禽腺病毒4型荧光定量PCR检测方法山东标准2020版

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禽腺病毒的结构及其血清4型检测方法研究进展

禽腺病毒的结构及其血清4型检测方法研究进展
王凯莉;刘成;楚肖冉;司振书;路建彪;李玉保;曹胜亮
【期刊名称】《动物医学进展》
【年(卷),期】2023(44)1
【摘要】近年来,由血清4型禽腺病毒引起的肝炎-心包积液综合征给养禽业带来严重的经济损失,该病毒的主要结构蛋白有六邻体、纤突和五邻体,可通过琼脂胶聚免疫扩散试验(AGIDT)、聚合酶链反应(PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等进行诊断,其中聚合酶链反应是最常用的分子生物学诊断方法;血清学检测方法中将禽腺病毒重组蛋白作为包被抗原建立的ELISA方法最为常用。

论文对禽腺病毒基因组和蛋白结构及FAdV-4检测方法进行了综述,以期为该病的快速检测及科学防控提供理论和技术支持。

【总页数】6页(P111-116)
【作者】王凯莉;刘成;楚肖冉;司振书;路建彪;李玉保;曹胜亮
【作者单位】聊城大学农学院
【正文语种】中文
【中图分类】S852.659.1;S852.657
【相关文献】
1.Ⅰ群禽腺病毒血清4型TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
2.禽腺病毒血清4型纳米PCR检测方法的建立与初步应用
3.禽腺病毒血清4型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用
4.血清4型禽腺病毒POCT荧光微
球免疫层析检测方法的建立5.禽腺病毒血清4型SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立与应用
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一种检测禽腺病毒血清4型的引物组、试剂盒及其检测方法与应用[发明专利]

专利名称：一种检测禽腺病毒血清4型的引物组、试剂盒及其检测方法与应用
专利类型：发明专利
发明人：王红宁,翟熙雯,雷昌伟,梅雪然,吴暄
申请号：CN201910430677.1
申请日：20190522
公开号：CN110042176A
公开日：
20190723
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种检测禽腺病毒血清4型的引物组、试剂盒及其检测方法与应用，所述引物组包括外引物和内引物，其中外引物为F3和B3，内引物为FIP和BIP，所述F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述FIP为5端生物素标记的序列，所述BIP为5端异硫氰酸荧光素标记的序列。

本发明结合环介导等温扩增技术与横向流动试纸条技术，针对FAdV‑4重要的因子52k基因设计一套引物，建立FAdV‑4的LAMP‑LFD快速检测技术，本发明提供的LAMP‑LFD试剂盒操作简便，安全可靠、灵敏高效、特异性好，特别适合于现场快速可视化检测。

申请人：四川大学
地址：610000 四川省成都市一环路南一段24号
国籍：CN
代理机构：成都顶峰专利事务所(普通合伙)
代理人：王霞
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Ⅰ群禽腺病毒4型IgG抗体间接ELISA检测方法的建立

Ⅰ群禽腺病毒4型IgG抗体间接ELISA检测方法的建立张启龙;孙丹;韦海涛;宋彦军;周德刚;冯小宇;王林【摘要】利用纯化的Ⅰ 群禽腺病毒4型重组Hexon蛋白,通过各反应条件筛选,建立了Ⅰ 群禽腺病毒4型IgG抗体间接ELISA检测方法.结果显示,抗原最佳包被浓度为1μg/mL;最佳封闭液为1％牛血清白蛋白;待检血清最佳作用浓度是400倍稀释,37℃孵育60 min;酶标抗体的最佳作用条件为稀释度1:8000,37℃孵育60 min;最佳显色时间为10 min.用所建方法对160只临床鸡只进行检测,同时与拭子PCR检测对比,一致性较好,表明该方法可有效用于临床检测.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2019(053)008【总页数】7页(P1-7)【关键词】Ⅰ群禽腺病毒4型;Hexon蛋白;间接ELISA;检测【作者】张启龙;孙丹;韦海涛;宋彦军;周德刚;冯小宇;王林【作者单位】北京市动物疫病预防控制中心,北京 102629;北京市兽药监察所,北京102629;北京市动物疫病预防控制中心,北京 102629;北京市动物疫病预防控制中心,北京 102629;北京市动物疫病预防控制中心,北京 102629;北京市动物疫病预防控制中心,北京 102629;北京市动物疫病预防控制中心,北京 102629【正文语种】中文【中图分类】S852.65肝炎-心包积液综合征(Hepatitis and hydropericardium syndrome，HHS)是由禽腺病毒4型(Fowl adenovirus serotype 4, FAdV-4)新基因型引起的以禽心包积液、肝脏黄染、肿大和出血为特征的传染病[1]。

HHS首次于1987年在巴基斯坦的安卡拉地区发生，又名安卡拉病，随后在亚洲、欧洲和南美洲等地区流行[2-4]。

2013年以来该病在我国河南、山东、江苏、河北、陕西等地大面积流行，给家禽养殖业造成了巨大经济损失[5-7]。

《中国药典》2020版—禽源性病毒荧光定量 PCR(Q-PCR)检查法

禽源性病毒荧光定量PCR（Q-PCR）检查法本法适用于禽源性生物制品的检测，包括流感全病毒灭活疫苗、流感病毒裂解疫苗种子批毒种的外源性禽病毒检测。

本法用提取的供试品RNA，反转录成cDNA后，或用提取的供试品DNA，针对3种外源性禽病毒设计特异性引物探针，进行荧光定量PCR 检测特异性扩增信号，从而测定供试品中外源性禽源病毒核酸序列，以检查供试品的外源性禽病毒污染。

