自身抗体的应用及研究进展
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SLE:
40-50%
②与皮损、光过敏、白细胞减少、淋巴结肿大、
血管炎、紫癜相关
③可造成新生儿狼疮、婴儿心脏传导阻滞
①原发性SS:40%,较抗SSA更特异
②其它CTD伴抗SSB者常伴继发性SS
抗ENA抗体
抗Scl-70
硬皮病标记性抗体
抗Jo-1
多肌炎/皮肌炎标记性抗体
抗Rib 胞浆抗原——核糖体位于胞浆内
(六)混合性结缔组织病(MCTD)
ANA阳性 ENA——抗RNP高滴度阳性
(七)血管炎
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)
荧光图谱分型 胞浆型cANCA 核周型pANCA
非典型型(cANCA)
主要抗原成分 蛋白酶3(PR3) 髓过氧化物酶(MPO)
不清
ANCA的临床意义
c-ANCA和PR3-ANCA
抗RNP 抗Sm 抗SSA
抗SSB
抗ENA抗体
MCTD100%阳性,且滴度高
双手肿胀,雷诺现象,肌炎,指(趾)端硬化
肾脏保护性抗体?
SLE的标记性抗体,阳性率30%
有助于早期、不典型及治疗缓解后SLE的回顾性诊断
抗Sm阳性一定伴抗RNP阳性,但抗RNP阳性可单独存在
①原发性SS:60-75%
类风湿因子(RF)
RF并非RA独有的特异性抗体,对RA的诊断不具 特异性
SLE 30%
SS 70%~90%
SSc 20%~30% MCTD 50%~60%
非风湿性疾病
5%以下的正常人
RF阳性不等于一定就是RA
RF阴性也不等于一定就不是RA
在非RA患者RF的检出率(%)
疾 病
传染病 亚急性细菌性心内膜炎 传 染 性 肝 炎 利什曼病(黑热病) 幼虫移行症 锥 虫 病 传染性单核细胞增多症
ANA——阳性率40%~70% ENA——抗SSA抗体阳性率70%~96%
抗SSB抗体阳性率50%~87%
抗α-Fordrin——对于pSS或sSS的诊断有一 定意义,但特异性和敏感性并不理想。
RF——阳性率75%~100% 高球蛋白血症 WBC下降
(五)系统性硬化病(pSS)
ANA——阳性率50%~55% ENA——抗Scl-70阳性率15%~40% 抗着丝点抗体(ACA)阳性
核仁型
多见于硬皮病
着丝点型
多见于CREST综合征
ANA常见五种核型及临床意义
核膜型——与抗ds-DNA有关, 多见于SLE,特别是有肾炎者
均质型——与AHA、抗DNA有关,引起LE形成 主要见于SLE、药物性狼疮
斑点型——与抗ENA有关,应进一步查特异性抗体 核仁型——多见于硬皮病 着丝点型——多见于CREST综合征
(三)皮肌炎/多发性肌炎(PM/DM)
免疫学检查
ANA ENA——抗Jo-1阳性
其它检查——肌酶谱
肌酸磷酸激酶(CPK): MM-心肌和骨骼肌
MB-心肌 BB-平滑肌和脑内
乳酸脱氢酶(LDH) 谷草转氨酶(AST) 谷丙转氨酶(ALT) 碱性磷酸酶(ALP)
(四)干燥综合征(SS)
项目名称 抗双链DNA抗体IgG抗体 抗核小体抗体 抗组蛋白抗体 抗Sm抗体 抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA) 抗核糖体P蛋白(PO) 抗SS-A/R060抗体 抗SSA/R052抗体 抗SSB/La抗体 抗着丝点B抗体(CENP-B) 抗Scl-70抗体(Scl-70) 抗nRNP抗体(U1-snRNP) 抗线粒体抗体M2型(AMA-M2) 抗JO-1抗体(JO-1) 抗PM-Scl抗体 抗Mi抗体(Mi-2) 抗Ku抗体(Ku)
抗ds-DNA抗体
临床意义
①对SLE的诊断有较高特异性 ②滴度与SLE活动相关,可作为病情监测及疗效观察指标 ③与SLE肾损害有关
检测方法
①放免法(Farr)——敏感,有利于早期预测 检测高亲合力的抗ds-DNA
②间接免疫荧光法(IF)——特异 ③ELISA——可检测低亲合力的抗ds-DNA
有助于中枢狼疮的病情监测 ④金标免疫斑点法
自身抗体的应用及研究进展
1
间接免疫荧 光法(IFA Indirect Fluorescen t Assay )
