实验二 细菌的人工培养 最后
细菌的人工培养实验报告
细菌的人工培养实验报告细菌的人工培养实验报告一、引言细菌是一类微小而简单的单细胞生物，广泛存在于自然界中的各种环境中。
为了研究和利用细菌，科学家发展出了人工培养细菌的方法。
本实验旨在通过人工培养细菌的过程，观察并学习细菌的生长特性及其对培养条件的响应。
二、材料与方法1. 实验所用材料和仪器：- 细菌培养皿- 细菌培养基- 微量移液器- 试管- 烧杯- 灭菌棒- 显微镜- 显微镜载玻片2. 实验步骤：a. 准备细菌培养基：按照实验所需的培养基配方，称取适量培养基粉末，并加入适量蒸馏水，搅拌均匀，然后用自动压力锅或高压灭菌锅对培养基进行高压灭菌处理。
b. 取出培养基后，将其倒入细菌培养皿中，用灭菌棒均匀涂布于培养皿底部。
c. 从已知细菌菌液中取一定数量，利用微量移液器滴加于培养皿上，注意避免不同菌种之间的交叉污染。
d. 将培养皿封闭，置于恒温培养箱中，控制培养温度和湿度，培养一定时间。
e. 从培养皿中取出一部分菌液，加入试管中，用显微镜观察细菌的形态、结构和数量。
f. 取少量菌液，滴于显微镜载玻片上，用显微镜观察不同放大倍数下的细菌结构。
三、结果与分析在人工培养过程中，通过观察培养皿上的细菌生长情况和显微镜下的细菌形态，我们可以得出以下结果和分析：1. 细菌生长情况：根据培养皿上的观察，我们可以观察到细菌在培养基上形成了不同大小和形状的菌落。
这说明细菌在适宜的培养条件下能够繁殖并形成群落。
2. 细菌形态：通过显微镜观察细菌的形态，我们可以发现不同菌种之间的形态差异。
例如，某些细菌呈现长棍状、圆球状或螺旋状等形态。
这些形态特征有助于我们对不同细菌的识别和分类。
3. 细菌数量：通过观察显微镜载玻片下的细菌液滴，我们可以估算细菌的数量。
我们可以观察到细菌在显微镜下以聚集和单独分散的形式出现。
数量的变化可以反映出细菌的生长速度和代谢活性。
四、讨论通过本实验，我们可以得出以下讨论结论：1. 细菌对培养条件的响应：细菌在不同的培养条件下表现出不同的生长特性。
实验二 培养基的配制和灭菌
实验二培养基的配制和灭菌一、实验目的微生物的生长发育都有一定的营养需要，培养基即人工培养微生物、为其生长发育提供所需营养的基质。
培养基配好后必须经过灭菌方能用于分离培养微生物试验，因此培养基的配制和灭菌是植物病理实验室中最基本的工作，通过本次实验学习植病实验室中常用培养基的配制方法和高压灭菌锅的使用方法。
二、内容、材料和方法(一)培养基的配制培养基按组成成分及对这些成分了解的程度分为天然培养基、半组合培养基和组合培养基三类，从物理性质上又分为液体培养基和固体培养基两类，培养基的种类不同，配制方法也有差异，限于时间，本次实验仅配制马铃薯琼脂培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。
1马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）这是植病实验室最常用的培养基(简称PSA)，主要用于植物病原真菌的分离和培养，有时也用于植物病原细菌。
成分：马铃薯200克蔗糖 10~20克琼脂 17~20克加水至1000毫升方法：将马铃薯洗净去皮切块，加水煮沸半小时，用双层纱布滤去薯块，补足水量，加入琼脂，加热熔化，再加糖，待完全化后，乘热用双层纱布过滤分装，塞好棉塞高压灭菌。
马铃薯蔗糖琼脂培养基略带酸性，培养真菌无需调节pH，培养细菌则调节pH至中性，此培养基留作下次实验分离培养病原真菌用，故不必调节pH。
5人分作一组，1、2组各作此培养基500毫升，其中200毫升分装试管，每管约10毫升，灭菌后摆成斜面；其余300毫升，分装在3个250—300毫升的三角瓶中，每瓶装100毫升左右，灭菌后妥善保存，留待下次实验使用。
2肉汁胨培养基（BPA）这种培养基主要用于细菌的分离和培养成分：牛肉浸膏 3克蛋白胨 5~10克蔗糖 10克酵母浸膏 1克琼脂 17~20克加水至 1000毫升方法：先将琼脂加热熔化于大部水中，再将其它各成分用少量水化开加入，调节pH至7，趁热用双层纱布过滤，分装，塞棉塞高压灭菌。
牛肉浸膏和酵母浸膏十分粘稠，不易称重，称重时用小烧杯盛装，以玻璃棒沾取，故要先称好杯和棒的重量后，再开始沾取浸膏称重，称后将杯和棒上粘着的浸膏洗净于锅中。
实验二.培养基的配制及灭菌
实验二培养基的配制及灭菌一、实验目的：1. 掌握常用培养基的制备方法；2. 了解培养基的成分、类型及特点；3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。
4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。
二、实验原理人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。
培养基的主要成分的详细内容见课本p26~29。
为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。
基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。
在配制母液时应注意防止沉淀产生。
绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要时加入稀酸或稀碱等物质促溶。
各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。
通常使用的浓度单位是mg/L。
配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。
灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。
培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间见课本P32表2ˉ2。
培养基必需保证绝对无菌，否则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生而导致植物死亡。
灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。
（一）、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
微生物试验-细菌的人工培养及形态学检查
实验一 细菌的人工培养
一、细菌在自然界的分布
1.空气中细菌的检查：每班两个血平板，标记 方法：在室内选择一处放一个平皿，揭开皿盖，
暴露放置10min，即盖上皿盖，放入37℃温箱 培养24小时，观察结果。
2.人体表面细菌的检查---手 指（每组1个平皿）
方法：取一普通平皿培养 基，一部分标记“前”， 另一部分标记“后”，然 后将手指在标记“前”的 部分沾一下，洗手后在标 记“后”的部分沾一下。 放入37℃温箱培养24h后 观察细菌的生长情况。
呼吸道咽部常驻菌群种类较多，正常人咽部需氧菌 中，甲型链球菌检出率最高，其次是奈瑟球菌属和表 皮葡萄球菌。
二、 理化因素对细菌的影响
1.物理因素对细菌的影响---紫外线
原理：紫外线主要作用于 DNA，使一条DNA链上相邻 的两个胸腺嘧啶以共价键结合成二聚体，从而干扰 DNA 的复制与转录导致细菌变异或死亡。
3.人体内部细菌的检查--咽喉部
方法：用“咳碟法”进行检查，取一个血琼脂平 皿培养基，打开平皿盖，置于口腔前约 10cm， 对着平皿咳嗽几次，标记时间，姓名，然后放 入37℃温箱培养24h后观察菌落特征。
二、外界因素对细菌的影响：
1.物理因素对细菌的影响 ：
紫外线：全班两份普通平板：一组大肠杆菌， 一组葡萄球菌，比较紫外线对G+，G-的抑制作 用。
满足a充足的营无菌
（三）分类：1、按物理性状
分类：
+0.3~0.5%琼脂
+1.5~2.5%琼脂
半固体培养基 液体培养基
固体培养基
观察细菌动力 大量繁殖细菌 细菌的分离和纯化
短期保存菌种
固体平板培养基
液体培养基
固体斜面培养基 半固体培养基
实验二 细菌的人工培养
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四、细菌的生化反应
IMViC试验 ❖大肠埃希菌 + + - ❖产气杆菌 - - + +
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四、细菌的生化反应 尿素酶试验
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❖原理： 细菌若有尿素酶，能分解培养基中的尿 素产生氨，使培养基变为碱性，酚红指示剂呈深 酒红色。
VP试验
❖ 方法：大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于葡萄糖 蛋白胨水，37℃培养18h～24h后，按每毫升培养 基加入含0.3%肌酸或肌酐的0.1ml 40% KOH溶液， 48℃～50℃水浴2h或37℃ 4h，充分摇动后观察。
甲基红试验
❖ 方法：大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于葡萄糖 蛋白胨水，37℃培养18h～24h后，滴加甲基红指 示剂观察结果。
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四、细菌的生化反应
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枸橼酸盐利用试验
❖原理： 细菌利用铵盐作为唯一氮源，并利用枸 橼酸盐作为唯一碳源时，可在枸橼酸盐培养基上 生长，分解枸橼酸盐生成碳酸盐，并分解铵盐生 成氨，培养基呈碱性反应。
❖ 方法：大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于枸橼酸 盐培养基，37℃培养18h～24h观察。
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二、培养基的制备、种类及细菌的生长现象 细菌的生长现象
1、液体培养基：混浊生长、沉淀生长、菌膜生长 2、半固体培养基：扩散生长、非扩散生长 3、固体培养基：菌落、菌苔
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四、细菌的生化反应
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1、记录细菌的生长现象。 2、记录并分析细菌的生化反应。
微生物学--细菌检验基本技术
• 常用的指示剂：酚红、中性红、溴麝香草酚蓝、溴甲酚紫、 甲基红等
一、培养基
（二）培养基分类
1．按成分分类
• 合成培养基：是人工合成，组分明确，都是无机盐和化学 纯物质组成的培养基 • 天然培养基：也称复合培养基。是指含有化学成分不完全 明了或各批物质的成分很难一致的天然物质所组成的培养基， 如蛋白胨、牛肉膏、肉浸液、鸡蛋、马铃薯等。细菌检验常 用
一、培养基
6．灭菌 • 高压蒸汽灭菌
• 无糖：103．4kPa
121．3℃维持
15~20min
• 有糖： 68．95kPa 115℃ 维持
15min
• 间歇蒸汽灭菌法：血清、牛乳、鸡蛋 • 血清凝固器灭菌
