗体工作液孵育；经洗涤后加入酶标记物孵育；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有口蹄疫A型抗体。
【试剂盒组成】【储存及有效期】2～8℃保存，有效期12个月。
包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。
使用期限为2个月。
【适用仪器】含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
【样品准备】1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。
样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
2.用工作洗涤液将待检牛、羊先按32倍稀释（如5μl 血清加入155μl 工作洗涤液中，混匀），待检猪血清按16倍稀释（如5μl 血清加入75μl 洗涤液中，混匀），阴、阳性对照不用稀释。
口蹄疫疫苗说明书
口蹄疫疫苗说明书1. 引言口蹄疫是一种广泛感染牛、猪、羊、山羊等偶蹄类动物的病毒性疾病。
为了有效控制和预防口蹄疫的传播，口蹄疫疫苗应运而生。
本说明书将详细介绍口蹄疫疫苗的使用方法、适应症、不良反应以及注意事项等内容。
2. 适应症口蹄疫疫苗适用于牛、猪、羊和山羊等偶蹄类动物，用于预防口蹄疫的发生和传播。
3. 使用方法口蹄疫疫苗为注射剂，使用前应摇匀。
以下为具体使用方法：1.选择合适的注射器和针头，确保消毒与清洁。
2.将疫苗瓶摇匀至均匀悬浊。
3.取出疫苗瓶塞，将针头插入瓶塞并抽取适量疫苗。
4.注射前，应对注射部位进行消毒处理。
5.根据动物的体重，确定合适的剂量。
6.从动物的适当部位进行肌肉注射或皮下注射。
注意：请在专业兽医的指导下使用本疫苗。
4. 不良反应虽然口蹄疫疫苗在预防口蹄疫方面非常有效，但在使用过程中也可能引发一些不良反应。
以下为常见的不良反应：1.局部反应：在注射部位可能出现肿胀、灼热、疼痛等不适感。
2.全身反应：在接种后的数天内，动物可能会出现体温升高、食欲减退、呼吸急促等全身性症状。
以上不良反应一般在数天内自行消失，并不需要特殊治疗。
如果动物出现严重的不良反应，建议立即就医。
5. 注意事项在使用口蹄疫疫苗时，务必注意以下事项：1.疫苗应在室温下保存，并避免阳光直射。
2.必须遵循正确的注射方法和剂量，避免造成过量或不足的注射。
3.未使用完的疫苗瓶，应密封保存，并在有效期内使用。
4.母畜在怀孕和哺乳期间使用本疫苗，需要咨询兽医的建议。
5.本疫苗只能用于预防口蹄疫，不可用于治疗感染口蹄疫的动物。
6. 结论口蹄疫疫苗是预防和控制口蹄疫传播的重要手段。
正确使用口蹄疫疫苗，可以有效降低口蹄疫的发病率，保障偶蹄类动物的健康与安全。
在使用疫苗前，请务必详细阅读本说明书，并遵循兽医的指导和建议。
规模场猪口蹄疫抗体效价的检测
2020年第10期猪口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的猪的一种急性、热性、高度接触性疾病,主要侵害猪的蹄部、口部及乳房等,仔猪多伴有心肌炎。
该病不仅造成重大的经济损失,还严重制约畜牧业的健康发展,甚至威胁着国家声誉和人类食品卫生安全。
因此口蹄疫的防控对畜牧业的健康发展有着重要意义。
规模场中通过采集猪血清检测血液中口蹄疫抗体的技术手段,可以有效的预防和掌握口蹄疫的流行动态,再配合有效的猪场生物安全措施,可降低口蹄疫的感染风险。
笔者对采集的某地区规模化育肥场的猪血清进行了抗体检测和结果分析,为制定口蹄疫的防控策略提供科学依据。