2
酶联免疫吸 附法 (ELISA)
3
免疫印迹法 (IB)
Westernblot LIA
4
其它:IDA、 RIA等
全自动自身抗体分析仪
自动化检测 检测定量化 单个项目随时检测 多个项目同时检测 45-90分钟报告结果 原厂质控和校正血清 精确温度调控系统 五点定标、三重检测
35.8% 99.6%
APF
40%-80% 70%-90%
AKA
40%-55% 85%-95%
抗Sa抗体
40%-60%
98.6%
抗CCP
46%-70%
96%
抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP)
瓜氨酸是RA血清抗聚角蛋白微丝蛋白相关 抗体的主要抗原决定簇
对RA诊断具有高度特异性(98%) 可在RA早期出现 预测早期关节炎发展为RA RA关节侵蚀破坏的早期识别及预测
是一种非炎症性自身免疫病,临床上以动/静脉血 栓形成、习惯性流产和血小板减少等症状为表现, 血清中存在抗磷脂抗体
血清学检查
抗心磷脂抗体( ACA )——IgG、IgM、IgA(ELISA) 抗β2糖蛋白1抗体(抗β2-GP1) 狼疮抗凝物(LA)——凝血酶原时间(PT)
激活的部分凝血活酶时间(APTT) 白陶土凝集时间(KCT) 蛇毒试验(αRVVT)
临床意义
①是SLE的又一特异性抗体,阳性率10-20% ②多见于SLE活动期
与抗ds-DNA抗体的消长相平行 但不会随病情缓解立即消失 可持续1-2年后才转阴
抗核小体抗体(AnuA)
核小体是细胞染色质中的一种成分,它是由DNA 和组蛋白以特殊的方式相连而组成,在SLE的诱 导和致病中起重要作用
对SLE的早期诊断有重要意义 比抗ds-DNA、抗组蛋白抗体更早出现 阳性率:50%~90% 特异性﹥98%
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百度文库
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风湿病的实验室诊断
血清学检查
自身抗体——特异性 非特异的免疫相关指标
滑液分析 一般的实验室检查项目
常 见 的 自 身 抗 体 及 其 检 测 方 法
(1)
项目 SLE四项 ANA 抗DS-DNA抗体 抗组蛋白抗体 抗核小体抗体 ENA系列 抗RNP 抗SM 抗SSA 抗SSB 抗JO-1 抗SCL-70 抗核糖体P蛋白 RA三项 AKA(抗角质蛋白抗体) 抗RA33 抗CCP(抗环瓜氨酸肽抗体) ANCA四项 P-ANCA(荧光模型为核周模型) C-ANCA(荧光模型为细胞质模型) MPO-ANCA(髓过氧化酶抗体) PR3-ANCA(抗蛋白酶3抗体)
抗核抗体(ANA)
方法——间接免疫荧光法 结果判断:
①滴度〉1:100为阳性 ②常见核型——5种
不同核型的临床意义不同
均质型
与AHA(抗组蛋白抗体)、抗DNA有关, 引起LE形成主要见于SLE、药物性狼疮
核膜型
与抗ds-DNA有关, 多见于SLE,特别是有肾炎者
斑点型
与抗ENA有关,应进一步查特异性抗体
AKA检测方法:取6周龄雄性Wistar大鼠食管中下1/3段作为抗原,做 冰冻切片,厚4 μm~5 μm-70 ℃保存备用。加1∶20稀释血清,湿盒内 37℃孵育30分钟,PBS漂洗,吹干,加1∶20稀释的荧光素标记羊抗人 IgG,37℃孵育30分钟,漂洗,吹干,缓冲甘油封片荧光显微镜下观 察。
判定标准:以角质层出现典型的规则的线状或板层状荧光为阳性。
18
100
80
60
40
60
45
RF常用检测方法
RF 1:40阳性 乳胶凝集法(测IgM-RF) RF 256 Iu/ml 双抗夹心ElISA法(测总RF) RF-IgG 110IU/ml
-IgA 18IU/ml ELISA法 -IgM 200IU/ml
RA早期诊断的系列指标
敏感性
特异性
抗RA33/36抗体
(一)类风湿关节炎(RA)
类风湿因子(RF) 早期诊断的系列指标
抗RA33/36抗体 抗核周因子(APF) 抗角蛋白抗体(AKA) 抗Sa抗体 抗环瓜氨酸抗体(抗CCP)
抗角蛋白抗体(AKA)