一、培养基
7．质量检验 • 无菌试验：将制好的培养基在35℃温箱培养过夜，判定是否 灭菌合格 • 效果检查：按不同的培养要求，接种相应菌种，观察细菌的 生长、菌落形态、色素、溶血及生化反应等特征，判断培养基 是否符合要求
（2）结果 抗酸性细菌和非抗酸性细菌
三、细菌染色标本的检查-革兰染色
三、细菌染色标本的检查
•未脱色细菌呈红色为抗酸性细菌 •脱色经复染呈蓝色为非抗酸性细菌
三、细菌染色标本的检查
3．其他染色方法
（1）鞭毛染色 （2）荚膜染色
第二节 细菌的培养与分离技术
重点提示
• 培养基的主要成分及作用 • 培养基的种类 • 培养基制备的基本程序 • 细菌接种与培养方法 • 细菌在培养基中的生长现象
2020/2/28
7
常用诊断流程
• 表解法 区别比较复杂细菌，将各种细菌及其多 种
特性列成矩阵表格，使相互区别点十分明显，便于分析 比较
•
肠杆菌科初步分属
微生物免疫学实验报告
1实验内容：2显微镜油镜的使用与保护。
3细菌的形态与结构的观察。
4实验目的：5学会显微镜的使用，重点掌握油镜的使用与保护。
6进一步认识细菌的形态，明确细菌的大小与测量单位。
7熟悉细菌的特殊结构。
8实验材料：显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的基本形态标本、细菌的特殊结构标本。
4实验方法：(1)显微镜油镜的使用与保护显微镜是一种贵重的光学仪器，而油镜又是显微镜的最精密部分，是观察细菌最重要的工具。
因此，要求大家必须熟练地掌握显微镜的使用和保护，尤其是油镜，避免损坏。
1识别油镜：95╳、100╳、HI、OeL。
2对光：自然光用平面反光镜，人工光用凹面反光镜；先用低倍镜对光，次用高倍镜。
对好光源后，染色标本将聚光器升高，光圈放开。
3、调节焦距：选一张细菌染色标本置于载物台上，用推进器固定，用低倍镜先找准物象，再用高倍镜看清物体，于标本上加镜油一滴。
⑴用眼从侧面观察，转动粗螺旋调节器，将油镜头徐徐下降浸入其中，切不可用力过猛，以免损坏油镜。
⑵用左眼从接目镜观察，徐徐向上转动粗螺旋调节器，见模糊物象后，再用细螺旋调节器，直到物象完全清晰为止。
4、显微镜的保护：⑴所有的光学部分结构都不能用手指、普通布擦拭，用过的油镜头应立即先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭，再用干擦镜纸擦去二甲苯，以防二甲苯镜头上的固定胶，致使镜片脱落。
⑵显微镜的光学部分应避免日光直射。
避免接触强酸、强硷、氯仿、酒精。
⑶显微镜用毕，将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒，用软布擦拭各部件后覆盖于接目镜上，双手端平送入镜箱内。
置于干燥处，以防受潮。
(二)细菌形态观察1、细菌的基本形态；球菌：肺炎球菌、脑膜炎球菌、葡萄球菌、链球菌杆菌：大肠杆菌、炭疽杆菌、结核杆菌、白喉杆菌弧菌：霍乱弧菌2、细菌的特殊结构：荚膜：肺炎球菌、产气荚膜杆菌鞭毛：水弧菌（周毛菌）一、实验内容：3细菌标本片的制备（操作）4革兰染色法（操作）二、实验目的：1进一步了解细菌特殊结构在鉴别细菌过程中的实用意义。
(完整版)细菌培养技术
第二节细菌培养检测技术节概述细菌的培养技术是微生物实验中基本技术之一。
大多数细菌均可用人工方法培养，只有将细菌培养出来才能对它进行研究和鉴定知识点导航一.培养基的种类培养基（culture medium）是细菌生长繁殖所需要的各种营养物质的人工制品。
适宜的培养基能使细菌在体外迅速生长繁殖，便于对细菌进行分离和鉴别。
可分为基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧菌用培养基和特殊培养基。
（一）基础培养基只含有细菌生长所需的最基本营养成分，应用最广泛，为制备多种培养基的基础，常见的有肉汤培养基、琼脂培养基。
（二）营养培养基在基础培养基中加入葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有机物，可供营养要求较高的细菌生长需要或增菌用。
如结核分枝杆菌培养基中添加鸡蛋、马铃薯、甘油等。
（三）选择培养基利用不同种类细菌对化学物质的敏感性不同而制成，使分离菌大量繁殖而抑制其它细菌生长的培养基。
培养基中含有的抑制剂能抑制非目的菌生长或使其生长不佳，有利于目的菌的检出和识别。
选择培养基多为固体平板，用于从标本中分离某些特定的细菌。
（四）鉴别培养基培养基中加有某些特定成分，如糖、醇类和指示剂等，用于检查细菌的各种生化反应，以资鉴别和鉴定细菌。
（五）厌氧菌用培养基专性厌氧菌须在无氧条件下才能生长，故需在培养基中加入半胱氨酸、硫乙醇酸钠等还原剂，降低培养基中氧化还原电势，并应与外界空气隔绝，使培养基本身为无氧的环境。
（六）特殊培养基为某些需要在特殊条件下才能生长的细菌培养之用。
如高渗盐增菌培养基、高渗糖增菌培养基、改良Kagan氏培养基等。
二.培养基的制备制备一般培养基的主要过程基本相似，包括调配、溶化、调整pH、过滤、分装、灭菌及检定和保存。
三.细菌检验室的注意事项及无菌技术细菌培养必须随时为防止污染和病原菌的扩散而进行操作，即无菌操作。
细菌检验室的注意事项如下：1．细菌的培养应在接种罩或无菌室内进行。
有条件的实验室可在超净工作台内进行。
实验二培养基的制备消毒与灭菌
编辑课件
培养基配制实验原理
❖培养基是人工配制的适合微生物生长繁 殖或积累代谢产物的营养基质。
❖人工制备培养基的目的，在于给微生物 创造一个良好的营养条件。
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培养基配制要素
