真空冷冻干燥法保藏菌种
菌种保藏方法及复壮技术
●食用菌栽培●·34·欢迎刊发广告，欢迎种业界商家朋友赞助、协办。
菌种保藏方法及复壮技术菌种保藏的原理是通过干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养等方法，使菌种的代谢水平降低，乃至完全停止，达到半休眠或完全休眠的状态，而在一定时间内得到保存。
需要时再通过提供适宜的生长条件使保藏物恢复活力，使菌种在较长期的保藏之后仍然保持着原有的生命力、典型的形态特征、优良生产性能。
目前常用的菌种保藏方法有以下几种。
1菌种保藏方法1.1斜面低温保藏法将需要保藏的菌种，接种在适宜的斜面培养基上，菌丝长满斜面时，用硫酸纸包扎棉塞，旋转在4℃的冰箱保藏。
由于微生物的新陈代谢活动未停止，试管内培养基易失水变干，因此，保藏时间较短，转管次数多，不适于长期保藏。
每隔六个月转管一次。
草菇菌种不耐低温，需保藏在10~12℃，或在草菇菌落上灌注3~4毫升的防冻剂（10%的甘油）。
如菌丝长满斜面后，在无菌条件下，用无菌橡皮塞代替棉塞，并用石蜡密封，即可在室温或冰箱中保藏。
这种方法可防止杂菌污染，隔绝氧气，避免培养基干燥，使用方便。
1.2液体石蜡保藏法石蜡防止培养基水分蒸发，隔绝斜面菌丝与空气接触，降低微生物代谢活性，使其处于休眠状态，因此能延长微生物的生命，保持菌种优良的种性。
一般可保藏3~5年，是一种中长期的菌种保藏方法。
液体石蜡选用化学纯的，在121℃下高温灭菌30分钟，再将液体石蜡在160℃烘箱中保温1~2小时，蒸发掉液体石蜡中的水，或将高压灭菌后的液体石蜡放置在40~60℃温箱中，使灭菌后的液体石蜡层由乳白色变成无色透明。
在无菌条件下，将灭菌除水的液体石蜡用无菌吸管罐到长满菌丝的斜面试管中，液体石蜡要高出斜面尖端1厘米左右，然后用无毒泡沫试管塞塞好，直立地放在试管架上或罐头瓶中，置于冰箱或室温中保藏。
液体石蜡灌注过多，移种时不方便；过少，时间长容易干涸。
如将棉塞齐试管中剪平，用石蜡溶封，或用无菌橡皮塞代替棉塞，可延长保藏时间。
整理微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏
精品文档国家自然科技资源平台微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏技术规程（试行）《自然科技资源收集整理保存技术规程研究制定》项目组二00四年十二月十日精品文档目次前言 (2)弓I 言 (3)1范围 (4)2规范性引用文件 (4)3术语和定义 (4)4内容 (5)参考文献 (10)精品文档*»-t-刖言本规程由微生物菌种资源平台建设项目提出。
本规程起草单位：中国农业科学院土壤肥料研究所、中国兽医药品监察所、中国科学院微生物研究所、中国林业科学研究院森林保护研究所、中国药品生物制品检定所、中国医学科学院医药生物技术研究所、中国食品发酵工业研究院。
本规程主要起草人：张月琴、刘红宇、黄明玉、姜瑞波、顾金刚、周宇光、朴春根、叶强、陈敏、程池等。
精品文档精品文档引言微生物菌种资源的长期有效保藏是微生物菌种资源有效实施共享的前提，采用操作性简便、保藏周期长、遗传变异率低是菌种资源保藏方法的首要选择。
精品文档精品文档微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏技术规程1范围本规程规定了冷冻干燥和低温冷冻保藏技术的定义、原理、技术要求、方法与步骤。
本规程适用于普通病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌及担子菌等微生物菌种的保藏。
对于病原微生物及其他需要特殊操作技术的微生物的参见相应的技术规程。
2规范性引用文件下列文件中的条款通过本规范的引用而成为本规范的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本规范，然而，鼓励根据本规范达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本规范。
国务院令第424号《病原微生物实验室生物安全管理条例》GB 19489实验室生物安全通用要求科技部自然科技资源平台联合管理办公室文件自然科技资源共性描述规范（试行）3术语和定义下列术语和定义适用于本规范。
3.1冷冻干燥freeze-drying将微生物冷冻，在减压下利用升华作用除去水分，使细胞的生理活动趋于停止，从而长期维持存活状态。
食用菌菌种贮藏八法
食用菌菌种贮藏八法1.低温定期移植贮藏法将需要贮藏的菌种接种在适宜的斜面培养基上，适温培养，当菌丝健壮地长满斜面时取出，放在3℃-5℃低温干燥处或4℃冰箱、冰柜中贮藏，每隔4-6个月时间移植转管一次，具体应根据菌种特性决定。
贮藏时要注意环境温度不能太高，以防霉菌通过棉塞进入管内。
因此，若用棉塞，可用干净的硫酸纸或牛皮纸包扎棉塞，即可减少污染的机会，也可防止培养基干燥。
除草菇菌种外，其他食用菌菌种都能采用此法贮藏。
2.液体石蜡贮藏法取化学纯液体石蜡(要求不含水分、不霉变)装于三角瓶中加棉塞并包纸，在1公斤/平方厘米压力下灭菌1小时，再放入40℃恒温箱中数天，以蒸发其中水分，至石蜡油完全透明为止。
将处理好的石蜡油移接在空白斜面上，在28℃-30℃温度下培养2-3天，确定无杂菌生长方可使用。
然后用无菌操作的方法把液体石蜡注入待贮藏的斜面试管中。
注入量以高出培养基斜面1-1.5厘米为宜，塞上橡皮塞，用固体石蜡封口，直立于低温干燥处贮藏。
贮藏时间在1年以上，在低温下，保藏时间还可延长。
3.沙土管贮藏法取河沙用水浸泡洗涤数次，过60目筛除去粗粒，再用10%盐酸浸泡2-4小时，除去其中有机物质，再用水冲洗至pH值达到中性，烘干备用。