抗角蛋白抗体(AKA),1979年Young等发现类风湿性关节炎(RA)血清 中有一种能与鼠食管角质层反应的抗体,并对类风湿性关节炎(RA)具 有特异性,命名为AKA。1989年Vincent等提出应将AKA更名为抗角质 层抗体更为恰当。AKA可以在RA发病以前若干年出现,所以有早期诊 断价值。
间接免疫荧光 间接免疫荧光 间接免疫荧光 间接免疫荧光
间接免疫荧光 间接免疫荧光
间接免疫荧光
ELISA ELISA ELISA ELISA ELISA ELISA ELISA
常 见 的 自 身 抗 体 及 其 检 测 方 法
(3)
ANA谱17项(免疫印迹法) 疾病
系统性红斑狼疮
干燥综合征/系统性红斑狼疮 系统性硬化 混合性结缔组织病(MCTD) 原发性胆汁性肝硬化 多发性肌炎、皮肌炎
gene Filaggrin
类风湿因子(RF)
抗人IgG分子Fc片段上抗原决定簇的特异性抗 体,分为IgM、G、A、E型
RF在RA中的阳性率为70%~80%,是诊断 RA的重要标准之一
RF含量与病情的活动性和严重性成正比,持续 高滴度的RF常提示RA病情活动,骨侵蚀发生 率高,常可伴有皮下结节或血管炎等关节外表 现,提示预后不良。
ANA检测方法
间接免疫荧光法 印迹法 ELISA法
抗核抗体谱(ANAs)
定义:以细胞核内物质为抗原的抗体 抗DNA抗体——抗ss-DNA
抗ds-DNA
抗组蛋白抗体——H1,H2A,H2B,H3,H4 抗非组蛋白抗体——抗ENA抗体
抗着丝点抗体 抗核仁抗体 其它——线粒体、溶酶体、高尔基体等
异常蛋白血症 高球蛋白血症性紫癜 高γ球蛋白血症 巨球蛋白血症
肺和肝脏疾病 慢性支气管炎 Caplan's综合征(类风湿性尘肺症) 原因不明的纤维化肺泡炎 Wegener's肉芽肿 原发性胆汁性肝硬化
抗 原 人IgG 兔IgG
48
22
24
21
100
90
44
27
44
72
100
62
19
32
30
22
62
(二)系统性红斑狼疮(SLE)
是一种临床表现有多系统损害症状的慢性系统性自身免疫 性疾病,其血清有以抗核抗体为主的大量不同的自身抗体
自身抗体 (1)抗核抗体谱——ANA、抗ds-DNA、抗ENA抗体 (2)抗磷脂抗体 (3)抗组织细胞抗体——抗RBC抗体
抗血小板相关抗体 抗神经元抗体 (4)其它——RF、p-ANCA
常 见 的 自 身 抗 体 及 其 检 测 方 法
(2)
自身免疫肝炎七项 ANA 抗LMA抗(肝细胞膜抗体) ASMA(抗平滑肌抗体) 抗LKM(抗肝肾微粒体抗体)
抗SLA(抗可溶性肝抗原抗体) AMA(线粒体抗体)
抗LSP(抗肝脏特异性蛋白抗体) RF三项 RF-IgG RF-IgA RF-IgM 抗磷脂综合征三项(ASP) PT-IgG(凝血素抗体) PT-IgM 抗β2-糖蛋白1抗体
对韦格纳肉芽肿有高度特异性(95%),敏感性80% 与病情活动性相关 常作为判断药物疗效和病情复发的指标
p-ANCA和MPO-ANCA
不如c-ANCA具有诊断特异性 阳性者血管炎程度较高,其滴度也与病情活动相关 主要与显微镜下多血管炎 坏死性新月体肾小球肾炎 变应性肉芽肿性血管炎 相关
(八)抗磷脂抗体综合征(APS)
抗核抗体(ANA)
定义——以细胞核内物质为抗原的抗体 临床意义 ①SLE的筛查抗体:
95%阳性,但滴度与SLE活动性无相关 阴性基本可排除SLE ②阳性并非SLE特异 阳性并非风湿病特异: ——风湿病(SLE、SSc、SS、RA)
非风湿性疾病(感染、慢肝、肺纤维化、肿瘤) 服用某些药物(INH、苯妥英钠、肼苯达嗪、普鲁卡因酰胺)
检验方法
间接免疫荧光 间接免疫荧光 ELISA ELISA
免疫印迹、 ELISA 免疫印迹、 ELISA 免疫印迹、 ELISA 免疫印迹、 ELISA 免疫印迹、 ELISA 免疫印迹、 ELISA 免疫印迹、 ELISA
间接免疫荧光 ELISA ELISA
间接免疫荧光 间接免疫荧光 ELISA ELISA
抗磷脂抗体
抗β2-GP1抗体比LA和ACA在APS患者中更具有特异性,是导致APS的主要 抗体
抗β2GP1抗体只出现于自身免疫性疾病, 而ACA也可出现于一些感染性疾病, 如梅毒、AIDS、肝炎、结核等