1血清采集及检测秋季免疫后1个月内,选择5个免疫口蹄疫多价灭活苗的规模化育肥场,存栏4000头左右。
对每个场随机选取100头育肥猪进行血液样品采集,采血部位为前腔静脉,血量为5m L 左右,共采集500份血液样品,样品按照不同养殖场进行分类,用油性记号笔在采血器表面标记样品并编码。
将装血样的采血管斜置或平放静置30m i n ,待血清析出后,送至实验室,离心分离血清,备用。
然后使用采购自中国农业科学院兰州兽医研究所的口蹄疫O 型液相阻断ELI SA 抗体检测试剂盒检测血清中猪口蹄疫的抗体,并记录结果。
2结果与分析使用口蹄疫O 型液相阻断ELI SA 抗体检测试剂盒检测血清中猪口蹄疫抗体,结果见表1。
由表1得知,5个规模化育肥场O 型口蹄疫的抗体合格率为93%。
其中,B 育肥场O 型口蹄疫免疫合格率高达到98%,在所调查育肥场中免疫保护效果最好;D 场O 型口蹄疫免疫合格率为87%,免疫保护效果率相对较低。
剩余A 、C 、E3个规模化育肥场O 型口蹄疫免疫合格率都在90%以上,5个规模化育肥场O 型口蹄疫的免疫保护率均达标。
免疫抗体监测是对动物的健康状况进行反馈的一项重要工作,猪作为口蹄疫的放大器,对口蹄疫病毒极为敏感,对猪群血清样品的检测能反映口蹄疫在易感家畜中的感染情况。
本次随机抽检了的5个规模化育肥场,从检测结果看,检测的500份血清样品口蹄疫抗体合格率,达到了农业部免疫抗体合格率70%以上的规定。
口蹄疫O型灭活疫苗（OS株）等3种兽药产品说明书和标签[001]
![口蹄疫O型灭活疫苗（OS株）等3种兽药产品说明书和标签[001]](https://img.taocdn.com/s3/m/ff44890dcdbff121dd36a32d7375a417876fc15d.png)
口蹄疫O型灭活疫苗（OS株）等3种兽药产品说明书和标签[001]附件2（略）附件3（略）附件4口蹄疫Ｏ型灭活疫苗（OS株）等3种兽药产品说明书和标签一、口蹄疫Ｏ型灭活疫苗（OS株）说明书和标签（一）口蹄疫Ｏ型灭活疫苗（OS株）说明书兽用【兽药名称】通用名口蹄疫O型灭活疫苗（OS株）商品名无英文名Foot and Mouth Disease Vaccine，Inactivited（TypeO，Strain OS）汉语拼音Koutiyi O Xing Miehuoyimiao（OS Zhu）【主要成份与含量】含灭活的口蹄疫O型病毒，灭活前每0.1ml 病毒含量应至少为107.0TCID50，或每0.2ml病毒含量应至少为107.0LD50。
【性状】略带粘滞性乳状液。
【作用与用途】用于预防牛、羊、鹿和骆驼O型口蹄疫。
免疫期为4～6个月。
【用法与用量】肌肉注射，牛、鹿和骆驼每头（峰）2m1，羊每只1m1。
【不良反应】一般不良反应注射部位肿胀，一过性体温反应，减食或停食1～2日，奶牛可出现一过性泌乳量减少，随着时间延长，症状逐渐减轻，直至消失。
因品种、个体的差异，个别牛接种后可能出现急性过敏反应，如焦躁不安、呼吸加快、肌肉振颤、可视黏膜充血、瘤胃鼓气、鼻腔出血等，甚至因抢救不及时而死亡;少数怀孕母畜可能出现流产。
【注意事项】（1）疫苗应冷藏运输（但不得冻结），并尽快运往使用地点。
运输和使用过程中避免日光直接照射。
（2）使用前应仔细检查疫苗。
疫苗中若有其他异物、瓶体有裂纹或封口不严、破乳、变质者不得使用。
使用时应将疫苗恢复至室温并充分摇匀。
疫苗瓶开启后限当日用完。
（3）本疫苗仅接种健康牛、羊。
病畜、瘦弱、怀孕后期母畜及断奶前幼畜慎用。
（4）严格遵守操作规程。
注射器具和注射部位应严格消毒，每头（只）更换一次针头。