要求检测的 3 种禽源性病毒：（1）禽腺病毒I 型（DNA 病毒）（2）禽腺病毒III 型（DNA 病毒）（3）外源性禽白血病病毒（逆转录病毒）试剂（1）RNA/DNA 提取试剂：RNA/DNA 的提取可使用酚-氯仿法、磁珠法、离心柱法等。

提取试剂中应含裂解液、洗涤液、洗脱液等，按试剂说明书要求配制。

（2）反转录试剂：含逆转录酶、RNA 酶抑制剂、dNTP 混合液、随机引物、逆转录反应缓冲液等，按试剂说明书要求配制。

（3）引物序列、探针序列见表1。

表 1 引物序列及探针序列（4）扩增缓冲液每20µl 反应体系中，含有上下游引物各5µmol，探针2.5µmol及适量荧光定量PCR混合液（Mix）。

（5）质粒标准品稀释液为DNA 稀释缓冲液或无RNA 酶水稀释。

（6）对照溶液以失活后无感染性的禽源性病毒为阳性对照。

以无RNA 酶水作为阴性对照。

提取核酸和逆转录步骤同（1），置-70℃保存备用。

（7）质粒标准品溶液及灵敏度供试品的制备选择病毒目的核酸序列，人工合成DNA，目的序列转入pMD19-T 质粒中，作为质粒标准品。

测定质粒标准品的DNA 核酸浓度后，对其进行10 倍稀释，从109Copies/µl 稀释至100Copies/µl。

取107Copies/µl～103Copies/µl 质粒标准品溶液作标准曲线各点。

101Copies/µl 稀释度作为灵敏度对照。

Ⅰ群4型禽腺病毒卵黄抗体实验室产品制备

Ⅰ群4型禽腺病毒卵黄抗体实验室产品制备于洪涛;赵丽;王昊【摘要】试验应用自行分离鉴定的Ⅰ群4型禽腺病毒HY株,制备了3批Ⅰ群4型禽腺病毒卵黄抗体,并进行了性状、装量、无菌、支原体、外源病毒、安全、效力、甲醛和辛酸残留量检测.试验结果表明,试制的3批卵黄抗体呈淡黄色澄明液体;装量符合规定标准要求;无细菌、霉菌、支原体及外源病毒污染,安全性好,预防效果好.【期刊名称】《饲料博览》【年(卷),期】2018(000)001【总页数】5页(P36-40)【关键词】卵黄抗体;实验室产品【作者】于洪涛;赵丽;王昊【作者单位】哈药集团生物疫苗有限公司,哈尔滨150069;哈药集团生物疫苗有限公司,哈尔滨150069;哈药集团生物疫苗有限公司,哈尔滨150069【正文语种】中文【中图分类】S852.65;S83腺病毒是全球家禽和野禽常见的传染病原之一[1-3]。

多数腺病毒可在健康禽体内存在并复制，不表现临床症状或临床症状非常轻微，但可成为混合感染时的条件性病原；腺病毒有时也可作为原发性病原，引起禽类的多种病症[4-6]。

腺病毒可分为A、B、C、D、E 5个种12个血清型，我国主要流行A、B、C 3种基因型，共6个血清型（火鸡1型、1型、4型、5型、8a/b型），但是近期在豫南、皖北、苏北、鲁西北和胶东地区流行的禽腺病毒主要是血清4型和8a/b型，造成鸡群的死亡率较高，并且发病急，有蔓延的趋势。

安卡拉病（心包积水-肝炎综合征）就是由Ⅰ群腺病毒，血清4型引起来的。

该病多发于肉鸡，近期也开始感染麻鸡以及产蛋鸡的育成鸡，并且育成鸡发病死亡率还非常高。

Ⅰ群禽腺病毒的12个血清型交叉保护性较差，因此在防控上必须选用与流行株匹配的疫苗株和卵黄抗体才能有效遏制疫情的蔓延。

并目前市场上没有商品化的疫苗或卵黄抗体，我公司通过自行分离的Ⅰ群4型禽腺病毒HY株，制备免疫原免疫蛋鸡，制备了3批Ⅰ群4型禽腺病毒卵黄抗体实验室制品，并且经过检验，该3批制品有较好的安全性及效力，为公司下一步申报该产品的新兽药注册证书奠定基础。

DB13_T2593-2017禽腺病毒4型PCR检测方法

ICS11.220B 43 DB13 河北省地方标准DB13/T 2593—2017 禽腺病毒4型PCR检测方法2017-11-22发布2017-12-22实施前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。

本标准由河北农业大学提出。

本标准起草单位：河北农业大学。

本标准主要起草人：袁万哲、王建昌、孙继国、刘聚祥、李丽敏、陈立功、李睿文、张磊、白云、陈赛娟、李杰峰。

禽腺病毒4型PCR检测方法1 范围本标准规定了禽腺病毒4型PCR检测方法的技术要求。

本标准适用于检测家禽咽喉拭子、肛拭子，发病禽组织和这些采集样品培养物中的禽腺病毒4型。

2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

2.1DNA脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid）2.2EB溴化乙锭（ethidium bromide）2.3PCR聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）2.4dNTP脱氧核苷酸三磷酸（deoxy-ribonucleoside triphosphate）3 试剂或材料包括各种市售病毒核酸提取试剂盒，1.0%琼脂糖凝胶，50×TAE缓冲液，溴化乙锭（EB，10 ug/μL）或核酸染料，焦碳酸二乙酯（DEPC）处理的灭菌的双蒸水，DNA分子量标准（100 bp），2×Taq MasterMix 或商品化的一步法PCR反应试剂。