❖营养：碳源、氮源、能源、生长因子、 水分和无机盐；
❖适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力； ❖一定的氧化还原电位；
• 当含盐类的液体和含盐的琼脂中大量的盐类泼 洒在工作腔体，要立即换水，冲洗腔体，仔细 擦干锅盖垫圈上的水滴。否则它们会带来腐蚀 和变质。
• 要检查压力表上的指数为“0 Mpa”后才能打 开锅盖。
• 外来物质（金属、液体）不能堵塞通风孔，否 则会引起装置故障、起火、短路。 编辑课件
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过滤除菌
❖ 因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要 高（160～170℃），时间要长（1～2h）， 但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器 皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。
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高压蒸气灭菌
❖ 高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的灭菌锅 内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。 待水蒸气急剧将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气 阀，继续加热。由于水蒸气无法排出，增加了灭菌锅内 的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导 致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌目的。
• 过滤除菌是通过机械作用滤去液体或气体
中细菌的方法。根据不同的需要选用不同 的滤器和滤板材料。
• 此法除菌的最大优点是可以不破坏溶液中
各种物质的化学成分，但由于滤量有限， 所以一般只适用于实验室中小量溶液的过 滤除菌。
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紫外线灭菌
紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。波长为200~300 nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力 最强。
细菌的人工培养实验步骤
细菌的人工培养实验步骤细菌的人工培养实验步骤细菌的人工培养是微生物学研究中非常重要的实验方法，可以用于分离、鉴定和纯化细菌。
下面将详细介绍细菌的人工培养实验步骤。
一、准备实验室设备和材料1. 培养基：根据不同的研究目的选择合适的培养基，如营养琼脂、大肠杆菌选择性琼脂、血琼脂等。
2. 细菌液：从保存在冰箱或冷冻库中的细菌液中取出所需的细菌，并进行预处理。
3. 实验室设备：无菌操作台、离心机、移液器、显微镜等。
4. 无菌操作器具：无菌培养皿、试管、移液器等。
二、制备固体培养基1. 称取所需量的琼脂和其他成分，加入适量的去离子水中溶解。
2. 调整pH值，通常为7.0-7.4。
3. 加热消毒：将琼脂溶液装入无菌试管或烧杯中，用高压灭菌器或自制压力锅进行高温高压灭菌。
4. 倒制琼脂：将琼脂溶液倒入无菌培养皿中，使其均匀分布在培养皿底部。
5. 固化琼脂：将培养皿放置在平板上，待琼脂凝固后即可使用。
三、制备液体培养基1. 称取所需量的营养成分和其他添加剂，加入适量的去离子水中溶解。
2. 调整pH值，通常为7.0-7.4。
3. 加热消毒：将液体培养基装入无菌试管或烧杯中，用高压灭菌器或自制压力锅进行高温高压灭菌。
四、细菌的预处理1. 从冷冻库或冰箱中取出细菌液，并进行预处理。
通常采用离心法将细菌沉淀下来，并用生理盐水洗涤2-3次，以去除残留培养基和代谢产物等。
2. 用显微镜观察细胞形态和数量，并调整浓度至合适的范围。
五、接种细菌1. 无菌操作台上进行无菌操作，将细菌液用移液器均匀地滴在琼脂培养皿表面上。
2. 用火柴头或无菌环将细菌液均匀地涂抹在琼脂表面上。
3. 将培养皿倒置放置于恒温箱中，通常为37℃，并注意标记好培养皿的信息。
4. 观察培养皿中细菌的生长情况，并记录下来。
六、细菌的分离和鉴定1. 根据实验设计和研究目的，选择不同的方法对细菌进行分离和鉴定，如生化试验、药敏试验等。
2. 根据实验结果对细菌进行鉴定，并记录下相关信息。
2-5动物微生物--细菌的人工培养(实验一)
1、3：有动力 2：无动力
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（2）在琼脂斜面上长成菌台。
a丝状
b刺毛状 c念珠状 d扩展状
e树状 f假根状
2、在液体培养基中的生长情况
（1）表面生长：液体清晰，细菌生长在 液面上形成菌膜。 （2）混浊生长：液体均匀混浊或有少量 沉淀。 （3）沉淀生长：液体清晰，细菌生长在 管底，形成沉淀。
三. 细菌在液体培养基中的生长情况
（1）在平板上形成肉眼可见的细菌集团， 称为菌落，观察菌落的大小、形状、边缘、 表面、颜色、溶血等情况。
Colony morphology
¹ ÌÅ à Ñ øÏ ù íµ ± æ Ï ¸Î ú ¾ úÆ ä Ï ¸ ¾ ú ¸» ° û µ Ä çÃ × Ó Ï Ô ¢¾ ¾ µ Í ¼ ¬Â
实验一
细菌的人工培养
一、实验目的