曾接触过病畜人员，在更换衣、帽、鞋和进行必要消毒之后，方可参与疫苗注射。
（5）疫苗对安全区、受威胁区、疫区牛、羊均可使用。
猪口蹄疫疫苗word版
猪口蹄疫疫苗
【商品名】猪蹄清（猪口蹄疫疫苗）
【主要成份】硫酸链霉素（载体为猪同源精制血清抗体）
【适应症】用于猪口鼻足部水泡病的紧急治疗和平时的预防保健；能迅速增
强免疫力、中和病毒。
提高猪的抗病力，增强猪的体质。
【用法用量】肌肉注射；治疗量每瓶20ml用于200斤体重、预防量每瓶20ml用
于400斤体重。
预防量减半。
【注意事项】1、本品不得与酸碱性药物混合应用，以免发生变性，降低疗效。
2、本品禁忌反复冻融，以免降低效
3、个别猪只可能会发生轻微过敏反应，严重者请用0.1％的肾上腺素2～4ml
缓解。
4、根据病情宜搭配强心药及10％葡萄糖静脉补液使用。
【包装】20ml/支×2支/盒×40盒/件
特点：本血清系用A型O型口蹄疫病毒弱毒株高度免疫健康青年猪后，采取血液，分离血清，经加工处理制成，含有高效价抗体，能够有效的治疗和控制口蹄疫，提高
仔猪免疫体质，同时可以辅助治疗其它一些细菌及病毒病。
1 / 1
【贮藏】避光，阴凉处常温可保存两年,冷藏时间更长，可保存6--9年。
（本资料素材和资料部分来自网络，仅供参考。
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猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体水平检测
＊ 收稿日期 :2009-04-08 作者简介 :陈方志(1984 -), 男 , 湖南长沙 人 , 硕士研究生 , 主要从事动物流行病学研究 。
陈方志等 :猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗抗体水平检 测
117
2 结果
2 .1 VP1 结构蛋白抗体 ELISA 检测 参照 试 剂 盒 说 明 书 进 行 计 算 , 阳 性 阈 值 为
对照组 , 无免疫应答 , 抗体水平随母源抗体的逐 步消失而下降至阳性阈值以下 。详见表 1 。
采样周龄 S ampli ng w eek age
6 7 8 9 11 13 20
表 1 V P1 ELIS A 检测 结果 Table 1 Result s of V P1 E LIS A det ection
3 讨论
两种猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗免疫过的 4 组共 计 80 头试验猪 , 首免后 4 周内即 100 %达到抗体阳 性 , 且抗体一直维持在一个较高的水平 。 这说明两 种合成肽疫苗的免疫原性都很好 , 进入动物体内后 迅速诱导免疫应答 , 产生了大量抗体 。 申联组的抗 体水平较中牧组略高 , 且抗体水平均一性好 , 波动不 大 ;抗体持续期也略好于中牧组 , 首免后 9 周仍呈上 升趋势 , 而中牧两个试验组抗体水平分别在第 5 周 和第 7 周开始呈现缓慢下降趋势 。 但无论哪个组 , 抗体水平均能令人满意 , 即使一次免疫 , 也足以维持 阳性水平以上的抗体直至生猪出栏 。
[ 3] W aldm ann O , Petermann H G .V ariation s of t he virus of t he f oot and mout h di sease[ J] .Bakt eri ol Parasi tenkd Infekt ionsk r H yg , 1952 , 157(8):551-555 .