同时取贫脊土或菜园土用水浸泡，使其呈中性，沉淀后除去上清液，烘干碾细，用100目筛子过筛，将处理好的沙与土以(2-4)：1比例混匀，用磁铁吸出其中的铁质，然后分装小试管或安瓿内，每管装量0.5-2克，塞棉塞，用纸包扎灭菌(1.5公斤/平方厘米，1小时)，再干热灭菌(160℃，2-3小时)1-2次，进行无菌检验，合格后使用。
将已形成孢子的斜面菌种，在无菌条件下注入无菌水3-5毫升，刮菌薹，制成菌悬液，再用无菌吸管吸取菌液滴入沙土管中，以浸透沙土为止。
将接种后的沙土管放入盛有干燥剂的真空干燥器内，接上真空泵抽气数小时，至沙土干燥为止。
真空干燥操作需在孢子接入后48小时内完成，以免孢子发芽。
菌种冷冻保藏
7.4采用酒精喷灯进行封管时，烧的温度要适宜。封管后不要立即放在台面上，以防受冷撕裂。
附图：泪滴型安瓿管长颈毛细玻璃管
多头岐管
附：1、冷冻保藏改进方法（一）
因真空冷冻干燥器价格比较昂贵，通常抗生素生产厂都采用自制的简单易行办法，可达到同样的目的。即：
6.2制备脱脂乳
取市售新鲜、清洁、无抗生素污染的原牛奶300ml煮沸，在5000 r/min下离心10分钟，除去上层奶皮、油脂，吸取下层奶液，经脱脂棉过滤，如此反复3次脱去脂肪，然后分装入两个250 ml三角瓶中，加棉塞并用牛皮纸包头、扎牢，在115℃25min高压蒸汽灭菌，冷却后做无菌试验，4℃冰箱保存备用。
6.6预冻
因为迅速超低温预冻可保持菌体细胞结构成份原状，利于细菌存活。故将分装好的冷冻管及指示管置于低温冰箱冷冻室-70℃下快速冷冻过夜。无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。也可用液氮。将冷冻管插入冷冻剂，只需冷冻4—5分钟，即可使悬液结冰。也可用液氮预冻。还可用低温冰箱-80℃预冻1～2小时后转入冷冻真空干燥。
由于同时满足菌种保藏三要素，使微生物始终处在低温、干燥、缺氧的条件下，能克服传代、沙土管简单保藏方法的不足，保藏菌种范围广、时间长（保藏期可达数年至十数年）、存活率高、保存过程不易失活和退化等。
3、主要步骤为：
3.1将待保藏菌种的细胞或孢子悬浮于保护剂（如脱脂牛奶）中；
3.2在低温（-45℃以下）下使微生物细胞快速冷冻；
6.7冷冻真空干燥
真空冷冻干燥器有成套的装置出售（长药厂新近成立菌种中心，购有该机）。按其方法操作。冷冻干燥机要先开机预冷30分钟以上，再根据冷冻干燥机的水分蒸发能力，确定一次放入的冷冻管数量。将预冻好的冷冻管及指示管于次日取出迅速放入已预冷的冷冻干燥机的干燥箱内，开动真空泵进行一级真空抽干，待指示管出现由粉红色变全兰色时，再进行二级抽干12h。二级真空干燥既保持菌体细胞干燥度，又避免细胞反复冻结造成保存中菌体死亡，因而能更长期保存菌种，并能提高其存活率，又不会发生菌株的变异
菌种保藏的方法
菌种保藏的方法菌种保藏是一种重要的微生物资源保护方式，对于研究、应用和开发微生物具有重要意义。
以下是几种常见的菌种保藏方法及其操作步骤。
一、低温冷冻保藏法低温冷冻是一种常用的微生物保藏方法，适用于大多数真菌、细菌和酵母菌。
其主要原理是将菌株保存在低温下，使其生理活动缓慢，以延长菌种的保藏时间。
操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。
2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。
3. 制备保存液：根据不同菌株的需要，制备适宜的保存液，常用的保存液有甘油、甘露醇等。
4. 菌种保存：将菌株用保鲜膜包裹，放入保存管中，加入保存液，密封保存管。
5. 冷冻保存：将保存管放入低温冰箱或液氮罐中进行冷冻保存。
二、干燥保藏法干燥保藏法是一种简便、经济的保藏方法，适用于真菌、细菌、放线菌等微生物。
其基本原理是将菌种与干燥剂混合，使其水分含量降低，从而实现微生物的休眠状态。
操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。
2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。
3. 制备干燥剂：根据不同菌株的需要，选择合适的干燥剂，如硅胶、氧化钙等。
4. 菌种混合：将菌株与干燥剂按照一定比例混合均匀。
5. 干燥保存：将混合物均匀地散布在无菌培养基上，置于通风干燥的环境中进行保存。
三、冷冻冻干保存法冷冻冻干保存法是一种较为复杂的菌株保藏方法，适用于难保存的微生物，如厌氧菌、放线菌等。
其主要原理是将菌株在低温下冻结干燥，从而保护微生物的活力。
操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。
2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。
3. 制备保存液：根据不同菌株的需要，制备适宜的保存液，如甘油、甘露醇等。
4. 冷冻过程：将菌株加入保存液中，放入冷冻机冷冻至低温（通常为-80℃）。
5. 冻干过程：将冷冻的菌株经过真空排气、结冰降温等步骤进行冻干处理。
菌种保存方法
菌种保存方法菌种保存是微生物学研究中非常重要的一环，它可以保证菌种的长期保存和稳定性，为科研工作提供了可靠的保障。
下面将介绍几种常见的菌种保存方法。
首先，冷冻保存是最常见的菌种保存方法之一。
冷冻保存是指将培养好的菌种悬浮液或培养物在-80℃以下的低温条件下保存。
在保存前，需要将菌种悬浮液加入一定比例的保护剂，如甘油或DMSO，以增加菌种的冷冻耐受性。
冷冻保存不仅简单易行，而且保存时间长，可以保存数年甚至更长时间。
其次，干燥保存也是一种常用的菌种保存方法。
干燥保存是指将培养好的菌种用干燥剂或者真空干燥的方法将菌种完全脱水，然后保存在低温、低湿的条件下。
这种方法保存的菌种可以在常温条件下保存，并且保存时间也相对较长。
另外，液氮保存也是一种非常有效的菌种保存方法。