1、掌握平板划线、斜面、液体和半固体 培养基等各种接种方法。 2、熟悉接种细菌用具、接种细菌的环境 要求和无菌操作要领。
3、熟悉细菌在各种培养基的生长现象。
二、实验原理
1、细菌在适宜的生长环境下，如营养、 酸碱度、温度和氧等条件下进行生长繁殖。 2、细菌的分离培养是根据细菌在固体 培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个 细胞繁殖而成的集合体。因此可通过调取单 菌落而获得一种纯培养。
菌膜
对照
菌沉淀
均匀浑浊
3、在半固体培养基中的生长情况 （1）有鞭毛的细菌，由于能运动，在半 固体培养基内沿穿刺线弥漫生长，原来的 穿刺线不清。 （2）无鞭毛的细菌，因不能运动，接种 后仍沿穿刺线生长，穿刺线与周围界限清 晰。
细菌在半固体培养上的培养特征
abd 沿穿刺线生长
cef运动生长
三. 细菌在半固体培养基中的生长情况
实验二细菌的接种、培养及代谢产物
实验二细菌的接种、培养及代谢产物（B a c t e r i a l I n o c u l e t i o n a n d A r t i f i c a l C u l t u r e a n dM e t a b o i c p r o d u c t s）一、细菌的人工培养（A r t i f i c a l C u l t u r e o f B a c t e r i a）在适当条件下，绝大多数细菌可用人工方法培养，使其繁殖，通过人工培养，获得纯种细菌，是进一步观察研究各种细菌具有不同特性的基础。
(一)常用培养基的制备1、肉汤培养基：是常用的液体培养基，也是制备某些其他培养基的基础。
材料：（制备100m l肉汤培养基的用量）(1)培养基的成分：牛肉50g蛋白脂1g氯化钠0.5g磷酸氢二钾(K2H P04·12H20)0.1g蒸馏水100m1(2)玻皿、试剂、比色管、比色架、吸管、1N与1／20N 的N a O H、三角烧瓶、漏斗、中试管、酚红指示剂、滤纸、卷筒、天平、蒸馏水。
方法：（1）将已去筋膜脂肪并经绞碎鲜牛肉50g，加蒸馏水100m l，放入冰箱中过夜。
（2）加热45—50℃一小时，并煮沸半小时，用数层纱布或滤纸过滤，滤液用蒸馏水补足其量为100m1。
（3）于滤液中加氯化钠0.5g，蛋白脂1g、磷酸氢二钾0.1g，加热使之完全溶化。
（4）测定酸碱度并调整至P H7.6，必要时用滤纸过滤。
（5）按需要分装于试管或烧瓶内，加棉花塞并包装后，置高压蒸汽灭菌器内经15磅／寸220—30分钟灭菌。
（6）灭菌后置37℃温箱，孵育24h，无杂菌生长，即可应用。
或放冰箱备用。
2、普通琼脂培养基它是最常用的固体培养基。
材料：肉汤、琼脂方法：(1)在肉汤中加入2％琼脂，熔化后调整P H7.6，必要时用棉花纱布过滤。
(2)于琼脂凝固前，分装于试管或小烧瓶内，然后加棉塞并包装。
(3)放入高压蒸汽灭菌器内，经15磅/寸220分钟灭菌。
细菌的人工培养
任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大营养要素：
碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水
任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理；
常规高压蒸汽灭菌： 1.05kg/cm2,121.3℃15-30分钟；0.56kg/cm2,112.6℃15-30分钟
培养基制备的一般程序
调配
培养基灭菌
★ 基础培养基：121℃高压蒸汽灭菌15分钟
溶化
矫正pH
★ 含糖培养基：113 ℃灭菌15分钟 过滤澄清 ★ 鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次 分装 灭菌 检定 ★ 不耐高温的液体成分：滤过除菌
保存
1、选用和设计培养基的原则和方法
目的明确 营养协调 理化条件适宜
经济节约
1）目的明确
根据不同的微生物的营养要求配制针对强的培养基。
培养化能自养型的氧化硫杆菌的培养基组成为： S 10g MgSO4.7H2O 0.5g NH4)2SO4 0.4g CaCl2 0.25g H2O 1000ml FeSO4 0.01g H2PO4 4g
液体培养基
不加任何凝固剂
大规模工业生产及在实验室进行微生物的 基础理论和应用方面的研究
含有一般微生物生长繁殖所 需的基本营养物质的培养基 按 用 途 不 同 划 分 基础培养基
在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的 一类营养丰富的培养基。特殊营养物质包括血 液、血清、酵母浸膏、动植物组织液等 在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质， 用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体 抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物 中分离出来的培养基 的生长
4）经济节约
以粗代精
以氮代朊
以野代家
以废代好 以简代繁
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细菌人工培养实验报告结论及分析
细菌人工培养实验报告结论及分析一、细菌人工培养实验报告，可以得出以下结论：1、细菌的生长速度和数量受到环境条件的影响。
我们观察到在适宜的温度和营养物供应下，细菌的数量呈指数增长趋势。
然而，过高或过低的温度以及缺乏营养物会抑制细菌的生长。
2、不同的细菌菌株具有不同的生长特性。
