血型分子诊断技术进展与应用
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–几个位点以外的核苷酸变化引起的ABO血型亚型常会 引起检测结果的偏差
• 发现的等位基因数为290个（2012年05月22日）
血型分子诊断技术进展与应用
A等位基因
• 可简要分为7大类等位基因 • A1、A2、A3、Ax、Ael、Aw、Am
• A101等位基因序列作为参照标准 –A102(C467T)（在中国人群中比例大于A101) –A103(C467T,C564T) –A104(A297G) –A105(A297G,B-O1重组) –A106(B-O02重组) –A205(A1009G )
• A101、A102、B101、O01、O02 • A101作为参考序列 • A102等位基因 C467T(Pro-Leu)
• B101基因在297、526、657、703、796、803、930、1096位 有8个核苷酸与A101基因不同
– 但只有526、703、796、803四ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ核苷酸的变化造成了氨基酸序列
血型分子诊断技术进展与应用
B等位基因型
• 可简要分为5大类等位基因 • B1、B3、Bx、Bel、Bw • B等位基因中297、703、796、803位基本恒定
• B101-B118 –B101:A297G;C526G;C657T;G703A;C796A;G8
03C;G930A;G1096A
• B301-B308 –B301:A297G,C526G,C657T,G703A,C796A,
• 缺失 • 插入 • 重排
血型分子诊断技术进展与应用
有关分子生物学概念
• 基因结构异常或表达异常 • 点突变 • 插入 • 缺失 • 易位和重排 • 拷贝数扩增 • DNA多态性 • 基因的检测
血型分子诊断技术进展与应用
常见突变示意图
• ATG CGG TAG CGT AGT CTG • ATG CGA TAG CGT AGT CTG • ATA CGG TAG CGT AGT CTG • ATG CGGG TAG CGT AGT CTG • ATG CG TAG CGT AGT CTG
–B亚型41份
• BABxe1n1d例1，例B3，9例AB，m A1B例x7，例B，enAdB31例5例。，Bel3例，Bm 2例，ABel 1例，
–B(A)1例 –CisAB2例 –A2 14例 –A2B 35例
• 引自中国输血杂志2006，19（1）：25
血型分子诊断技术进展与应用
ABO亚型的分子研究
血型分子诊断技术进展与应用
CisAB和B(A)等位基因
• CisAB01-06
–CisAB01:C467T,G803C –CisAB02:C526G,C657T,G703A,G803C,
• B(A)01-06
–B(A)型单克隆试剂应用于临床后，抗A试剂偶尔与 原定为B型的红细胞发生反应，这类含有大量B抗原 极少A抗原的红细胞称之为B(A)型
• 插入 • 缺失 • 基因重组（RHD/RHCE） • 基因部分重复
• http://=bgmut/systems
血型分子诊断技术进展与应用
ABO血型分子生物学研究
• 1990年Yamamoto等首次克隆 • 基因定位于染色体9q34
• ABO基因cDNA，其分子量为41,000 Dalton，DNA长度为
血型分子诊断技术进展与应用
新等位基因形成
血型分子诊断技术进展与应用
红细胞血型系统
• 40个基因 • 1250个等位基因(截止2012年5月12日) • 参见Blood Group Antigen Gene Mutation
Database
血型分子诊断技术进展与应用
红细胞血型分子机制
• 点突变
同义突变、无义突变、 有义突变、起始密码突变、 拼接接受位点
• 通过检测261、526、703、796、803位的核苷酸 可以确认大多数典型的ABO血型的基因型
• 近年来对血清学分类的ABO血型亚型抗原，应用 PCR、DNA测序等技术，在核苷酸和酶蛋白氨基酸 序列水平上进行研究
–结果表明：原为同一亚型的抗原存在异质性，即血清 学上同一亚型，在核苷酸和酶蛋白氨基酸序列水平上 有可能存在差异。
血型分子诊断技术进展与应用