口蹄疫病毒非结构蛋白(NSP)抗体检测试验
口蹄疫病毒非结构蛋白（NSP）抗体检测试验一、介绍：口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的急性、热性高度接触性传染病，主要侵害偶蹄兽，一旦发病，将会引起严重的经济损失。
口蹄疫病毒属于微核糖核酸病毒科口蹄疫病毒属，目前已知共有7种血清型，即O型、A型、C型、SAT1、SAT2、SAT3和亚洲1型。
口蹄疫病毒（FMDV）非结构蛋白（NSP）特异性抗体的存在，通常用来证明宿主体内口蹄疫病毒已经感染或正在感染，非结构蛋白与结构蛋白不一样，没有血清型区分。
国际兽医局（OIE）规定的非结构蛋白血清学检测方法为EITB和ELISA。
韩国金诺VDPro FMDV 非结构蛋白（NSP）抗体检测试剂盒，是用阻断ELISA，重组FMDV NSP蛋白包被，过氧化物酶标记的单克隆抗体，来检测血清中非结构蛋白抗体是否存在。
适用对象包括猪、牛、山羊以及绵羊等。
二、试剂盒组成：三、注意事项：1、使用之前请仔细阅读操作说明；2、试剂盒储存条件：2-8℃；四、实验前准备：1、洗液10倍稀释：如20ml洗液，加入180ml去离子水混匀，备用。
2、TMB底物：使用前恢复到室温，因为低温可能导致不显色。
五、操作步骤：1、使用前将试剂盒所有组件恢复到室温（25±3℃），取出抗原包被板；2、标记好样品、阳性对照和阴性对照（对照各做两孔），每孔加入样品稀释液80μl，然后加入样品血清、阳性对照、阴性对照各20μl后进行震荡混匀；3、室温孵育60分钟；4、洗板：每孔加入洗涤液300μl，洗涤3次，最后在吸水纸上拍干；5、每孔加入100μl酶标抗体，室温孵育60分钟；6、重复步骤4，洗涤3次；7、每孔加入TMB底物反应液100μl，室温暗处放置15分钟。
六、读数：每孔加入50μl终止液，在酶标仪450nm波长处读数。
七、结果判定：1、实验有效性判定阴性对照OD值≥0.6阳性对照OD值≤0.32、计算方法3、判定标准SN值＞0.60 判为阴性；SN值≤0.60 判为阳性。
猪口蹄疫疫苗免疫后跟踪抗体检测试验及建议
户居住分散， 每年春秋季防疫工作十 分艰巨，村防疫员工资报酬低，工作面 广量大，任务繁重。 因此，做为基层畜 牧兽医工作者， 我们呼吁农业部尽快 将 三 种 血 清 型 （O型 、A型 、亚 洲Ⅰ型 ） 口蹄疫疫苗批准为招标统购疫苗，也 盼望尽早投入使用， 以降低基层防疫 人员工作量和免疫工作成本， 只有高 效、多价且使用便捷的疫苗，才能成功 的预防和制控动物口蹄疫病。
1 试验材料
1.1 试验材料 测试使用的疫苗为 “猪克鼻”(由
法 国 某 公 司 提 供)，用 于 试 验 测 试 的 小 白鼠和兔子,有关试剂和仪器（其中包 括营养肉桂粉， 选购来自杭州的有关 生物公司 ）,普通性质的琼 脂 粉 以 及 麦 康凯性琼脂粉。 （这两种试剂都是来自 同一公司）。 1.2 试验设备
猪 O型 口 蹄 疫 两 种 剂 量 免 疫 28d、56d（二 免 ）抗 体 滴 度
单位：份
分组第一组：常规量免疫第二组：加倍量免疫天数 抗体滴度
28 d
56 d
28 d
56 d
25
2
2
2
3
26
0
2
0
1
27
0
0
0
0
28
0
0
1
1
合格总数
2
4
2
5
合格率