液氮保存是指将培养好的菌种悬浮液或培养物直接存放在液氮罐中保存。
由于液氮的温度极低，可以有效地阻止微生物的代谢和生长，因此保存效果非常好。
但是在使用液氮保存时需要注意安全问题，操作人员要具备相关的安全知识和技能。
最后，冷冻干燥保存也是一种常见的菌种保存方法。
冷冻干燥保存是将培养好的菌种在低温条件下冷冻，然后通过真空干燥的方法将菌种脱水保存。
这种方法既兼具冷冻保存和干燥保存的优点，保存效果非常好，被广泛应用于微生物学研究中。
综上所述，菌种保存方法有很多种，选择合适的保存方法需要根据具体的实验要求和条件来确定。
无论采用何种保存方法，都需要严格按照操作规程来进行，以确保菌种的保存质量和稳定性。
希望本文介绍的菌种保存方法对大家有所帮助。
菌种保藏方法
一、石蜡油低温保藏法本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖灭菌的液体石蜡，达到菌体与空气隔绝，使菌处于生长和代谢停止状态，同时石蜡油还防止水分蒸发，在低温下达到较长期的保藏菌种的目的。
保藏温度要求在-4～4℃下。
液体石蜡法适用于不产孢子的菌种。
具体操作是：菌种为斜面培养菌种，斜面不宜过长；选择纯净优质石蜡油，置三角烧瓶中经过121℃高压蒸汽灭菌1～2h，将其放烘箱中(160℃左右)干热处理，去除灭菌时渗入的水分，待石蜡油变得清澈透明后冷却即可加入斜面，斜面上不能出现气泡，液蜡添加量以高出斜面顶部约1cm为宜。
二、甘油管冷冻保藏法1．试验方法介绍本法也是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。
其方法是，将80%的甘油高压蒸汽灭菌待用。
将培养好的斜面菌种用无菌水制成高浓度的菌悬液(108～1010/ml)。
取1ml灭菌甘油放入与甘油充分混匀，使甘油浓度约为10%-30%，于-70℃下冻存。
-20℃保存时间较短。
或采用体积比为8：2的甘油－生理盐水，加入新鲜培养的菌体肉汤，混合均匀后至-20℃冰箱保存。
2．效果该法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种，适用范围广，操作简便，效果好，无变异现象发生。
甘油－生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液，其原因可能是加入生理盐水适当降低了甘油的高渗作用，且有肉汤培养物适量增加保存液的营养成分，从而更好地保护了待保存的菌株。
三、真空冷冻干燥法1．试验原理真空冷冻干燥保藏法是兼具低温、干燥、除氧三方面菌种保藏的主要因素，除不宜于丝状真菌的菌丝体外，对病毒、细菌、放线菌、酵母及丝状菌孢子等各类微生物都适用，不宜用冻干法保存的微生物不到2%。
冷冻干燥法是在低温下快速将细胞冻结，然后在真空条件下干燥，使微生物的生长和酶活动停止。
为了防止在冷冻和水分升华过程中对细胞的损害，要采用保护剂来制备细胞悬液，使菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质，通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。
最新微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏
1.1.1.1.1.2微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏国家自然科技资源平台微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏技术规程（试行）《自然科技资源收集整理保存技术规程研究制定》项目组二〇〇四年十二月十日目次目次 (1)前言 (2)引言 (3)1 范围 (4)2 规范性引用文件 (4)3 术语和定义 (4)4 内容 (5)参考文献 (10)前言本规程由微生物菌种资源平台建设项目提出。
本规程起草单位：中国农业科学院土壤肥料研究所、中国兽医药品监察所、中国科学院微生物研究所、中国林业科学研究院森林保护研究所、中国药品生物制品检定所、中国医学科学院医药生物技术研究所、中国食品发酵工业研究院。
本规程主要起草人：张月琴、刘红宇、黄明玉、姜瑞波、顾金刚、周宇光、朴春根、叶强、陈敏、程池等。
引言微生物菌种资源的长期有效保藏是微生物菌种资源有效实施共享的前提，采用操作性简便、保藏周期长、遗传变异率低是菌种资源保藏方法的首要选择。
微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏技术规程1 范围本规程规定了冷冻干燥和低温冷冻保藏技术的定义、原理、技术要求、方法与步骤。
本规程适用于普通病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌及担子菌等微生物菌种的保藏。
对于病原微生物及其他需要特殊操作技术的微生物的参见相应的技术规程。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本规范的引用而成为本规范的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本规范，然而，鼓励根据本规范达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本规范。
国务院令第424号《病原微生物实验室生物安全管理条例》GB 19489 实验室生物安全通用要求科技部自然科技资源平台联合管理办公室文件自然科技资源共性描述规范（试行）3 术语和定义下列术语和定义适用于本规范。
3.1冷冻干燥 freeze-drying将微生物冷冻，在减压下利用升华作用除去水分，使细胞的生理活动趋于停止，从而长期维持存活状态。
5菌种保藏的原理和方法
16
.