血型分子诊断技术进展与应用
主要内容
• 红细胞血型系统分子诊断
–红细胞血型系统分子基础
• ABO血型系统 • Rh血型系统 • H血型系统(类孟买型) • 红细胞血型系统分子诊断技术及其应用
• 小结
血型分子诊断技术进展与应用
有关分子生物学概念
• 点突变
➢同义突变 ➢无义突变 ➢有义突变 ➢起始密码突变
G803C, G930A, G1096A, C1054T
血型分子诊断技术进展与应用
O等位基因
• O01－O74
– 大多数261nt缺失，13个261nt不缺失
–O01:261delG –O02:261delG 、 T646A 、 G681T 、 C771T 、
G829A
• 人群中常见
–003:261G、A297G,C526G,G802A –O50
–B(A)01:A297G,C526G, 796A,G803C,G930A,G1096A –B(A)02:A297G,C526G,C657T,C700G,G703A,
C796A,G803C,G930A,G1096A
血型分子诊断技术进展与应用
实验室发现的ABO等位基因
• A208 allele* C467T; G539C • A210 allele* 268T>C;467C>T • A211 allele* 266C>T;467C>T • B112 allele* 297A>G; 526C>G; 559C>T;657C>T; 703G>A;
的变化（A101依次是精氨酸、甘氨酸、亮氨酸和甘氨酸，B101
依次是甘氨酸、丝氨酸、蛋氨酸和丙氨酸）
• O01基因在261位的G缺失,提前终止 血型分子诊断技术进展与应用
ABO亚型频率分布
• ABO血型中存在ABO亚型 • 临床输血和献血者检测中常见
–440617份 –A亚型22份
• AxB 11例，AelB 3例，Ax 3例，Ael 2例，Amh 2例，A3 1例
1062bp
• ABO血型系统为三复等位基因，有A、B、O三个基因 • ABO基因包括7个外显子，长度大于18kb
• 大多数编码序列位于第6和7外显子
血型分子诊断技术进展与应用
ABO基因示意图
血型分子诊断技术进展与应用
常见等位基因
• A和B基因 编码的蛋白都是353个氨基酸，O基因编码的蛋
白只有 115个氨基酸
• 发现的等位基因数为290个（2012年05月22日）
血型分子诊断技术进展与应用
A等位基因
• 可简要分为7大类等位基因 • A1、A2、A3、Ax、Ael、Aw、Am
• A101等位基因序列作为参照标准 –A102(C467T)（在中国人群中比例大于A101) –A103(C467T,C564T) –A104(A297G) –A105(A297G,B-O1重组) –A106(B-O02重组) –A205(A1009G )
• A101、A102、B101、O01、O02 • A101作为参考序列 • A102等位基因 C467T(Pro-Leu)
• B101基因在297、526、657、703、796、803、930、1096位 有8个核苷酸与A101基因不同
– 但只有526、703、796、803四ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ核苷酸的变化造成了氨基酸序列
血型分子诊断技术进展与应用
B等位基因型
• 可简要分为5大类等位基因 • B1、B3、Bx、Bel、Bw • B等位基因中297、703、796、803位基本恒定
• B101-B118 –B101:A297G;C526G;C657T;G703A;C796A;G8
03C;G930A;G1096A
• B301-B308 –B301:A297G,C526G,C657T,G703A,C796A,
• 缺失 • 插入 • 重排
血型分子诊断技术进展与应用
有关分子生物学概念
• 基因结构异常或表达异常 • 点突变 • 插入 • 缺失 • 易位和重排 • 拷贝数扩增 • DNA多态性 • 基因的检测
血型分子诊断技术进展与应用
常见突变示意图
• ATG CGG TAG CGT AGT CTG • ATG CGA TAG CGT AGT CTG • ATA CGG TAG CGT AGT CTG • ATG CGGG TAG CGT AGT CTG • ATG CG TAG CGT AGT CTG