我们在实验中采集了几种常见的细菌样本，并观察到它们在相同的培养条件下，生长的速度和数量存在差异。
这表明不同的细菌对于环境条件和营养物需求有所不同。
3、细菌的形态在不同生长阶段可能发生变化。
通过显微镜观察，我们发现细菌在菌落发育的过程中，可能会发生变形、分裂和聚集等现象。
这进一步证明了细菌的繁殖过程是一个动态的过程。
二、实验分析：根据我们的实验结果，可以对细菌的人工培养进行一些分析和讨论。
首先，了解细菌的生长规律和特性对生物学和医学领域都有重要意义。
细菌的繁殖是一种快速且效率很高的方式，因此，细菌的培养也常被用于制备和生产许多重要的生物药物和化学物质。
对于不同细菌的生长条件和需求的了解，有助于优化人工培养的过程和提高生产产量。
其次，了解细菌的生长规律对于预防和控制细菌感染也具有重要意义。
细菌感染是很多疾病的原因之一，因此，了解细菌生长的条件和环境对细菌感染的传播和治疗具有指导作用。
通过人工培养实验，我们可以研究细菌菌株的特性，包括其对不同抗生素的敏感性和抗性等，从而提供更好的防控措施。
最后，细菌的繁殖也与环境污染和食品安全等问题相关。
了解细菌在特定环境下的生长情况有助于预测和控制其对环境和食品的影响。
人工培养实验可以提供基础数据和方法来评估和监测环境中细菌的数量和种类，从而保障公众健康和环境保护。
总之，通过本次细菌人工培养实验，我们不仅加深了对细菌生长特性的理解，还为相关领域的研究和应用提供了有益的信息和方法。
细菌的人工培养研究将继续推动我们对微生物世界的认识和应用的发展。
细菌的培养实验
细菌的培养实验细菌的培养实验是微生物学中的重要实验之一，它帮助我们了解细菌生长的条件以及它们对环境的适应能力。
在本实验中，我们将展示一种常用的培养细菌的方法——琼脂培养法。
实验材料和设备：1. 琼脂培养基2. 细菌液体培养物3. 灭菌的平板、试管、培养皿等4. 灭菌环、移液管、移液枪5. 实验室安全设备，如手套、防护眼镜实验步骤：1. 准备琼脂培养基：将适量的琼脂粉溶解在适量的蒸馏水中，加热煮沸使之完全溶解。
2. 蒸馏水的消毒处理：将蒸馏水倒入试管中，用自动高温高压灭菌器进行高温高压灭菌处理，使其达到无菌状态。
3. 准备试管：取3支无菌试管，用高温高压灭菌器进行高温高压灭菌处理，使其达到无菌状态。
4. 准备移液枪和平板：将移液枪头部进行高温高压灭菌处理，将平板放入高温高压灭菌器中进行无菌处理。
5. 接种细菌：将适量的细菌液体培养物取出并将其移液到无菌试管中，然后将试管倾斜，用灭菌环将液体均匀涂抹在平板上。
6. 培养细菌：将已涂抹细菌的平板放入恒温培养箱中，设定适合细菌生长的温度和时间，让细菌进行培养。
7. 观察结果：在培养时间结束后，取出培养好的平板，观察是否有细菌生长，并记录下细菌的数量和形态特征。
讨论和分析：在实验过程中，我们利用琼脂培养基提供了细菌生长所需的营养物质和适宜的环境条件。
而细菌的液体培养物则作为实验前期的来源，通过适量的接种和平板涂抹，将细菌均匀分布在平板上。
培养箱提供了适宜的温度和湿度条件，促使细菌的生长和繁殖。
实验结果的观察和记录是实验的重要一环，在观察时需要注意细菌的数量、颜色、形状和其他特征。
通过这些观察，我们可以了解到不同细菌对于不同培养条件的反应情况，比如某些细菌在一定条件下会形成菌落，而在其他条件下则可能无法生长。
通过这个实验，我们可以探索细菌生长的规律和影响因素。
并且，细菌的培养实验在医学、食品工业等领域具有广泛应用，它为我们研究和应对细菌感染提供了重要的手段。
细菌的人工培养实验报告
一、实验目的1. 了解细菌人工培养的基本原理和方法。
2. 掌握无菌操作技术，提高实验操作的规范性。
3. 通过观察细菌的生长和繁殖过程，加深对细菌生物学特性的认识。
二、实验原理细菌人工培养是指利用人工配制的培养基，为细菌提供生长繁殖所需的营养和生长条件，使其在体外进行繁殖。
培养基通常含有碳源、氮源、无机盐、维生素等营养物质，以满足细菌的生长需求。
无菌操作技术是防止细菌在培养过程中被污染的关键。
三、实验材料与仪器1. 材料：牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂、无菌水、无菌棉签、接种环、酒精灯、高压蒸汽灭菌器、培养皿、恒温培养箱等。
2. 仪器：电子天平、高压蒸汽灭菌器、显微镜、无菌操作台等。
四、实验步骤1. 培养基的制备与灭菌（1）称取牛肉膏蛋白胨培养基，按照比例加入无菌水，搅拌均匀。
（2）将配制好的培养基分装到培养皿中，每皿约10ml。
（3）将培养皿放入高压蒸汽灭菌器中，121℃灭菌15分钟。
2. 细菌接种（1）用无菌棉签蘸取菌液，在无菌操作台上轻轻涂抹在培养皿的培养基表面。
（2）将接种后的培养皿倒置，放入恒温培养箱中培养。
3. 细菌生长观察（1）在恒温培养箱中培养24小时后，取出培养皿，观察细菌生长情况。
（2）记录细菌生长的形态、大小、颜色等特征。
4. 细菌鉴定（1）使用显微镜观察细菌的形态，记录细菌的形状、大小、排列等特征。
（2）进行生化实验，如糖发酵试验、氧化酶试验等，进一步鉴定细菌种类。
五、实验结果与分析1. 细菌生长情况经过24小时培养，观察到培养皿表面有明显的细菌生长，菌落呈圆形、白色，边缘整齐。
2. 细菌形态观察显微镜下观察到细菌为革兰氏阳性菌，呈球形，排列成链状。
3. 细菌鉴定结果通过糖发酵试验、氧化酶试验等生化实验，鉴定该细菌为金黄色葡萄球菌。
六、实验结论1. 通过本次实验，掌握了细菌人工培养的基本原理和方法，了解了无菌操作技术的重要性。
2. 观察到细菌在人工培养条件下的生长繁殖过程，加深了对细菌生物学特性的认识。
《医学微生物学》细菌的人工培养实验