警示:电泳中用到的EB在操作中应戴手套和口罩。

试验中被EB污染的物品要进行无害化处理；DEPC 在操作中应在通风条件下进行，使用时戴手套和口罩，不小心沾到皮肤应立即冲洗。

3.1 病毒核酸提取试剂盒。

3.2 1.0 %琼脂糖凝胶，配制方法见附录A中A.1。

3.3 50×TAE缓冲液，配制方法见附录A中A.2。

3.4 溴化乙锭（EB，10 ug/μL）或核酸染料，配制方法见附录A中A.3。

3.5 焦碳酸二乙酯（DEPC）处理的灭菌的双蒸水，配制方法见附录A中A.4。

禽Ⅰ群腺病毒血清4型感染的诊断与防治

图1 病死鸡心包积液、肝色浅质脆、肿大充血二、病理剖检病变IBH 特征性病理剖检变化表现在肝脏和骨髓。

肝脏肿大，边缘钝圆，表面有不同程度的出血点或条索状出血斑，质脆，褪色，呈淡黄色，胆囊充盈，内有大量胆汁淤积。

偶尔可见肝脏有大小不一的坏死灶，并伴随血细胞浸润，使肝脏触之有凹凸不平的感觉。

骨髓呈灰白色或黄色胶冻样病变、体积变小，法氏囊萎缩，内膜有出血点或出血斑，且切面无光泽。

胸腺点状出血、萎缩、且颜色变深。

脾脏体积变化不大，偶见个别病例脾脏肿大、出血。

肾脏呈灰白色、肿大，表面有癖斑和疲点。

肺充血、水肿，除此之外，可见大腿部肌肉、胸肌以及皮下组织图2 病死鸡的心、肝、法氏囊、肾、脾、肺病理切片四、实验室诊断1.引物的设计合成。

根据 GenBank 中已发表的Ⅰ群禽腺病毒 Hexon 基因核酸序列设计完成两对引物，预计扩增片段为500 bp。

上游引物为P1: 5'CGAGGTCTATACCAACACG-AGCA-3';下游引物为P2: 5'-CGGCGCAGG TTAA-TGAAGTTATC-3'。

引物由吉林库美生物工程技术有限公司合成。

2.病毒分离与鉴定。

取疑似鸡包涵体肝炎病鸡的肝脏剪碎，按 1∶5（W/V）比例加入灭菌PBS进行匀浆处理，将匀浆液反复冻融 3次，4 000 r/min离心30 min，取上清液备用。

上清液中加双抗（青霉素、链霉素）各3 000 U/ml，置4℃过夜，以8 000 r/min离心10 min，取制备的上清液以卵黄囊途径接种5日龄SPF 鸡胚，0.2 ml/胚，于 37℃孵育，每日观察2次，收获 24～144 h内死亡的鸡胚尿囊液，收集死胚尿囊液，进行HA试验及PCR鉴定。

3.病毒DNA的提取及PCR扩增。

病毒液采用TaKaRa MiniBEST Viral RNA DNA Extraction Kit Ver.5.0 提取试剂盒，按说明书进行病毒DNA的提取。

血清4型禽腺病毒研究进展

血清4型禽腺病毒研究进展朱庆贺;张鹏宇;王观悦;王爽;陈曦;杨旭东;史同瑞【摘要】近年来,血清4型禽腺病毒( FAdV-4)在我国爆发,造成家禽行业严重的经济损失.病毒感染引起死亡率高,临床剖检可见明显的心包积液综合征的症状.病毒极具传染性,可垂直及水平传播,通过受感染肝脏组织匀浆可以分离和检测病毒.目前实验室诊断主要通过琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验、限制酶分析、聚合酶链式反应、实时荧光定量PCR、高分辨率的融化曲线分析等进行检测.疾病预防主要通过灭活疫苗的接种,而减毒活疫苗和亚单位疫苗也相继被开发.对FAdV-4的流行病学、发病特征、病毒诊断方法以及预防策略等方面进行了综述,以期为FAdV-4的深入研究奠定基础.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2018(052)011【总页数】6页(P80-85)【关键词】4型禽腺病毒;流行;诊断;疫苗【作者】朱庆贺;张鹏宇;王观悦;王爽;陈曦;杨旭东;史同瑞【作者单位】黑龙江省兽医科学研究所,黑龙江齐齐哈尔161000;黑龙江八一农垦大学,黑龙江大庆163000;黑龙江省兽医科学研究所,黑龙江齐齐哈尔161000;黑龙江省兽医科学研究所,黑龙江齐齐哈尔161000;黑龙江省兽医科学研究所,黑龙江齐齐哈尔161000;黑龙江省兽医科学研究所,黑龙江齐齐哈尔161000;黑龙江省兽医科学研究所,黑龙江齐齐哈尔161000【正文语种】中文【中图分类】S852.654型禽腺病毒（Fowl avianadenovirus serotype 4，FAdV-4）主要是以心包积水为主要临床症状的鸡急性传染病，临床中又称为“鸡心包积水综合征（Hydropericardium syndrome，HPS）”。