17
.
方法。
9
.
（六）液氮保藏法
原理：低温 悬浮介质： 10%甘油或5%的二甲亚砜 机理：甘油或二甲亚砜可进入细胞，并通过降低强烈的
脱水作用而保护细胞。 甘油—般用高压蒸汽灭菌，而二甲亚砜最好为过滤灭菌。 适用菌种：适用于所有微生物、动植物细胞保藏。 保藏期：置液氮内（-196 ℃ ），保存5-10年。 特点：保藏期最长，但保藏费用高，仅用于保存经济价
4 菌种保藏的原理和方法
菌种保藏原理及条件 菌种保藏的方法 菌种保藏的注意事项 菌种保藏机构
1
.
一、菌种保藏原理
原理：
根据菌种的生理生化特性，人为创造条件使菌 体的代谢活动处于休眠的状态。
条件：
挑取优良纯种，最好是休眠体（孢子、芽孢等）
创造一个最有利于休眠的环境条件，如：降低培 养基营养成分、低温、干燥、隔氧及添加保护剂 等方法。
2
.
二、菌种保藏的方法
斜面保藏法 穿刺保藏法 固体曲保藏法 沙土管干燥保藏法 真空冷冻干燥保藏法 液氮保藏法 悬液保藏法 低温保藏法
3
.
（一）斜面保藏法
原理：低温 方法： 将培养好的斜面菌种，置于4-5℃冰箱保存，定期
移植到新的斜面培养基上继续保藏。 一般保存期3-6个月。 注意事项: 冰箱的温度； 培养基水分蒸发情况（用橡皮塞代替棉塞）。 优点：简便，适合于实验室中菌种的短期保藏。 缺点：短期内多次传代，易引起菌种变异、退化，染菌
过筛、灭菌并干燥的沙土为保藏介质，
可用硅胶、磁珠或多孔玻璃珠，但适于这些载 体的微生物不多，保存期短，不及沙土实用。
7
.
（五）真空冷冻干燥保藏法
原理：在低温下迅速地将细胞冻结以保持细胞结构完整， 然后在真空下使水分升华（最有效方法之一）。
简述真空冷冻干燥法保藏菌种的一般流程
真空冷冻干燥法是一种常用的菌种保藏方法，它通过将菌种在低温下冷冻、然后在真空条件下干燥的方式，实现了长期保存菌种的目的。
以下是真空冷冻干燥法保藏菌种的一般流程：一、菌种准备1. 选择合适的菌株：在进行菌种保藏前，首先需要选择适合的菌株。
通常应选择生长良好、代谢活跃的菌种进行保藏。
2. 菌种培养：将选好的菌株进行培养，培养条件需严格控制，保证菌种的纯度和活力。
二、预处理1. 预冷冻处理：将培养好的菌种进行预冷冻处理，将其置于低温环境中进行预冷冻，通常温度为-80℃以下，以减慢菌种的新附粘聚和氧化。
2. 冷冻保存：将预处理好的菌种转移到常规保存的冷冻设备中，将温度进一步调节至-196℃以下，以实现菌种的长期冷冻保存。
三、真空干燥1. 复苏：当需要使用保存好的菌种时，首先需要将其从冷冻状态中复苏出来，将其放置在适宜的培养基中进行复苏培养。
2. 真空干燥：在菌种复苏成功后，使用真空冷冻干燥设备进行干燥处理。
将菌种在低温下，通过升高温度并施加真空条件，使得菌种的水分逐渐蒸发，最终实现了菌种的干燥保存。
四、包装1. 包装材料：选择合适的包装材料，通常为玻璃瓶或者高密度聚乙烯瓶等耐高温、耐压、密封性好的材料。
2. 包装方法：将经过真空冷冻干燥处理的菌种装入包装容器中，并采用干燥消毒的方式，保证包装容器和菌种的无菌状态。
3. 封口保存：对包装容器进行封口处理，保证菌种在包装容器中的密封保存。
五、贮存1. 温度控制：将经过包装的菌种存放在恒温设备中，控制温度在-20℃至-80℃之间，以保证菌种的长期保存。
2. 防潮措施：在存放的过程中，采取适当的防潮措施，避免包装容器内部产生凝结水、霉菌和细菌。
3. 定期检测：定期对存放的菌种进行检测，观察其存活情况和纯度，必要时进行复苏培养。
通过以上流程，真空冷冻干燥法可以实现菌种的长期保存，确保菌种的活力和纯度，为科研工作提供了重要的技术保障。
在菌种保藏的过程中，真空冷冻干燥法作为一种常用的方法，具有许多优势。
菌种长期保存方法
菌种长期保存方法
菌种的长期保存方法有多种，常用的包括以下几种：
1. 冷冻保存：将菌株培养物添加适量的保护剂（如甘油、蔗糖等），将菌种冷冻在低温下保存。
通常在-70或更低的温度下保存，可以避免菌种的变异和死亡。
2. 真空冻干保存：将菌株培养物通过真空冷冻干燥技术，制备成干粉状，然后密封保存。
这种方法适用于某些脆弱的菌种，有助于保持菌株的原始特性。
3. 高温烘箱保存：将菌株培养物置于高温（通常为40-50）的烘箱中烘干，然后密封保存。
这种方法适用于耐热的菌株，可以较长时间地保持菌种的活性。
4. 冷冻干燥保存：将菌株培养物进行冷冻干燥处理，制备成干燥粉末，并密封保存。
这种方法可以长期保存菌种，且易于运输和储存。
5. 非洲紫外线灭菌保存：将菌株培养物置于紫外线照射仪中进行灭菌处理，然后密封保存。
这种方法适用于一些容易形成胞内孢子的菌株，可以有效地保持菌种的活性。
选择合适的保存方法应根据菌株的特性以及实验需求来确定，同时在保存过程中应注意使用无菌操作，确保保存的菌种不受外界污染。