10%
20%
15%
25%
· 6 · 疫病防制
LIVESTOCK AND POULTRY INDUSTRY NO．307
第二组合格3份合格率是15并同时进行9月11日56d后再每组采样20份进行抗体检测第一组合格4份合格率是20第二组合格5份合格率是25免疫反应免疫注射后对免疫202头试验猪进行3d观察第一组免疫注射51头发生免疫反应1头占试验猪的196第二组免疫注射151头发生免疫反应3头占试验猪的199试验使用的疫苗由金宇保灵生物有限公司生产毒株为ogx1097株oxj1011株我县地处秦岭腹地路途遥远县动物疫控中心用冷藏车将疫苗从商洛市动物疫控中心运回后在冷库贮藏25合格率第一组
郑州中道生物猪口蹄疫O型试剂盒(酶联免疫法)说明书
猪口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书【产品名称】通用名：猪口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine foot and mouth disease virus (ELISA) 【预期用途】本品采用酶联免疫间接法检测猪血清或血浆中的猪口蹄疫病毒（O型）抗体，适用于评估猪场猪口蹄疫疫苗免疫状况，可用于动物疫病的调查。
【检验方法】1. 配洗液：将50ml洗液（20×）加纯化水稀释至1000ml，充分摇匀后备用。
2. 编号：每次试验应在包被板上设空白对照孔1孔，阴性对照孔2孔，阳性对照孔2孔，其余为待检样品孔。
3. 加样品稀释液：用加样器在包被板的待检样品孔中加入样品稀释液，每孔100μl；空白对照孔、阴性对照孔及阳性对照孔不加样品稀释液。
4. 加样：分别于各待检样品孔加入待检样品10μl，阴性对照孔加入阴性对照血清100μl，阳性对照孔加入阳性对照血清100μl；空白对照孔不加样。
5. 温育（一）：充分混匀，贴上封板膜，37±2℃温育30分钟。
6. 洗板（一）：洗板机洗或手洗，方法如下：①手洗：倾去内容物，用洗液注满反应孔，静置15秒至30秒后吸去或弃去，在毛巾或吸水纸上拍干。
如此洗板重复5次。
②洗板机洗：洗板次数为5次，每次洗液在孔中滞留时间为15-30秒，洗液应注满反应孔，确保每次吸净无残留，全部洗完后在毛巾或吸水纸上拍干。
7. 加酶标结合物：除空白对照孔以外，各孔中加入酶标结合物100μl。
8. 温育（二）：贴上封板膜，37±2℃温育30分钟。
9. 洗板（二）：方法同洗板（一）。
10. 加显色剂：每孔加入显色剂A 50μl，全部加完后再在每孔中加入显色剂B 50μl，混匀。
11. 温育（三）：37±2℃显色10分钟。
12. 终止：显色完毕后立即于每孔加50μl终止液，混匀。
口蹄疫监测诊断作业指导书
一、口蹄疫病毒 VP1 构造蛋白抗体检测酶联免疫吸附实验1.合用范畴用于检测猪、牛、羊血清中的口蹄疫病毒 VPI 构造蛋白抗体，与猪、牛、羊口蹄疫病毒非构造蛋白抗体酶联免疫吸附实验诊疗试剂盒联合使用，可分辨口蹄疫病毒感染动物及疫苗免疫动物。
检测猪血清应用猪口蹄疫病毒 VP1 构造蛋白抗体酶联免疫吸附实验诊疗试剂盒；检测牛、羊血清应用牛、羊口蹄疫病毒 VP1 构造蛋白抗体酶联免疫吸附实验诊疗试剂盒。
