菌体收集与干燥

5.3 干燥失重
按仪器方法测定，除另有规定外，芽孢菌制品的减失重量
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5.4 活菌数测定
活菌数应大于等于200亿个活菌/克
无菌称取3.0g菌粉（胶囊取内容物），加入27.0ml稀释液中，充分摇 匀，做10倍系列稀释（最终稀释度根据不同的指标要求而定）。取最终稀 释度的菌液100μl，滴入选择性琼脂培养基平皿上，共做3个平皿，并以玻 棒涂布均匀，置适宜条件下培养，到期观察每个平皿菌落生长情况，并计 数。当平皿菌落数小于10或大于300时，应调整最终稀释度，重新测定。 根据3个平皿菌落总数按下列公式计算活菌数：
溶性淀粉按下述重量比混合：原菌粉2份，乳糖10份、可
溶性淀粉88份，并充分搅匀，其中上述菌粉混合物的活菌
数控制在≧1×108个活菌数/克。将菌粉混合物置于胶囊灌
装机内罐装，压板、包装，制成枯草芽孢杆菌胶囊制剂，
其中每粒胶囊为0.25克/粒。
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成品鉴定
•7.1 鉴别试验
•7.2 理化检查 （外观、干燥失重、装量差异 、崩解时限）
菌体收集与干 燥
将培养到期的培养物（要求生孢率达90%以上）经过 纯菌试验，确认无杂菌污染。将上述培养物4000rpm/min 转速离心20分钟，弃上清，收获湿菌体。将湿菌体与无水 碳酸钙以1：3（重量比）混合搅拌成湿菌粉。在70~80℃ 条件下干燥，并研磨、过筛制成粉末状菌wk.baidu.com。
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•5.1 外观
量应不得超过7.0%。
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7.2.3 装量（重量）差异
胶囊剂的装量差异限度：0.3g以下在±10％以 内
取供试品20粒，分别精密称定质量后，倾出内容物（不 能损失囊壳），硬胶囊壳用小刷或其他事宜的用具（如棉签） 拭净，再分别精密称定囊壳质量，求得每粒内容物装量与平 均装量。每粒装量与平均装量相比，超出限度差异的胶囊不 得多于2粒，并不得有1粒超出装量差异限度的1倍。
•7.3 活菌数测定
•7.4 安全试验
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7.1 鉴别试验 检查成品中所含的目的菌是否符合生产用菌种
的特性。即按上述“种子批的检定”方法进行生长 特性、染色镜检和生化反应检查，应符合规定。
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7.2 理化检查
7.2.1 外观 胶囊剂内粉末的粒子大小、色泽应均匀，间有菌粉色斑。
7.2.2 干燥失重 按仪器方法测定，除另有规定外，芽孢菌制品的减失重
活菌数（CFU/g）=3个平皿菌落数之和/3*10*最终稀释度
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【附注】 （1） 活菌数用“CFU”表示，即为细菌集落单位。 （2） 稀释液使用灭菌生理氯化钠溶液或其他适宜的稀释 液。 （3） 选择性琼脂培养基，是指最适宜制剂（或菌粉）中 活菌生长的培养基。须经批准后方可使用。
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胶囊制备
将上述原菌粉与灭菌过筛（筛孔为80目）地乳糖、可
菌粉的鉴 定
•5.2 目的菌检验
•5.3 干燥失重
•5.4 活菌数测定
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5.1 外观
采用肉眼观察，应为白色，灰白色或灰黄色粉末。
5.2 目的菌检验
取少量菌粉加入适量灭菌生理氯化钠溶液或其他适宜稀释 液以后，涂布在适宜的琼脂平皿上，在适宜条件下培养，其 培养物的生长特性和染色镜检的特征应符合生产用菌种特征。
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7.2.4 崩解时限
硬胶囊或软胶囊，除另有规定外，取供试品6粒，按 片剂的装置与方法进行检查（使用崩解篮）。硬胶囊应在 30分钟内全部崩解并通过筛网（囊壳碎片除外），如有1 粒不能完全崩解，应另取6粒复试，均应符合规定。
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7.3 活菌数测定 见“菌粉”的活菌测定
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7.4 安全试验
安全试验是通过动物试验进行的非特异性毒性检查，应根据 制品的使用途径和人用剂量确定试验方法。
肠道微生态活菌制品检查 ：称取2g制品，加入8ml生理氯化
钠溶液中，混合均匀。用5只体重18~22g小鼠，每只小鼠经口灌
胃0.5ml，每天1次，连续3天。自第1天灌胃起，连续观察7天，小
鼠应健康存活、体重增加，判为合格。如不合格，可另选10只小
鼠复试1次，判定标准同前。
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