菌种可以长期保存的方法
菌种可以长期保存的方法引言菌种的长期保存对于微生物学研究和应用具有重要意义。
对于许多研究人员而言，保存菌种是保障研究可重复性和可验证性的关键步骤之一。
在此篇文章中，我们将介绍一些常见的菌种长期保存方法，并探讨它们的优缺点。
常见的保存方法冷冻保存冷冻保存是最常见和最简单的保存方法之一。
这种方法通过降低菌种的温度来阻止其生长和繁殖。
通常，菌液会被加入到含有细胞保护剂（如甘油或乳糖）的冻存液中，然后在低温条件下（通常是-80C或液氮温度）保存。
这种保存方法的优点是简单易行且成本较低，但缺点是保存过程需要依赖专业的冷冻设备，且一旦冷冻设备出现问题或停电，保存的菌种可能会失效。
干燥保存干燥保存是另一种常见的菌种保存方法。
这种方法通过将菌种置于无水环境下，使其失去活性。
常见的干燥保存方法包括冷冻干燥和烘干。
冷冻干燥是将菌种冷冻后加入到真空中，然后在低温下慢慢升温使其脱水。
烘干通常是将菌种放在高温环境下，以加速水分的蒸发。
干燥保存的优点是保存方式简单，不需要依赖专业设备，且保存时间较长。
然而，这种方法的缺点是复苏菌种时需要特殊的培养条件，且干燥过程中可能会对菌种造成一定的伤害。
低温保存除了冷冻保存外，低温保存也是一种常见的保存方法。
这种方法通过将菌种保存在较低的温度下，如4C或-20C，来延缓其生长速度。
低温保存的优点是保存设备相对简单，保存的菌种可以在较长一段时间内保持较高的活性。
然而，低温保存并不能无限期延长菌种的保存时间，而且一旦温度失控，保存的菌种可能会失效。
其他保存方法除了以上介绍的常见保存方法外，还有一些其他的保存方法可供选择。
其中包括液氮保存、冷冻液氮保存、冷冻胶囊保存等。
液氮保存是将菌种置于液氮中，以极低的温度来保持菌种的活性。
冷冻液氮保存和冷冻胶囊保存是将菌种与冷冻液氮或冷冻胶囊结合使用来降低保存温度和保护菌种。
结论菌种的长期保存对于微生物学研究和应用具有重要意义。
我们可以通过冷冻保存、干燥保存、低温保存等常见的方法来保存菌种，并根据需要选择适合的保存方法。
简述菌种冷冻干燥保藏法的流程
简述菌种冷冻干燥保藏法的流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor.I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!简述菌种冷冻干燥保藏法的流程菌种的保藏是微生物研究和工业生产中不可或缺的一环，它能够保证菌种的活性和稳定性。
菌种的保存,真空冷冻干燥法
菌种的保存：真空冷冻干燥法1准备安培管用于真空冷冻菌种保藏的安培管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安培管。
大小要求外径6～7.5mm，长105 mm，球部直径9～11 mm，壁厚0.6～1.2 mm，也可用没有球部的管状安培管。
先用2%盐酸浸泡8～10h，再经自来水冲洗多次，用蒸馏水涮洗2～3次，烘干；在每管内放入打好菌号及日期的标签，字面朝向管壁，管口塞好脱脂棉塞，121℃下高压灭菌20分钟，备用。
2准备菌种用真空冷冻干燥法保藏的菌种保藏期可长达几年甚至几十年，为了不出现差错，所用菌种纯度要高，而且菌龄要适宜。
细菌和酵母菌的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活期反而降低。
一般细菌的菌龄要求24～48h；酵母菌为3d；形成孢子的微生物则宜保藏孢子；放线菌和丝状真菌菌龄为7～10d。
3保护剂的选择和准备选取新鲜牛奶作为保护剂，牛奶要先脱脂，用离心方法去除上层油脂，115℃下高压蒸汽灭菌25min，备用。
4菌种准备及分装菌种要求为生长良好的纯种，菌龄以处于稳定期为好，孢子是新鲜的。
每支长好的斜面加2～3ml保护剂，用接种环将菌苔轻轻刮起(注意勿刮起培养基)，制成菌悬液。
如用液体培养的菌种，则需经离心收集和用灭菌生理盐水洗涤细胞，收集的菌体用保护剂悬浮制成菌悬液。
悬液中菌数要求达到108～1010个/ml为宜。
悬液制备完成尽快分装和冻结。
分装安瓿时可用灭菌的长滴入安瓿管底部，每管分装量约0.1～0.2毫升，分装安瓿管时间尽量要短，最好在1-2小时内分装完毕并预冻。
分装时应注意在无菌条件下操作。
5 预冻-80℃冰箱预冻1～2小时。
6冷冻干燥将冷冻后的样品安瓿管置于冷冻干燥机的干燥箱内，开始冷冻干燥，时间一般为8-20小时。
终止干燥时间应根据下列情况判断：①安瓿管内冻干物呈酥块状或松散片状；②真空度接近空载时的最高值；③选用1-2支对照管，其水份与菌悬液同量，视为干燥完结。
实验室最常用的五种菌种保藏方法