该病发病急，传播速度快，主要引起4～8周龄肉鸡感染，死亡率可达40%～90%。

该病最早于巴基斯坦的安卡拉被报道，由此又成为“安卡拉病”。

近年来，我国河南、山东、安徽、辽宁、吉林、江西和湖北等省份出现大面积爆发，给我国养鸡业造成了严重的经济损失。

实时荧光定量PCR快速检测腺病毒方法的建立与评价

实时荧光定量PCR快速检测腺病毒方法的建立与评价姚新华;郭英飞【期刊名称】《解放军预防医学杂志》【年(卷),期】2015(33)2【摘要】目的建立针对人腺病毒Hexon基因的实时荧光定量Taq Man PCR检测方法,用于腺病毒感染的早期诊断及病毒核酸定量分析。

方法根据人腺病毒Hexon 基因高度保守区设计引物和Taq Man探针,建立人腺病毒实时荧光定量Taq Man PCR快速检测方法。

对方法的灵敏度及特异性进行评价;选取3个浓度的标准品,进行5次重复检测,对方法的重复性进行验证;用该方法对90份临床标本进行检测。

结果建立的检测方法对人腺病毒的检测与其它呼吸道病原无交叉反应;检测灵敏度为10拷贝/μl;对103、104、105拷贝/μl 3个浓度标准品分别进行5次重复检测,其Ct值的变异系数均小于5%。

对临床90份发热病例的咽拭子标本检测的腺病毒阳性率为90%,与普通PCR检测法的结果(90%)一致;检测准确率达100%。

结论本研究建立的Taq Man荧光定量PCR方法的特异性、灵敏度和重复性均好,适用于人腺病毒的日常监测和暴发疫情的应急诊断。

【总页数】3页(P127-129)【关键词】人腺病毒;实时荧光定量PCR;TaqMan探针;hexon基因;检测【作者】姚新华;郭英飞【作者单位】空军司令部门诊部防疫科【正文语种】中文【中图分类】R511.1【相关文献】1.实时荧光定量PCR快速检测百日咳鲍特菌方法学建立及评价 [J], 王慧;罗炜;赖克方2.白色念珠菌ITS2的实时荧光定量PCR快速检测方法的建立及评价 [J], 郭毅;杨靖娴;邵冬华;刘静;梁国威3.鸭腺病毒3型MGB TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 陈翠腾;陈珍;朱春华;蔡国漳;刘斌琼;黄瑜4.Ⅰ群禽腺病毒血清4型TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J], ZHANG Yundan;YANG Yuan;WANG Jun;WEN Ming;ZHOU Bijun;YUE Jun;LI Tao;CHENG Zhentao5.快速检测炭疽杆菌的实时荧光定量PCR方法的建立及评价 [J], 杜清春;董珊珊;丁奕博;张艳;李伟;王鹏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

I 群禽腺病毒（4 型）Fiber-2 蛋白亚单

·研究论文·Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报摘要：为评价I 群禽腺病毒（4型）Fiber-2重组蛋白亚单位疫苗的免疫保护效果，本研究利用FAV-HN 株Fiber-2基因构建pET-30a-Fiber-2重组质粒，转化至BL21感受态诱导表达Fiber-2重组蛋白；Fiber-2蛋白纯化后制备不同抗原含量的亚单位疫苗，免疫SPF 鸡进行免疫效力评价。

结果表明，Fiber-2蛋白部分为可溶性表达，纯化后纯度约90%，AGP 效价达1∶64。

亚单位疫苗抗原含量AGP 效价不低于1∶2时，SPF 鸡免疫后第21 d AGP 抗体10/10阳性，可抵抗Ⅰ群禽腺病毒（4型）强毒株的攻击，提供100%的免疫攻毒保护。

关键词：禽腺病毒；Fiber-2蛋白；亚单位疫苗；免疫攻毒保护中图分类号：S859.797 文献标志码：A 文章编号：1674-6422（2022）06-0077-06Immunogenicity of a Subunit Vaccine of Fiber-2 Protein against Fowl AdenovirusSerotype 4 of Group IDU Dongying 1, SHENG Dongbei 1, HUO Huanyan 1, DUAN Jialei 1, WANG Mengyue 1, TAN Jingming 2,CHEN Yuming 2, HU Penghui 2, LIU Wujie 1, TIAN Kegong 1(1. National Research Center for Veterinary Medicine, Luoyang 471000, China; 2. Bureau of Changsha Administration and ComprehensiveLaw Enforcement in Agricultural, Changsha 410205, China)收稿日期：2022-01-13基金项目：郑洛新自创区创新引领型产业集群专项（201200211200）；云南省田克恭专家工作站（2019IC062）作者简介：杜东颖，女，兽医师，硕士，主要从事禽病毒病疫苗研究；盛东北，男，兽医师，本科，主要从事禽病毒病疫苗研究通信作者：刘武杰，E-mail：***************；田克恭，E-mail：**************I 群禽腺病毒（4型）Fiber-2蛋白亚单位疫苗免疫效果研究杜东颖1，盛东北1，霍环艳1，段佳蕾1，王孟月1，谭镜明2，陈宇明2，胡鹏辉2，刘武杰1，田克恭1（1.国家兽用药品工程技术研究中心，洛阳471000；2.长沙市农业综合行政执法局，长沙 410205）2022,30(6):77-82Abstract: To evaluate the immunogenicity of a subunit vaccine prepared with the recombinant Fiber-2 protein, the Fiber-2 gene of the FA V-HN strain was cloned into the pET-30a vector and recombinant pET-30a-Fiber-2 plasmid was constructed and transformed into BL21 for protein expression. After puriﬁ cation of Fiber-2 protein, subunit vaccines with different antigen doses were prepared for immunization of SPF chickens. The results showed that the recombinant Fiber-2 protein with a purity of about 90% was obtained and the AGP titer was 1: 64. When the AGP titer of the subunit vaccine antigen content was not less than 1:2, all immunized 10 SPF chickens produced antibodies at 21 days post immunization and resisted the challenge of the virulent strain of avian adenovirus type 4 (type 4).Key words: Avian adenovirus; Fiber-2 protein; subunit vaccine; protection· 78 ·中国动物传染病学报2022年12月鸡肝炎-心包积液综合征（h e p a t i t i s-hydropericardium syndrome, HHS）是由血清4型禽腺病毒（Flow adenovirus serotype 4, FAdV-4）引起的高致病性传染病[1]，该病首次在巴基斯坦的安卡拉地区发生，随后陆续在美国、印度、韩国等地区流行[2-5]，HHS可感染不同品种的鸡，临床剖检特征性病变主要包括心包积液，肝脏肿大、颜色变浅等[6-8]。