2.检测试剂口蹄疫病毒 VP1 抗原包被板、样品稀释液、酶结合物、阴性对照、VP1 阳性对照、酶结合物稀释液、TMB 底物A 液、TMB 底物B 液、终止液（l.OMHZSO。
）、浓缩洗涤液、稀释板、一次性封板膜、微孔定位标签。
3.检测环节3.1使用前将试剂盒恢复到室温，避免阳光直射或放置在30℃ 以上的环境中。
3.2取出试剂盒中的样品稀释液。
A1、B1 两孔作为阴性对照，Cl、D1 两孔作为阳性对照孔，其它孔作检测孔，每孔一种样品。
3.3在稀释板的各孔中加 200 样品稀释液。
在对应各孔中分别加入 10 此对照血清或被检血清样品。
用加样器重复吹吸多次。
稀释每个样品时必须使用不同的吸头。
3.4取出抗原包被板。
3.5分别从稀释板上取稀释后的对照血清和被检血清各 100 此，加至抗原包被板的对应孔中，加益或封膜后，置 37 士2℃下孵育 60 士5 分钟。
3.6洗涤工作液配制：按需要量，用去产离子水或双蒸水将洗涤液作 25 倍稀释。
3.7用洗涤工作液洗涤抗原包被板，每孔 300 吨，洗涤 6 次，拍干。
3.8酶结合物工作液配制：用酶结合物稀释液将酶结合物作 100 倍稀释，现配现用。
3.9每孔加入 100 此酶结合物工作液，加盖或封膜后，置37±2℃下孵育30±2分钟。
3.10重复 3.7。
3.11T MB 底物工作液配制：将 TMB 底物B 液和TMB 底物A 液等量混合，现配现用。
3.12每孔加入 100 此底物工作液，加盖或封膜后，置37±2℃下孵育15±1 分钟。
检测口蹄疫血清抗体的方法
检测口蹄疫血清抗体的方法〔一〕口蹄疫正向间接红细胞凝集试验〔间接血凝试验〕该试验是以口蹄疫O、A、C、Asia-1型病毒和猪水泡病病毒的细胞培养物〔细胞毒〕经PEG浓缩，蔗糖密度梯度超离后纯化的病毒抗原分别致敏戊二醛鞣酸处理的绵羊红细胞，而制成的血凝抗原，用于快速检测动物血清中的口蹄疫和猪水泡病特异抗体水平。
该法简易、快速、特异、直观、是当前测抗的实用方法。
1．试验材料 V型96孔110。
医用血凝滴定板、玻璃板〔与血凝板大小相同〕、微量移液器〔10~100微升〕、塑料咀、微量振荡器、1毫升/5毫升刻度玻璃吸管、玻璃中试管〔内径1.5毫米，长度100毫米〕、铝质试管架〔40孔〕、口蹄疫各型和猪水泡正向间接血凝诊断液、口蹄疫O、A、C、Asia-1型阳性血清、SVD阳性血清、阴性血清、稀释液。
2．试验方法根据试验目的可分为用于鉴别诊断；用于监测疫苗接种动物的抗体水平的检测方法。
（1）疫苗接种动物抗体水平监测方法接种何种疫苗就使用何种正向血凝诊断液。
①稀释待检血清在血凝板上1~8孔各加稀释液50微升，取待检血清50微升参加第1孔，混匀后从中取出50微升参加第2孔，混匀后从中取出50微升参加第3孔……直至第8孔混匀后从该孔取出50微升丢弃，保持每孔50微升的剂量。
此时1~8孔的血清稀释度依次为1：2、1：4、1：8、1：16；1：32、1：64、1：128、1：256。
②稀释阴性对照血清取中试管1支加稀释液1.5毫升，再加阴性血清0.1毫升，充分摇匀阴性血清的稀释度即为1：16。
③稀释阳性对照血清取中试管5支，第1管加稀释液3.1毫升，第2~5管分别加稀释液0.5毫升，取阳性血清0.1毫升参加第1管混匀后从中取出0.5毫升，参加第2管混匀后从中取出0.5毫升，参加第3管……直至第5管，此时各管阳性血清的稀释度低次为1：32、1：64、1：128、1：256、1：512。