《医学微生物学》细菌的人工培养实验[目的]1．掌握平板划线法、斜面、液体和半固体培养基等各种接种方法。
2．掌握接种细菌用具、接种细菌的环境要求和无菌操作要领。
3．熟悉常用培养基的原理、种类及其用途。
4．熟悉细菌和二氧化碳培养方法。
5．熟悉常用的厌氧菌培养技术。
6．了解培养基制备的基本过程。
[内容]（一）、培养基制备技术[材料]1．试剂：牛肉膏、氯化钠、蛋白胨、琼脂粉、抗凝绵羊血、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、葡萄糖、乳糖、甘露醇、柠檬酸钠、硫酸镁、磷酸二氢铵、硝酸钾、硫代硫酸钠、柠檬酸铁、硫酸。
亚铁、尿素、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中性红、酚红、lmol ／L NaOH、lmol／L HCl。
2．器材：500ml锥形瓶、500ml量筒、10ml、5ml和lml吸管、精密pH试纸、华氏试管、硅胶塞、天平、高压蒸气器、血清凝固器、脱脂棉、滤纸、漏斗、无菌平皿。
[方法]1．培养基制备的基本过程包括调配成分、溶解、矫正pH、过滤澄清、分装、灭菌、质量检查和保存。
（1）调配成分：按培养基组成准确称取各成份用量，放入锥形瓶或大容量烧瓶中，加一定量蒸馏水，使其充分混合。
应注意染料、胆盐和指示剂等应在矫正pH后加入。
（2）溶解：将调配好的混合物在沸水浴或流动蒸气灭菌器中，使其完全溶解。
不可将培养基装在铜铁容器中加热，因培养基中含铜量超过0.3mg／L时，细菌不易生长；含铁量超过0.14mg／L时可抑制细菌毒素的产生。
（3）矫正pH：一般将培养基的pH调至7.2～7.6左右。
经高压灭菌后其pH可发生0.1～0.2变动。
若用NaOH矫正，高压灭菌后pH下降0.1～0.2；若用Na2CO3矫正，高压灭菌后pH升高0.1～0.2。
（4）滤过澄清：自配的培养基通常有一些混浊或沉淀，需滤过澄清后方可使用。
液体或半固体培养基常用滤纸过滤；固体培养基在熔化后趁热以绒布或双层纱布加脱脂棉过滤。
（5）分装：①基础培养基：一般分装于锥形瓶灭菌后备用，以便随时分装倾注平板或配制营养培养基等；②琼脂斜面：通常在熔化后分装于试管，量约为试管高度的1/4～1/3，加塞后灭菌，趁热摆成斜面，斜面长度约为试管长度的2/3，且保持试管下端1cm柱高；③半固体培养基：分装量为试管量的1/4-1/3，加塞灭菌后趁热直立凝固④琼脂高层培养基：分装量为管长的2/3(接种厌氧菌用)，灭菌后趁热直立凝固；⑤琼脂平板无菌分注：先将灭菌琼脂熔化后冷却至50℃左右，以无菌操作倾注于灭菌平皿内(内径90mm的平皿约13～15min)，水平旋转平皿，待琼脂凝固后将平皿翻转，置4℃保存备用。
实验二 细菌的人工培养 最后
本次实验课结束
作业看结果后由组长收齐交上来，值日同学留 下 再见！
碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水 任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理
高压蒸 汽灭菌
培养基的分类：
按 物 理 状 态 不 同 划 分
固体培养基
在液体培养基中加入一定量凝固剂，使 其成为固体状态，琼脂含量一般为 1.5%-2.0% 固体培养基常用来进行微生物的分离、 鉴定、活菌计数及菌种保藏
1.熟悉培养基的成分、类型和作用; 2.掌握细菌平板划线分离法的原理、 步骤及结果; 3.掌握细菌在液体培养基的三种生长 状态; 4.了解细菌的自然界分布.
细菌的人工培养
一、培养基
概念: 培养基是用人工方法将多种营养物质按 照各类微生物生长的需要而合成的一种混合养料。 任何培养基都应该具备微生物生长所需要六 大营养要素：
细菌在正常人体的分布
人工培养细菌的意义
在医学中的应用：诊断；细菌鉴定；生物制品。
在工农业生产中的应用：细菌在培养过程产生多种代谢
产物，经过加工处理，可制成抗生素、维生素、氨基酸、
有机溶剂、酒、酱油、味精等产品。
在基因工程中的应用：制备出胰岛素和干扰素等生物制
剂。
问题与讨论
1.培养基按物理性状分为几种？决定相应物理性状的物 质是什么？不同物理性状的培养基主要用途如何？ 2.什么是菌落？分离培养时，如何识别琼脂平板上的目 的菌，还是污染的杂菌菌落？ 3.液体培养基中细菌的生长状态有哪几种？各举一例说 明。
在液体培养基中加入一定量凝固剂使其成为固体状态琼脂含量一般为1520固体培养基常用来进行微生物的分离鉴定活菌计数及菌种保藏琼脂含量一般为0305观察微生物的运动特征分类鉴定及噬菌体效价滴定不加任何凝固剂用于增菌大规模工业生产及在实验室进行微生物的研究培养基的分类
细菌的人工培养
菌种: 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌
培养基:
普通平板培养基、斜面培养基、半固体 培养基
12
材
料
接种环、接种针 13
材
料
普通平板培养基
斜面培养基 半固体培养基 (2-3%琼脂) (0.2-0.5%琼脂14 )
材料分配
分组 菌种
培养基
两人一组 一位取金葡菌，另一位取大肠杆菌
一块普通平板/每人 一支斜面培养基/每人 一支半固体培养基/每人
实验二 细菌的人工培养
1
目的
1.掌握接种细菌用具、接种细菌的环境要求 和无菌操作要领。 2.掌握平板划线法、斜面和半固体培养基等 各种接种方法。 3.熟悉常用培养基的原理、种类及其用途。 4.了解培养基制备的基本过程。
2
细菌人工培养目的
感染性疾病的病原学诊断
鉴定细菌, 指导临床用药。
细菌学研究
菌种的目的，第一区和最后一区划线是否 可以相接？ 斜面纯培养为何先划一条直线? 为何在进行半固体培养时，接种针不可穿刺 到底部?