一起来航鸡感染禽4_型腺病毒的诊断

4532023一起来航鸡感染禽4型腺病毒的诊断何晖福建省农业农村厅福州350003摘要2021年9月，福建省某鸡场存栏的2000羽来航鸡出现大批量死亡，患鸡于35日龄发病，发病率约50%，病死率达70%，结合流行病学特点、病死鸡的剖检病变和病原学检测确定该鸡群感染禽4型腺病毒（FADV-4）。

关键词来航鸡禽4型腺病毒诊断文献标识码：B文章编号：1003-4331（2023）03-0101-02禽腺病毒（FADV）是一种能够感染鸡、鸭、鹅等家禽以及火鸡、雉鸡、野鸭、麻雀等野生禽类较为常见的传染病病原之一，病毒粒子无囊膜，直径大小为60~90nm，属于腺病毒科禽腺病毒属[1]。

根据抗原性的不同，禽腺病毒可分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ共3个群[2]，不同群在致病性、抗原性、血凝特性、血清学特性方面差异较大。

目前我国鸡群流行的Ⅰ群FADV主要是禽4型腺病毒[1]，该病毒主要侵害肉用仔鸡[3]，是引起心包积液-肝炎综合征（HPS-IBH）的主要病原[4]。

2021年9月初，福建省某养殖场饲养的35日龄来航鸡出现突然死亡，患鸡翅膀下垂，羽毛蓬松，呼吸困难，剖检可见发病鸡主要表现为心包积液、肝脏肿大出血并伴有坏死点或出血点等。

无菌采集病死鸡的心脏、肝脏等脏器进行病原学检测，最终确定该场鸡群为禽4型腺病毒感染，现将该病的诊治总结报道如下。

1发病情况与临床症状2021年9月初，福建省某来航鸡养殖场的雏鸡饲养至35日龄时开始发病，患鸡主要表现为翅膀下垂，羽毛蓬松，呼吸困难，排黄绿色稀粪，发病3d后开始出现大量死亡，发病率近50%、病死率高达70%。

部分患鸡临死前表现角弓反张等神经症状。

2剖检病变剖检病死鸡，可见心肌肿大，有明显的淡黄色且澄清的心包积液；肝脏充血肿大，表面有坏死点或出血点；肺脏瘀血水肿；肾脏肿大，有尿酸盐沉积；气囊壁浑浊，气管内有黏性分泌物。

3病原检测无菌采集病死鸡的心脏、肝脏、肺脏、肾脏等组织，剪碎、加PBS研磨并反复冻融后，离心取上清，按照核酸提取试剂盒说明书提取核酸。

Ⅰ群禽腺病毒血清4型的分离鉴定及不同代次细胞毒的序列分析

Ⅰ群禽腺病毒血清4型的分离鉴定及不同代次细胞毒的序列分析禽腺病毒（Fowl Adenovirus,FAdV）属于腺病毒科、禽腺病毒属。

以限制性酶切图谱以及血清学交叉中和反应性为依据,目前FAdV可以分成5个种（A-E）,12个血清型（血清型1-7,8a、8b、9-11）。

流行病学的研究发现,FAdV广泛分布于世界范围内,并易感于不同日龄的家禽。

其中,Ⅰ群血清4型禽腺病毒（Fowl Adenovirus serotype 4,FAdV-4）主要能引起鸡的“心包积液-肝炎综合征”（Hydropericardium hepatitis syndrome,HHS）,该病最早于1963年在美国被发现,随后便流行至全球各个国家。

自2013年起,我国的多个省份也相继爆发由FAdV-4感染所引起的HHS,对国内鸡类养殖造成了严重的经济损失。

为了解FAdV-4在山东省的流行情况及其演变进化规律,本研究对自山东多个鸡场分离到的FAdV-4毒株开展了相关研究,主要内容如下:1.FAdV-4的分离鉴定和全基因组测序分析本研究收集了山东省内不同来源的19份疑似感染FAdV-4病鸡的肝脏,首先通过聚合酶链式反应（PCR）扩增Hexon基因,并对扩增产物进行测序分析。