④滴加对照孔取1：16稀释的阴性血清50微升参加血凝板的第10孔；取1：500稀释的阳性血清50微升参加第11孔；取稀释液50微升参加第12孔。
申联口蹄说明书
申联口蹄说明书首先，口蹄疫病毒的感染性非常强：1、传播途径多，可通过空气传播、接触传播、气溶胶的远距离传播；2、排毒量大，猪是口蹄疫病毒气溶胶的最大制造者，每天排出108感染单位，可使1000万头牛发病。
因此，并不是生物安全做好了，疫苗就可以不打了，特别是对于没有安装高效空气过滤器的猪场来说，疫苗免疫依旧是最有效的防控手段。
其次，口蹄疫病毒的血清型多达7种，目前国内流行的是O型和A型。
O型和A型又分出很多亚型，所以免疫过程中一定要分清楚国内猪群的流行毒株，及时更换。
第3个特点是病毒免疫原性弱。
免疫保护力取决于合理的抗原含量和匹配的毒株，并不是抗原含量越高保护力就越高。
国际上一般将口蹄疫疫苗中的抗原含量定为1-10μg/剂量，低于1.5μg/剂量不能诱导良好的免疫应答，高于9.2μg/剂量时中和抗体滴度并不因抗原量的增加而提高。
第4个特点是敏感，导致口蹄疫疫苗稳定性差。
疫苗中抗原含量的稳定性非常关键，在灭活疫苗中，完整FMDV粒子（146S粒子）是至关重要的免疫抗原，它的数量和稳定性决定了疫苗的免疫效果。
FMDV粒子一旦裂解，疫苗的免疫效果将大幅降低。
研究发现，灭活的口蹄疫病毒146S在4℃时相对稳定，但在37℃及以上的温度下稳定性较差，即使在几个小时内，146S损失也会很大；当pH值低于6.8时，146S很容易裂解，最稳定的pH值范围为7.5-8.0。
为了解决口蹄疫疫苗稳定性的问题，一般选择添加抗原保护剂。
传统的抗原保护剂有氨基酸类、蛋白质类、多羟基类等，不同的配比组合形成抗原保护剂，各有优缺点。
王江辉介绍，申联生物目前创新运用独创的分子书钉i-MolSta--双向抗原保护技术，可有效解决疫苗降解难题。
防控需要做好疫苗免疫和生物安全口蹄疫的有效防控离不开生物安全和疫苗免疫。
王江辉表示，生物安全不需要多复杂，关键是要执行到位。
而疫苗免疫方面，必须坚持打苗，选对血清型，选对种毒，并且选择含量稳定的疫苗才能起到保护效果。
猪、牛、羊口蹄疫和高致病性禽流感免疫抗体检测报告
１ － ３ 免疫 抗体检 测试剂 Ｏ型 口蹄疫 和亚洲Ｉ 型 口蹄 疫液 相 阻断Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测试 剂盒 ，中 国农业科 学院兰州兽医研究 所 ，批 号：２ ０ １ ３ ０ ８ １ ８ ０ ２ ，禽 流感Ｈ５ Ｎ１ 亚型ＨＩ 抗原 ，哈尔
３ 结果
（ １ ）猪Ｏ型 口蹄疫抗 体合格率为９ ５ ． ８ ％（ ９ ２ ／ ９ ６ ） ，其 中 徂徕 镇猪 口蹄疫抗 体合 格率为 １ ０ ０ ％（ ３ ８ ／ ３ ８ ） ，房村镇 猪 口
蹄疫抗 体合 格率为８ ２ ． ８ ％（ ４ ８ ／ ５ ８ ） 。 （ ２ ）牛Ｏ型 口蹄疫抗体
价 灭 活 疫 苗 灭 活 苗 免 疫 后 ，猪 ０型 口蹄 疫 和 牛 羊 Ｏ． Ａｓ ｉ ａ Ｉ
２ 试验方法
４ ６ 只。
９ ５ ． ７ ％（ ６ ７ ／ ７ ０ １ 。牛Ａ ｓ ｉ ａ Ｉ型 口蹄 疫 抗 体 合 格 率 为 ９ ５ ． ２ ％