20
用于细菌生理、遗传变异、致病性
和耐药性等研究。
生物制品的制备
疫苗、抗毒素等的制备。
3
细菌人工培养基本步骤
制备培养基
ห้องสมุดไป่ตู้
接种
培养
4
培养基的种类
根据营养组成和用途可分为 基础、增菌、选择、鉴别、厌氧 根据物理状态分为 液体、固体、半固体
5
普通平板
血平板
6
培养基的制备
调配成分
溶解
矫正pH
质量检 查和保存
15
实验流程
领取菌种 及培养基
分别进行平板、 斜面及半固体培 养基接种, 然后 贴上标签。
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图4-2
平板划线分离法
1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法
斜线(分区)划线分离法
1、以无菌操作用接种环取待分离纯化的菌液，将菌液点种在平板 边缘一处，取出接种环，烧去多余的菌种。 2、将接种环再次通过稍打开皿盖的缝隙（约45度角）伸入平板， 在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却,然后从接种有菌的部位 在平板上自左向右轻轻划线。 3、划线时平板面与接种环面成30-40度角，以手腕力量在平板表 面轻巧滑动划线, 线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意 勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上皿盖.灼烧接种环。
本次实验课结束
作业看结果后由组长收齐交上来，值日同学留 下 再见！
碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水 任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理
高压蒸 汽灭菌
培养基的分类：
按 物 理 状 态 不 同 划 分
固体培养基
在液体培养基中加入一定量凝固剂，使 其成为固体状态，琼脂含量一般为 1.5%-2.0% 固体培养基常用来进行微生物的分离、 鉴定、活菌计数及菌种保藏
微生物学实验
实验二 细菌的人工培养
实验内容和要求
1.熟悉培养基的成分、类型和作用; 2.掌握细菌平板划线分离法的原理、 步骤及结果; 3.掌握细菌在液体培养基的三种生长 状态; 4.了解细菌的自然界分布.
细菌的人工培养
一、培养基
概念: 培养基是用人工方法将多种营养物质按 照各类微生物生长的需要而合成的一种混合养料。 任何培养基都应该具备微生物生长所需要六 大营养要素：
斜线(分区)划线分离法
4.用接种环先将培养物涂布于平板1区并作数次划线,再在2、 3……区依次划线。 5.每划完一个区域，均将接种环灭菌一次，待冷后再划下一区域 6.每一区域的划线均接触上一区域的接种线1~2次，使接种量逐 渐减少，以获得单个菌落。其他操作与上述曲线划线分离法相 同。
平板划线分离法
细菌在正常人体的分布
人工培养细菌的意义
在医学中的应用：诊断；细菌鉴定；生物制品。
在工农业生产中的应用：细菌在培养过程产生多种代谢
产物，经过加工处理，可制成抗生素、维生素、氨基酸、
有机溶剂、酒、酱油、味精等产品。
在基因工程中的应用：制备出胰岛素和干扰素等生物制
剂。
问题与讨论
1.培养基按物理性状分为几种？决定相应物理性状的物 质是什么？不同物理性状的培养基主要用途如何？ 2.什么是菌落？分离培养时，如何识别琼脂平板上的目 的菌，还是污染的杂菌菌落？ 3.液体培养基中细菌的生长状态有哪几种？各举一例说 明。
菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉 眼可见的细菌集团。菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、 表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性。 菌落类型：S型、R型、M型菌落。 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。
菌苔
（2） 细菌在半固体培养基中的生长现象
无鞭毛的细菌沿穿刺线生长，穿刺线清晰； 有鞭毛的细菌则沿穿刺线向周围扩散生长，穿刺线模糊不清。 经常用于做用于检查细菌的动力。
鉴别培养基
特殊培养基
如厌氧培养基。用于厌氧菌的培养。
细菌的人工培养
二、细菌的接种技术
分离培养接种法——平板划线法、平行划线法 纯种细菌接种法 ——固体斜面培养基接种法 液体培养基接种法 半固体培养基接种法
细菌分离培养接种法的原理
根据机械分离 作用，在无菌培养 基中从混杂的标本 中分离出所需的单 个细菌生长繁殖所 形成的菌落。
半固体培养基
琼脂含量一般为0.3%-0ຫໍສະໝຸດ 5% 观察微生物的运动特征、分类鉴定及
噬菌体效价滴定
液体培养基
不加任何凝固剂
用于增菌，大规模工业生产及在实验 室进行微生物的研究
固体培养基
液体培养基
半固体培养基
培养基的分类：
含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物 。比如 肉汤培养基。
基础培养基
在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的 一类营养丰富的培养基。如血琼脂培养基。
操作要领： ① 无菌操作。 ② 无划破琼脂。 ③ 前后两条线密而不重叠。 ④ 做好标记，第二天观察结果
纯种细菌接种法
固体斜面培养 液体培养基接种 半固体培养 基接种 基穿刺接种
图 斜面接种时的无菌操作 (1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞
（1）细菌在固体培养基中的生长现象
按 用 途 不 同 划 分
营养培养基 选择培养基
在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学 物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于 所需微生物的生长。用来将某种或某类微生 物从混杂的微生物群体中分离出来。如SS琼 脂培养基。 利用细菌代谢产物不同而使指示剂显色反应 不同的原理，鉴别和鉴定细菌。如麦糠凯琼 脂培养基。
（3）细菌在液体培养基中的生长现象
不同细菌在液体培养基中生长繁殖可出现均匀混浊、沉淀 （多见于链状排列的细菌）和形成菌膜（专性需氧菌）三种现 象，临床应用的澄清透明的注射液若发现上述任何一种现象， 均表明已被细菌污染，禁止使用。
菌膜 对照
菌沉淀
均匀浑浊
细菌的分布
细菌在自然界的分布
土壤中的细菌 水中的细菌 空气中的细菌