测序结果显示,19份病料均可检测到FAdV-4的存在。

随后,选取其中一份病料,研磨过滤后通过卵黄囊途径接种SPF鸡胚,分离到一株Ⅰ群血清4型禽腺病毒并将其命名为SDTA1512株。

通过不同引物的设计对不同基因区域进行了扩增和克隆测序,对得到的基因片段进行拼接获得了其全基因组。

将该序列与不同参考毒株进行序列对比,结果显示本次分离株与HB1510和JSJ13全基因组同源性最高,而与其它国家分离株同源性较低。

最后,将分离株SDTA1512通过腹腔接种1日龄SPF雏鸡,同时设对照组,研究了该病毒的致病性。

结果显示,攻毒组鸡只在接种病毒后,出现精神沉郁,翅膀下垂,羽毛蓬乱等临床症状。

4株禽腺病毒的鉴定和分析

4株禽腺病毒的鉴定和分析作者：胡晓苗潘孝成张丹俊赵瑞宏戴银潘孝成侯宏艳沈学怀尹磊来源：《农业灾害研究》2019年第06期摘要 [目的]对六安、郭河、宣城、肥西某养殖户送检的疑似腺病毒的病料进行分离鉴定，为进一步鉴别、预防和控制疾病提供科学的理论依据。

[方法]首先采集病例中鸡的肝脏，提取病毒DNA，根据Genbank已登录腺病毒的hexon基因设计引物，通过PCR检测病料中腺病毒，对扩增的序列进行连接转化和阳性克隆子筛选，并对扩增到的序列进行测序鉴定，最后将获得的基因序列构建进化树分析确定安徽省部分地区禽腺病毒血清型。

[结果]临床中疑似腺病毒感染的主要症状为心包积液和肝脏肿大，用设计的引物均检测出大小为599 bp的目的基因條带，序列比对结果发现，此次检测的腺病毒均为4型腺病毒。

[结论]试验建立了快速检测禽腺病毒的方法，为安徽省地区禽腺病毒防控提供了理论依据。

关键词禽腺病毒;hexon;测序;血清型鉴定中图分类号：S852.65 文献标识码：A 文章编号：2095-3305（2019）06-018-03DOI： 10.19383/ki.nyzhyj.2019.06.008Identification and Analysis of Four Avian Adenovirus StrainsHU Xiao-miaoet al（Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine， Anhui Academy of Agricultural Sciences， Hefei， Anhui 230031）Abstract [Objective] The suspected adenovirus samples from a farmer in Lu’an， Guohe，Xuancheng and Feixi were isolated and identified， which provided a scientific theoretical basis for further identification， prevention and control of diseases. [Method] Firstly， the chicken liver was collected， the virus DNA was extracted， and the primers were designed according to the hexon gene of the adenovirus that GenBank had registered. The adenovirus was detected by PCR， the amplified sequence was transformed and the positive clone was screened， and the amplified sequence was sequenced and identified. Finally， the obtained gene sequence was constructed and analyzed by evolutionary tree to determine the fowl adenovirus serotype in Anhui Province.[Result] In clinical practice， the main symptoms of adenovirus infection were pericardial effusion and liver enlargement. The designed primers were used to detect the target gene band with a size of 599 bp. Sequence comparison results showed that all the tested adenoviruses were type 4adenoviruses.[Conclusion] The method of rapid detection of avian adenovirus was established，which provided a theoretical basis for the prevention and control of avian adenovirus in Anhui Province.Key words Avian adenovirus;hexon;Sequencing;Serotype identificationIdentification and Analysis of Four Avian Adenovirus StrainsHU Xiao-miaoet al（Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine， Anhui Academy of Agricultural Sciences， Hefei， Anhui 230031）Abstract [Objective] The suspected adenovirus samples from a farmer in Lu’an， Guohe，Xuancheng and Feixi were isolated and identified， which provided a scientific theoretical basis for further identification， prevention and control of diseases. [Method] Firstly， the chicken liver was collected， the virus DNA was extracted， and the primers were designed according to the hexon gene of the adenovirus that GenBank had registered. The adenovirus was detected by PCR， the amplified sequence was transformed and the positive clone was screened， and the amplified sequence was sequenced and identified. Finally， the obtained gene sequence was constructed and analyzed by evolutionary tree to determine the fowl adenovirus serotype in Anhui Province.[Result] In clinical practice， the main symptoms of adenovirus infection were pericardial effusion and liver enlargement. The designed primers were used to detect the target gene band with a size of 599 bp. Sequence comparison results showed that all the tested adenoviruses were type 4adenoviruses.[Conclusion] The method of rapid detection of avian adenovirus was established，which provided a theoretical basis for the prevention and control of avian adenovirus in Anhui Province.Key words Avian adenovirus;hexon;Sequencing;Serotype identification禽腺病毒（Fowl adenovirus，FAV）属于腺病毒科禽腺病毒属，主要寄生于禽类的眼、上呼吸道、肝、肾、生殖道和消化道内，但以隐性或不显性感染为主，一旦机体受到应激反应或其他疾病感染时，病毒就会很快发生反应而产生致病性，同時也可以作为原发性病原引起其他疾病的继发感染。