实验室最常用的五种菌种保藏方法一、冷冻保存在实验室中，冷冻保存是最常用的菌种保藏方法之一。
这种方法利用低温的环境，将菌种置于-70°C以下的冰柜或液氮罐中进行保存，以减缓菌种的新陈代谢过程，从而延长其保存时间。
冷冻保存不仅适用于常见的细菌菌种，对真菌、酵母菌等微生物也同样适用。
在冷冻保存的过程中，需要注意样品容器的密封性和防潮性，以避免保存过程中的交叉污染和冻结损伤。
二、干燥保存干燥保存是另一种常见的菌种保藏方法。
这种方法通过将菌种置于低温低湿环境中，使其水分蒸发，使菌种变得干燥并进入休眠状态，从而延长其保存时间。
常见的干燥保存方式包括真空冷冻干燥、干燥剂吸附法等。
干燥保存尤其适用于灵敏对湿度敏感的菌种，以及一些难以存活在液体培养基中的微生物。
三、低温保存除了冷冻保存外，低温保存也是常见的菌种保藏方式之一。
在这种方法中，菌种通常被保存在4°C左右的冰箱中，通过控制温度和湿度，延缓菌种的新陈代谢，并保持其生长状态。
这种保存方式不仅适用于微生物的短期保存，也可以用于长期保存对保存温度敏感的微生物。
四、液氮保存液氮保存是一种极低温的保存方式，通过将微生物样品浸没在液氮中进行保存。
这种方法不仅可以有效地防止菌种的新陈代谢和变异，还能够保持菌种的生物特性和遗传信息。
液氮保存适用于需要长期保存的珍贵菌株和难培养的微生物，如土壤中的特殊嗜冷菌和特殊嗜热菌等。
五、冻干保存冻干保存是将微生物样品在冷冻的条件下先冻结，然后通过真空干燥的方式将水分蒸发，最终将样品转变成固态的干燥状态。
这种方法既能保留微生物的生物特性，又能有效地延长样品的保存时间，适用于需要长时间运输和保存的微生物。
总结回顾通过冷冻保存、干燥保存、低温保存、液氮保存和冻干保存等五种菌种保藏方法，可以满足实验室对于微生物样品保存的不同需求。
不同的菌种和实验目的，需要选择合适的保存方式，以确保微生物的品质和可用性。
在进行菌种保存的过程中，需要注意样品的密封性、温度和湿度的控制，以及保存设备的维护和管理。
一种简便的菌种冷冻真空干燥保存法
62 0
中国卫生检验杂志 2000 年 10 月第 10 卷第 5 期 Ch ines e Journ al of Heal t h L aborat ory T echnol ogy 2000. V ol. 10. N o. 5.
率达 98% 。不同菌种的存活情况见 下表。 对存活 的 10 株沙门 菌和 9 株志 贺菌, 分别做革兰 染色、三
Байду номын сангаас
【基层园地】
〔文章编号〕1004- 8685 ( 2000) 05- 0620- 02
固体 食 品 样 品的 透 析 法 处理
丛伟红 苏敬武 车燕妮 徐 莉
( 山东威海市卫生防疫站 264200) 〔中图分类号〕O 657. 704 〔文献标识码〕B
我们研究用透析罐透析法处理固体 食品样品, 高效 液相色 谱法测定糖精纳、苯甲酸、山梨酸, 样品的前处理简单, 不使 用有机溶剂, 测定结果令人满意。
糖 铁斜面 ( 主要 观察乳 糖、蔗 糖、葡萄糖 发酵、产 气及硫 化氢 产 生 ) 、靛基 质、氰化钾、pH7. 2 尿素、赖氨 酸等 生化试 验, 并用 诊 断血清测定 O 抗原。19 株菌 的形态、生化、O 抗原结构的 测定结 果, 均同 1981 年测定的结果一致。生物学特性未发生变异。
不同菌种的存活情况
实验要 求, 若回 收率< 95% 或 > 105% 时, 建议对标 准曲线进 行 修正, 并适当缩小标准曲线范围。
对于 一种新 的检测 方法, 在 进行样 品加 标回收 实验 前, 建 议先进行 标准加标回收实验, 以摸清影 响回收率的 主要因素 是 由标 准曲线 本身对 比尔定 律的偏 离或由样 品基 体效应 所造 成 的。
出版社 1985; 270 2 中华人民共和国国家标准 . 饮用天然矿泉水检验方法 . 甲醛肟分光
实验室菌种保存方法
实验室菌种保存方法菌种保存是实验室中常见的一项重要工作。
正确保存菌种不仅可以确保其活性和可持续使用，还可以减少实验室的成本和劳动力。
以下是一些常见的菌种保存方法。
1.常温保存常温保存是最简单和最不昂贵的保存方法之一、对于许多菌株而言，它们在常温下可以长时间存活。
通常，菌种可以直接在琼脂平板上保存。
首先，选取一个带有菌落的琼脂平板，并将其密封好，避免水分流失和污染。
然后，将琼脂平板保存在阴暗的地方，例如实验室的柜子里。
这种方法适用于一些相对稳定的微生物，例如常见的实验室菌株。
2.冷藏保存冷藏也是一种常见的菌种保存方法。
在这种方法中，菌落从琼脂平板或液体培养物中挑取，然后悬浮在无菌保护液中。
无菌保护液可以是无菌的生理盐水、甘油溶液或无菌冷冻保护剂。
然后，将菌悬液分装到无菌冷冻管中，并放置在冰箱中保存。