（ １ ３ ９ ／ １ ４ ６ ） ； 其 中 范镇 牛 Ａ ｓ ｉ ａ Ｉ型 口蹄 疫 抗 体 合 格 率 为
１ ． ２ 免 疫疫 苗 猪 口蹄疫。型 灭活 疫苗 ，中农威 特 生物 科技 股份有 限公司生产 ，批 号： １ ３ １ １ ｌ １ ８ ； 牛羊Ｏ ． Ａｓ ｉ ａ Ｉ
为 了防控 重大 动物 疫病传 播 ，确实 掌握 猪、牛 羊 口
蹄 疫和 高致 病性 禽流感 疫苗 免疫 效果 ，为重 大动物 疫病
凝抑 制 试 验 ，严 格 按 照 《 高 致病 性 禽 流 感 诊 断技 术 》
ｆ ＧＢ ／ Ｔ １ ８ ９ ３ ６ － －２ ０ ０ ３ ） 规 定 的操 作 方 法 进 行 。
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猪口蹄疫抗体快速检测试剂盒
——（胶体金法）使用说明书
【名称】
通用名称：猪口蹄疫抗体快速检测试剂盒
英文名称：Rapid Anti-FMDV Test
汉语拼音：Zhu KouTiYi Kangti Kuaisu Jiance Shiji He(Jiaoti Jin Fa)
【原理】
猪口蹄疫抗体检测试剂盒（胶体金法），系采用国际最先进的胶体金免疫层析技术检测样本（全血、血清、血浆）中抗猪口蹄疫抗体的方法。
整个试验只需20分钟，操作简便、快速、准确，灵敏度高、结果直观、容易判定。
本试剂盒内还设计一张“金标试纸与正向间接血凝试验实物参照图”，用试纸检测线的颜色与实物参照图对照，便可粗略估计样品中抗体的滴度。
【试剂盒组成】
1.猪口蹄疫抗体快速检测卡50头份
2.说明书1份
3.一次滴管50根
【操作方法】
1．在检测卡的加样孔内加入2滴（100ul）待检血清或血液样品。
2．将检测卡平放于桌面上，在室温下静置5－20分钟内判定结果。
超过20分钟的结果只能作为参考。
阳性：在观察孔内，检测线区（T）及对照线区
（C）同时出现紫红色线。
猪口蹄疫抗体滴度越高，检测线（T）颜色越深。
弱阳性：在观察孔内，检测线区（T）及对照线区
（C）同时出现紫红色线，但检测线区（T）出现的颜色很浅。
阴性：在观察孔内，只有对照线区
（C）出现一条紫红色线。
失效：在观察孔内，对照线区
（C）和检测线区（T）都不出现色线；或仅检测线区（T）出现色线。
【诊断参考】
1. 如果该猪未接种过猪口蹄疫病毒疫苗:
a)当被检样品检测线（T）处无明显色带出现，说明被检测样品中没有口蹄疫病毒抗体。
如果猪群健康，
应当及时进行猪口蹄疫病毒疫苗接种。
b)当被检样品检测线（T）处有明显色带出现，则该猪有可能为野毒感染，应进一步观察验证。
2. 如果该猪已接种过猪口蹄疫病毒疫苗:
c)当被检样品检测线（T）条带的色泽≥对照卡中1：32效价时，说明口蹄疫病毒抗体的滴度较高，已
达到抵御强毒攻击的保护水平。
d)当被检样品检测线（T）条带的色泽＜对照卡中1：32效价时，说明口蹄疫病毒抗体效价未达到抵御
口蹄疫病毒强毒攻击的最低保护滴度，建议进行疫苗补种。
【注意事项】
铝箔袋打开后，检测卡应尽快使用；受潮后检测卡将失效。
常温保存，保质期18个月。
【特点】
方便:肉眼判断、无需仪器、操作简单；
快速:5－20分钟即可出结果，有利于疫情的快速鉴别和免疫水平监测；
用途:适合于各级防检部门、猪场、兽医站广泛使用。