一株禽腺病毒4_型病毒分离与鉴定

1.2
试剂和试剂盒
DL-2 000 DNA Marker、Premix Taq 和 pMD18-T
病毒 1~7 型（FAV1~7）、禽腺病毒 8a 型（FAV8a）、禽
载体，购自宝生物工程（大连）有限公司；Simply P
等 12 个不同血清型[ 2 ]，其中 FAV4、FAV11、FAV8a
限公司；质粒小量提取试剂盒、琼脂糖凝胶 DNA
离，成功分离到一株 FAV4 病毒，扩增所分离病毒 hexon 基因部分序列，测序结果与 GenBank 上的 FAV4 hexon 基因
（登录号：EF554403）相似性为 100%。分离病毒盲传 3 代，测定的 ELD50 为 104.5/0.2 mL，以 0.2 mL·只-1 的剂量胸部
肌肉注射 30 日龄 SPF 鸡 5 只，4 d 内鸡只全部死亡，病变与临床剖检病死鸡相似。取病死鸡肝脏制备组织灭活疫
positive, and a strain of FAV4 virus was successfully isolated using the treatment solution. The partial sequence of
the isolated virus hexon gene was amplified, and the sequencing results showed 100% similarity with the FAV4
长情况。
2.3
[7]
征既能水平传播又能垂直传播，鸡感染后可长期
带毒，并不定期排毒，是危害养禽业健康发展的
[8]
重要疾病之一，该病无明显的季节性，全年均可
发病。
2022 年 8 月份，滨州市滨城区周边某肉鸡场暴

禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法

禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法1、范围禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测的操作方法，适用于活禽及其产品中禽流感病毒的检测。

2、缩略语缩略语:荧光RT-PCR，荧光反转录-聚合酶链反应。

Ct值，每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。

RNA，核糖核酸。

DEPC，焦碳酸乙二酯。

PBs，磷酸盐缓冲盐水。

Taq酶，TaqDNA聚合酶。

3、原理禽流感病毒各亚型均属A型流感病毒，根据A型流感病毒共有基因特定的序列，合成一对特异性引物和一条特异性的荧光双标记探针。

该探针与禽流感病毒特有的共同基因特异性结合，结合部位位于引物结合区域内。

探针的5’端和3’端分别标记不同的荧光素，如5’端标记FAM荧光素，它发出的荧光能够被检测仪器接收，称为报告荧光基团(用R表示)，3’端一般标记TAMRA荧光素，它在近距离内能吸收5’端报告荧光基团发出的荧光信号，称为淬灭荧光基团(用Q表示)。

当PCR反应在退火阶段时，一对引物和一条探针同时与目的基因片段结合，此时探针上R基团发出的荧光信号被Q 基团所吸收，仪器检测不到R所发出的荧光信号;当PCR反应进行到延伸阶段时，Taq酶在引物的引导下，以四种核苷酸为底物，根据碱基配对的原则，沿着模板链合成新链;当链的延伸进行到探面结合部位时，受到探针的阻碍而无法继续，此时的Taq酶发挥它的5’→3’外切核酸酶的功能，将探针水解成单核苷酸，消除阻碍，与此同时标记在探针上的R基团游离出来，所发出的荧光再不为Q所吸收而被检测仪所接收;在Taq酶的作用下继续延伸过程合成完整的新链，R和Q 基团均游离于溶液中，仪器可继续检测到R所发出的荧光信号。

4材料与试剂4.1仪器与器材荧光RT-PCR检测仪高速台式冷冻离心机(离心速度12000r/min以上)台式离心机(离心速度3000r/min)混匀器冰箱(2℃~8℃和-20℃两种)微量可调移液器(10L、100uL、1000uL)及配套带滤芯吸头Eppendorf管(1.5mL)4.2试剂除特别说明以外，本标准所用试剂均为分析纯，所有试剂均用无RNA酶污染的容器(用DEPC水处理后高压灭菌)分装。

血清4型禽腺病毒对SPF鸡的致病特性及其排毒规律

52中国兽医杂志2020年(第56卷)第10期Chinese Journal of V eterinaj Medicine血清4型禽腺病毒对SPF鸡的致病特性及其排毒规律殷国政，王凯莉，刘成，路建彪，吴昊，李玉保，司振书(聊城大学农学院，山东聊城252059)摘要:为研究血清4型禽腺病毒(FAdVP)的致病性及传播途径，采用FAdVP分离株(SDLC201601"人工感染SPF鸡,利用病学及PCR方法,检测感染组鸡器官的病理学变化、病毒在器官的分布及排毒情况。

，感染组鸡与未感染同居组鸡分别在感染后3d和4d死亡,且死亡率均为60%&感染组死亡鸡肝脏、心脏、肺脏及肾脏等器官病变;感染组死亡鸡的肝脏、心脏、脾脏、胰、小肠、肾脏等脏器均检测到该病毒阳性;感染组鸡于感染后3d泄殖腔拭子检测病毒阳性,感染后7d头拭子检测病毒阳性。