–B亚型41份
• BABxe1n1d例1，例B3，9例AB，m A1B例x7，例B，enAdB31例5例。，Bel3例，Bm 2例，ABel 1例，
–B(A)1例 –CisAB2例 –A2 14例 –A2B 35例
• 引自中国输血杂志2006，19（1）：25
血型分子诊断技术进展与应用
ABO亚型的分子研究
血型分子诊断技术进展与应用
CisAB和B(A)等位基因
• CisAB01-06
–CisAB01:C467T,G803C –CisAB02:C526G,C657T,G703A,G803C,
• B(A)01-06
–B(A)型单克隆试剂应用于临床后，抗A试剂偶尔与 原定为B型的红细胞发生反应，这类含有大量B抗原 极少A抗原的红细胞称之为B(A)型
• 插入 • 缺失 • 基因重组（RHD/RHCE） • 基因部分重复
• http://=bgmut/systems
血型分子诊断技术进展与应用
ABO血型分子生物学研究
• 1990年Yamamoto等首次克隆 • 基因定位于染色体9q34
• ABO基因cDNA，其分子量为41,000 Dalton，DNA长度为
血型分子诊断技术进展与应用
新等位基因形成
血型分子诊断技术进展与应用
红细胞血型系统
• 40个基因 • 1250个等位基因(截止2012年5月12日) • 参见Blood Group Antigen Gene Mutation
Database
血型分子诊断技术进展与应用
红细胞血型分子机制
• 点突变
同义突变、无义突变、 有义突变、起始密码突变、 拼接接受位点
• 通过检测261、526、703、796、803位的核苷酸 可以确认大多数典型的ABO血型的基因型
• 近年来对血清学分类的ABO血型亚型抗原，应用 PCR、DNA测序等技术，在核苷酸和酶蛋白氨基酸 序列水平上进行研究
–结果表明：原为同一亚型的抗原存在异质性，即血清 学上同一亚型，在核苷酸和酶蛋白氨基酸序列水平上 有可能存在差异。
血型分子诊断技术进展与应用
血型分子诊断技术进展与应用
主要内容
• 红细胞血型系统分子诊断
–红细胞血型系统分子基础
• ABO血型系统 • Rh血型系统 • H血型系统(类孟买型) • 红细胞血型系统分子诊断技术及其应用
• 小结
血型分子诊断技术进展与应用
有关分子生物学概念
• 点突变
➢同义突变 ➢无义突变 ➢有义突变 ➢起始密码突变
G803C, G930A, G1096A, C1054T
血型分子诊断技术进展与应用
O等位基因
• O01－O74
– 大多数261nt缺失，13个261nt不缺失
–O01:261delG –O02:261delG 、 T646A 、 G681T 、 C771T 、
G829A
• 人群中常见
–003:261G、A297G,C526G,G802A –O50
–B(A)01:A297G,C526G, 796A,G803C,G930A,G1096A –B(A)02:A297G,C526G,C657T,C700G,G703A,
C796A,G803C,G930A,G1096A
血型分子诊断技术进展与应用
实验室发现的ABO等位基因
• A208 allele* C467T; G539C • A210 allele* 268T>C;467C>T • A211 allele* 266C>T;467C>T • B112 allele* 297A>G; 526C>G; 559C>T;657C>T; 703G>A;
的变化（A101依次是精氨酸、甘氨酸、亮氨酸和甘氨酸，B101
依次是甘氨酸、丝氨酸、蛋氨酸和丙氨酸）
• O01基因在261位的G缺失,提前终止 血型分子诊断技术进展与应用
ABO亚型频率分布
• ABO血型中存在ABO亚型 • 临床输血和献血者检测中常见
–440617份 –A亚型22份
• AxB 11例，AelB 3例，Ax 3例，Ael 2例，Amh 2例，A3 1例
1062bp
• ABO血型系统为三复等位基因，有A、B、O三个基因 • ABO基因包括7个外显子，长度大于18kb
• 大多数编码序列位于第6和7外显子
血型分子诊断技术进展与应用
ABO基因示意图
血型分子诊断技术进展与应用
常见等位基因
• A和B基因 编码的蛋白都是353个氨基酸，O基因编码的蛋
白只有 115个氨基酸