通常，菌株可以在4℃下保存几个月，甚至一年。
这种方法适用于大多数微生物。
3.冷冻保存冷冻保存是一种可以长期保存菌株的方法。
在这种方法中，菌落从琼脂平板或液体培养物中挑取，然后悬浮在无菌保护液中。
然后，将菌悬液用干燥冰或液氮急冷，并将其转移到液氮罐中。
液氮罐的温度通常在-196℃左右。
这种方法可以长期保存微生物，通常可以保存数年到几十年。
当需要使用菌株时，可以从液氮罐中取出，并迅速解冻。
冷冻保存适用于需要长期保存或大量保存的菌株。
4.真空冷冻干燥保存真空冷冻干燥保存是一种更先进的菌株保存方法。
在这种方法中，菌桩从琼脂平板或液体培养物中挑取，然后转移到无菌试管中，并用无菌保护液悬浮。
然后，将试管放入真空冷冻干燥机中，通过控制温度和真空度，使菌株快速冷冻和干燥。
这种方法可以在保持菌株活性的同时，去除水分，从而阻止微生物的生长与繁殖。
真空冷冻干燥保存方法适用于对冷冻和干燥敏感的菌株。
综上所述，菌种保存方法的选择应根据菌株的特性、使用频率和所需保存时间等因素进行决定。
不同的方法有各自的优点和缺点，实验室可以根据自身需求来选择最适合的保存方法。
实验室菌种的保藏方法
实验室菌种的保藏方法一、甘油悬液保藏法此法是将菌种悬浮在甘油蒸馏水中，置于低温下保藏，本法较简便，但需置备低温冰箱。
保藏温度若采用-20℃，保藏期约为0.5～1年，而采用-70℃，保藏期可达10年。
将拟保藏菌种对数期的培养液直接与经121℃蒸汽灭菌20min的甘油混合，并使甘油的终浓度在10％～15％，再分装于小离心管中，置低温冰箱中保藏。
基因工程菌常采用本法保藏。
二、冷冻真空干燥保藏法冷冻真空干燥保藏法又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法。
它通常是用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。
并在真空条件下立即融封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物处于休眠状态，而得以长期保藏。
常用的保护剂有脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物质。
由于此法同时具备低温、干燥、缺氧的菌种保藏条件，因此保藏期长，一般达5～15年，存活率高，变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的保藏方法。
除不产孢子的丝状真菌不宜用此法外，其他大多数微生物如病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等均可采用这种保藏方法。
但该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备。
保藏菌种需用时，可在无菌环境下开启安瓿管，将无菌的培养基注入安瓿管中，固体菌块溶解后，摇匀复水，然后将其接种于适宜该菌种生长的斜面上适温培养即可。
三、液氮超低温保藏法液氮超低温保藏法简称液氮保藏法或液氮法。
它是以甘油、二甲基亚砜等作为保护剂，在液氮超低温（-196℃）下保藏的方法。
其主要原理是菌种细胞从常温过渡到低温，并在降到低温之前，使细胞内的自由水通过细胞膜外渗出来，以免膜内因自由水凝结成冰晶而使细胞损伤。
美国ATCC菌种保藏中心采用该法时，把菌悬液或带菌丝的琼脂块经控制致冷速度，以每分钟下降1℃/min的速度从0℃直降到-35℃，然后保藏在-150℃～-196℃液氮冷箱中。
简述微生物菌种保藏的原理及常用方法。
简述微生物菌种保藏的原理及常用方法。
微生物菌种保藏是指将微生物菌种保存在适宜的条件下以确保其长期存活和保持遗传稳定性的一种方法。
微生物菌种保藏的主要目的是为了保护菌种的遗传多样性、促进科学研究和应用开发。
微生物菌种保藏的原理主要包括两个方面：冷冻保存和冻干保存。
冷冻保存是将微生物菌种在低温条件下保存，通过冷冻剂的作用，降低菌种的代谢活动，以减缓细胞的老化和死亡速度。
冻干保存是将微生物菌种在低温下冻结，然后通过真空干燥的方法，将细胞内的水分蒸发掉，使菌种处于无水状态，以防止代谢活动和细胞死亡。
常用的微生物菌种保藏方法主要有冷冻保存、冻干保存、液氮保存和固体保存等。
冷冻保存是目前最常用的微生物菌种保存方法之一。
它的优点是操作简单、成本低廉，同时可保存多种微生物菌种。
冷冻保存一般是将微生物菌种培养至对数生长期，然后加入适宜的冷冻保护剂（如甘油、DMSO等），将菌液分装到冷冻管中，经过快速冷冻后存放在低温冰箱或液氮罐中保存。
冻干保存是将微生物菌种在深度冷冻后，通过真空干燥的方法将菌种中的水分蒸发掉，使菌种处于无水状态。