，该病毒株感染性强，具一定的泛嗜性，致死率高，水平传播能力强，泄排毒是其最的排毒，做好排泄物的消毒控制该病尤为％关键词:血清4型禽腺病毒；心-肝炎征；病学；排毒中图分类号：R511.8文献标志码:A文章编号：0529—6005(2020)10—0052—03Pathogenicity and Excretion of Serotype4Fowl Adenovirus inSpecific Pathogen Free ChickensYIN Guv-zheng，WANG Kyi-Ji，LIN Cheng，LU Jian-biav，WU Hav，LI Yu-bav，SI Zhen-shu(Institude of Ag/culture，Liaocheng University，Liaocheng252059，China) Abstraci:To evvluate the pathogenicity and transmission mechanism of serotype4fowl adenovirus(FAdVP)，the FAdVP strain (SDLC201601)wasused ioineeciSPFchickensaoiieiciay.Hisiopaihoogica,changes，and viousii s uedisioibuiion and eicoeiion weoedeiecied byihemeihodsoehisiopaihoogyand PCR.Deaihsoccu o ed ai3and4daysaeieoineeciion in ineecied gooup and in ihe gooup unineecied buiived iogeiheo，oespeciivey，and ihe mo oia i iy oa ie was60%.The main auiopsy esionsweoeobseoved in iveo，heaoi，,ungand kidneyin ihedead chickens.DNA oeFAdV-4waseound in vaoiousvisceoaoeihedead chickenseoom iheineecied gooup，inc,uding iveo，heaoi，sp een，pancoeas，sma,iniesiineand kidney.DNA oeFAdV-4wasdeiecied in coacaswab oeineecied gooup chicken eoom3daysaeieoineeciion and in ioachea,swab eoom7daysaeieoineeciion.Theoesu isshowed ihaiihevioussioain was highly pathogenic，pantmpicaCy，highly lethaCty rate and strong ho/zontal transmission.The cloacal was the most important way of eicoeiion.Topoeveniihedisease，disineeciion oeeicoeiaispaoiicueaoe impooiani.Key wordt:serotype4fowl adenovirus；HHS；pathological histology；excretionCorresponding authort:LI Yu-bao，E-mail:***************.cn；SI Zhen-shu，E-mail:**************禽腺病毒(Fowl adenovims，FAdV)属于腺病毒科(AdenoviTdav)，禽腺病毒属(Aviadenovirus)%根据限制性酶切和交叉中和试验将其分为5个种(FAdV琼〜FAdVP)和12个血清型(FAdVP〜8a，收稿日期：2019—03—04基金项目：山东省自然科学基金(ZR2016CM40)；聊城大学博士启动基金(318051310)&聊城大学科研基金(318011503)；国家大学生创新创业训练项目(201610447031)；山东省重点研发计划(公益类)项目(2019GNC106082)作者简介:殷国政(1991-)，男，硕士生,从事家禽疫病诊断与防控技术研究工作，E-mail:1029165099@通讯作者:李玉保，E-mail：1i yuboo@；司振书，E-mail: **************8b~FAdV-11)[1]，其中FAdVP可引起鸡心包积液-肝炎综合征(Hydmpe/cardium-hepatitis syndmma，HHS)O1987年巴基斯坦的报道了该病,主要病为心和肝脏性坏死[2]o2015年以来HHS在我国河南、河北、山东、江苏、、广东等地和流行，鸡业带了的经济损失魚。

鸡鸭鹅A型禽腺病毒的PCR检测和分析

鸡鸭鹅A型禽腺病毒的PCR检测和分析张明明;钱琨;王小辉;秦爱建【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2009(017)003【摘要】为了解A型禽腺病毒在家禽中的分布情况,从不同地区外表健康家禽中采集泄殖腔拭子,根据鸡胚致死孤儿病毒(Chicken Embryo Lethal Orphan Virus,CELOV)的全基因组序列设计引物,采用PCR方法扩增了禽腺病毒(Fovl Adenoviruses,FAV)病毒基因组右末端ITR片段和ORF 8片段.结果表明:A型禽腺病毒在家禽中分布比较广泛,鸡群、鸭群和鹅群的阳性率分别为23.8%、51.7%和17.2%.ITR片段扩增产物测序结果表明,禽腺病毒分离株与A型禽腺病毒CELOV、FAV-JS株在ITR片段具有很高同源性,而与FAV-9、火鸡腺病毒A型和鸭腺病毒A型的同源性较低.ORF 8片段扩增产物测序结果表明,分离株的ORF 8的序列与CELOV、FAV-JS株的ORF 8片段也具有高度同源性.【总页数】6页(P39-44)【作者】张明明;钱琨;王小辉;秦爱建【作者单位】扬州大学兽医学院,扬州,225009;扬州大学兽医学院,扬州,225009;扬州大学兽医学院,扬州,225009;扬州大学兽医学院,扬州,225009【正文语种】中文【中图分类】S858.326.591【相关文献】1.Ⅰ群禽腺病毒血清4型TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J], ZHANG Yundan;YANG Yuan;WANG Jun;WEN Ming;ZHOU Bijun;YUE Jun;LI Tao;CHENG Zhentao2.禽腺病毒血清4型纳米PCR检测方法的建立与初步应用 [J], 王利丽; 郑丽; 李富强; 李秀丽; 任卫科; 路超; 张莉; 董志民; 鄢明华3.禽腺病毒血清4型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用 [J], 罗洋洋;李群辉;林丽苗;周庆丰4.禽腺病毒血清4型纳米PCR检测试剂盒的研制及应用 [J], 王利丽;郑丽;田向学;李秀丽;任卫科;路超;张莉;池晶晶;鄢明华5.鸡鸭禽腺病毒感染的血清学检测 [J], 江汉湖;朱琴亚;秦大壮;陆熬芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。