这种保存方法适用于一些对冷冻保护剂敏感的微生物菌种，如厌氧菌和放线菌等。
冻干保存的步骤包括深度冷冻、真空干燥和密封保存。
液氮保存是将微生物菌种保存在极低温的液氮中。
液氮保存的温度通常为-196℃，可以长期保存微生物菌种。
液氮保存适用于对保存温度要求极低的微生物菌种，如真菌、酵母菌等。
液氮保存需要使用专用的液氮罐，将微生物菌种培养物冷冻后迅速浸入液氮中保存。
固体保存是将微生物菌种保存在固体培养基中。
这种保存方法适用于一些微生物菌种，如细菌和酵母菌。
固体保存的步骤包括将菌种培养至对数生长期后，加入适宜的固体保护剂（如明胶、蔗糖等），均匀涂布在无菌培养基上，经过干燥后保存在低温条件下。
微生物菌种保藏的方法选择应根据菌种的特性和保存条件的要求进行选择。
不同的保存方法有其特点和适用范围，选择合适的方法可以确保菌种的长期保存和保持遗传稳定性，为科学研究和应用开发提供可靠的菌种资源。
常见医学真菌菌种低温真空冷冻干燥长期保存后存活情况研究
4
16 年活 1 ,18 年活 1 ,20 年活 1 ,22 年活 1
3
16 年活 1 ,20 年活 1 ,22 年活 1
4
13 年活 2 ,14 年死 2
属存活率 % 100
50
毛癣菌属 :存活率为 75 % ,在保存至 13 年时也有失活 现象 ,但其最长存活年限也达 20 年 。(3) 表皮癣菌 属 :存活率为 100 %。该菌为皮肤癣菌中最难长期保 存的一种 ,在用培养基传代保存法中既易形成永久性 变异 ,又易失活 ,而用冷干法保存竟活了 20 年无变异 实属难得 。
从以上皮肤癣菌能够保存 20 年的效果看 ,冷干 法对于孢子少的皮肤癣菌是完全适合的 。
酵母样菌 :存活率为 83. 5 % ,在保存至 18 、20 、22 年时分别出现失活现象 ,最长存活年限为 22 年 。(1) 念珠菌属 :存活率为 80. 0 % ,个别菌株在保存至 18 年 时出现失活现象 ,其余大部分存活至 20～22 年 。(2) 隐球菌属 :存活率为 87. 1 % ,在保存至 16 、20 、22 年时 出现失活现象 ,其最长存活年限为 22 年 。
皮肤癣菌 :存活率为 91. 6 % ,虽保存至 13 年时有 失活现象 , 但大部菌种存活至 20 年 。(1) 小孢子菌 属 :存活率为 100 % ,保存的菌种 20 年全部存活 。(2)
菌种名称 石膏样小孢子菌 ( Microsporum gypseum) 石膏样毛癣菌 ( Trychophyton gypseum) 断发毛癣菌 ( Trychophyton tonsurans) 絮状表皮癣菌 ( Epidermophyton floccosum)
表 2 酵母样菌存活情况
实验株数 保存期及存活情况
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
真空冷冻干燥法保藏菌种
操作过程
1、安瓿管准备
选取规格约直径为8mm，高100mm的中性玻璃安瓿管，先用2%盐酸浸泡8～10h，再经自来水冲洗多次，用蒸馏水涮洗2～3次，烘干；在每管内放入打好菌号及日期的标签，字面朝向管壁，管口塞好脱脂棉塞，121℃下高压灭菌20分钟，备用。
2保护剂的选择和准备
选取新鲜牛奶作为保护剂，牛奶要先脱脂，用离心方法去除上层油脂， 115℃下高压蒸汽灭菌25min，备用。
3冻干样品的准备
(3)菌种准备及分装
菌种要求为生长良好的纯种，菌龄以处于稳定期为好，孢子是新鲜的。
每支长好的斜面加2～3ml保护剂，用接种环将菌苔轻轻刮起(注意勿刮起培养基)，制成菌悬液。
如用液体培养的菌种，则需经离心收集和用灭菌生理盐水洗涤细胞，收集的菌体用保护剂悬浮制成菌悬液。
悬液中菌数要求达到108～1010个/ml为宜。
悬液制备完成尽快分装和冻结。
分装安瓿时可用灭菌的长滴入安瓿管底部，每管分装量约0.1～0.2毫升，分装安瓿管时间尽量要短，最好在1-2小时内分装完毕并预冻。
分装时应注意在无菌条件下操作。
4预冻
-80℃冰箱预冻1～2小时。
5冷冻干燥
将冷冻后的样品安瓿管置于冷冻干燥机的干燥箱内，开始冷冻干燥，时间一般为8-20小时。
终止干燥时间应根据下列情况判断：①安瓿管内冻干物呈酥块状或松散片状；②真空度接近空载时的最高值；③选用1-2支对照管，其水份与菌悬液同量，视为干燥完结。
6真空封口
将安瓿管颈部棉塞以下处用强火焰拉细进行熔封。
7保藏
安瓿管保藏在-20℃冰箱里。
8活化
如果要从中取出菌种恢复培养，可先用75%酒精将管的外壁消毒，用镊子敲下已开裂的
安瓿管的顶端，使管子破裂，在安瓿管中加入0.5～1ml液体培养基，慢慢旋转安瓿管，是冻干菌种复水，然后直接接种到琼脂斜面或涂布平板。